一種治療癌癥的中藥組合物及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種治療癌癥的中藥組合物，由下述原料按重量份配比組成：腫節(jié)風15份，生地20份，焦瓦楞15份，海蛤殼30份，赭石子10份，威靈仙10份，白頭翁12份，無花果12份，焦麥芽20份，荊芥穗10份，生薏仁30份，柳樹根60份，炙內(nèi)金15份，夏枯草12份，木賊草40份，山萸肉20份，防風10份，王不留行15份。體內(nèi)體外實驗研究結(jié)果顯示，該中藥組合物對人肺癌A549細胞系和人肺癌NCI-H460細胞的生長有明顯的抑制作用。本發(fā)明可用于治療癌癥，特別是用于治療肺癌。
【專利說明】一種治療癌癥的中藥組合物及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥領(lǐng)域，具體涉及一種治療癌癥的中藥組合物及其制備方法。
【背景技術(shù)】[0002]惡性腫瘤，也稱癌癥，是指細胞失去控制，異常增殖，持續(xù)生長進而侵犯臨近正常組織，并可經(jīng)血管、淋巴管及體腔轉(zhuǎn)移到身體其他部位，最終危及人類生命的一類嚴重疾病。在我國惡性腫瘤在各種死因中已經(jīng)排在第二位，在部分城市則已排到首位；并且近20年，腫瘤的發(fā)病率及死亡率呈明顯上升趨勢，其中肺癌發(fā)病率居首位。目前，腫瘤的臨床治療主要應(yīng)用手術(shù)切除、放療、化療、生物治療和中藥治療等方法。由于腫瘤的惡性程度高，目前的治療手段難以取得良好療效，導(dǎo)致腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，并存在一些治療手段的不足，如化療的毒副作用常常導(dǎo)致骨髓抑制。因此，開發(fā)新的抗腫瘤藥物對治療腫瘤具有重要意義。我國傳統(tǒng)的中醫(yī)藥在腫瘤治療上具有十分重要的價值，已經(jīng)積累了許多寶貴的經(jīng)驗，用于無法手術(shù)和術(shù)后的患者，并在減少放療、化療和生物治療中毒副作用等方面具有輔助治療作用。因此，有效的中藥復(fù)方在臨床治療腫瘤中已經(jīng)發(fā)揮了重要的作用。
[0003]扶正祛邪是中醫(yī)學治療疾病的通用法則，可用于腫瘤的預(yù)防和治療。本發(fā)明的中藥組合物由18位藥品組成，主要針對肺癌肺陰虧耗，脾陰不振，痰涎壅盛、氣滯血瘀，土弱金衰等設(shè)方立法，用于治療癌癥，特別是用于治療肺癌。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種中藥組合物。該中藥組合物對人肺癌A549細胞系和人肺癌NC1-H460細胞的生長有明顯的抑制作用，可用于治療癌癥，特別是用于治療肺癌。
[0005]本發(fā)明涉及一種中藥組合物，其由以下原料按相應(yīng)的重量份配比組成:腫節(jié)風15份，生地20份，焦瓦楞15份，海蛤殼30份，赭石子10份，威靈仙10份，白頭翁12份，無花果12份，焦麥芽20份，荊芥穗10份，生薏仁30份，柳樹根60份，炙內(nèi)金15份，夏枯草12份，木賊草40份，山萸肉20份，防風10份，王不留行15份。優(yōu)選地，該中藥組合物可由下列重量的原料組成:腫節(jié)風15克，生地20克，焦瓦楞15克，海蛤殼30克，赭石子10克，威靈仙10克，白頭翁12克，無花果12克，焦麥芽20克，荊芥穗10克，生薏仁30克，柳樹根60克，炙內(nèi)金15克，夏枯草12克，木賊草40克，山萸肉20克，防風10克，王不留行15克。
