專利名稱：一種含貝伐單抗的長效緩釋微球的制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及藥物制劑技術領域，具體涉及一種含貝伐單抗的長效緩釋微球的制備方法。
背景技術：
貝伐單抗即rhMAb VEGF, bevacizumab, Avastin是由羅氏公司研發(fā)，是抑制血管內(nèi)皮生長因子VEGF的全長單克隆抗體，分子量為149kDa，對人的VEGF的所有亞型都具有特異性親和力，能結合和阻斷所有VEGF的異構體，通過抑制VEGF達到抑制新生血管生成的作用。美國FDA于2004年2月底獲得了美國食品和藥品管理局的批準，并于同年3月份在美國上市，商品名為Bevacizumab，這是目前全世界第一個被批準用于抑制血管生長的單克隆抗體藥物。首次批準該藥聯(lián)合化療用于一線治療晚期的結直腸癌。Bevacizumab在眼科 中，對于角膜、虹膜、脈絡膜、視網(wǎng)膜的新生血管及年齡相關性黃斑變性、黃斑水腫等疾病的治療具有很可觀的應用前景。貝伐單抗玻璃體內(nèi)的半衰期約為3-5天，很多患者需要重復注藥以達到治療效果，但是重復注藥的時間間隔仍有爭議。California Retina Consultants的RL Avery等于2006在Ophthalmology 113(3) :363-372提出起始治療每月注射一次，需持續(xù)3個月，University Hospital of Coimbra 的RM RICH 于2006年在Retina (Philadelphia, Pa.)提出應持續(xù)到OCT檢查結果顯示沒有黃斑水腫的表現(xiàn)才停止。多數(shù)研究表明，使用貝伐單抗玻璃體腔內(nèi)注射在短期內(nèi)是比較安全的，最大的不良反應多是由眼內(nèi)注射這一有創(chuàng)操作引起。因此，如果藥物能夠在起始快速釋放，隨后控制釋放則最為理想。多肽、蛋白質藥物由于易被酯水解，在體內(nèi)生物半衰期短.控制釋放被認為是此類藥物最有前景的給藥途徑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明提供了一種起始可以快速釋放、隨后釋放可控的含貝伐單抗的長效緩釋微球。為了實現(xiàn)上述目的，本實用新型采用了以下的技術方案
一種含貝伐單抗的長效緩釋微球的制備方法，其特征在于包括以下步驟
(1)配制濃度為25-2500mg/ml的貝伐單抗溶液；
(2)取步驟(I)中制得的貝伐單抗溶液，加入海藻酸鈉，配制成海藻酸鈉濃度為0-15mg/ml的貝伐單抗溶液,作為內(nèi)水相；配制濃度為10-500mg/ml的可降解生物醫(yī)用高分子材料的有機溶劑溶液，作為油相；配制含有l(wèi)-1000mg/ml鈣離子的乳化劑水溶液，乳化劑的百分含量為0. 25-15%，作為外水相；
(3)ff/0/ff復乳法緩釋微球的制備
首先將作為內(nèi)水相的海藻酸鈉溶液分散到作為油相的可降解生物醫(yī)用高分子材料的有機溶劑溶液中，內(nèi)水相與油相的體積比為1:3 1:20，分散速度為8000-100000rpm，形成初乳；將初乳分散到作為外水相的乳化劑水溶液中，其中添加比例按照內(nèi)水相和乳化劑油相的體積比為1:3 1:20進行，分散速度為8000-50000rpm，形成復乳；
將復乳在0-10°C下減壓蒸發(fā)l_4h，然后在30-40°C下減壓蒸發(fā)1-4小時；
