專利名稱：抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物及其制備方法
技術領域：
本發明涉及醫藥技術領域，是一種抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物及其制備方法。
背景技術：
育纖實iTrachyspermum ammi L. Sprague)為傘形科糙果療屬植物阿育魏的成熟果實，是傳統的維吾爾藥材。主產我國新疆喀什、和田地區。國外埃及、伊朗、印度和阿富汗等地亦有栽培。史料記載，阿育魏實為味辛性熱，具有散寒祛濕，理氣開胃，行氣寬中，軟堅消炎的功能。所制成的復方制劑消白軟膏，在維醫中用來清除局部異常粘液質，散寒利濕，治療白癜風。目前，還沒有關于阿育魏實的新藥應用于臨床，阿育魏實這一良好的藥用 資源尚未得到充分利用。白癜風是一種與自身免疫有關的皮膚色素脫失癥，好發于暴露部位而影響美觀，癥狀為皮膚出現局限性或泛發性色素脫失斑，是由皮膚和毛囊的黑色素細胞內酪氨酸酶系統的功能減退或喪失而引起。中醫稱之為白癜、白駁風。白癜風癥狀雖無痛癢，卻影響美容，常給患者造成心理壓力，對大部分患者的生活、學習、工作、社交等方面都帶來了許多負面因素。白癜風在全世界患病率為O. 5% 4.0%，是世界皮膚病三大頑癥之一。我國患病率約O. 1% 2. 7%，且呈逐年上升的趨勢?？砂l生于任何年齡，10 30歲為發病高峰，無性別差異。白癜風的發病原因到目前為止還不十分清楚，因此，治療起來存在一定困難，無法從病因上去尋找解決方法。治療白癜風的良藥極少，療效不滿意，有的患者病急亂投醫，盲目用藥的后果可能會導致病情的進一步惡化，所以研究尋找有效治療白癜風的新型藥物是非常迫切需要的。現代醫學認為治療白癜風應從色素生成的關鍵酶一一酪氨酸酶入手，用離體酶學方法從治療白癜風的藥物中篩選出對酪氨酸酶有激活作用的藥，并對所篩選出的藥物進行致色素作用的動物實驗，以找出在活體中能促進皮膚色素生成和黑色素細胞增生的藥物，使皮膚重新出現色素沉著，從而來達到治療白癜風的目的。目前中國還沒有與阿育魏實提取物有關的專利文獻公開。與阿育魏實有關的文獻報道也相對較少，主要涉及其種子揮發油化學成分分析以及不同溶劑提取物的化學成分分離，例如劉力等《阿育魏實化學成分的GC-MS分析》(分析測試學報[J]2004，23(3)100-102)；吳霞等《阿育魏實的化學成分研究》(中國中藥雜志[J]2005，30 (13) 1028-1029);馬慶東等《維吾爾藥阿育魏實化學成分的分離與鑒定》(沈陽藥科大學學報[J]2011，(7)526-529)等文獻。但是，上述已經公開的各種研究主要針對其化學成分的分離，而藥理及藥理活性基礎方面的研究主要是針對水提取物對抑菌及殺真菌的作用研究，但水提物純度低，成分復雜，且使大量無效成分包含其中，使服用量大，導致資源嚴重浪費。

發明內容
本發明提供了一種抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物及其制備方法，克服了上述現有技術之不足，其能有效解決育魏實未被充分利用的問題。本發明方法使提取物的成分更加集中，提高了阿育魏實資源的利用率，特別是本發明阿育魏實提取物在用于制備白癜風藥物方面的應用。本發明的技術方案之一是通過以下措施來實現的一種抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物按下述步驟得到第一步，將阿育魏實種子粉碎成阿育魏實碎料并過10目篩至50目篩，向阿育魏實碎料中加入重量是阿育魏實種子6倍重量份至20倍重量份的70%至95%乙醇水溶液進行乙醇提取，浸泡至透心，在溫度為80°C至90°C下加熱回流提取I次至3次，每次提取O. 5小時至2小時，過濾得到第一濾液和濾渣，濾渣取出晾干后得到干濾渣，向干濾渣中加入重量是干濾渣6倍重量份至20倍重量份的30%至70%的乙醇水溶液進行乙醇提取，在溫度為80°C至90°C下加熱回流提取I次至3次，每次提取O. 5小時至2小時，過濾得到第二濾液，合并第一濾液和第二濾液后減壓回收乙醇進行濃縮干燥得到的提取物 I ；