[0006]本發(fā)明同時提供一種制備上述中藥組合物的方法，該方法包含如下步驟:將前述的原料按相應(yīng)的重量配比混合，包括腫節(jié)風15份、生地20份、焦瓦楞15份、海蛤殼30份、赭石子10份、威靈仙10份、白頭翁12份、無花果12份、焦麥芽20份、荊芥穗10份、生薏仁30份、柳樹根60份、炙內(nèi)金15份、夏枯草12份、木賊草40份、山萸肉20份、防風10份以及王不留行15份；先用清水沖洗兩遍，以去掉灰塵、農(nóng)藥、化肥殘留；然后將其用溫水浸泡，100°C煎二遍，成流浸膏狀，再稀釋三倍，搖勻得浸膏；最后將所述浸膏低溫密閉或貯存。該浸膏可作藥用，也可用于如動物抑瘤實驗。[0007]具體地，該中藥組合物可由下列原料按相應(yīng)的重量混合，包括腫節(jié)風15克、生地20克、焦瓦楞15克、海蛤殼30克、赭石子10克、威靈仙10克、白頭翁12克、無花果12克、焦麥芽20克、荊芥穗10克、生薏仁30克、柳樹根60克、炙內(nèi)金15克、夏枯草12克、木賊草40克、山萸肉20克、防風10克以及王不留行15克；先用清水沖洗兩遍，以去掉灰塵、農(nóng)藥、化肥殘留；然后將其用溫水浸泡，100°C煎二遍，成流浸膏狀，再稀釋三倍，搖勻得浸膏；最后將所述浸膏低溫密閉或貯存。該浸膏可作藥用，也可用于如動物抑瘤實驗。
[0008]進一步，本發(fā)明還提供由前述浸膏配成的工作液。將前述浸膏加入一定體積的蒸餾水，配制成濃度為100mg/ml的母液，高壓滅菌后，將該母液用濾器過濾2_3遍，并稀釋可制成一定梯度濃度工作液。該工作液可低溫密閉或貯存，可作藥用，也可用于研究，如細胞水平的研究。
[0009]具體來說，本發(fā)明提供的所述中藥組合物可按常規(guī)工藝加入輔料制成片劑、膠囊劑、顆粒劑、滴丸、微丸、分散片、口腔崩解片、丸劑、口服液體制劑；所述輔料包括溶劑、崩解劑、矯味劑、防腐劑、著色劑、粘合劑、潤滑劑和基質(zhì)中的一種或幾種。
[0010]此外，本發(fā)明還涉及所述中藥組合物在制備治療癌癥藥物中的應(yīng)用。更具體地，本發(fā)明涉及所述中藥組合物在制備治療肺癌藥物中的應(yīng)用。
[0011]本發(fā)明中的中藥組成物由18味中藥組成，主要針對肺癌肺陰虧耗，脾陰不振，痰涎壅盛、氣滯血瘀，土弱金衰等設(shè)方立法，其方解如下:“肺主氣，朝百脈”，人體氣血津液正常運行全賴氣的推動。肺癌患者氣血瘀滯，必然影響肺津正常輸布，肺不布津則津液停聚，郁積不行，進而轉(zhuǎn)化為痰濁。由于本方未見報道，僅對方中各中藥的治療功效表述如下:
[0012](1)腫節(jié)風:性味苦辛平。入心經(jīng)、肝經(jīng)。可清熱涼血，活血消斑，祛風通絡(luò)，有抗癌作用；
[0013](2)生地:性味甘寒。入心經(jīng)、肝經(jīng)、腎經(jīng)。涼血清熱、養(yǎng)陰生津、破瘀生新、潤燥滑腸、止痛。多用于治療陰虛內(nèi)熱、骨蒸勞熱、舌絳煩渴、發(fā)斑發(fā)疹等；
[0014](3)焦瓦楞:性味咸平。歸肺經(jīng)、胃經(jīng)、肝經(jīng)。消痰化瘀，軟堅散結(jié)，制酸止痛。用于頑痰積結(jié)，粘稠難咯，癭瘤，瘰疬，瘕痞塊，胃痛泛酸等；
[0015](4)海蛤殼:性味咸平。入心經(jīng)、腎經(jīng)。可清熱利水，軟堅化痰。用于治療熱痰喘嗽，水腫，癭瘤積聚，血結(jié)胸痛等；
[0016](5)赭石子:性味苦甘平。入肝經(jīng)、胃經(jīng)、心胞經(jīng)。可平肝潛陽，降逆止血。用于眩暈耳鳴，喘息，噫氣，嘔吐，呃逆，吐血，紐血等；