(4)將復乳進行離心抽濾干燥，得到含貝伐單抗的長效緩釋微球。鈣離子可與海藻酸鈉反應生成海藻酸鈣，海藻酸鈣具有特殊的蛋箱結構，制備初乳時分散速度為8000-100000rpm，初乳的包封率和顆粒直徑最佳，有利于下一步試劑的制備。此外，分段高低溫減壓蒸發(fā)可以使油相中的有機溶劑在短時間內(nèi)充分揮發(fā) 作為優(yōu)選，所述的可降解生物醫(yī)用高分子材料為聚丙交酯、聚乙交酯、聚丙交酯-乙交酯、聚己內(nèi)酯、聚涇丁酸、聚涇戊酸、聚類酸、聚酸酐中的一種或幾種。采用上述的優(yōu)選方案后，上述可降解生物醫(yī)用高分子材料的生物相容性較好，幾乎不會因為材料問題而引起炎癥問題。作為優(yōu)選，所述的可降解生物醫(yī)用高分子材料為聚丙交酯-乙交酯，所述的聚丙交酯-乙交酯中丙交酯與乙交酯的聚合比例為75/25或50/50，所述的聚丙交酯-乙交酯的分子量為30000-100000道爾頓。采用上述的優(yōu)選方案后,聚乳酸-輕基乙酸共聚物即poly (lactic-co-glycolicacid,簡寫為PLGA，是由兩種單體乳酸和羥基乙酸隨機聚合而成，是一種可降解高分子有機化合物，在體內(nèi)首先被降解為羥基乙酸和乳酸，最終完全降解為0)2和H2O,排出體外，故人體對該聚合物的耐受性大，生物相容性好。此外，PLGA不僅具有良好的生物相容性、無毒、良好的成囊和成膜的性能，更重要的是PLGA的降解速率和藥物的釋放可通過聚合體的物理化學性質如分子量、親水性和丙交酯與乙醇酸的比值來控制，這種生物降解材料被廣泛應用于制藥和生物醫(yī)用材料領域。而聚合比例優(yōu)選75/25或50/50后，這兩個比例制備的緩釋微球，首先在降解性能上能適配藥物Avastin的釋放周期；其次它們對該藥物的包封率較高。作為優(yōu)選，所述的有機溶劑為二氯甲烷、乙酸乙酯或乙腈中的一種或多種。采用上述的優(yōu)選方案后，有機溶劑濃度對最后微球顆粒的直徑和藥物緩釋效果有直接的影響，上訴有機溶劑均為生物醫(yī)用高分子良溶劑，且易于揮發(fā)，采用上述的有機溶劑可以使最后微球顆粒和藥物釋緩效果達到最佳。作為優(yōu)選，所述可降解生物醫(yī)用高分子材料的有機溶劑溶液中的可降解生物醫(yī)用高分子材料的濃度為10-300mg/ml。采用上述的優(yōu)選方案后，有機溶劑濃度對最后微球顆粒的直徑和藥物緩釋效果有直接的影響，采用上述的優(yōu)選的濃度后，微球顆粒的直徑和藥物釋緩效果可以達到最優(yōu)。作為優(yōu)選，所述乳化劑為聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、泊洛沙姆中的一種或多種。采用上述的優(yōu)選方案后，上述乳化劑均為生物相容性較好的乳化劑，殘留毒性較小。作為優(yōu)選，所述乳化劑水溶液中的乳化劑濃度為0. 25-10%。乳化劑的濃度及乳化效果對包封率和粒徑有影響，太大或太小均乳化效果不好，達不到要求。采用上述的優(yōu)選方案后，可以使制得的釋緩微球的包封率和粒徑達到最優(yōu)。作為優(yōu)選，所述步驟(3)中的復乳在0. 0013MPa 1. 01325MPa、0_4°C下減壓l_4h蒸發(fā)除去有機溶劑，再在0. 0013MPa 1.01325MPa、30_37°C下減壓l_4h除去有機溶劑。采用上述的優(yōu)選方案后，分高溫段和低溫端溶劑的揮發(fā)效果更好，低溫段的主要目的是減緩微球表面的溶劑的揮發(fā)速度，以免表面凝固后，內(nèi)層溶劑揮發(fā)不完全，低溫減壓蒸發(fā)一段時間后，升溫的目的一方面是增加溶劑的揮發(fā)，另一方面加快微球表面的凝固成形，便于下步分離。