專利名稱：一種預(yù)知子籽提取物在治療原發(fā)性肝癌藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種預(yù)知子籽提取物在治療原發(fā)性肝癌藥物中的應(yīng)用，具體說(shuō)，是涉及一種預(yù)知子籽乙醇提取物在制備治療原發(fā)性肝癌的藥物制劑中的應(yīng)用，屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
預(yù)知子別名八 月札、八月炸、八月楂、八月瓜、八月果、百日瓜、牽藤瓜、臘瓜、拉拉果、木通子、壓驚子、畜菖子、拿子、桴梭子、覆子、冷飯包、野香交、羊開(kāi)口，為木通科植物木通(Akebia quinata (Thunb.)Decne.)、三葉木通(Akebia trifoliate (Thunb.)Koidz.)、白木通(Akebia trifoliate (Thunb.) Koidz.var.australis ((Diels)) Rehd.)的干燥近成熟果實(shí)。預(yù)知子性味苦寒，歸肝、膽、胃、膀胱經(jīng)；疏肝理氣，和胃，活血止痛，軟堅(jiān)散結(jié)，利尿；用于肝胃氣滯，脘脅脹痛，飲食不消，下痢便泄，痛經(jīng)閉經(jīng)，疝氣疼痛，痰核痞塊，小便不利等治療。但是，現(xiàn)有技術(shù)中沒(méi)有關(guān)于預(yù)知子籽的單獨(dú)功效的論述。迄今為止，預(yù)知子相關(guān)論著、專利、科技成果等文獻(xiàn)內(nèi)容多以復(fù)方組成藥物之一的形式在臨床應(yīng)用為主，單味藥研究特別是臨床常用功效機(jī)制研究罕見(jiàn)；在這些文獻(xiàn)中，預(yù)知子參與的組方多次提及治療肝癌，但未見(jiàn)其單味藥和單味藥的作用機(jī)制研究報(bào)道。預(yù)知子相關(guān)專利共計(jì)132項(xiàng)幾乎全是復(fù)方臨床應(yīng)用，僅有I項(xiàng)單味藥相關(guān)專利CN200910040491.1中公開(kāi)了一種預(yù)知子提取物及其制劑和其在抗抑郁藥物中的用途。對(duì)于預(yù)知子這一肝癌治療中藥復(fù)方常用藥，其單味藥應(yīng)用于惡性腫瘤治療的研究發(fā)明至目前未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。原發(fā)性肝癌是我國(guó)重大疾病，居惡性腫瘤死亡率第2位，發(fā)病人數(shù)約占全球的55%，嚴(yán)重威脅人民生命，造成家庭和社會(huì)經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。然而原發(fā)性肝癌治療目前尚無(wú)特效治療方法和藥物。因此，尋找療效確切的抗癌藥物迫在眉睫。原發(fā)性肝癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵在于癌變細(xì)胞不可調(diào)控的惡性增殖，因此有效抑制癌細(xì)胞的增殖是原發(fā)性肝癌治療的關(guān)鍵所在。經(jīng)文獻(xiàn)檢索，迄今尚未見(jiàn)有預(yù)知子籽提取物用于抑制原發(fā)性肝癌細(xì)胞惡性增殖及其直接相關(guān)疾病方面的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種預(yù)知子籽提取物的新應(yīng)用。本發(fā)明提供的預(yù)知子籽提取物的一種新應(yīng)用是指以預(yù)知子籽提取物作為活性成分之一或唯一活性成分用于制備治療原發(fā)性肝癌的藥物制劑。所述的預(yù)知子籽提取物優(yōu)選為預(yù)知子籽的乙醇提取物。作為進(jìn)一步優(yōu)選方案，所述的預(yù)知子籽的乙醇提取物是由體積分?jǐn)?shù)為60 90%的乙醇水溶液對(duì)預(yù)知子籽進(jìn)行回流提取而得。