一種具有抗癌作用的中藥組合物及其制備方法和用途
【專利摘要】本發明提供了一種具有抗癌作用的中藥組合物及其制備方法和用途。所述抗癌作用的中藥組合物的原料藥主要由白芍、當歸組成；所述中藥組合物的制備方法包括：按比例取原料藥，以水或與水相互溶的有機溶劑提取；或，按比例取原料藥，采用水提醇沉法制備；其中所述醇沉濃度為50-90。所述用途是在該中藥組合物在制備治療癌癥藥物，特別是宮頸癌藥物中的應用。該中藥組合物由如下重量比的原料藥組成：白芍：當歸=1：（0.2-4）。本發明白芍和當歸配伍對Hela細胞具有協同抑制作用，具有較好的抗癌作用。
【專利說明】一種具有抗癌作用的中藥組合物及其制備方法和用途

【技術領域】
[0001]本發明涉及一種中藥組合物及其制備方法和用途，具體涉及一種具有抗癌作用的中藥組合物及其制備方法和用途，屬中醫藥【技術領域】。

【背景技術】
[0002]癌癥是危及人類健康的重大疾病，其致死率呈逐年上升的趨勢，它的發生和發展是多因素參與、多基因改變及多階段發展的復雜病變過程。目前對于癌癥的治療大多采用手術治療結合放、化療方法，但是該方法對病人的創傷大，危險性高，且費用昂貴，但療效卻并不理想。中藥作為我國傳統防病治病的武器，伴隨著近年來逐步深入的研究與探索，在癌癥治療中越來越受到重視。研究表明，在腫瘤防治過程中，中藥主要是從提高機體免疫功能、誘導腫瘤細胞凋亡、抑制腫瘤細胞轉移以及對化療的減毒增效等方面發揮作用的。
[0003]本發明所述中藥組合物配伍合理，既能調節氣血陰陽和臟腑功能，保護骨髓造血功能，又能啟動自身防御系統，提高機體免疫力，對于腫瘤的輔助治療很有益處。


【發明內容】

[0004]本發明的第一個目的在于提供一種具有抗癌作用的中藥組合物。
[0005]本發明的第二個目的在于提供該組合物的制備方法。
[0006]本發明的第三個目的在于提供該組合物在制備治療癌癥藥物中的應用。
[0007]本發明的第四個目的在于提供該組合物在制備治療宮頸癌藥物中的應用。
[0008]本發明的目的是通過如下技術方案實現的:
[0009]一種具有抗癌作用的中藥組合物，該中藥組合物由如下重量比的原料藥組成:
[0010]白芍:當歸=1: (0.2-4)。
[0011]所述中藥組合物的原料藥優選為:
[0012]白芍:當歸=1: (0.3-3.5)。
[0013]所述中藥組合物的原料藥優選為:
[0014]白芍:當歸=1: (0.4-3)。
[0015]所述中藥組合物的原料藥優選為:
[0016]白芍:當歸=1: (0.5-2.5)。
[0017]所述中藥組合物的原料藥優選為:
[0018]白芍:當歸=1:(0.5-2.2)。
[0019]所述中藥組合物的原料藥優選為:
[0020]白芍:當歸=1: (0.5-2)。
[0021]所述中藥組合物的原料藥進一步優選為:
[0022]白芍:當歸=1:0.5;
[0023]或，白芍:當歸=1:1;
[0024]或，白芍:當歸=1:2。
[0025]本發明中藥組合物可按常規工藝制備成臨床可接受的顆粒、片劑、膠囊、滴丸、口服液、混懸液、乳濁液、注射劑。
[0026]本發明中藥組合物可采用如下方法制備:
[0027]按比例取原料藥，以水或與水相互溶的有機溶劑提取；
[0028]進一步的，所述與水相互溶的有機溶劑選自甲醇、乙醇、丙酮中的一種或幾種；更進一步優選為50-90%的乙醇；更進一步優選為60-80%的乙醇；更進一步優選為70%的乙醇；
[0029]所用的提取方法包括煎煮提取、回流提取、浸泡提取、超聲提取或滲漉提取中的任意一種方式，或者不同提取方法的組合。
[0030]本發明中藥組合物還可采用:按比例取原料藥，采用水提醇沉法制備；其中所述醇沉濃度為50-90% ；
[0031]進一步的，所述醇沉濃度為60-80% ;更進一步的所述醇沉濃度為70%。
[0032]上述制備方法中原料藥經提取后還可經純化、精制，如過大孔樹脂柱；并進一步按常規的制劑工藝制成藥劑學可接受的任意常規劑型，包括顆粒、片劑、膠囊、滴丸、口服液、混懸液、乳濁液、注射劑。