[0017](6)威靈仙:性味辛咸溫，有毒。入膀胱經(jīng)。可祛風除濕，通絡(luò)止痛，消痰水，散癖積；
[0018](7)白頭翁:性味苦寒;歸胃經(jīng)、大腸經(jīng)。具有清熱解毒，涼血止痢，燥濕殺蟲的功效。可治療癰瘡，瘰疬等；
[0019](8)無花果:性味甘微辛平，有小毒。主治痔瘡腫痛等；
[0020](9)焦麥芽:性味甘平。歸脾經(jīng)、胃經(jīng)。可健脾養(yǎng)胃，消導(dǎo)食積；
[0021](10)荊芥穗碳:性味辛澀微熱。歸肺經(jīng)、肝經(jīng)。可收澀止血；
[0022](11)生薏仁:性味涼甘淡。可健脾滲濕，除痹止瀉。可用于治療水腫、小便不利、濕痹拘攣、脾虛泄瀉；
[0023]( 12)柳樹根:可祛風利濕、消腫止痛；[0024](13)炙內(nèi)金:性昧甘寒。歸脾經(jīng)、胃經(jīng)、小腸經(jīng)、膀胱經(jīng)。可消食健胃助消化，澀精止遺。用于治療消化不良、面色萎黃、不思納谷、小兒疳積、形體消瘦、腹大腹脹、脾胃虛弱、食積脹滿等病癥；
[0025](14)夏枯草:性味寒甘辛微苦，具有清泄肝火、散結(jié)消腫、清熱解毒、祛痰止咳、涼血止血的功效，適用于淋巴結(jié)核、甲狀腺腫、乳癰等病癥。現(xiàn)代藥理研究表明，夏枯草有抑制癌細胞的作用；[0026](15)木賊草:性味甘苦平，無毒，微寒。入心經(jīng)、肝經(jīng)、胃經(jīng)、膀胱經(jīng)。可止血，清肝明目，利尿通淋，用于治療咳嗽、目赤腫痛、腸風下血等病癥；
[0027](16)山萸肉:性味酸澀微溫。如肝經(jīng)、腎經(jīng)。可補益肝腎，收斂固澀、固精縮尿，止汗生津。可用于腰膝酸痛，大汗虛脫，內(nèi)熱消渴等病癥；
[0028](17)防風:性味辛甘微溫。入膀胱經(jīng)、肺經(jīng)、脾經(jīng)、肝經(jīng)。可祛風解表、勝濕止痛、解痙止癢。用于治療外感風寒，頭痛身痛，風濕痹痛，骨節(jié)酸痛，腹痛泄瀉等癥；
[0029](18)王不留行:性味苦平。入肝經(jīng)，胃經(jīng)。可行血調(diào)經(jīng)、消腫止痛、活血通乳、催生下乳、產(chǎn)后胸腺疏通。用于治療血瘀經(jīng)閉，痛經(jīng)，難產(chǎn)，乳癰腫痛等病癥。
[0030]在這一組方的基礎(chǔ)上可以增加其他佐藥和/或使藥，以進一步提聞療效。
[0031]本發(fā)明的優(yōu)勢在于提供的中藥組合物在治療癌癥、特別是治療肺癌方面具有顯著的療效。發(fā)明人通過實驗發(fā)現(xiàn)，該組合物對人永生化肝細胞L02的抑制率達到70%，對裸鼠腫瘤的抑制率可達75%，在臨床試驗中對患者肺癌的癥狀有明顯的改善和治療作用。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0032]圖1中藥組合物作用于人永生化肝細胞L02在48小時后的形態(tài)學照片。
[0033]圖2中藥組合物作用于人肺癌細胞A549在48小時后的形態(tài)學照片。
[0034]圖3中藥組合物作用于人肺癌細胞NC1-H460在48小時后的形態(tài)學照片。
[0035]圖4中藥組合物作用人永生化肝細胞L02在48小時后的臺盼藍染色結(jié)果Cp1=0.0417，*p〈0.05，**p〈0.01，***p〈0.001)。
[0036]圖5中藥組合物作用人肺癌細胞48小時后臺盼藍染色結(jié)果(P1=0.0053，P2=0.0013 ；p3=0.0048)。
[0037]圖6中藥組合物作用人肺癌細胞NC1-H460在48小時后的臺盼藍染色(P1=0.0075，P2=0.0158, P3=0.0167)。