作為更進(jìn)一步優(yōu)選方案，所述的預(yù)知子籽的乙醇提取物是由8 10倍重量體積的體積分?jǐn)?shù)為70 80%的乙醇水溶液對(duì)預(yù)知子籽進(jìn)行回流提取I 3次，每次I 3小時(shí)而得。所述的藥物制劑形式可以是任何可藥用的劑型，這些劑型包括:片劑、糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸齊 、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、軟膏劑、硬膏劑、霜?jiǎng)婌F劑、滴齊 、貼劑；優(yōu)選口服劑型，如:膠囊劑、片劑、口服液、顆粒劑、丸劑、散劑、丹劑、膏劑等。所述的口服劑型可含有常用的賦形劑，諸如粘合劑、填充劑、稀釋劑、壓片劑、潤(rùn)滑劑、崩解劑、著色劑、調(diào)味劑和濕潤(rùn)劑，必要時(shí)可對(duì)片劑進(jìn)行包衣。適宜的填充劑包括纖維素、甘露糖醇、乳糖和其它類似的填充劑；適宜的崩解劑包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如羥基乙酸淀粉鈉；適宜的潤(rùn)滑劑包括，例如硬脂酸鎂。適宜的藥物可接受的濕潤(rùn)劑包括十二烷基硫酸鈉。本發(fā)明采用癌細(xì)胞生長(zhǎng)增殖MTT檢測(cè)方法，實(shí)驗(yàn)論證了預(yù)知子籽提取物具有非常顯著地抑制原發(fā)性肝癌細(xì)胞惡性增殖的作用，有望通過(guò)抑制原發(fā)性肝癌細(xì)胞惡性增殖而作為活性成分應(yīng)用于治療原發(fā)性肝癌的藥物制劑的制備中，為預(yù)知子籽提取物開(kāi)拓了一種新的藥用價(jià)值。


圖1是各藥物組對(duì)SMMC7721肝癌細(xì)胞惡性增殖的抑制作用對(duì)比圖，其中:a是普通細(xì)胞組，b是用藥濃度為0.6mg/mL的G418組，c是用藥濃度為2.5mg/mL的預(yù)知子非籽其余部分的乙醇提取物組，d是用藥濃度為2.5mg/mL的預(yù)知子籽乙醇提取物組。圖2體現(xiàn)了預(yù)知子籽提取物的用藥對(duì)肝癌細(xì)胞的形態(tài)學(xué)影響(采用倒置鏡相顯微鏡(400倍)觀察的形態(tài)圖片)，其中:a圖是常規(guī)培養(yǎng)的SMMC7721肝癌細(xì)胞；b圖是在給藥濃度為1.88mg/mL的預(yù)知子籽提取物作用24h后的SMMC7721肝癌細(xì)胞；c圖是在給藥濃度為1.88mg/mL的預(yù)知子籽提取物作用48h后的SMMC7721肝癌細(xì)胞；d圖是在給藥濃度為1.88mg/mL的預(yù)知子籽提取物作用72h后的SMMC7721肝癌細(xì)胞。圖3是不同劑量的預(yù)知 子籽提取物對(duì)SMMC7721肝癌細(xì)胞惡性增殖的抑制作用對(duì)比圖，其中:a是普通細(xì)胞組，b是用藥濃度為0.6mg/mL的G418組，c是用藥濃度為1.25mg/mL的預(yù)知子籽乙醇提取物組，d是用藥濃度為1.88mg/mL的預(yù)知子籽乙醇提取物組，e是用藥濃度為2.5mg/mL的預(yù)知子籽乙醇提取物組。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)闡述。實(shí)施例1:制備預(yù)知子籽及預(yù)知子非籽其余部分的乙醇提取物取中藥飲片預(yù)知子，分離預(yù)知子籽；取預(yù)知子籽及預(yù)知子非籽其余部分各35g，于60°C烘箱中干燥24小時(shí)后粉碎至顆粒直徑〈0.25cm。向粉碎的預(yù)知子籽及預(yù)知子非籽其余部分的顆粒中分別加入350mL的體積分?jǐn)?shù)為75%的乙醇水溶液，室溫下密閉浸泡2h后，水浴加熱到回流，每次回流提取2h，共回流提取2次；收集乙醇提取液，過(guò)濾，分別濃縮至30mL，用堿調(diào)節(jié)pH為7.0，然后加雙蒸水定容至35mL (Ig 生藥/mL)。細(xì)胞培養(yǎng)條件抽濾滅菌，分別分裝保存于-80°C備用。