[0033]為使上述劑型能夠實現，需在制備這些劑型時加入藥學可接受的輔料，例如:填充劑、崩解劑、潤滑劑、助懸劑、粘合劑、甜味劑、矯味劑、防腐劑、基質等。填充劑包括:淀粉、預膠化淀粉、乳糖、 甘露醇、甲殼素、微晶纖維素、蔗糖等；崩解劑包括:淀粉、預膠化淀粉、微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉、交聯聚乙烯吡咯烷酮、低取代羥丙纖維素、交聯羧甲基纖維素鈉等；潤滑劑包括:硬脂酸鎂、十二烷基硫酸鈉、滑石粉、二氧化硅等；助懸劑包括:聚乙烯吡咯烷酮、微晶纖維素、蔗糖、瓊脂、羥丙基甲基纖維素等；粘合劑包括:淀粉漿、聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基甲基纖維素等；甜味劑包括:糖精鈉、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矯味劑包括:甜味劑及各種香精；防腐劑包括:尼泊金類、苯甲酸、苯甲酸鈉、山梨酸及其鹽類、苯扎溴銨、醋酸氯乙定、桉葉油等；基質包括:PEG6000，PEG4000，蟲蠟等。為使上述劑型能夠實現中藥藥劑學，需在制備這些劑型時加入藥學可接受的其它輔料(范碧亭《中藥藥劑學》，上海科學出版社1997年12月第I版中各劑型記載的輔料)。
[0034]本發明所述中藥組合物除了以白芍、當歸原藥材投料的形式外，還可以采用以白芍、當歸提取物(有效部位)投料的形式，因此本發明進一步公開了一種具有抗癌作用的中藥組合物:
[0035]一種具有抗癌作用的中藥組合物，該中藥組合物由如下重量比的原料組成:
[0036]白芍提取物:當歸提取物=1:(0.2-4)。
[0037]所述中藥組合物的原料藥優選為:
[0038]白芍提取物:當歸提取物=1:(0.3-3.5)。
[0039]所述中藥組合物的原料藥優選為:
[0040]白芍提取物:當歸提取物=1:(0.4-3)。
[0041]所述中藥組合物的原料藥優選為:
[0042]白芍提取物:當歸提取物=1:(0.5-2.5)。
[0043]所述中藥組合物的原料藥優選為:
[0044]白芍提取物:當歸提取物=1:(0.5-2.2)。
[0045]所述中藥組合物的原料藥優選為:
[0046]白芍提取物:當歸提取物=1:0.5-2。
[0047]所述中藥組合物的原料藥進一步優選為:
[0048]白芍提取物:當歸提取物=1:0.5 ；
[0049]或，白芍提取物:當歸提取物=1:1;
[0050]或，白芍提取物:當歸提取物=1:2。
[0051]本發明所述白芍提取物和當歸提取物分別為白芍、當歸的水提取物或與水相互溶的有機溶劑提取物；或，分別為白芍、當歸經水提醇沉處理后得到的提取物。
[0052]進一步的，所述與水相互溶的有機溶劑選自甲醇、乙醇、丙酮中的一種或幾種；更進一步優選為50-90%的乙醇；更進一步優選為60-80%的乙醇；更進一步優選為70%的乙醇；
[0053]所用的提取方法包括煎煮提取、回流提取、浸泡提取、超聲提取或滲漉提取中的任意一種方式，或者不同提取方法的組合。
[0054]進一步的，所述醇沉濃度為50-90% ;進一步優選醇沉濃度為60-80% ;更進一步的所述醇沉濃度為70%。
[0055]本發明所述水提醇沉法系指在中藥水提濃縮液中，加入乙醇使達到規定的含醇量(即醇沉濃度)，某些成分在醇溶液中溶解度降低析出沉淀，濾過，取乙醇溶液，回收乙醇得提取物，使水提液得以精制的方法。
[0056]實驗結果表明，白芍、當歸、川芎和熟地單獨作用于人宮頸癌Hela細胞時，僅白芍對Hela細胞的增殖有抑制作用，抑制率可達到28.6%，當歸、川芎和熟地均無明顯抑制作用。而白芍與當歸配伍時對Hela細胞起協同抑制作用(CI〈1，0.l〈Fa〈0.9)，白芍與川芎配伍或白芍與熟地配伍對Hela細胞的增殖抑制均起拮抗作用(CI>1)。
[0057]效果實驗例
[0058]實驗例I白芍藥對的研究
[0059]I 材料
[0060]人宮頸癌Hela細胞由天津市腫瘤研究所中心實驗室惠贈；RPMI_1640培養基，美國GIBCO公司產品；