[0038]圖7中藥組合物作用永生化肝細胞L02在48小時后的MTT檢測結(jié)果(P1=0.0163)。
[0039]圖8中藥組合物作用人肺癌細胞A549在48小時后MTT檢測結(jié)果(Pl=0.017，P2=0.0070, P3=0.0061)。
[0040]圖9中藥組合物作用人肺癌細胞NC1-H460在48小時后的MTT結(jié)果(Pl=0.0125，P2=0.0358, P3=0.0167)。
[0041]圖10中藥組合物作用人永生化肝細胞L02在48小時后的流式結(jié)果。
[0042]圖11中藥組合物作用肺癌細胞A549在48小時后的流式結(jié)果。
[0043]圖12BALB/C裸鼠重量隨時間的變化關(guān)系。
[0044]圖13BALB/C裸鼠腫瘤體積隨時間的變化關(guān)系。
[0045]圖14BALB/C裸鼠灌胃給藥45天后的腫瘤塊照片(每組6只)。[0046]圖15BALB/C裸鼠灌胃給藥45天后的腫瘤塊重量柱狀圖。
[0047]圖16用于基因芯片檢測的RNA質(zhì)量分析結(jié)果。
【具體實施方式】
[0048]實施例1中藥組合物及其制備
[0049][I]中藥組合物成分及其制備[0050]中藥組合物由下述原料按重量份配比為:腫節(jié)風15份，生地20份，焦瓦楞15份，海蛤殼30份，赭石子10份，威靈仙10份，白頭翁12份，無花果12份，焦麥芽20份，荊芥穗10份，生薏仁30份，柳樹根60份，炙內(nèi)金15份，夏枯草12份，木賊草40份，山萸肉20份，防風10份，王不留行15份。
[0051]在本實施例中，所述中藥組合物由腫節(jié)風15克，生地20克，焦瓦楞15克，海蛤殼30克，赭石子10克，威靈仙10克，白頭翁12克，無花果12克，焦麥芽20克，荊芥穗10克，生薏仁30克，柳樹根60克，炙內(nèi)金15克，夏枯草12克，木賊草40克，山萸肉20克，防風10克以及王不留行15克組成。
[0052]該中藥組合物的制備，包括以下步驟:
[0053]a)前述種類和分量的原料先用清水沖洗兩遍，以去掉灰塵、農(nóng)藥、化肥殘留；
[0054]b)用溫水浸泡，100°C煎二遍，成流浸膏狀、稀釋三倍，搖勻得浸膏；
[0055]c)將所述浸膏低溫密閉或貯存。
[0056]該浸膏具有治療效果，可以用于動物抑瘤實驗，也可作藥用。
[0057]將前述浸膏加入一定體積的蒸餾水，配制成母液，濃度為100mg/ml，高壓滅菌后，用濾器過濾2-3遍，可稀釋成一定梯度濃度工作液。該工作也可低溫密閉或貯存，可用于研究，例如細胞水平的研究。
[0058][2]原料加工方法
[0059]1.按處方請藥材基地供應(yīng)商供藥。藥品購進后，首先檢查進藥渠道手續(xù)，了解產(chǎn)地；其次核對方藥是否相符；再次篩選，確定藥品是否有雜質(zhì)、摻假以及霉變藥品，待無誤后才能入庫加工。
[0060]2.按量將藥品投入反應(yīng)釜，加水清洗二遍，目的是去掉灰份，保持藥品潔凈，同時減少農(nóng)藥化肥殘留，另外輕洗過程中攪拌也可減少重金屬含量，使藥品加工后鉛、砷等各種重金屬含量完全符合企業(yè)、國家標準，保證藥品質(zhì)量。
[0061]3.上藥準備就緒后，采用100°C高溫煎煮二次，每次煎煮二小時，第一次加10倍水煎煮，第二次加六倍水煎煮，然后提取煎煮液倒入缸中，再將液體噴霧干燥為粉，最后將干燥粉收貯后裝入密封袋中。
[0062][3]片劑加工工藝
[0063]1.將干燥半成品粉，添加玉米淀粉、硬脂酸美、微晶纖維素、二氧化硅等輔料造粒、壓片。