實(shí)施例2:預(yù)知子籽及預(yù)知子非籽其余部分的乙醇提取物對(duì)原發(fā)性肝癌細(xì)胞增殖的抑制作用實(shí)驗(yàn)將SMMC7721肝癌細(xì)胞進(jìn)行96孔板鋪皿；過(guò)夜細(xì)胞貼壁后，均以2.5mg/mL的用藥濃度進(jìn)行預(yù)知子籽乙醇提取物及預(yù)知子非籽其余部分的乙醇提取物的給藥；并取用藥濃度為0.6mg/mL的細(xì)胞毒抗生素G418為陽(yáng)性對(duì)照。分別在給藥24、48、72h后采用MTT法檢測(cè)SMMC7721肝癌細(xì)胞增殖生長(zhǎng)率，并繪制
量效曲線。圖1是各藥物組對(duì)SMMC7721肝癌細(xì)胞惡性增殖的抑制作用對(duì)比圖，其中:a是普通細(xì)胞組，b是用藥濃度為0.6mg/mL的G418組，c是用藥濃度為2.5mg/mL的預(yù)知子非籽其余部分的乙醇提取物組，d是用藥濃度為2.5mg/mL的預(yù)知子籽乙醇提取物組。由圖1對(duì)比結(jié)果可見(jiàn):用藥濃度為2.5mg/mL的預(yù)知子籽提取物對(duì)SMMC7721肝癌細(xì)胞增殖的抑制作用明顯優(yōu)于相同用藥濃度的預(yù)知子非籽其余部分的乙醇提取物，并強(qiáng)于用藥濃度為0.6mg/mL的陽(yáng)性對(duì)照藥一細(xì)胞毒抗生素G418。實(shí)施例3:不同劑量的預(yù)知子籽提取物對(duì)原發(fā)性肝癌細(xì)胞增殖的抑制作用實(shí)驗(yàn)將SMMC7721肝癌細(xì)胞進(jìn)行96孔板鋪皿；過(guò)夜細(xì)胞貼壁后，分別以最終濃度為1.25mg/mL、1.88mg/mL、2.5mg/mL的3個(gè)劑量的預(yù)知子籽提取物進(jìn)行給藥；并取用藥濃度為0.6mg/mL的細(xì)胞毒抗生素G418為陽(yáng)性對(duì)照。分別在給藥24、48、72h后采用MTT法檢測(cè)SMMC7721肝癌細(xì)胞增殖生長(zhǎng)率，并繪制
量效曲線。圖2體現(xiàn)了預(yù)知子籽提取物的用藥對(duì)肝癌細(xì)胞的形態(tài)學(xué)影響(采用倒置鏡相顯微鏡(400倍)觀察的形態(tài)圖片)；其中:a圖是常規(guī)培養(yǎng)的SMMC7721肝癌細(xì)胞；b圖是在給藥濃度為1.88mg/mL的預(yù)知子籽提取物作用24h后的SMMC7721肝癌細(xì)胞；c圖是在給藥濃度為1.88mg/mL的預(yù)知子籽提取物作用48h后的SMMC7721肝癌細(xì)胞；d圖是在給藥濃度為
1.88mg/mL的預(yù)知子籽提取物作用72h后的SMMC7721肝癌細(xì)胞。由圖2可見(jiàn):隨著預(yù)知子籽提取物的作用時(shí)間的延長(zhǎng)，肝癌細(xì)胞內(nèi)空泡逐步變大，部分細(xì)胞出現(xiàn)凋亡現(xiàn)象。圖3是不同劑量的預(yù)知子籽提取物對(duì)SMMC7721肝癌細(xì)胞惡性增殖的抑制作用對(duì)比圖，其中:a是普通細(xì)胞組，b是用藥濃度為0.6mg/mL的G418組，c是用藥濃度為1.25mg/mL的預(yù)知子籽乙醇提取物組，d是用藥濃度為1.88mg/mL的預(yù)知子籽乙醇提取物組，e是用藥濃度為2.5mg/mL的預(yù)知子籽乙醇提取物組。由圖3的對(duì)比結(jié)果可見(jiàn):當(dāng)預(yù)知子籽提取物的用藥濃度為1.25mg/mL時(shí)，已顯示出對(duì)SMMC7721肝癌細(xì)胞增殖的抑制作用；當(dāng)用藥濃度增加到1.88mg/mL時(shí)，預(yù)知子籽提取物對(duì)SMMC7721肝癌細(xì)胞增殖的抑制作用已接近用藥濃度為0.6mg/mL的陽(yáng)性對(duì)照組一細(xì)胞毒抗生素G418組；當(dāng)用藥濃度增加到2.5mg/mL時(shí)，預(yù)知子籽提取物對(duì)SMMC7721肝癌細(xì)胞增殖的抑制作用已強(qiáng)于用藥濃度為0.6mg/mL的陽(yáng)性對(duì)照組一細(xì)胞毒抗生素G418組。