[0061]白芍、當歸、川芎、熟地各單藥及白芍分別于當歸、川芎、熟地按不同比例配伍的組合物的“藥對”均采用如下方法制備:取原料藥，加水浸泡30min，加入8倍量水煎煮三次，每次1.5小時，濾過，合并濾液，離心、干燥，粉碎成粉。按實驗需要將干燥粉用DMEM高糖培養基配成相應濃度的試藥并過濾除菌。
[0062]2實驗方法
[0063]2.1白芍、當歸、川芎、熟地對Hela細胞增殖的影響
[0064]Hela細胞在5% C02孵箱中培養，培養基為含10%滅活小牛血清的RPM1-1640，含
I%雙抗(青霉素和鏈霉素)。每2~3天傳代一次，取對數生長期細胞用于實驗。24孔板每孔接種5000/ml個Hela細胞，接種后24小時加藥培養，設白芍、當歸、川芎、熟地及陰性對照組。以下式換算各組體外培養加藥物濃度:(:&8/1^)=^)(1^/敁/(1) ;C為體外實驗所需濃度，D為臨床用藥濃度，臨床用量按四味藥各9g/計算。于加藥后96小時收集細胞，行臺盼藍計數。
[0065]2.2白芍配伍不同藥物對Hela細胞增殖的影響
[0066]取對數生長期的Hela細胞，胰酶消化并吹打為細胞懸液。離心收集細胞，計數后調整懸液的細胞濃度為I X 1VmL,接種于24孔細胞培養板，每孔lmL。根據2.1實驗結果選取對Hela細胞增殖有明顯抑制作用的白芍，將其與其他藥物按不同比例不同濃度配伍使用作用于Hela細胞，設制白芍、當歸、熟地、川芎單用組，白芍與當歸按1:1、2:1、1:2比例配伍合用組、白芍與熟地按1: 1、2:1、1:2比例配伍合用組、白芍與川芎按1: 1、2:1、1:2比例配伍合用組，以及陰性對照組。以下式換算白芍與不同藥物配伍中劑量組體外培養加藥物濃度:C(y g/mL)=ro(mg/Kg/d) ；C為體外實驗所需濃度，D為臨床用藥濃度。以此濃度為中間濃度，分別向上、向下2倍遞增遞減，連續設置6個濃度梯度。孵箱中培養96h，光經鏡下觀察各組細胞形態變化，后收集細胞，行臺盼藍計數。
[0067]運用中效原理判斷聯合藥效:中效濃度(Dm)，即半數抑制濃度(IC50)的計算，根據臺盼藍拒染活細胞數計算藥物組細胞fu(生存率fract1n of unaffeeted cells)及fa(抑制率 fraet1n of affected cells)
[0068]fu=試驗組平均活細胞數/對照組平均活細胞數
[0069]fa=l-fu
[0070]將中效方程fa/fu= (D/Dm)m兩邊取對數(D為藥物濃度；Dm為中效濃度)得方程:
[0071]log(fa/fu)=mLogD-mLogDm
[0072]從而Dx=DmX [fa/(l_fa) ] 1/m
[0073]設Y=1g (fa/fu), X=1gD,則得直線方程:
[0074]Y=mX+a (m方程的斜率，a為方程截距)
[0075]Fa=0.5時，X=logDm=-a/m,計算出藥物單用及聯合應用時的Dm值
[0076]應用此公式Dx=DmX [fa/ (1-fa) ] l//m 計算出達到各種效應(fa=0.1, 0.2, 0.3...0.9)時兩種藥物單用及聯合應用所需要的藥物濃度(D)
[0077]根據周-特氏聯合指數法中的量-效公式計算兩藥合用時的Cl (The Combinat1nindex)值
[0078]Clx=Dl/Dxl+D2/Dx2
[0079]注意:式中Dl，D2為合用時，效應達X時兩藥物所占濃度，Dxl，Dx2為兩藥單用時，效應達X時各自的濃度。系數α根據中效作圖確定，兩藥作圖相互平行時α取值為0，反之為I。
[0080]結果判定:CI〈1表示兩藥合用時產生協同(synergism)作用；CI=1表示兩藥合用時產生相加(additivity)作用；CI>1表示兩藥合用時產生拮抗(antagonism)作用。
[0081]中效濃度及聯合藥效通過CalcuSyn軟件計算并擬合圖表。
[0082]2.3藥物配伍協同作用機制研究