本發(fā)明的含貝伐單抗的長效緩釋微球將會成為治療眼內(nèi)新生血管性疾病的新劑型，可以單次注射緩慢釋放，達到長期穩(wěn)定的治療濃度。本 由于大多數(shù)可降解生物醫(yī)用高分子材料是人工合成的親脂性多聚物材料，在應用中存在著一定局限性，與機體細胞缺少特異性的結合，微球及納米粒的突釋效應明顯，對于水溶性藥物或者蛋白多肽藥物包封率低及藥物釋放不能平穩(wěn)緩釋的缺點也限制了其一些應用。而本發(fā)明采用海藻酸鈉即sodium alginate,簡稱SA,作為藥物緩控釋載體。海藻酸鈉是由海帶中提取的天然聚陰離子多糖化合物，由古洛糖醛酸(G段)與其立體異構體甘露糖醛酸(M段)2種結構單元以3種方式(麗段、GG段與MG段)通過a (1_4)糖苷鍵鏈接而成的線性嵌段共聚物。海藻酸鈉由于含有較多的羧酸根離子，親水性較強具有生物相容性、生物降解、無毒等優(yōu)點，已成為較理想的藥物緩控釋載體。本發(fā)明方法制備貝伐單抗緩釋微球的過程中，通過調整海藻酸鈉在內(nèi)水相中不同的加入量，來增加內(nèi)水相的粘度，同時藥物蛋白分子也進入到海藻酸鈉吸水后形成的水凝膠纖維網(wǎng)絡中不和油相中的有機溶劑接觸，最大程度的保持其生物活性，當形成復乳時，遇到外水相中的鈣離子，海藻酸鈉水凝膠會迅速形成海藻酸鈣的蛋箱結構，降低內(nèi)水相的損失，同時和油相中的固化的可降解生物醫(yī)用高分子一起對內(nèi)水相中的藥物蛋白進行雙重包裹。微球科技規(guī)則無粘連，粒徑可控，一般小于10 ii m,載藥量和包封率可控,載藥量一般為
0.5-30%和包封率一般可達60%，緩釋期可達2個月以上，突釋率較低。所制備的微球可再加工成其他劑型，可應用于局部注射或靜脈注射；貝伐單抗緩釋微球能在2-3個月內(nèi)維持藥物的有效治療濃度，提高生物利用度，即減少患者的用藥次數(shù)，也降低了經(jīng)濟成本。本專利以海藻酸I丐和Bevacizumab為內(nèi)水相,利用海藻酸I丐的蛋箱結構對藥物蛋白進行有效的包載，同時不影響其生物相容性及藥物蛋白結構，再用可降解生物醫(yī)用高分子材料進行二次包裹，既能有效保護蛋白的活性，也可以有效提高包封率，通過W/0/W復乳方法制備含貝伐單抗的長效緩釋微球，有效提高水溶性蛋白類藥物的包封率，且不影響藥物蛋白活性，并能有效延長水溶性蛋白釋放時間，緩釋期長達兩到三個月及以上，減少了注射次數(shù)，方便臨床使用。


圖1為本發(fā)明含貝伐單抗的長效緩釋微球的結構示意 圖2為本發(fā)明含貝伐單抗的長效緩釋微球的實施例1的5放大000掃描電鏡照片；
圖3為本發(fā)明含貝伐單抗的長效緩釋微球的實施例5的粒徑分布圖片；
圖4為本發(fā)明含貝伐單抗緩釋微球實施例廣5中藥物蛋白溶出后電泳檢測結果 圖5為本發(fā)明含貝伐單抗緩釋微球實施例廣5中體外釋藥曲線 圖6為本發(fā)明含貝伐單抗的長效緩釋微球的蛋箱結構示意圖。
具體實施方式
本發(fā)明制得的含貝伐單抗的長效緩釋微球的結構如圖1所示，其中，a為藥物蛋白，b為海藻酸鈣的蛋箱結構，c為PLGA，圖6為本發(fā)明的含貝伐單抗的長效緩釋微球的海藻酸鈣的蛋箱結構。實施例1
含貝伐單抗的長效緩釋微球的制備方法，包括以下步驟
(1)配置濃度為200mg/ml的貝伐單抗溶液；
(2)取步驟(I)中制得的貝伐單抗溶液，加入海藻酸鈉，配制成海藻酸鈉濃度為15mg/ml的貝伐單抗溶液，作為內(nèi)水相；配制濃度為150mg/ml的PLGA的二氯甲烷溶液，作為油相，其中，PLGA的聚合比例為75/25，3W ;配制含有1000mg/ml鈣離子的聚乙烯醇水溶液，聚乙烯醇的百分含量為0. 25%，作為外水相； (3)W/0/W復乳法緩釋微球的制備