第二步，向提取物I中加入重量是提取物I I倍重量份至4倍重量份的水，在常溫下攪拌或振搖5分鐘至30分鐘使其溶解或混懸后得到懸溶液，在常溫下向懸溶液中加入重量是提取物I I倍重量份至4倍重量份的石油醚進行石油醚萃取，攪拌或振搖5分鐘至30分鐘，靜置2小時至12小時，棄去石油醚層后得到初次石油醚萃取剩余部分，然后向初次石油醚萃取剩余部分中加入重量是提取物I I倍重量份至4倍重量份的石油醚接著進行再次石油醚萃取，石油醚萃取操作重復3次至5次后得到石油醚萃取剩余部分；
第三步，在常溫下向石油醚萃取剩余部分中加入重量是提取物I I倍重量份至4倍重量份的三氯甲烷進行三氯甲烷萃取，攪拌或振搖5分鐘至30分鐘，靜置2小時至12小時，棄去三氯甲烷層后得到初次三氯甲烷萃取剩余部分，然后向初次三氯甲烷萃取剩余部分中加入重量是提取物I I倍重量份至4倍重量份的三氯甲烷接著進行再次三氯甲烷萃取，三氯甲烷萃取操作重復3次至5次后得到三氯甲烷萃取剩余部分；
第四步，在常溫下向三氯甲烷萃取剩余部分中加入重量是提取物I I倍重量份至4倍重量份的乙酸乙酯進行乙酸乙酯萃取，攪拌或振搖5分鐘至30分鐘，靜置2小時至12小時，收集乙酸乙酯層，收集乙酸乙酯層后得到乙酸乙酯萃取剩余部分，再向乙酸乙酯萃取剩余部分中加入重量是提取物I I倍重量份至4倍重量份的乙酸乙酯進行再次乙酸乙酯萃取，該操作重復3次至5次，合并3次至5次乙酸乙酯萃取所得到的乙酸乙酯層，并對合并的乙酸乙酯層進行干燥得到乙酸乙酯提取物。本發明的技術方案之二是通過以下措施來實現的一種抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物的制備方法，按下述步驟進行第一步，將阿育魏實種子粉碎成阿育魏實碎料并過10目篩至50目篩，向阿育魏實碎料中加入重量是阿育魏實種子6倍重量份至20倍重量份的70%至95%乙醇水溶液進行乙醇提取，浸泡至透心，在溫度為80°C至90°C下加熱回流提取I次至3次，每次提取O. 5小時至2小時，過濾得到第一濾液和濾渣，濾渣取出晾干后得到干濾渣，向干濾渣中加入重量是干濾渣6倍重量份至20倍重量份的30%至70%的乙醇水溶液進行乙醇提取，在溫度為80°C至90°C下加熱回流提取I次至3次，每次提取O. 5小時至2小時，過濾得到第二濾液，合并第一濾液和第二濾液后減壓回收乙醇進行濃縮干燥得到的提取物I;
第二步，向提取物I中加入重量是提取物I I倍重量份至4倍重量份的水，在常溫下攪拌或振搖5分鐘至30分鐘使其溶解或混懸后得到懸溶液，在常溫下向懸溶液中加入重量是提取物I I倍重量份至4倍重量份的石油醚進行石油醚萃取，攪拌或振搖5分鐘至30分鐘，靜置2小時至12小時，棄去石油醚層后得到初次石油醚萃取剩余部分，然后向初次石油醚萃取剩余部分中加入重量是提取物I I倍重量份至4倍重量份的石油醚接著進行再次石油醚萃取，石油醚萃取操作重復3次至5次后得到石油醚萃取剩余部分；
第三步，在常溫下向石油醚萃取剩余部分中加入重量是提取物I I倍重量份至4倍重量份的三氯甲烷進行三氯甲烷萃取，攪拌或振搖5分鐘至30分鐘，靜置2小時至12小時，棄去三氯甲烷層后得到初次三氯甲烷萃取剩余部分，然后向初次三氯甲烷萃取剩余部分中加入重量是提取物I I倍重量份至4倍重量份的三氯甲烷接著進行再次三氯甲烷萃取，三氯甲烷萃取操作重復3次至5次后得到三氯甲烷萃取剩余部分；
第四步，在常溫下向三氯甲烷萃取剩余部分中加入重量是提取物I I倍重量份至4倍重量份的乙酸乙酯進行乙酸乙酯萃取，攪拌或振搖5分鐘至30分鐘，靜置2小時至12小時，收集乙酸乙酯層，收集乙酸乙酯層后得到乙酸乙酯萃取剩余部分，再向乙酸乙酯萃取剩余部分中加入重量是提取物I I倍重量份至4倍重量份的乙酸乙酯進行再次乙酸乙酯萃取， 該操作重復3次至5次，合并3次至5次乙酸乙酯萃取所得到的乙酸乙酯層，并對合并的乙酸乙酯層進行干燥得到乙酸乙酯提取物。下面是對上述發明技術方案的進一步優化或/和改進