[0083]取對數生長期的Hela細胞，0.25%胰酶消化后，收集細胞。臺盼藍染色作活細胞計數(活細胞數須在90%以上)并制備細胞懸液，調整細胞濃度為每孔I X 15,接種于6孔培養板中，繼續培養24h，待細胞貼壁后，換液加藥，設白芍單用(250 μ g/mL)組，當歸單用(125μ g/mL)組，白芍配伍當歸(250μ g/mL+125y g/mL)組及空白對照組，各實驗組對應加入占培基體積10 %的各濃度的含藥血清，空白對照組加入等體積培養液，繼續培養96h后收集細胞，通過流式細胞術檢測藥物對Hela細胞周期及細胞凋亡的影響。
[0084]取對數生長期的Hela細胞，調整細胞濃度為5X 14/孔接種于12孔培養板中，繼續培養24h，待細胞貼壁后，換液加藥，設白芍單用(250μ g/mL)組，當歸單用(125 μ g/mL)組，白芍配伍當歸(250μ g/mL+125y g/mL)組及空白對照組各實驗組對應加入占培基體積10%的各濃度的含藥血清，空白對照組加入等體積培養液，繼續培養96h后收集細胞，Elisa檢測白茍與當歸配伍對Hela細胞CyclinDl表達的影響。
[0085]3統計方法
[0086]應用SPSS16.0統計分析軟件包，實驗數據以均數土標準差(x±S )表示，在檢驗數據正態分布及方差齊性的條件下，多組間數據比較采用方差分析，各組組間差異的比較用LSD — t檢驗。以P < 0.05為有統計學意義。
[0087]4實驗結果
[0088]4.1白芍、當歸、川芎、熟地對Hela細胞增殖的影響
[0089]臺盼藍計數法檢測不同實驗組。白芍對Hela細胞的增殖有抑制作用，抑制率可達到28.6%，而相同劑量的當歸、川芎和熟地對Hela細胞均無明顯抑制作用(詳見表1)。
[0090]表1各實驗組對Hela細胞抑制率
[0091]

【權利要求】
1.一種具有抗癌作用的中藥組合物，其特征在于，該中藥組合物的原料藥主要由白芍、當歸組成。
2.如權利要求1所述的中藥組合物，其特征在于，該中藥組合物由如下重量比的原料藥組成: 白芍:當歸=1:(0.2-4)； 或，白芍:當歸=1:(0.3-3.5)； 或，白芍:當歸=1:(0.4-3)； 或，白芍:當歸=1:(0.5-2.5)； 或，白芍:當歸=1:(0.5-2.2)。
3.如權利要求2所述的中藥組合物，其特征在于，該中藥組合物由如下重量比的原料藥組成: 白芍:當歸=1:0.5 ； 或，白茍:當歸=1:1; 或，白茍:當歸=1:2o
4.如權利要求1-3任 一所述中藥組合物的制備方法，其特征在于，該方法包括: 按比例取原料藥，以水或與水相互溶的有機溶劑提取； 或，按比例取原料藥，采用水提醇沉法制備；其中所述醇沉濃度為50-90%。
5.如權利要求4所述中藥組合物的制備方法，其特征在于，所述與水相互溶的有機溶劑選自甲醇、乙醇、丙酮中的一種或幾種；所述提取方法包括煎煮提取、回流提取、浸泡提取、超聲提取或滲漉提取中的任意一種方式，或者不同提取方法的組合。
6.一種具有抗癌作用的中藥組合物，其特征在于，該中藥組合物由如下重量比的原料組成: 白芍提取物:當歸提取物=1:(0.2-4)。
7.如權利要求6所述的中藥組合物，其特征在于，該中藥組合物由如下重量比的原料組成: 白芍提取物:當歸提取物=1:(0.3-3.5)； 或，白芍提取物:當歸提取物=1:(0.4-3)； 或，白芍提取物:當歸提取物=1:(0.5-2.5)； 或，白芍提取物:當歸提取物=1:(0.5-2.2)。
8.如權利要求7所述的中藥組合物，其特征在于，該中藥組合物由如下重量比的原料組成: 白芍提取物:當歸提取物=1:0.5 ； 或，白芍提取物:當歸提取物=1:1; 或，白芍提取物:當歸提取物=1:2。
9.如權利要求1-3、6-8任一所述的中藥組合物在制備治療癌癥藥物中的應用。
10.如權利要求1-3、6-8任一所述的中藥組合物在制備治療宮頸癌藥物中的應用。
【文檔編號】A61K36/71GK104069194SQ201310100488
【公開日】2014年10月1日 申請日期:2013年3月26日 優先權日:2013年3月26日
【發明者】姚華, 王軍, 杜軍, 郭潔, 李芳
申請人:成都地奧集團天府藥業股份有限公司