首先將作為內(nèi)水相的海藻酸鈉溶液分散到作為油相的可降解生物醫(yī)用高分子材料的有機溶劑溶液中，內(nèi)水相與油相的體積比為1:3，分散速度為lOOOOOrpm，形成初乳；
將初乳分散到作為外水相，內(nèi)水相和油相的總體積與外水相體積的體積比為1:20，的聚乙烯醇水溶液中，分散速度為，50000rpm，形成復乳；
將復乳在4°C、0. 0020MPa下減壓蒸發(fā)3h，然后在35°C、1. OMPa下減壓蒸發(fā)I小時；
(4)將復乳進行離心、水洗、在冷凍干燥36h，得到含貝伐單抗的長效緩釋微球。將實施例1制備得到的含貝伐單抗的長效緩釋微球進行電鏡實驗，獲得實驗電鏡圖，如圖2所示，成球較光滑無粘連，粒徑在10 u m。將貝伐單抗緩釋微球加入pH=7. 4為磷酸鹽緩沖液，一天后，采用SDS-PAGE電泳測定蛋白質相對分子質量，結果如圖3所示，與貝伐單抗注射液比較，見圖4，條帶相同，由于溶出量不同，所以條帶的強度不高。貝伐單抗緩釋微球體外釋放情況如圖4所示，實施例1所得樣品的釋放時間為10天左右。實施例2
含貝伐單抗的長效緩釋微球的制備方法，包括以下步驟
(1)將市售的貝伐單抗注射液濃縮得到濃度為50mg/ml的貝伐單抗溶液；
(2)取步驟(I)中制得的貝伐單抗溶液，加入海藻酸鈉，配制成海藻酸鈉濃度為IOmg/ml的貝伐單抗溶液，作為內(nèi)水相；配制濃度為300mg/ml的PLGA的二氯甲烷溶液，作為油相，其中，PLGA的聚合比例為50/50，IOff ；
配制含有1000mg/ml鈣離子的聚乙烯醇水溶液，聚乙烯醇的百分含量為2%，作為外水
相；
(3)ff/0/ff復乳法緩釋微球的制備
首先將作為內(nèi)水相的海藻酸鈉溶液分散到作為油相的可降解生物醫(yī)用高分子材料的有機溶劑溶液中，內(nèi)水相與油相的體積比為1:20，分散速度為8000rpm，形成初乳；
將初乳分散到作為外水相的聚乙烯醇水溶液中，內(nèi)水相和油相的總體積與外水相的體積比為1:3，分散速度為SOOOrpm，形成復乳，形成復乳；
將復乳放入旋轉蒸發(fā)儀中，4°C、0. 053MPa下減壓蒸發(fā)3h，然后在35°C、0. 0620MPa下減壓蒸發(fā)I小時；
(4)將復乳進行離心、水洗、在常溫下真空干燥72h，得到含貝伐單抗的長效緩釋微球。實施例3含貝伐單抗的長效緩釋微球的制備方法，包括以下步驟
(1)將市售的貝伐單抗注射液濃縮得到濃度為500mg/ml的貝伐單抗溶液；
(2)取步驟(I)中制得的貝伐單抗溶液，加入海藻酸鈉，配制成海藻酸鈉濃度為5mg/ml的貝伐單抗溶液，作為內(nèi)水相；配制濃度為10mg/ml的PLGA的二氯甲烷溶液，作為油相，
配制含有l(wèi)OOOmg/ml鈣離子的聚乙烯醇水溶液，聚乙烯醇的百分含量為15%，作為外水
相；
(3)ff/0/ff復乳法緩釋微球的制備
首先將作為內(nèi)水相的海藻酸鈉溶液分散到作為油相的可降解生物醫(yī)用高分子材料的有機溶劑溶液中，內(nèi)水相與油相的體積比為1:10，分散速度為30000rpm，形成初乳；
將初乳分散到作為外水相的聚乙烯醇水溶液中，內(nèi)水相和油相的總體積與外水相的體積比為1:5,分散速度為14500rpm,形成復乳,形成復乳；
將復乳放入旋轉蒸發(fā)儀中，(TC、1. 0025MPa下減壓蒸發(fā)3h，然后在40°C、0. 0245MPa下減壓蒸發(fā)I小時；