上述第一步中，加完70%至95%乙醇水溶液進行乙醇提取時，在溫度為86°C下進行加熱回流提取，加完30%至70%乙醇水溶液進行乙醇提取時，在溫度為86°C下進行加熱回流提取，加熱回流提取的加熱方式均為水浴加熱。上述第一步中減壓回收乙醇進行濃縮干燥是在溫度為50°C至70°C、壓力為-O. 06Mpa至-O. IMpa條件下進行的。上述第四步中對合并后的乙酸乙酯層進行干燥，干燥是在50°C至80°C下的鼓風干燥箱內進行或者是在進風溫度130°C至190°C、出風溫度30°C至90°C的噴霧干燥下進行的。本發明方法過程簡單，提高了阿育魏實資源的利用率，阿育魏實乙酸乙酯提取物具有較好的激活酪氨酸酶的作用，并且通過使用比目前臨床上治療白癜風藥物較少的劑量，便能達到與使用現有臨床上治療白癜風藥物同樣的藥效，在提高療效的同時，大大節約了阿育魏實資源、降低了成本。
具體實施例方式本發明不受下述實施例的限制，可根據本發明的技術方案與實際情況來確定具體的實施方式。下面結合實施例對本發明作進一步描述
實施例1，該抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物按下述制備方法得到第一步，將阿育魏實種子粉碎成阿育魏實碎料并過10目篩至50目篩，向阿育魏實碎料中加入重量是阿育魏實種子6倍重量份至20倍重量份的70%至95%乙醇水溶液進行乙醇提取，浸泡至透心，在溫度為80°C至90°C下加熱回流提取I次至3次，每次提取O. 5小時至2小時，過濾得到第一濾液和濾渣，濾渣取出晾干后得到干濾渣，向干濾渣中加入重量是干濾渣6倍重量份至20倍重量份的30%至70%的乙醇水溶液進行乙醇提取，在溫度為80°C至90°C下加熱回流提取I次至3次，每次提取O. 5小時至2小時，過濾得到第二濾液，合并第一濾液和第二濾液后減壓回收乙醇進行濃縮干燥得到的提取物I;
第二步，向提取物I中加入重量是提取物I I倍重量份至4倍重量份的水，在常溫下攪拌或振搖5分鐘至30分鐘使其溶解或混懸后得到懸溶液，在常溫下向懸溶液中加入重量是提取物I I倍重量份至4倍重量份的石油醚進行石油醚萃取，攪拌或振搖5分鐘至30分鐘，靜置2小時至12小時，棄去石油醚層后得到初次石油醚萃取剩余部分，然后向初次石油醚萃取剩余部分中加入重量是提取物I I倍重量份至4倍重量份的石油醚接著進行再次石油醚萃取，石油醚萃取操作重復3次至5次后得到石油醚萃取剩余部分；
第三步，在常溫下向石油醚萃取剩余部分中加入重量是提取物I I倍重量份至4倍重量份的三氯甲烷進行三氯甲烷萃取，攪拌或振搖5分鐘至30分鐘，靜置2小時至12小時，棄去三氯甲烷層后得到初次三氯甲烷萃取剩余部分，然后向初次三氯甲烷萃取剩余部分中 加入重量是提取物I I倍重量份至4倍重量份的三氯甲烷接著進行再次三氯甲烷萃取，三氯甲烷萃取操作重復3次至5次后得到三氯甲烷萃取剩余部分；
第四步，在常溫下向三氯甲烷萃取剩余部分中加入重量是提取物I I倍重量份至4倍重量份的乙酸乙酯進行乙酸乙酯萃取，攪拌或振搖5分鐘至30分鐘，靜置2小時至12小時，收集乙酸乙酯層，收集乙酸乙酯層后得到乙酸乙酯萃取剩余部分，再向乙酸乙酯萃取剩余部分中加入重量是提取物I I倍重量份至4倍重量份的乙酸乙酯進行再次乙酸乙酯萃取，該操作重復3次至5次，合并3次至5次乙酸乙酯萃取所得到的乙酸乙酯層，并對合并的乙酸乙酯層進行干燥得到乙酸乙酯提取物。實施例2，該抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物按下述制備方法得到第一步，將阿育魏實種子粉碎成阿育魏實碎料并過10目篩或50目篩，向阿育魏實碎料中加入重量是阿育魏實種子6倍重量份或20倍重量份的70%或95%乙醇水溶液進行乙醇提取，浸泡至透心，在溫度為80°C或90°C下加熱回流提取I次或3次，每次提取O. 5小時或2小時，過濾得到第一濾液和濾渣，濾渣取出晾干后得到干濾渣，向干濾渣中加入重量是干濾渣6倍重量份或20倍重量份的30%或70%的乙醇水溶液進行乙醇提取，在溫度為80°C或90°C下加熱回流提取I次或3次，每次提取O. 5小時或2小時，過濾得到第二濾液，合并第一濾液和第二濾液后減壓回收乙醇進行濃縮干燥得到的提取物I;
