專利名稱：丹酚酸a組合物用于制備保護缺血腦組織損傷藥物的用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種丹酚酸A組合物用于制備保護缺血腦組織損傷藥物的用途。
背景技術：
腦血管病又稱腦卒中，是由各種病因使供應腦部血液的血管發生病變所致的一種神經系統疾病。其主要病因為腦動脈系統病損(如腦動脈硬化)等原因導致的腦動脈管腔狹窄、血管痙攣、閉塞或破裂、血流減少或完全阻塞，腦部血液循環和功能障礙，腦組織受損而發生的一系列癥狀。主要包括缺血性和出血性腦血管病。其中(ICVD，又稱缺血性卒中)占80 %左右。缺血性腦血管病是指局部腦組織包括神經細胞、膠質細胞及聯系纖維由于供血障礙發生的變性、壞死或一過性的功能喪失。血管內血栓形成、栓塞、血管狹窄導致的腦動脈阻塞是缺血性腦卒中的主要原因。缺血引起腦神經細胞損傷和死亡的作用機制多樣、復雜，缺血性腦卒中(即腦缺血)后，由于腦部缺乏血液和氧氣的供應，導致大腦能量代謝失衡，產生一系列病理性損傷，如氧化應激、興奮性氨基酸毒性、鈣超載、炎癥反應等，從而導致神經元的大量死亡。它是臨床上的常見病、多發病，死亡率及致殘率很高，現已經成為世界公認的三大致死疾病之一。臨床上治療主要是溶栓、挽救缺血區域(半暗帶)的瀕臨死亡的神經元和促進損傷后神經功能的恢復。防治缺血性腦血管疾病是目前人類迫切需要解決的醫學難題。目前美國FDA僅批準了組織纖溶酶原活化因子(tPA)用于中風后的溶栓治療，但其治療時間窗很窄，只有在中風4.5小時內使用才有效；而且還存在出血以及缺血再灌加重腦損傷的危險性。而目前針對缺血性中風治療的神經保護藥包括鈣通道阻斷劑如尼莫地平、谷氨酸受體拮抗劑如地佐環平(dizocilPine)、抗氧化劑或自由基清除劑如依達拉奉、NO信號傳導通路調節劑蘆貝魯哩(Lubeluzole)以及炎癥抑制劑恩莫單抗(enlimomab)等。但它們中有的治療作用不確切 或特異性不強，有的毒副作用較大、耐受性小，有的還處于臨床前或臨床研究階段，很難在防治缺血性腦卒中發揮積極影響。因而，研發出快速有效、安全穩定的防治腦缺血藥物迫在眉睫。在此領域中醫藥發揮了不可忽視的積極作用。丹參制劑是我國心腦血管疾病的基本治療藥物，因療效確切，丹參已成為我國用量最大、銷售額最高、制劑生產廠最多，臨床劑型最全的中藥之一。丹參有效化學成分主要有兩大類:脂溶性丹參酮類化合物和水溶性酚酸類化合物。研究表明:丹酚酸類在抗肝臟損傷、抗動脈粥樣硬化及細胞凋亡以及改善記憶功能障礙等方面有著顯著的活性。其中又以丹酚酸A(Salvianolic acid A)抗氧化活性最強，丹酚酸A結構如下:
權利要求
1.酚酸A組合物用于制備保護缺血腦組織損傷藥物的用途，其中所述的組合物中丹酚酸A94% 97%，紫草酸0.1 % 1.5%，迷迭香酸0.1 % 1.5%，丹酚酸B0.1 % 1.5%，丹酚酸C0.1 % 2.0%，所述丹酚酸A組合物采用下制備方法獲得: 取丹參藥材，切成飲片或粉碎成直徑約Imm 5mm顆粒，每次加3 15倍量、45 95 °C水溫浸提取，同時以10 50轉/分速度攪拌，或加3 15倍量水煎煮提取，共提取I 3次，每次提取I 4小時；提取液減壓濃縮至相對密度1.0 1.25 (600C )，加入乙醇使含醇量在50% 85%，靜置，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至無醇味，得丹參提取液；或者 取丹參藥材，切成飲片或粉碎成直徑約Imm 5mm顆粒，每次加3 15倍量30 % 60%乙醇回流提取，每次提取I 4小時，共提取I 3次；減壓回收乙醇并濃縮至無醇味，得丹參提取液； 上述丹參提取液加水稀釋至每Iml含丹酚酸BI 30mg，水溶液用堿調pH至3.5 6.5，加入與丹酚酸B摩爾百分比0.1 3%氯化鋅作為催化劑，在100 140°C溫度加熱轉化I 6小時； 轉化液調PH值至2.5 4.5，靜置、離心，上清液減壓濃縮至每Iml含丹酚酸Al 10mg，經HPD-100大孔樹脂柱層析分離，丹酚酸A上樣量與大孔吸附樹脂比為1: 35 I: 70，樹脂柱徑高比為1: 4 1: 30，分別用I 8倍柱體積水、I 10倍柱體積10% 40%乙醇洗脫，除去雜質，再用2 10倍柱體積20 % 60%乙醇洗脫，HPLC檢測，收集含有丹酚酸A的20% 60%乙醇洗脫部分，減壓回收乙醇并濃縮至無醇味； 