紅細胞生成素產生促進劑的制作方法
【專利摘要】本發明提供了腎性貧血的治療劑及/或預防劑。而且，本發明提供了紅細胞生成素產生促進劑。本發明提供了包含ALA類的腎性貧血的治療劑及/或預防劑。進一步，本發明提供了包含ALA類的紅細胞生成素產生促進劑。
【專利說明】紅細胞生成素產生促進劑

【技術領域】
[0001] 本發明涉及紅細胞生成素產生促進劑。更具體而言，本發明涉及包含ALA類的紅 細胞生成素產生促進劑。
[0002] 本發明還涉及針對紅細胞生成素產生能力降低所引起的貧血、典型地為腎性貧血 的治療劑及/或預防劑。更具體而言，本發明涉及包含ALA類的貧血的治療劑及/或預防 劑。

【背景技術】
[0003] 腎臟為產生紅細胞生成素的主要器官，而紅細胞生成素主要在腎臟的腎小管間質 細胞中產生。
[0004] 紅細胞生成素為由165個氨基酸組成的激素（荷爾蒙）之一。紅細胞生成素于造 血組織中與紅細胞前體細胞上的受體結合，而促進紅細胞前體細胞的增殖與分化。如此一 來，紅細胞生成素便可調節紅細胞的產生。
[0005] 平時，通過血液中的氧氣分壓來調整紅細胞生成素的產生，由此亦可調整紅細胞 的產生。而且，如發生貧血時，腎臟為了進行造血而增加紅細胞生成素的產量，結果使血液 中的紅細胞生成素上升。
[0006] 然而，因腎臟疾病等導致腎臟中的紅細胞生成素的產量下降時，盡管發生貧血，血 液中的紅細胞生成素也不會上升，仍會引發紅細胞的產生受抑制的病狀；此種病狀即為腎 性貧血。亦即，腎性貧血是主要由"因腎臟疾病等導致腎臟中的紅細胞生成素（ΕΡ0)的產量 下降"所引起而產生的貧血。在腎臟病當中，尤其為慢性腎臟病時，由于腎功能緩慢下降，所 以未必會引起腎性貧血。然而，在腎臟病當中，若為腎衰竭等急性腎疾病時，已知發生腎性 貧血的機率很高。此外，亦可看到許多由與腎臟病的發病完全無關的紅細胞生成素產量的 下降所引發的貧血。因此，腎疾病，尤其為慢性腎臟病與包含腎性貧血的紅細胞生成素下降 所引起的貧血并非為相同的發病機制。
[0007] 作為腎性貧血的癥狀的特征，可例舉如氣喘、心悸、眩暈、食欲不振、疲勞感。
[0008] 此外，對于腎衰竭持續惡化的患者，已知會并發尿毒癥。尿毒癥是一種因腎功能下 降導致尿素等廢物殘留于血液中的病狀。尿毒癥患者會并發各種癥狀，而腎性貧血的癥狀 亦為其中之一。
[0009] 作為治療此種腎性貧血的方法，已經開發有ESA(紅細胞造血刺激因子制 劑，erythrocyte hematopoietic stimulating factor preparation),并已實用化。作為 ESA的實例，可例舉（1)紅細胞生成素、（2)紅細胞生成素的衍生物、（3)其他可刺激紅細胞 生成素受體的化合物等。
[0010] 此外，日本的腎性貧血的治療方針基于以下準則（非專利文獻1)來進行：
[0011] 1)當診斷確定腎性貧血、并滿足施用基準時，應開始進行ESA(紅細胞造血刺激因 子制劑）療法（積極推薦）。
[0012] 2)應并用造血所需的鐵劑的施用（積極推薦）。
[0013] 3)對于維持血液透析（hemodialysis :HD)患者，致力于透析液的凈化，并進行充 分的透析（積極推薦）。
[0014] 4)對于伴有營養失調、炎癥的患者，應對這些進行積極治療（積極推薦）。
[0015] 如上述準則所示，在日本國內，ESA被推薦作為腎性貧血治療劑的第一選擇藥。