第二步，向提取物I中加入重量是提取物I I倍重量份或4倍重量份的水，在常溫下攪拌或振搖5分鐘或30分鐘使其溶解或混懸后得到懸溶液，在常溫下向懸溶液中加入重量是提取物I I倍重量份或4倍重量份的石油醚進行石油醚萃取，攪拌或振搖5分鐘或30分鐘，靜置2小時或12小時，棄去石油醚層后得到初次石油醚萃取剩余部分，然后向初次石油醚萃取剩余部分中加入重量是提取物I I倍重量份或4倍重量份的石油醚接著進行再次石油醚萃取，石油醚萃取操作重復3次或5次后得到石油醚萃取剩余部分；
第三步，在常溫下向石油醚萃取剩余部分中加入重量是提取物I I倍重量份或4倍重量份的三氯甲烷進行三氯甲烷萃取，攪拌或振搖5分鐘或30分鐘，靜置2小時或12小時，棄去三氯甲烷層后得到初次三氯甲烷萃取剩余部分，然后向初次三氯甲烷萃取剩余部分中加入重量是提取物I I倍重量份或4倍重量份的三氯甲烷接著進行再次三氯甲烷萃取，三氯甲烷萃取操作重復3次或5次后得到三氯甲烷萃取剩余部分；第四步，在常溫下向三氯甲烷萃取剩余部分中加入重量是提取物I I倍重量份或4倍重量份的乙酸乙酯進行乙酸乙酯萃取，攪拌或振搖5分鐘或30分鐘，靜置2小時或12小時，收集乙酸乙酯層，收集乙酸乙酯層后得到乙酸乙酯萃取剩余部分，再向乙酸乙酯萃取剩余部分中加入重量是提取物I I倍重量份或4倍重量份的乙酸乙酯進行再次乙酸乙酯萃取，該操作重復3次或5次，合并3次或5次乙酸乙酯萃取所得到的乙酸乙酯層，并對合并的乙酸乙酯層進行干燥得到乙酸乙酯提取物。實施例3，作為上述實施例的優選，第一步中，加完70%至95%乙醇水溶液進行乙醇提取時，在溫度為86°C下進行加熱回流提取，加完30%至70%乙醇水溶液進行乙醇提取時，在溫度為86°C下進行加熱回流提取，加熱回流提取的加熱方式均為水浴加熱。實施例4，作為上述實施例的優選，第一步中減壓回收乙醇進行濃縮干燥是在溫度為50°C至70°C、壓力為-O. 06Mpa至-O. IMpa條件下進行的。 實施例5，作為上述實施例的優選，第四步中對合并后的乙酸乙酯層進行干燥，干燥是在50°C至80°C下的鼓風干燥箱內進行或者是在進風溫度130°C至190°C、出風溫度30°C至90°C的噴霧干燥下進行的。一、取上述實施例所得的抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物對酪氨酸酶激活作用實驗
白癜風作為一種常見的色素脫失性皮膚病，患病率較高，且呈上升趨勢。盡管白癜風易診斷，但卻難于治療，因此其發病機理的研究受到廣泛關注。盡管如此，早期研究已經認識到通過上調酪氨酸酶活性加速黑色素生成的藥物可提高白癜風的治療效果。I、本實驗的原理在于酪氨酸酶是黑色素合成的主要限速酶，催化酪氨酸羥化為多巴并進而形成多巴醌的反應，該酶的活性大小決定著黑色素合成的數量，近年來的研究通過常用中藥對黑色素生物合成過程中的關鍵酶——酪氨酸酶的激活作用，為臨床中藥治療白癜風提供選藥借鑒；此實驗主要考察本發明獲得的抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物對酪氨酸酶的激活作用以及多巴色素自動氧化生成黑色素含量的測定。2、實驗材料(1)藥品與試劑、本發明獲得的抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物、補骨脂、驅蟲斑鳩菊、蘑菇酪氨酸酶(比活力為1000U/mg)、3，4-二羥基苯氨酸(L-D0PA)、二甲基亞砜(DMS0)、磷酸氫二鈉和磷酸二氫鈉，蘑菇酪氨酸酶(比活力為1000U/mg),3, 4- 二羥基苯氨酸(L-D0PA)、二甲基亞砜(DMS0)、磷酸氫二鈉和磷酸二氫鈉均為國產分析純；使用的蒸餾水為去離子蒸餾水。(2) Lambda 17紫外可見分光光度計、旋轉蒸發儀(上海亞榮儀器公司)、LD4-2離心機(北京醫用離心機廠)、恒溫水浴鍋(金壇市醫療儀器廠)。