專利名稱：一種消炎片的制備方法及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥制劑技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種消炎片的制備方法及應(yīng)用。
背景技術(shù)：
消炎片記載于衛(wèi)生部標(biāo)準(zhǔn)WS3-B-0809-91，由蒲公英446g、紫花地丁 446g、野菊花 446g、黃芩446g作為原料藥制成，能抗菌消炎。用于呼吸道感染，發(fā)熱，肺炎，支氣管炎，咳嗽有痰，癤腫等。
現(xiàn)有技術(shù)中，尚未有消炎片在提取制備方面采用超臨界和微波技術(shù)的報道，而采用打粉和水煎煮的方法，工藝粗糙、落后，雜質(zhì)多，導(dǎo)致患者用量過大，不方便服用，嚴(yán)重影響了本品在臨床上應(yīng)用。發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明目的為了解決上述問題，本發(fā)明的目的在于提供一種消炎片的制備方法。
本發(fā)明的另一個目的在于提供一種消炎片在制備抑制人急性早幼粒白血病細(xì)胞 NB4細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
技術(shù)方案本發(fā)明的目的是通過如下的方案實現(xiàn)的
一種消炎片的制備方法，由蒲公英446g、紫花地丁 446g、野菊花446g、黃芩446g 作為原料藥制成，所述的方法由下列步驟組成取野菊花，加入到C02超臨界萃取器中， 乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4-6%，萃取壓力15-30MPa，溫度 30-50°C, C02流量l-3ml/g生藥· min，萃取時間150_180min，得超臨界萃取物，備用；取其余中藥，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率400-600W， 萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮,加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，備用；將上述超臨界萃取物和微波提取物混合，加入淀粉，70%乙醇制顆粒，干燥，壓片，制成1000片，每片重O. 5g。
上述一種消炎片的制備方法，所述CO2超臨界萃取夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5%。
上述一種消炎片的制備方法,所述微波萃取功率500W,每次萃取6分鐘。
上述一種消炎片的制備方法，所述CO2超臨界萃取的萃取壓力20MPa，溫度40°C， CO2流量2ml/g生藥· min,萃取時間160min。
上述消炎片在制備抑制人急性早幼粒白血病細(xì)胞NB4細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
現(xiàn)有技術(shù)中，消炎片每片O. 5g，每次4-6片，一日3-4次，采用本發(fā)明制備成的消炎片每片O. 5g，每次僅需2-3片，一日服用3-4次，在具有更多活性成分的條件下大大減少了服用量。此結(jié)論可以通過下述試驗證明。
試驗一、不同方法制備的消炎片中黃芩素含量的比較
1、儀器及試藥本發(fā)明消炎片按實施例3方法制備，使用1784g原料藥，經(jīng)提取制成500片，每片重O. 5g。原消炎片，按部頒標(biāo)準(zhǔn)方法制備，使用1784g原料藥，經(jīng)提取制成500片，每片重O. 5g。Agilent 1200高效液相色譜儀；METTLER AE240電子分析天平；黃芩素對照品(中國藥品生物制品檢定所)。
2、方法
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水-磷酸(40 60 :0. 2)為流動相；檢測波長為280nm。理論板數(shù)按黃芩素峰計算，應(yīng)不低于3000。
對照品溶液的制備精密稱取在60°C減壓干燥4小時的黃芩素對照品適量，加甲醇制成每Iml含18 μ g的溶液，即得。
供試品溶液的制備取本發(fā)明消炎片和原消炎片，研細(xì)，混勻，取lg，精密稱定，精密加入70%乙醇20ml，密塞，超聲處理10分鐘，離心，取上清液，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μ 1，注入液相色譜儀，測定， 即得。
3、結(jié)果
結(jié)果表明，本發(fā)明消炎片中黃芩素的含量為1. 64mg/片；而原消炎片中黃芩素的含量為O. 28mg/片，在服用量減少的情況下，黃芩素含量有很大提高。
上述研究表明，采用本發(fā)明制備的消炎片，有效成分含量高于部頒標(biāo)準(zhǔn)法制備的消炎片。
具體實施方式
以下通過實施例形式，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
實施例1