[0016] 然而，已知腎性貧血患者的一部分對ESA療法顯示出抗性。關于對ESA療法產生 低反應性的機制，迄今仍有許多有不清楚的點。作為此種對ESA療法呈低反應性的原因之 一，認為主要原因在于TNF-α、IL-6等炎癥性細胞因子的血中濃度增加。炎癥性細胞因子 是指，引起活體內的各種炎癥癥狀的病因因子（causative factor)。還已知炎癥性細胞因 子會縮短紅細胞壽命。還已知炎癥性細胞因子會降低紅細胞生成素產生細胞所產生的紅細 胞生成素的產量。因此，炎癥性細胞因子被認為是引起貧血的原因物質。
[0017] 另外，就ESA療法其副作用而言，有發生血栓癥或心肌梗塞等的風險。近來，亦有 惡性腫瘤的不良預后的報道。
[0018] 此外，ESA療法如上述，僅為一種對癥療法，并沒有使紅細胞生成素產生細胞所產 生的紅細胞生成素的產量下降恢復等作用。
[0019] 而且，ESA通常難以進行經口施用，從用藥依從性（compliance)觀點來說亦存有 問題。
[0020] 【現有技術文獻】
[0021] 【非專利文獻1】慢性腎臟病患者的腎性貧血治療的準則


【發明內容】

[0022] 【發明所要解決的問題】
[0023] 本發明提供了細胞的紅細胞生成素產生促進劑，并提供了通過與ESA(紅細胞造 血刺激因子制劑）等對癥療法藥劑不同的新穎途徑，來治療及/或預防貧血，尤其是腎性貧 血的方法。
[0024]【用以解決問題的手段】
[0025] 本發明的發明人等深入研究的結果，出乎意料地發現ALA類可抑制紅細胞生成素 產生細胞所產生的紅細胞生成素的產量下降。
[0026] 這表示ALA類對于紅細胞生成素產量下降所引起的貧血的根本治療及預防是有 效的。
[0027] 如上所述，腎性貧血是典型的紅細胞生成素的產量下降所引起的貧血，即由腎臟 內的紅細胞生成素產生細胞所產生的紅細胞生成素的產量下降所生成的病狀。因此，以下 將紅細胞生成素的產量下降所引起的貧血作為代表性的貧血，對"腎性貧血"進行敘述，但 作為本發明對象的貧血并不限于腎性貧血。
[0028] 本發明可針對腎性貧血的更根本原因進行治療。
[0029] 更具體而言，本發明的發明人等深入研究的結果，出乎意料地發現ALA類可抑制 由炎癥性細胞因子或尿毒癥毒素引起的紅細胞生成素產生細胞所產生的紅細胞生成素的 產量的下降。
[0030] 關于貧血與ALA的關系，已知ALA對于防止仔豬的貧血是有效的（參照日本專利 第4754731號公報）。已報道仔豬的貧血是因造血無法趕上急速的生長所引起，且作為造血 所需的化合物之一，添加ALA是有效的。該作用機制是"ALA為活體內的內在物質，且ALA 轉化為血紅素以增強血紅蛋白"。然而，這與"ALA類可抑制紅細胞生成素產生細胞所產生 的紅細胞生成素的產量下降"的本發明的機制完全無關。
[0031] 此外，本發明的發明人等獲得了以下見解，如已經提交但未公開的申請中所公開 的。此外，對于這些（申請）中的幾個，將其作為本申請的優先權的基礎申請。
[0032] S卩，本發明的發明人等發現ALA類的癌性貧血的改善效果。然而，這被認為是癌特 異性溶血反應的抑制所致。此外，本發明人等亦發現ALA類的慢性腎臟病的改善、預防效 果。然而，其直接改善腎臟的過濾能力，與"可抑制紅細胞生成素產生細胞所產生的紅細胞 生成素的產量的下降"的本發明的機制完全無關。且，本發明的發明人等還發現ALA類的敗 血癥的治療、預防效果。然而，其是基于抑制炎癥性細胞因子的產生自身的效果，與"可抑制 紅細胞生成素產生細胞所產生的紅細胞生成素的產量的下降"的本發明的機制完全無關。
[0033] 如此，"可抑制紅細胞生成素產生細胞所產生的紅細胞生成素的產量下降"的本發 明的特征，由常規的現有技術或作為發明人等的先前申請的未公開的申請是無法想到的。 而且，有關"ALA類為何對紅細胞生成素產生能力的改善有效"的準確的機制的闡明是今后 的課題。