3、實驗方法本發明獲得的抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物對酪氨酸酶激活作用的測定將本發明獲得的抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物溶于磷酸緩沖液(O. 2mol/L, pH6. 8)，制成含抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物10mg/mL的溶液，以5mmol/L L-DOPA為底物，在O. 05mol/L磷酸緩沖液(pH6. 8)的3mL測活體系中，先加入
O.ImL抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物溶液于比色杯中，再加入2. 8mL預先在37°C恒溫水浴保溫的底物溶液，然后加入O. ImL蘑菇酪氨酸酶水溶液，立刻混勻，在37°C恒溫條件下測定波長為475nm的光密度值隨時間的增長曲線以及吸光度。根據在475nm下的吸光度計算抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物對酪氨酸酶的激活率(％)，并將酶活性激活率(％)達到50%時激活劑的濃度測定為IC5tl值，另取的補骨月旨、補骨脂素為陽性參比對照?？拱遵帮L用阿育魏實乙酸乙酯提取物、補骨脂、補骨脂素的IC50平均值如表2所示。激活率(％)可以根據下式進行
激活率(％) = [ (C-D) - (A-B) ] / (A-B) X 100，
上式中A表示含有底物、酪氨酸酶、但不含抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物的測活體系的吸光度值；
B表示含有底物，但不含酪氨酸酶、抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物的測活體系的吸光度值；
C表示含有底物、抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物，但不含酪氨酸酶的測活體系的吸光度值；
D表示含有底物、酪氨酸酶、抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物的吸光度值?？拱遵帮L用阿育魏實乙酸乙酯提取物與補骨脂分別對酪氨酸酶激活率平均值如表I所示
4、結論
由表I可見，當抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物的濃度為10 mg/mL時，發現提取物具有酪氨酸酶激活性，當抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物的濃度為10 mg/mL時對酪氨酸酶的激活率為25. 71%，而補骨脂的濃度為10 mg/mL時對酪氨酸酶的激活率為20. 68%，可見相同濃度下，抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物對酪氨酸酶激活作用較顯著，其中抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物優于對照品補骨脂提取物；而補骨脂作為臨床廣泛認可的治療白癜風的化學藥物，本實驗以它作對照，具有說服力，補骨脂素為分析標準品。由表2可見，當酪氨酸酶活性激活率(％)達到50%時，抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物的IC5tl為13. 64±7. 78 mg/mL，補骨脂的IC5tl為21. 18±2.88 mg/mL，由此可見，若需達到相同的激活率，抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物的濃度低于補骨脂的濃度。二、多巴色素自動氧化生成黑色素量的測定