取蒲公英446g、紫花地丁 446g、野菊花446g、黃岑446g,將野菊花，加入到C02 超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4%，萃取壓力 15MPa，溫度30°C，C02流量lml/g生藥·π η，萃取時間150min，得超臨界萃取物，備用；取其余中藥，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率400W，萃取2次，每次4分鐘，合并萃取液，濃縮,加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5 倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，備用；將上述超臨界萃取物和微波提取物混合，加入淀粉，70%乙醇制顆粒，干燥，壓片，制成1000片，每片重O. 5g。
經(jīng)檢測，成品中黃芩素的含量為1. 59mg/片。
實施例2
取蒲公英446g、紫花地丁 446g、野菊花446g、黃岑446g,將野菊花,加入到CO2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為6%，萃取壓力30MPa， 溫度50°C，CO2流量3ml/g生藥· min，萃取時間180min，得超臨界萃取物，備用；取其余中藥，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率600W，萃取2 次，每次8分鐘，合并萃取液，濃縮,加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，備用；將上述超臨界萃取物和微波提取物混合，加入淀粉，70%乙醇制顆粒，干燥，壓片，制成1000片，每片重O. 5g。
經(jīng)檢測，成品中黃芩素的含量為1. 57mg/片。
實施例3
取蒲公英446g、紫花地丁 446g、野菊花446g、黃岑446g,將野菊花,加入到CO2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5%，萃取壓力20MPa， 溫度40°C，CO2流量2ml/g生藥· min，萃取時間160min，得超臨界萃取物，備用；取其余中藥，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率500W，萃取2 次，每次6分鐘，合并萃取液，濃縮,加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，備用；將上述超臨界萃取物和微波提取物混合，加入淀粉，70%乙醇制顆粒，干燥，壓片，制成1000片，每片重O. 5g。
經(jīng)檢測，成品中黃芩素的含量為1. 64mg/片。
實施例4 :消炎片抑制NB4細(xì)胞增殖的實驗研究資料
I實驗材料·
1.1實驗用細(xì)胞株
人急性早幼粒白血病細(xì)胞NB4細(xì)胞，南京正寬醫(yī)藥科技有限公司實驗室細(xì)胞庫， DMEM+10%FBS常規(guī)培養(yǎng)。
1. 2實驗藥物
研究藥物本發(fā)明消炎片按實施例3方法制備。
藥液儲液稱取IOOmg消炎片，溶于5ml無水乙醇中，O. 2 μ m濾器過濾,500 μ I doff管分裝，-20°C存儲，同時O. 2 μ m濾器過濾無水乙醇以備對照組之用。
1. 3實驗試劑
DMEM(GIBC0 公司 Cat. No. 12100-061 Lot. No. 758137);胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司Lot. No. 100419);NaHC03(上海久億化學(xué)試劑有限公司Cat. No. 11810-033 Lot. No. 1088387)；Trypsin (AMRESC0 公司批號2010/04)；EDTA (AMRESC0 公司批號:2009/10); Penicillin G Sodium Salt(AMRESC0公司批號2010242)；Streptomycin SulfateCAMRESCO 公司批號2010382);無水乙醇(南京化學(xué)試劑有限公司批號080310182);MTT(Biosharp批號:0793) ;PBS (實驗室自配)；
1. 4實驗器材
萊卡倒置顯微鏡(德國Leica型號DM1L);可見-紫外光微孔板檢測儀(美國MD 公司型號SPECTRAMAX 190) ;C02培養(yǎng)箱(FORMA型號3111);超凈臺(蘇凈集團安泰公司制造型號SW-CJ-ZFD);純水儀(美國Spring公司型號S/N 020579);精密移液器(法國吉爾森公司型號P2);電子天平(德國賽多利斯有限公司型號BT323S);全自動高壓滅菌鍋(日本SANK)公司型號MLS-3020);臺式電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海精密實驗設(shè)備公司型號 DHG9123A);冰箱(西門子公司型號KG18V21TI);液氮罐(CBS型號:2001);低速離心機(上海安亭科學(xué)儀器廠型號ΚΑ-1000) ;0. 2μπι濾器(MILLIP0RE型號SLGP033RB) ;10cm培養(yǎng)皿(NEST公司)、96孔培養(yǎng)板(NEST公司)；細(xì)胞計數(shù)板；離心管、移液管、Tips若干。
2實驗方法