[0034] 亦即，本發明有關紅細胞生成素產生促進劑，其含有以下式（I)表示的化合物或 其鹽，
[0035] [化學式1]
[0036] R^NHCH^OCH^H^OOR2 (I)
[0037] (式中，R1表示氫原子或酰基，R2表示氫原子、直鏈或支化烷基、環烷基、芳基或芳 燒基）。
[0038] 本發明還有關促進紅細胞生成素的產生的方法，其特征在于：
[0039] 將治療上有效量的以下式（I)所示的化合物或其鹽針對對象進行施用，
[0040] [化學式2]
[0041] R^NHCH^OCH^H^OOR2 (I)
[0042] (式中，R1表示氫原子或酰基，R2表示氫原子、直鏈或支化烷基、環烷基、芳基或芳 燒基）。
[0043] 本發明還有關紅細胞生成素的產量下降所引起的貧血的治療劑及/或預防劑，其 含有以下式（I)表示的化合物或其鹽，
[0044] [化學式3]
[0045] R1 NHCH2C0CH2CH2C00R2 (1)(式中，R 1表不氫原子或酰基，R2表不氫原子、直鏈或 支化烷基、環烷基、芳基或芳烷基）。
[0046] 于此，紅細胞生成素的產生的下降可能由炎癥性細胞因子或尿毒癥毒素所引起。
[0047] 各上式⑴中，
[0048] R1可選自由氫原子、碳數1?8的烷酰基、及碳數7?14的芳酰基組成的組，且
[0049] R2可選自由氫原子、直鏈或支化的碳數1?8的烷基、碳數3?8的環烷基、碳數 6?14的芳基、及碳數7?15的芳烷基組成的組。
[0050] 本發明的紅細胞生成素的產生的下降所引起的貧血的治療劑及/或預防劑可進 一步含有一種或二種以上的含金屬的化合物。該含金屬的化合物可為含有選自由鐵、鎂、及 鋅組成的組的金屬的化合物。
[0051] 本發明的紅細胞生成素的產生的下降所引起的貧血的治療劑及/或預防劑中，該 貧血可為腎性貧血。
[0052] 【發明的效果】
[0053] 通過使用本發明的紅細胞生成素產生促進劑，可促進紅細胞生成素產生細胞所進 行的紅細胞生成素的產生。由此的結果，其對于紅細胞生成素的產生的下降所引起的貧血， 典型地為腎性貧血的根本治療及預防是有效的。
[0054] 亦即，本發明提供了腎性貧血的治療劑及/或預防劑。
[0055] 此外，本發明中，"治療"不僅包括完全治愈腎性貧血，還包括改善腎性貧血的癥 狀。對于"預防"，亦同樣不僅包括完全不產生腎性貧血的癥狀，還包括使未施用本發明的預 防劑可能產生的腎性貧血的癥狀緩解。
[0056] 通過使用本發明的紅細胞生成素產生促進劑，可抑制紅細胞生成素產生細胞所產 生的紅細胞生成素的產量的下降，并可治療及/或預防貧血，尤其是腎性貧血。
[0057] 如此，本發明提供了通過與ESA (紅細胞造血刺激因子制劑）等對癥療法藥劑不同 的新穎途徑，來治療及/或預防腎性貧血的方法。
[0058] 而且，本發明的腎性貧血的治療劑及/或預防劑可代替ESA療法、或與ESA療法并 用來使用，從而可減少單獨使用ESA療法時所產生的副作用。
[0059] 此外，本發明提供了紅細胞生成素產生促進劑。
[0060] 通過使用本發明的紅細胞生成素產生促進劑，可促進紅細胞生成素產生細胞所進 行的紅細胞生成素的產生。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0061] 圖1表示在以6種不同的條件培養可產生紅細胞生成素的肝癌細胞（HEP3B細 胞）24小時后，在培養上清液中所含的紅細胞生成素濃度的測定結果的圖表。

【具體實施方式】