I、實驗組首先將蘑菇酪氨酸酶I mL(100 U)與5mM L-DOPA反應液I mL混合，37°C保溫5 min,加入抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物I mL,置37°C保溫30 min最后用Imol/L HCl 0.2 mL終止反應，將反應混合物于3000 r/min下離心15 min，棄上清，沉淀物用6 mol/L鹽酸洗I次，蒸餾水洗2次離心后的沉淀用I mol/L NaOH 3 mL充分溶解，于400 nm處測光吸收值A_?？瞻讓φ战M首先將蘑菇酪氨酸酶I mL (100 U)與5mM L-DOPA反應液I mL混合，于400 nm處測光吸收值A·。黑色素生成上調率(%)= [A1A2] X 100，本實驗提取物濃度均選取10 mg/ml οA1表示實驗組于400 nm處測光吸收值；
A2表示空白對照組于400 nm處測光吸收值。表3為當抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物與補骨脂的濃度分別為10 mg/ml時，酪氨酸酶黑色素生成的上調率平均值。2、結論
由表3可見，當抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物與補骨脂的濃度相同時，抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物對黑色素生成具有直接刺激作用，其黑色素生成上調率效果顯著強于對照品補骨脂。三、對酪氨酸酶激活的動力學分析
本次實驗在測活體系中，固定酪氨酸酶的質量濃度為5 yg/mL，改變底物(L-DOPA)的濃度，測定不同激活劑濃度下的反應初始速率(％)。表4為抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物對酪氨酸酶的激活動力學參數平均值。通過抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物動力學分析，結果表明由表4可知，隨著抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物的增大，Km值降低，表明抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物對酪氨酸酶催化氧化L-DOPA具有競爭性激活作用，這可能是由于抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物部位有效成分分子結構與L-DOPA相似，能結合在酶的活性中心上，被催化氧化成二醌，并進一步氧化得到色素，表現出與底物相互競爭酶的特征。綜上，本實驗主要兩個方面驗證了阿育魏實提取物對酪氨酸酶的活性作用，結果顯示抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物對酪氨酸酶激活作用較明顯，對黑色素生成具有直接刺激作用，與對照品補骨脂、補骨脂素相比，抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物對酪氨酸酶激活效果優于臨床治療白癜風藥物補骨脂。以上實驗結果提示此藥材提取物具有較好的激活酪氨酸酶的作用，為臨床治療白癜風藥物提供依據。表I
權利要求