綜上所述可見(jiàn):預(yù)知子籽乙醇提取物對(duì)肝癌細(xì)胞惡性增殖具有顯著地抑制作用，并呈量效關(guān)系，有望通過(guò)抑制原發(fā)性肝癌細(xì)胞惡性 增殖而作為活性成分應(yīng)用于治療原發(fā)性肝癌的藥物制劑的制備中，具有藥用價(jià)值。
最后有必要在此說(shuō)明的是:以上實(shí)施例只用于對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步詳細(xì)地說(shuō)明，不能理解為對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限制，本領(lǐng)域的技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容作出的一些非本質(zhì)的改進(jìn) 和調(diào)整均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1.一種預(yù)知子籽提取物在治療原發(fā)性肝癌藥物中的應(yīng)用，其特征在于:是以預(yù)知子籽提取物作為活性成分用于制備治療原發(fā)性肝癌的藥物制劑。
2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于:是以預(yù)知子籽提取物作為唯一活性成分用于制備治療原發(fā)性肝癌的藥物制劑。
3.如權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于:所述的預(yù)知子籽提取物為預(yù)知子籽的乙醇提取物。
4.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于:所述的預(yù)知子籽的乙醇提取物是由體積分?jǐn)?shù)為60 90%的乙醇水溶液對(duì)預(yù)知子籽進(jìn)行回流提取而得。
5.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于:所述的預(yù)知子籽的乙醇提取物是由8 10倍重量體積的體積分?jǐn)?shù)為70 80%的乙醇水溶液對(duì)預(yù)知子籽進(jìn)行回流提取I 3次，每次I 3小時(shí)而得 。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種預(yù)知子籽提取物在治療原發(fā)性肝癌藥物中的應(yīng)用，所述應(yīng)用是指以預(yù)知子籽提取物作為活性成分用于制備治療原發(fā)性肝癌的藥物制劑。本發(fā)明采用癌細(xì)胞生長(zhǎng)增殖MTT檢測(cè)方法，實(shí)驗(yàn)論證了預(yù)知子籽提取物具有非常顯著地抑制原發(fā)性肝癌細(xì)胞惡性增殖的作用，有望通過(guò)抑制原發(fā)性肝癌細(xì)胞惡性增殖而作為活性成分應(yīng)用于治療原發(fā)性肝癌的藥物制劑的制備中，為預(yù)知子籽提取物開(kāi)拓了一種新的藥用價(jià)值。
文檔編號(hào)A61K131/00GK103191162SQ201310140809
公開(kāi)日2013年7月10日 申請(qǐng)日期2013年4月22日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月22日
發(fā)明者方肇勤, 任紅艷, 梁超, 張園園, 潘志強(qiáng), 盧文麗, 劉小美 申請(qǐng)人:上海中醫(yī)藥大學(xué)