(4)將復乳進行離心、水洗、在冷凍干燥36h，得到含貝伐單抗的長效緩釋微球。將貝伐單抗緩釋微球加入PBS即磷酸鹽緩沖液，一天后，采用SDS-PAGE電泳測定蛋白質相對分子質量，結果如圖4所示，與貝伐單抗注射液比較，條帶相同，由于溶出量不同，所以條帶的強度不高。實施例3所得樣品的釋放時間為70天累計釋放量為75. 04 ± 8. 63%,如圖5中所示。實施例4
含貝伐單抗的長效緩釋微球的制備方法，包括以下步驟
(I)將市售的貝伐單抗注射液濃縮得到濃度為1000mg/ml的貝伐單抗溶液；
(2 )取步驟(I)中制得的貝伐單抗溶液，加入海藻酸鈉，配制成海藻酸鈉濃度為2. 5mg/ml的貝伐單抗溶液，作為內(nèi)水相；配制濃度為300mg/ml的聚丙交酯的二氯甲烷溶液，作為油相，
配制含有5mg/ml鈣離子的聚乙烯醇水溶液，聚乙烯醇的百分含量為2%，作為外水相；
(3)ff/0/ff復乳法緩釋微球的制備
首先將作為內(nèi)水相的海藻酸鈉溶液分散到作為油相的可降解生物醫(yī)用高分子材料的有機溶劑溶液中，內(nèi)水相與油相的體積比為1:3，分散速度為20500rpm，形成初乳；
將初乳分散到作為外水相中，內(nèi)水相和油相的總體積與外水相的體積比為1:3分散速度為9500rpm,形成復乳；
將復乳在4°C、0. 7834MPa下減壓蒸發(fā)3h，然后在35°C、0. 4512MPa下減壓蒸發(fā)I小時；
(4)將復乳進行離心、水洗、在冷凍干燥36h，得到含貝伐單抗的長效緩釋微球。將貝伐單抗緩釋微球加入PBS，一天后，采用SDS-PAGE電泳測定蛋白質相對分子質量，與貝伐單抗注射液比較，條帶相同，由于溶出量不同，所以條帶的強度不高。貝伐單抗緩釋微球體外釋放情況。實施例5
含貝伐單抗的長效緩釋微球的制備方法，包括以下步驟
(1)將市售的貝伐單抗注射液濃縮得到濃度為25mg/ml的貝伐單抗溶液；
(2)取步驟(I)中制得的貝伐單抗溶液，作為內(nèi)水相，配制成濃度為500mg/ml的聚乙烯醇水溶液，作為內(nèi)水相；配制濃度為500mg/ml的PLGA的二氯甲烷溶液，作為油相，其中，PLGA的聚合比例為50/50，7. 5W ；
配制含有1000mg/ml鈣離子的聚乙烯醇水溶液，聚乙烯醇的百分含量為10%，作為外水
相；
(3)ff/0/ff復乳法緩釋微球的制備
首先將作為內(nèi)水相的聚乙烯醇水溶液分散到作為油相的可降解生物醫(yī)用高分子材料的有機溶劑溶液中，內(nèi)水相與油相的體積比為1:3，分散速度為30000rpm，形成初乳；
將初乳分散到作為外水相的聚乙烯醇水溶液中，內(nèi)水相和油相的總體積與外水相的體積比為1:3,分散速度為14500rpm,形成復乳；
將復乳在4°C、0. 1354MPa下減壓蒸發(fā)3h，然后在35°C、0. 3412MPa下減壓蒸發(fā)I小時；·
(4)將復乳進行離心、水洗、在常溫干燥72h，得到含貝伐單抗的長效緩釋微球。將貝伐單抗緩釋微球加入PBS，一天后，采用SDS-PAGE電泳測定蛋白質相對分子質量，與貝伐單抗注射液比較，條帶相同，由于溶出量不同，所以條帶的強度不高。實施例3所得樣品的釋放時間最短，為7天左右，見圖5。
權利要求