水溶液濃縮至每Iml含1-1Omg丹酚酸A的溶液，通過聚酰胺層析柱分離，丹酚酸A上樣量與聚酰胺比為1: 5 1: 25，樹脂柱徑高比為1: 4 1: 25，分別用I 10倍柱體積水、5 20倍柱體積20% 60%乙醇溶液洗脫除雜，再用4 15倍柱體積40% 90%乙醇溶液洗脫，收集含有丹酚酸A的40% 90%乙醇溶液部分，減壓回收乙醇并濃縮至無醇味水溶液； 水溶液濃縮，調酸pH至2.0 4.0，用水溶液1-8倍量的叔丁基甲基醚，分2 6次萃取，分離有機層，減壓回收叔丁基甲基醚，制成每Iml含丹酹酸Alg IOg的萃取液,加入I 3倍量硅膠，攪拌，揮干； 把攪拌樣硅膠加到已裝好的5 20倍量干硅膠柱上，硅膠柱徑高比為1: 4 1: 25，以正戊烷-叔丁基甲基醚為洗脫劑，梯度洗脫，分別用正戊烷-叔丁基甲基醚(4: 6)洗脫6 30倍柱體積，正戊烷-叔丁基甲基醚(6: 4)洗脫6 30倍柱體積，減壓回收洗脫劑，回收有機溶劑后的丹酚酸A加5 20倍量水溶解，微波真空干燥，得所述丹酚酸A組合物。
2.據權利要求1所述的用途，還包括保護血腦屏障的用途。
3.據權利要求1所述的用途，還包括減少缺血腦組織梗死范圍的用途。
4.據權利要求1所述的用途，還包括減輕缺血腦組織水腫的用途。
5.據權利要求1 4任一項所述的用途，其中所述組合物是由下列重量配比制成:丹酚酸A95 % 96 %，紫草酸0.1 % 1.2 %，迷迭香酸0.1 % 1.2 %，丹酚酸B0.1 % 1.2%，丹酚酸 C0.1 % 1.5%。
6.據權利要求1 4任一項所述的用途，其中微波真空干燥溫度:20-100°C，回差溫度1_5°C，真空度-0.07Mpa以上，微波功率1-100KW，干燥10-200分鐘。
7.據權利要求6所述的用途，其中微波真空干燥溫度:50-85°C，回差溫度2-4°C，真空度-0.07Mpa以上，微波功率10-80KW，干燥100-150分鐘。
8.據權利要求7所述的用途，其中微波真空干燥溫度:55-80°C，回差溫度2-3°C，真空度-0.07Mpa以上，微波功率25-60KW，干燥120-140分鐘。
9.據權利要求1 8任一項所述的用途，其特征在于采用高效液相色譜法測定丹酚酸A，紫草酸，迷迭香酸，丹酚酸B，丹酚酸C含量，測定條件如下: 以十八乙烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑； 檢測波長286nm ;流速1.0ml/min ;柱溫30°C ； 理論塔板數按丹酚酸A計應不低于10000 ； 對照品溶液的制備精密稱取丹酚酸A、紫草酸、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸C對照品適量至容量瓶中，加甲醇制成混合對照品溶液； 供試品溶液的制備:精密稱取樣品IOmg到IOOml容量瓶中，加甲醇溶解搖勻，并稀釋至刻度，即得； 洗脫以甲醇為流動相A，以0.1 0.5%磷酸為流動相B，按下述條件進行梯度洗脫，運行60分鐘； O 10分鐘時，甲醇的比例由30%升至40%，0.1 0.5%磷酸水溶液的比例由70%降至60% ； 10 30分鐘時，甲醇的比例由40%升至55%，0.1 0.5%磷酸水溶液的比例由50%降至45% ； 30 60分鐘時，甲醇的比例由55%升至80%，0.1 0.5%磷酸水溶液的比例由45%降至20%。
測定法:分別精密吸取混合對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測定，計算丹酚酸Α、紫草酸、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸C的含量。
全文摘要
本發明涉及一種丹酚酸A組合物用于制備保護缺血腦組織損傷藥物的用途，該組合物由丹酚酸A、紫草酸、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸C組成，其中所述的組合物中丹酚酸A94％～97％，紫草酸0.1％～1.5％，迷迭香酸0.1％～1.5％，丹酚酸B0.1％～1.5％，丹酚酸C0.1％～2.0％。
文檔編號A61P7/02GK103083302SQ201210490338
公開日2013年5月8日 申請日期2012年11月20日 優先權日2012年11月20日
發明者李志勇, 劉地發, 曾發林, 鐘陽桂, 蔣春紅, 楊小玲 申請人:蔣春紅