1.一種抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物，其特征在于按下述步驟得到第一步，將阿育魏實種子粉碎成阿育魏實碎料并過10目篩至50目篩，向阿育魏實碎料中加入重量是阿育魏實種子6倍重量份至20倍重量份的70%至95%乙醇水溶液進行乙醇提取，浸泡至透心，在溫度為80°C至90°C下加熱回流提取I次至3次，每次提取O. 5小時至2小時，過濾得到第一濾液和濾渣，濾渣取出晾干后得到干濾渣，向干濾渣中加入重量是干濾渣6倍重量份至20倍重量份的30%至70%的乙醇水溶液進行乙醇提取，在溫度為80°C至90°C下加熱回流提取I次至3次，每次提取O. 5小時至2小時，過濾得到第二濾液，合并第一濾液和第二濾液后減壓回收乙醇進行濃縮干燥得到的提取物I; 第二步，向提取物I中加入重量是提取物I I倍重量份至4倍重量份的水，在常溫下攪拌或振搖5分鐘至30分鐘使其溶解或混懸后得到懸溶液，在常溫下向懸溶液中加入重量是提取物I I倍重量份至4倍重量份的石油醚進行石油醚萃取，攪拌或振搖5分鐘至30分鐘，靜置2小時至12小時，棄去石油醚層后得到初次石油醚萃取剩余部分，然后向初次石油醚萃取剩余部分中加入重量是提取物I I倍重量份至4倍重量份的石油醚接著進行再次石油醚萃取，石油醚萃取操作重復3次至5次后得到石油醚萃取剩余部分； 第三步，在常溫下向石油醚萃取剩余部分中加入重量是提取物I I倍重量份至4倍重量份的三氯甲烷進行三氯甲烷萃取，攪拌或振搖5分鐘至30分鐘，靜置2小時至12小時，棄去三氯甲烷層后得到初次三氯甲烷萃取剩余部分，然后向初次三氯甲烷萃取剩余部分中加入重量是提取物I I倍重量份至4倍重量份的三氯甲烷接著進行再次三氯甲烷萃取，三氯甲烷萃取操作重復3次至5次后得到三氯甲烷萃取剩余部分； 第四步，在常溫下向三氯甲烷萃取剩余部分中加入重量是提取物I I倍重量份至4倍重量份的乙酸乙酯進行乙酸乙酯萃取，攪拌或振搖5分鐘至30分鐘，靜置2小時至12小時，收集乙酸乙酯層，收集乙酸乙酯層后得到乙酸乙酯萃取剩余部分，再向乙酸乙酯萃取剩余部分中加入重量是提取物I I倍重量份至4倍重量份的乙酸乙酯進行再次乙酸乙酯萃取，該操作重復3次至5次，合并3次至5次乙酸乙酯萃取所得到的乙酸乙酯層，并對合并的乙酸乙酯層進行干燥得到乙酸乙酯提取物。
2.根據權利要求I所述的抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物，其特征在于第一步中，加完70%至95%乙醇水溶液進行乙醇提取時，在溫度為86°C下進行加熱回流提取，加完30%至70%乙醇水溶液進行乙醇提取時，在溫度為86°C下進行加熱回流提取，加熱回流提取的 加熱方式均為水浴加熱。
3.根據權利要求I或2所述的抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物，其特征在于第一步中減壓回收乙醇進行濃縮干燥是在溫度為50°C至70°C、壓力為-O. 06Mpa至-O. IMpa條件下進行的。
4.根據權利要求I或2所述的抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物，其特征在于第四步中對合并后的乙酸乙酯層進行干燥，干燥是在50°C至80°C下的鼓風干燥箱內進行或者是在進風溫度130°C至190°C、出風溫度30°C至90°C的噴霧干燥下進行的。
5.根據權利要求3所述的抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物，其特征在于第四步中對合并后的乙酸乙酯層進行干燥，干燥是在50°C至80°C下的鼓風干燥箱內進行或者是在進風溫度130°C至190°C、出風溫度30°C至90°C的噴霧干燥下進行的。
6.一種抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物的制備方法，其特征在于按下述步驟進行第一步，將阿育魏實種子粉碎成阿育魏實碎料并過10目篩至50目篩，向阿育魏實碎料中加入重量是阿育魏實種子6倍重量份至20倍重量份的70%至95%乙醇水溶液進行乙醇提取，浸泡至透心，在溫度為80°C至90°C下加熱回流提取I次至3次，每次提取O. 5小時至2小時，過濾得到第一濾液和濾渣，濾渣取出晾干后得到干濾渣，向干濾渣中加入重量是干濾渣6倍重量份至20倍重量份的30%至70%的乙醇水溶液進行乙醇提取，在溫度為80°C至90°C下加熱回流提取I次至3次，每次提取O. 