I) NB4細(xì)胞用DMEM+10%FBS于37 °C、5%C02進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)(IOcm培養(yǎng)皿)，當(dāng)細(xì)胞生長至對數(shù)期時，收集細(xì)胞，棄去培養(yǎng)液，PBS輕洗3遍，加入3ml 0.25%胰蛋白酶-0. 049ffiDTA，37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培養(yǎng)基中和反應(yīng)，吹打細(xì)胞后將其轉(zhuǎn)入離心管中，IOOOrpm離心5min，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度3X 104個/ml。
2)將細(xì)胞種入96孔培養(yǎng)板中，每孔加入細(xì)胞懸液180 μ I,培養(yǎng)板放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中(37 °C，5%C02 )常規(guī)培養(yǎng)。
3)根據(jù)細(xì)胞生長情況，一般長至50%_70%，加入消炎片溶液，繼續(xù)培養(yǎng)24h。
4) 24h 后加入 20 μ I MTT 溶液(5mg/ml，即 O. 5%MTT)，繼續(xù)培養(yǎng) 4h。
5) 4h后扣板法倒去上清，用吸水紙輕輕拍干，每孔加入200 μ I 二甲基亞砜，置搖床上低速振蕩lOmin，使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測儀490nm處測量各孔的吸光值。
6)同時設(shè)置本底(不加細(xì)胞，只加培養(yǎng)液)，對照孔(細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜)，每組設(shè)定6個復(fù)孔。
7)結(jié)果以藥物對細(xì)胞的抑制率表示細(xì)胞增值抑制率(％)=(對照孔OD值-給藥孔OD值)/對照孔OD值X 100%。實驗重復(fù)3次。
3統(tǒng)計處理
采用Microsoft Excel 2003軟件中的相關(guān)分析和Student t檢驗，數(shù)據(jù)以 mean + S. D.表不。
4實驗結(jié)果
MTT法實驗后統(tǒng)計結(jié)果顯示，與對照組比較，當(dāng)劑量達(dá)到5mg/ml時，對NB4細(xì)胞增殖抑制有差異(P〈0. 05)，劑量在10mg/ml時該差異具有顯著性(P〈0. 01)，當(dāng)劑量達(dá)到 15-20mg/ml時有極顯著性差異(Ρ〈0· 001)。
表I消炎片對ΝΒ4細(xì)胞增殖抑制影響研究(XflD)
權(quán)利要求
1.一種消炎片的制備方法，由蒲公英446g、紫花地丁 446g、野菊花446g、黃芩446g作為原料藥制成，其特征在于所述的方法由下列步驟組成取野菊花，加入到CO2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4-6%，萃取壓力15-30MPa，溫度30-50°C，CCV流量l_3ml/g生藥·π η，萃取時間150_180min，得超臨界萃取物，備用；取其余中藥，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率400-600W， 萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮,加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，備用；將上述超臨界萃取物和微波提取物混合，加入淀粉，70%乙醇制顆粒，干燥，壓片，制成500片，每片重O. 5g。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種消炎片的制備方法，其特征在于所述CO2超臨界萃取夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種消炎片的制備方法，其特征在于所述微波萃取功率500W， 每次萃取6分鐘。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種消炎片的制備方法，其特征在于所述CO2超臨界萃取的萃取壓力20MPa,溫度40。。, CO2流量2ml/g生藥· min,萃取時間160min。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種消炎片在制備抑制人急性早幼粒白血病細(xì)胞NB4細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供一種消炎片的制備方法，由蒲公英446g、紫花地丁446g、野菊花446g、黃芩446g作為原料藥制成，采用超臨界萃取和微波萃取制備而成，使得黃芩素含量有很大提高，本發(fā)明還提供了消炎片在制備抑制人急性早幼粒白血病細(xì)胞NB4細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
文檔編號A61P29/00GK102988614SQ20121037843
公開日2013年3月27日 申請日期2012年10月8日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月8日
發(fā)明者不公告發(fā)明人 申請人:卞毓平