[0062] 本發明中，腎性貧血是主要由"因腎臟疾病等導致腎臟中的紅細胞生成素的產量 下降"所引起而產生的貧血。于此，腎臟中的紅細胞生成素的產生的下降，亦包括由炎癥性 細胞因子或尿毒癥毒素所引起的紅細胞生成素的產生的下降。此處尿毒癥毒素包括硫酸吲 哚酌' (indoxyl sulfate)等。
[0063] 作為本發明的腎性貧血的治療劑及/或預防劑，只要其是含有ALA類的腎性貧血 的治療劑及/或預防劑則沒有特別限制。
[0064] 此外，作為本發明的紅細胞生成素產生促進劑，只要其是含有ALA類的紅細胞生 成素產生促進劑則沒有特別限制。
[0065] 本說明書中，ALA類是指ALA或者其衍生物或它們的鹽。
[0066] 本說明書中，ALA意指5-氨基乙酰丙酸。ALA亦稱為δ-氨基乙酰丙酸，為氨基酸 的1種。
[0067] 作為ALA衍生物，可例示以下式（I)表示的化合物。式（I)中，R1表示氫原子或酰 基，R2表示氫原子、直鏈或支化烷基、環烷基、芳基或芳烷基。此外，式（I)中，ALA相當于R1 及R2為氫原子的情況。
[0068] [化學式4]
[0069] R1-NHCH2C0CH2CH2C00R 2 (1)
[0070] ALA類只要在活體內，以式（I)的ALA或其衍生物的狀態作為有效成分而發揮作用 即可，亦能以由活體內的酶分解的前體藥物（前體）的形式進行施用。
[0071] 作為式（I)的R1的酰基，可例舉甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基、異丁酰基、戊酰 基、異戊酰基、三甲基乙酰基、己酰基、辛酰基、節基羰基（benzylcarbonyl)等直鏈或支化 的碳數1?8的烷酰基、或苯甲酰基、1-萘甲酰基、2-萘甲酰基等碳數7?14的芳酰基。
[0072] 作為式（I)的R2的燒基，可例舉甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、 叔丁基、戊基、異戊基、新戊基、己基、庚基、辛基等直鏈或支化的碳數1?8的烷基。
[0073] 作為式（I)的R2的環烷基，可例舉環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、環辛 基、環十二烷基、1-環己烯基等可存在飽和、或一部分不飽和鍵的碳數3?8的環烷基。
[0074] 作為式（I)的R2的芳基，可例舉苯基、萘基、蒽基、菲基等碳數6?14的芳基。
[0075] 作為式（I)的R2的芳烷基，芳基部分可例示與上述芳基相同的基團，烷基部分亦 可例示與上述烷基相同的基團，具體可例舉芐基、苯乙基、苯丙基、苯丁基、二苯甲基、三苯 甲基、萘甲基、萘乙基等碳數7?15的芳烷基。
[0076] 作為優選的ALA衍生物，可例舉其中R1為甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基等的化 合物。此外，作為優選的ALA衍生物，可例舉其中上述R 2為甲基、乙基、丙基、丁基、戊基等 的化合物。此外，作為優選的ALA衍生物，可例舉上述R1與R 2的組合為（甲酰基與甲基）、 (乙酰基與甲基）、（丙酰基與甲基）、（丁酰基與甲基）、（甲酰基與乙基）、（乙酰基與乙 基）、（丙酰基與乙基）、（丁酰基與乙基）各組合的化合物。
[0077] ALA類當中，作為ALA或其衍生物的鹽，可例舉藥理學上可接受的酸加成鹽、金屬 鹽、銨鹽、有機胺加成鹽等。作為酸加成鹽，可例示如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、磷酸鹽、 硝酸鹽、硫酸鹽等各無機酸鹽、甲酸鹽、乙酸鹽、丙酸鹽、甲苯磺酸鹽、琥珀酸鹽、草酸鹽、乳 酸鹽、酒石酸鹽、乙醇酸鹽、甲磺酸鹽、丁酸鹽、戊酸鹽、檸檬酸鹽、延胡索酸鹽、馬來酸鹽、蘋 果酸鹽等各有機酸加成鹽。作為金屬鹽，可例示鋰鹽、鈉鹽、鉀鹽等各堿金屬鹽、鎂鹽、鈣鹽 等各堿土金屬鹽、鋁、鋅等各金屬鹽。作為銨鹽，可例示銨鹽、四甲基銨鹽等烷基銨鹽等。作 為有機胺鹽，則可例示三乙胺鹽、哌啶鹽、嗎啉鹽、甲苯胺鹽等各鹽。此外，這些鹽在使用時 亦能以溶液形式使用。