1.一種含貝伐單抗的長效緩釋微球的制備方法，其特征在于包括以下步驟(O配制濃度為25-2500mg/ml的貝伐單抗溶液；(2)取步驟(I)中制得的貝伐單抗溶液，加入海藻酸鈉，配制成海藻酸鈉濃度為 0-15mg/ml的貝伐單抗溶液,作為內(nèi)水相；配制濃度為10-500mg/ml的可降解生物醫(yī)用高分子材料的有機溶劑溶液，作為油相；配制含有l(wèi)-1000mg/ml鈣離子的乳化劑水溶液，乳化劑的百分含量為O. 25-15%，作為外水相；(3)ff/0/ff復乳法緩釋微球的制備首先將作為內(nèi)水相的海藻酸鈉溶液分散到作為油相的可降解生物醫(yī)用高分子材料的有機溶劑溶液中，內(nèi)水相與油相的體積比為1:3 1:20，分散速度為8000-100000rpm，形成初乳；將初乳分散到作為外水相的乳化劑水溶液中，其中添加比例按照內(nèi)水相和乳化劑油相的體積比為1:3 1:20進行，分散速度為8000-50000rpm，形成復乳；將復乳在0-10°C下減壓蒸發(fā)l_4h，然后在30-40°C下減壓蒸發(fā)1_4小時；(4)將復乳進行離心抽濾干燥，得到含貝伐單抗的長效緩釋微球。
2.根據(jù)權利要求1所述的含貝伐單抗的長效緩釋微球的制備方法，其特征在于所述的可降解生物醫(yī)用高分子材料為聚丙交酯、聚乙交酯、聚丙交酯-乙交酯、聚己內(nèi)酯、聚涇丁酸、聚涇戊酸、聚類酸、聚酸酐中的一種或幾種。
3.根據(jù)權利要求2所述的含貝伐單抗的長效緩釋微球的制備方法，其特征在于所述的可降解生物醫(yī)用高分子材料為聚丙交酯-乙交酯，所述的聚丙交酯-乙交酯中丙交酯與乙交酯的聚合比例為75/25或50/50，所述的聚丙交酯-乙交酯的分子量為30000-100000 道爾頓。
4.根據(jù)權利要求1所述的含貝伐單抗的長效緩釋微球的制備方法，其特征在于所述的有機溶劑為二氯甲烷、乙酸乙酯或乙腈中的一種或多種。
5.根據(jù)權利要求1所述的含貝伐單抗的長效緩釋微球的制備方法，其特征在于所述可降解生物醫(yī)用高分子材料的有機溶劑溶液中的可降解生物醫(yī)用高分子材料的濃度為 10_300mg/ml。
6.根據(jù)權利要求1所述的含貝伐單抗的長效緩釋微球的制備方法，其特征在于所述乳化劑為聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、泊洛沙姆中的一種或多種。
7.根據(jù)權利要求1或6所述的含貝伐單抗的長效緩釋微球的制備方法，其特征在于 所述乳化劑水溶液中的乳化劑濃度為O. 25-10%。
8.根據(jù)權利要求1所述的含貝伐單抗的長效緩釋微球的制備方法，其特征在于所述步驟(3)中的復乳在O. 0013MPa 1. 01325MPa、0_4°C下減壓l_4h蒸發(fā)除去有機溶劑，再在.O.0013MPa L 01325MPa、30_37°C下減壓 l_4h 除去有機溶劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種含貝伐單抗的長效緩釋微球的制備方法，將水溶性藥物蛋白貝伐單抗包封入可降解生物醫(yī)用高分子材料形成緩釋微球的制備方法。該微球采用W/O/W溶劑揮發(fā)法制備，以貝伐單抗及其溶液和海藻酸鹽為內(nèi)水相，將其分散到可降解生物醫(yī)用高分子材料為油相的溶液中形成初乳，再將初乳分散到含有乳化劑的水溶液為外水相中形成復乳，再通過攪拌減壓蒸發(fā)、離心、洗滌及干燥，得到貝伐單抗緩釋微球。本發(fā)明的制備得到的含貝伐單抗的長效緩釋微球，有效提高水溶性蛋白類藥物的包封率，且不影響藥物蛋白活性，并能有效延長水溶性蛋白釋放時間，緩釋期長達兩到三個月及以上，減少了注射次數(shù)，方便臨床使用。
文檔編號A61P35/00GK102988301SQ20121057941
公開日2013年3月27日 申請日期2012年12月26日 優(yōu)先權日2012年12月26日
發(fā)明者孟永春, 鄭欽象, 南開輝, 任月萍, 陳浩 申請人:溫州醫(yī)學院