5小時至2小時，過濾得到第二濾液，合并第一濾液和第二濾液后減壓回收乙醇進行濃縮干燥得到的提取物I; 第二步，向提取物I中加入重量是提取物I I倍重量份至4倍重量份的水，在常溫下攪拌或振搖5分鐘至30分鐘使其溶解或混懸后得到懸溶液，在常溫下向懸溶液中加入重量是提取物I I倍重量份至4倍重量份的石油醚進行石油醚萃取，攪拌或振搖5分鐘至30分鐘，靜置2小時至12小時，棄去石油醚層后得到初次石油醚萃取剩余部分，然后向初次石油醚萃取剩余部分中加入重量是提取物I I倍重量份至4倍重量份的石油醚接著進行再次石油醚萃取，石油醚萃取操作重復3次至5次后得到石油醚萃取剩余部分；第三步，在常溫下向石油醚萃取剩余部分中加入重量是提取物I I倍重量份至4倍重量份的三氯甲烷進行三氯甲烷萃取，攪拌或振搖5分鐘至30分鐘，靜置2小時至12小時，棄去三氯甲烷層后得到初次三氯甲烷萃取剩余部分，然后向初次三氯甲烷萃取剩余部分中加入重量是提取物I I倍重量份至4倍重量份的三氯甲烷接著進行再次三氯甲烷萃取，三氯甲烷萃取操作重復3次至5次后得到三氯甲烷萃取剩余部分； 第四步，在常溫下向三氯甲烷萃取剩余部分中加入重量是提取物I I倍重量份至4倍重量份的乙酸乙酯進行乙酸乙酯萃取，攪拌或振搖5分鐘至30分鐘，靜置2小時至12小時，收集乙酸乙酯層，收集乙酸乙酯層后得到乙酸乙酯萃取剩余部分，再向乙酸乙酯萃取剩余部分中加入重量是提取物I I倍重量份至4倍重量份的乙酸乙酯進行再次乙酸乙酯萃取，該操作重復3次至5次，合并3次至5次乙酸乙酯萃取所得到的乙酸乙酯層，并對合并的乙酸乙酯層進行干燥得到乙酸乙酯提取物。
7.根據權利要求6所述的抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物的制備方法，其特征在于第一步中，加完70%至95%乙醇水溶液進行乙醇提取時，在溫度為86°C下進行加熱回流提取，加完30%至70%乙醇水溶液進行乙醇提取時，在溫度為86°C下進行加熱回流提取，加熱回流提取的加熱方式均為水浴加熱。
8.根據權利要求6或7所述的抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物的制備方法，其特征在于第一步中減壓回收乙醇進行濃縮干燥是在溫度為50°C至70V、壓力為-O. 06Mpa至-O. IMpa條件下進行的。
9.根據權利要求6或7所述的抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物的制備方法，其特征在于第四步中對合并后的乙酸乙酯層進行干燥，干燥是在50°C至80°C下的鼓風干燥箱內進行或者是在進風溫度130°C至190°C、出風溫度30°C至90°C的噴霧干燥下進行的。
10.根據權利要求8所述的抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物的制備方法，其特征在于第四步中對合并后的乙酸乙酯層進行干燥，干燥是在50°C至80°C下的鼓風干燥箱內進行或者是在進風溫度130°C至190°C、出風溫度30°C至90°C的噴霧干燥下進行的。
全文摘要
本發明涉及醫藥技術領域，是一種抗白癜風用阿育魏實乙酸乙酯提取物及其制備方法，其按下述步驟得到第一步，將阿育魏實種子粉碎成阿育魏實碎料并過10目篩至50目篩，向阿育魏實碎料中加入重量是阿育魏實種子6倍重量份至20倍重量份的70%至95%乙醇水溶液進行乙醇提取，浸泡至透心，在溫度為80℃至90℃下加熱回流提取1次至3次。本發明方法過程簡單，提高了阿育魏實資源的利用率，阿育魏實乙酸乙酯提取物具有較好的激活酪氨酸酶的作用，并且通過使用比目前臨床上治療白癜風藥物較少的劑量，便能達到與使用現有臨床上治療白癜風藥物同樣的藥效，在提高療效的同時，大大節約了阿育魏實資源、降低了成本。
文檔編號A61K36/23GK102961421SQ20121055812
公開日2013年3月13日 申請日期2012年12月20日 優先權日2012年12月20日
發明者王強, 劉玲玲, 張正方 申請人:新疆大學