[0078] 以上的ALA類當中，最優選地為ALA、及ALA甲基酯、ALA乙基酯、ALA丙基酯、ALA 丁基酯、ALA戊基酯等各種酯類、以及它們的鹽酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽。其中，作為特別優選 的，可例示ALA鹽酸鹽、ALA磷酸鹽。
[0079] 上述ALA類可通過例如化學合成、利用微生物生產、利用酶生產等公知方法來制 造。此外，上述ALA類可形成水合物（hydrate)或溶劑合物，亦可單獨或適當組合2種以上 來使用ALA類。
[0080] 本發明的紅細胞生成素產生促進劑、或本發明的腎性貧血的治療劑及/或預防劑 優選以在不發生過多癥的范圍，進一步含有含金屬的化合物；作為所述含金屬的化合物，只 要未對本發明的效果造成損害，則可有利地使用金屬化合物。作為本發明的含金屬的化合 物的金屬部分，可例舉鐵、鎂、鋅、鎳、釩、鈷、銅、鉻、鑰，但優選為鐵、鎂、鋅，其中作為更優選 的可例示鐵。
[0081] 作為鐵化合物，可例舉檸檬酸亞鐵、檸檬酸亞鐵鈉、檸檬酸鐵鈉、檸檬酸鐵銨、焦 磷酸鐵、血紅素鐵（(heme iron)、右旋糖酐鐵、乳酸鐵、葡萄糖酸亞鐵、二乙三胺五乙酸鐵 鈉、二乙三胺五乙酸鐵銨、乙二胺四乙酸鐵鈉、乙二胺五乙酸鐵銨、三亞乙基四胺鐵、二羧甲 基谷氨酸鐵鈉、二羧甲基谷氨酸鐵銨、乳鐵蛋白鐵、轉鐵蛋白鐵、氯化鐵、三氧化二鐵、鐵葉 綠酸鈉 （sodium iron chlorophyllin)、鐵蛋白鐵、富馬酸亞鐵、焦磷酸亞鐵、含糖氧化鐵 (saccharated iron oxide)、乙酸鐵、草酸鐵、琥拍酸亞鐵、琥拍酸朽1檬酸鐵鈉、硫酸鐵、硫 酸甘氨酸鐵（iron glycine sulfate)等，其中優選為檸檬酸亞鐵、檸檬酸亞鐵鈉。
[0082] 作為鋅化合物，可例舉氯化鋅、氧化鋅、硝酸鋅、碳酸鋅、硫酸鋅、二乙三胺五乙酸 鋅二銨、乙二胺四乙酸鋅二鈉、鋅原卟啉、含鋅的酵母。
[0083] 上述含金屬的化合物可分別使用1種或2種以上，作為含金屬的化合物的施用量， 相對于ALA類的施用量，以摩爾比計，可例舉0. 01?10倍量，優選為0. 1?5倍量，更優選 為0. 2?2倍量。
[0084] 本發明的紅細胞生成素產生促進劑、或本發明的腎性貧血的治療劑及/或預防劑 所含有的ALA類及含金屬的化合物，可作成包含ALA類及含金屬的化合物的組合物來施用、 或各自單獨施用，但在各自單獨施用時，優選的是同時施用它們。然而，嚴格說來，即便為非 同時，為使ALA類及含金屬的化合物的施用能夠發揮相加效果或協同效果，亦可于兩者間 未隔開相當間隔之下來進行。
[0085] 作為本發明的紅細胞生成素產生促進劑、或本發明的腎性貧血的治療劑及/或預 防劑的施用路徑，可例舉亦包含舌下施用的經口施用、或者吸入施用、包含靜脈滴注的靜 脈內施用、使用泥罨劑（poultice)等的經皮施用、坐藥、或利用鼻胃管、鼻腸管、胃造口管 (gastrostomy tube)或是腸造口管的強制性腸道營養法（enteral nutrition)所進行的施 用等非經口施用等，但一般為經口施用。
[0086] 于此，施用的對象典型地為人類，但寵物、實驗動物、家畜等非人類動物的情況亦 包含在內。
