專利名稱：一種靶向降解Bcr-Abl蛋白的試劑及其在制備費城染色體陽性腫瘤治療藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發明公開一種靶向降解Bcr-Abl蛋白的方法和試劑及其在制備Ph陽性腫瘤治療藥物中的應用，屬于醫藥和生化與細胞生物學技術領域，具體涉及冬凌草甲素在制藥和臨床治療中祀向泛素化降解病原蛋白Bcr-Abl并抑制和殺傷Ph陽性腫瘤細胞，以及在臨床和基礎研究中作為一種誘導劑來分析Bcr-Abl及其相關信號通路的生物學功能。
背景技術：
腫瘤是威脅人類健康的頭號殺手。2008年全球新增腫瘤患者1270萬，死亡760萬，并且這些數字仍在持續增長中。隨著現代醫學的發展，人們逐漸認識到腫瘤的形成是由于基因突變造成的，由此開發出多種以基因為靶點的分子靶向療法，并在腫瘤治療中取得了顯著成效。·染色體畸變是導致腫瘤細胞中基因突變的常見原因。1960年，兩位美國科學家Peter Nowell和Dacid Hungerford在慢性髓性白血病(CML)病人的血液樣品中發現了一個異常的染色體，由于是在美國費城(Philadelphia)發現的，故命名為費城染色體(Ph)。后來經染色體顯帶發現費城染色體是由9號染色體長臂(9q34)和22號染色體長臂(22qll)易位造成的，又被稱為t(9; 22) (q34; qll)。費城染色體具有重要的臨床意義大約95%的慢性髓性白血病病例都是Ph陽性，因此可作為診斷的依據。另外，在急性髓性白血病、前B細胞和T細胞白血病/淋巴瘤中大約20%_30%的成人與2-10%的未成年患者中也能檢測到費城染色體。t (9; 22) (q34; qll)染色體易位產生一種致癌性的融合基因Bcr_Abl，該基因編碼的融合蛋白產物具有異常增高的酪氨酸激酶活性，是導致慢性髓性白血病及其他Ph陽性腫瘤發生的首要原因。研究表明，Bcr-Abl融合蛋白還是造成Ph陽性腫瘤細胞對多種化療藥物不敏感的原因。在K562細胞及其它Ph陽性的腫瘤細胞中抑制Bcr-Abl蛋白，可以顯著抑制和殺傷腫瘤細胞，還可以逆轉這些腫瘤細胞對化療藥物的耐藥性。STI-571 (格列衛)是靶向Bcr-Abl的酪氨酸激酶競爭性抑制劑，目前已經成為治療慢性髓樣白血病(CML)病人的一線用藥，對于慢性期(CP)的CML病人具有良好的治療效果。但是，對于加速期(AP)和急變期(BC)的病人，STI-571的治愈率很低，而且病人容易復發并最終演變成STI-571耐受的CML-BC。因此急需開發一些作用機制與STI-571不同的的抗腫瘤藥物用于CML的治療。除了使用小分子抑制劑干擾癌蛋白的酶活性外，靶向癌蛋白的泛素化降解也是一種很好的分子靶向治療策略。泛素化降解是細胞中重要的蛋白質質控系統，可以選擇性降解細胞中不需要的蛋白質，例如一些短壽命的細胞周期調節蛋白、癌基因和抑癌基因產物以及變性變構蛋白等。在腫瘤細胞中，促進癌蛋白的降解對于逆轉腫瘤惡性程度、改善治療效果具有重要的意義。冬凌草甲素是我國傳統抗癌中藥冬凌草中最主要的抗腫瘤活性成分，經鑒定屬于貝殼杉烯類四環二萜類化合物。中國專利(申請號200410016891. 6，
公開日2005年9月14日)公開了冬凌草甲素在降解AMLl-ETO融合蛋白中的應用，為開發具有t(8;21)染色體易位的白血病靶向治療藥物奠定了基礎。另一中國專利(申請號201110413556. X，
公開日2012年7月4日)公開了冬凌草甲素在制備FBW7抑癌蛋白激活劑中的應用，報道了冬凌草甲素通過激活FBW7介導的泛素化降解途徑革巴向降解癌蛋白c-Myc、cyclinE和mTOR的作用。關于冬凌草甲素在降解Bcr-Abl蛋白以及制備費城染色體陽性腫瘤治療藥物的應用還未見報道。
權利要求
1.一種靶向降解Bcr-Abl蛋白的試劑，其特征在于其主要成分為冬凌草甲素，或以冬凌草甲素為先導化合物的具有環外亞甲基環戊酮結構的四環二萜類化合物。
2.如權利要求I所述的試劑，其特征在于冬凌草甲素的濃度為2.5-20 μ M0
3.如權利要求I所述的試劑在哺乳動物腫瘤細胞的實驗研究中作為誘導劑降解Bcr-Abl和c-Abl蛋白的應用。
4.如權利要求3所述的應用，其特征在于所述的哺乳動物為人類、小鼠或大鼠。
5.冬凌草甲素或以冬凌草甲素為先導化合物的具有環外亞甲基環戊酮結構的四環二萜類化合物在制備費城染色體陽性腫瘤治療藥物。
6.如權利要求5所述的應用，其特征在于所述的費城染色體(Ph)陽性腫瘤包括Ph陽性的慢性髓性白血病、Ph陽性的急性髓性白血病、Ph陽性的急性淋巴性白血病和Ph陽性的前B細胞、T細胞淋巴瘤。
7.如權利要求5所述的應用，其特征在于使用2.5-20 μ M及以上濃度的冬凌草甲素處理費城染色體陽性的Κ562細胞和KU812細胞，2-24小時后可引起Bcr-Abl蛋白的泛素化降解，使細胞生長受到抑制并且誘導細胞凋亡。
8.如權利要求5所述的應用，其特征在于以15mg/kg冬凌草甲素的劑量連續注射攜帶費城染色體陽性腫瘤的小鼠，12天后可引起腫瘤組織中Bcr-Abl蛋白的降解，抑制腫瘤的生長。
9.如權利要求5所述的應用，其特征在于冬凌草甲素可專一性地降解費城染色體陽性腫瘤的病源蛋白Bcr-Abl,以及其同一蛋白家族的成員c-Abl蛋白。
全文摘要
本發明公開了冬凌草甲素通過降解Bcr-Abl融合蛋白可用于治療費城染色體陽性腫瘤，涉及冬凌草甲素在制備費城染色體陽性腫瘤治療藥物中的應用。經過大量研究發現，冬凌草甲素能夠激活Bcr-Abl特異的泛素化降解途徑，迅速和高效地降解Bcr-Abl癌蛋白，從而使費城染色體陽性的腫瘤細胞發生顯著的生長抑制和不可逆轉的細胞凋亡。在小鼠體內，冬凌草甲素同樣能夠降解Bcr-Abl蛋白，顯著抑制費城染色體陽性腫瘤的生長。冬凌草甲素主要來源于我國傳統中藥冬凌草，對人體毒性較低，且易于制備、可應用性強。另外，本發明所揭示的冬凌草甲素作用機制與目前用于白血病臨床治療的一線藥物STI-571(格列衛)完全不同，因此可作為一種治療STI-571耐受的費城染色體陽性腫瘤的潛在藥物。
文檔編號A61P35/02GK102895221SQ20121037170
公開日2013年1月30日 申請日期2012年9月29日 優先權日2012年9月29日
發明者黃慧琳, 翁桁游, 周惠, 屈良鵠 申請人:中山大學