[0087] 作為本發明的紅細胞生成素產生促進劑、或本發明的腎性貧血的治療劑及/或預 防劑的劑型，可根據上述施用路徑來適當決定，可例舉注射劑、點滴劑（infusions)、片劑、 膠囊劑、細粒劑、散劑、液劑、溶于糖漿等的水劑、泥罨劑、坐藥劑等。
[0088] 為制備本發明的紅細胞生成素產生促進劑、或本發明的腎性貧血的治療劑及/或 預防劑，可視需求添加藥理學上可接受的載體、賦形劑、稀釋劑、添加劑、崩解劑、結合劑、被 覆劑、潤滑劑、光滑劑（gliding agent)、光澤劑（glossing agent)、增味劑、甜味劑、增溶 齊?、溶劑、凝膠劑、營養劑等，具體可例示水、生理食鹽水、動物性脂肪及油、植物油、乳糖、淀 粉、明膠、結晶性纖維素、樹膠（gum)、滑石、硬脂酸鎂、羥丙基纖維素、聚烷撐二醇、聚乙烯 醇、甘油。此外，以水溶液形式制備本發明的腎性貧血的治療劑及/或預防劑、或本發明的 紅細胞生成素產生促進劑時，為防止ALA類的分解，需留意勿使水溶液呈堿性，若其呈堿性 時，亦可通過去除氧氣來防止分解。
[0089] 作為本發明的紅細胞生成素產生促進劑、或本發明的腎性貧血的治療劑及/或預 防劑的量、頻率、時間，將因腎性貧血患者的年齡、體重、癥狀等而異，但作為優選施用量的 實例，以ALA磷酸鹽換算，可例舉成人每人lmg?3000mg/日，優選為2mg?lOOOmg/日，更 優選為3mg?700mg/日。使用其他ALA類時，亦可通過進行摩爾換算來計算優選施用量。 而且，上述優選施用量的范圍僅為例示，并非予以限定。
[0090] 作為施用頻率，可例示一日一次?多次的施用或通過靜脈滴注等所進行的連續施 用。施用時間亦可基于能診斷出血液中的Hb(血紅蛋白）值、或紅細胞生成素濃度等的腎 性貧血的指標，根據該【技術領域】的藥理學者或臨床醫師已知的方法來確定。
[0091] 將本發明的紅細胞生成素產生促進劑作為腎性貧血的治療劑及/或預防劑使用 時，可與其他現有的腎性貧血的治療劑及/或預防劑組合來使用。作為現有的腎性貧血的 治療劑及/或預防劑的實例，可例舉ESA療法中所使用的ESA(紅細胞造血刺激因子制劑） 等。作為此種ESA(紅細胞造血刺激因子制劑）的非限定實例，可舉出Epoetina (商標）、 EpoetinP (商標）、Darbepoetina (商標）等重組人體紅細胞生成素制劑（rHu紅細胞生 成素）。認為這些藥劑與ALA的腎性貧血治療劑及/或預防劑相關的機制于根本上各自不 同，因而有相加效果，且依情況，有協同效果。
[0092] 本說明書中所使用的用語，除非特別定義，否則是用以說明特定的實施方案，并非 用來限定本發明。
[0093] 此外，本說明書中所使用的用語"包含（含有）"，除根據文中前后邏輯應做明顯不 同的理解的情況以外，均意指"記述的事項（構件、步驟、要素、數字等）存在"，且不排除"除 此之外的事項（構件、步驟、要素、數字等）存在"。
[0094] 只要沒有不同的定義，此處所使用的所有用語（含技術用語及科學用語）與本發 明所屬的領域的技術人員所廣泛理解的意思是相同的。此處所使用的用語，只要沒有明示 不同的定義，否則應解釋為具有與本說明書及相關【技術領域】中的含義一致的含義，不應就 理想化或過度形式化的意義來解釋。
[0095] 以下將參照實施例對本發明更詳細進行說明。然而，本發明可通過各種方面而具 體化，不應以限定于此處所記載的實施例來解釋。
[0096]【實施例】
[0097]〈實施例1 :針對紅細胞生成素產生能力降低的細胞施用ALA類后的紅細胞生成素 產生能力的改善效果的測定〉
[0098] 通過在低氧條件下培養紅細胞生成素產生細胞，在人為產生紅細胞生成素的狀態 下添加炎癥性細胞因子、或尿毒癥毒素，而使紅細胞生成素產生細胞的紅細胞生成素產生 能力降低。
[0099] 作為炎癥性細胞因子，采用TNF-a。此外，作為尿毒癥毒素，則采用硫酸吲哚酚。 硫酸吲哚酚一般被認為是尿毒癥毒素的病因物質（causative substance)，亦是尿毒癥相 關標記當中最常使用的。此外，硫酸吲哚酚在體內是衍生自色氨酸的吲哚在肝臟經硫酸化 所合成的物質。如此，通過添加炎癥性細胞因子、或尿毒癥毒素，紅細胞生成素的產量下降 的狀態便為模擬的腎性貧血的狀態。而且，本發明的發明人等發現，通過在所述狀態下施用 ALA類，可抑制紅細胞生成素的產生的下降。
[0100] 本實施例中，使用為在不同的培養條件下可產生I?VI組的紅細胞生成素的肝 癌細胞的HEP3B細胞（ATCC公司）。首先，作為全部6組所共同的培養步驟，對12孔板的 每孔（well)約30萬個HEP3B細胞進行培養。作為培養條件，使用添加有10% FCS/PC-SM 的RPMI1640培養基，于37°C、20%氧氣條件下進行培養。培養24小時后，分作以下I? VI的培養條件，進一步培養24小時。此外，以下作為TNF-α，使用人重組TNF-a(human recombinant TNF_a)(rhTNF-a ;Rochc)〇
[0101] 【表1】
[0102]

【權利要求】
1. 紅細胞生成素產生促進劑，所述紅細胞生成素產生促進劑含有以下式（I)表示的化 合物或其鹽， [化學式1] R'-NHCH^OCH^^COOR2 (1)式中，R1表示氫原子或酰基，R2表示氫原子、直鏈或支化 烷基、環烷基、芳基或芳烷基。
2. 促進紅細胞生成素的產生的方法，其特征在于： 將治療上有效量的以下式（I)所示的化合物或其鹽針對對象進行施用， [化學式2] R'-NHCH^OCH^^COOR2 (1)式中，R1表示氫原子或酰基，R2表示氫原子、直鏈或支化 烷基、環烷基、芳基或芳烷基。
3. 由紅細胞生成素的產生的下降所引起的貧血的治療劑及/或預防劑，所述治療劑及 /或預防劑含有以下式（I)表示的化合物或其鹽， R'-NHCH^OCH^^COOR2 (1)式中，R1表示氫原子或酰基，R2表示氫原子、直鏈或支化 烷基、環烷基、芳基或芳烷基。
4. 如權利要求3所述的貧血的治療劑及/或預防劑，其中， R1選自由氫原子、碳數1?8的烷酰基、及碳數7?14的芳酰基組成的組， R2選自由氫原子、直鏈或支化的碳數1?8的烷基、碳數3?8的環烷基、碳數6?14 的芳基、及碳數7?15的芳烷基組成的組。
5. 如權利要求3或4所述的貧血的治療劑及/或預防劑，其中，所述治療劑及/或預防 劑進一步含有一種或二種以上的含金屬的化合物。
6. 如權利要求5所述的貧血的治療劑及/或預防劑，其中，所述含金屬的化合物為含有 選自由鐵、鎂、及鋅組成的組的金屬的化合物。
7. 如權利要求5所述的貧血的治療劑及/或預防劑，其中，所述金屬化合物為含有鐵的 化合物。
8. 如權利要求3所述的貧血的治療劑及/或預防劑，其中，所述紅細胞生成素的產生的 下降是由炎癥性細胞因子或尿毒癥毒素所引起。
9. 如權利要求3至8中任一項所述的貧血的治療劑及/或預防劑，其中，所述貧血為腎 性貧血。
10. 如權利要求9所述的腎性貧血的治療劑及/或預防劑，其中，所述化合物或其鹽通 過促進紅細胞生成素的產生來治療及/或預防所述腎性貧血。
【文檔編號】A61K31/197GK104105482SQ201280060344
【公開日】2014年10月15日 申請日期:2012年10月5日 優先權日:2011年10月12日
【發明者】田中徹, 中島元夫, 高橋究, 阿部高明 申請人:思佰益藥業股份有限公司, 國立大學法人東北大學