[0064]2.藥品加工后每片藥品重量為550毫克，其中生藥粉為420毫克、玉米淀粉為90毫克，二氧化硅15毫克、硬脂酸美5毫克。
[0065][4]干膠囊造粒方法
[0066]1.取噴霧干燥粉提取粉300毫克、微晶纖維素60毫克、二氧化硅15毫克、硬脂酸美5毫克，合計400毫克，造粒后裝入0號膠囊，將提取粉和微晶纖維素混合均勻；加入80%乙醇制成適宜軟材，16目尼龍篩制粒；50~60°C干燥，18目尼龍篩整粒，整粒時加入羥甲基錠粉鈉，二氧化硅，硬脂酸美，混合均勻；裝入0號膠囊，再裝并密閉。
[0067][5]混懸液及粒丸加工方法[0068]混懸液加工的方法是，將二次煎煮液濃縮后，再加溫后熱灌裝密閉包裝瓶中，然后加熱真空處理即可
[0069][6]滴丸加工方法
[0070]滴丸是將噴霧干燥經(jīng)離心機處理后，將二氧碳化物等雜質(zhì)去掉，剩下微粉加輔料，即可加工成滴丸。
[0071]實施例2:藥效學研究
[0072][I]實驗材料和儀器設(shè)備
[0073]100%乙醇(天津市化學試劑批發(fā)公司)、胎牛血清(Invitrogen，USA)、RPMI1640(Invitoogen，USA)、胰酶(生工生物工程(上海)股份有限公司)、臺盼藍(北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限公司)、MTT (全稱為 3_(4，5) -dimethylthiahiazo (-z-yl) -3, 5-d1-phenytetrazoliumromide, 3-(4, 5- 二甲基噻唑-2) -2, 5- 二苯基四氮唑溴鹽,商品名噻唑藍，Thermo,USA)、DMSO (二甲基亞砜，北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限公司)、碘化丙啶(Sigma，USA);血球計數(shù)板(上海求精生化試劑有限公司)、低速臺式離心機(長沙湘儀離心機儀器有限公司)、酶聯(lián)免疫檢測儀(BIO-RAD，USA)、流式細胞儀(BD FACSDiVa，USA)、脫色搖床(北京德天佑科技發(fā)展有限公司)、C02培養(yǎng)箱(sanyo，Japan)、倒置顯微鏡(OLYMPUS，Japan)。
[0074][2]細胞培養(yǎng)
[0075]人非小細胞肺癌細胞株A549、人大細胞肺癌細胞株NC1-H460和人永生化肝細胞株L02購于南京凱基生物科技發(fā)展有限公司。上述細胞株應(yīng)用含10%胎牛血清(HyClone，澳大利亞)的RPMI1640培養(yǎng)基(Gibco，USA)在37°C的5%C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
[0076][3]統(tǒng)計學方法
[0077]米用Student’ s t檢驗對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析，P〈0.05和P〈0.01為差異顯著。
[0078][4]形態(tài)學觀察
[0079]1.配制一定濃度的中藥組合物的中藥母液，高壓滅菌，過濾除雜2~3次，稀釋成一系列梯度濃度(0.01，0.1，1.0，5.0和10.0mg/ml)備用；細胞株采用人肺癌A549細胞系、人肺癌NC1-H460細胞及人永生化肝細胞株L02 ；
[0080]2.將生長在對數(shù)期的細胞鋪6孔板，放入孵箱培養(yǎng)至細胞長到80%~90%時，分別加不同濃度的中藥200 u I,其中對照組加200 u I PBS ；
[0081]3.孵箱培養(yǎng)48小時，顯微鏡下觀察不同濃度藥物(0.01，0.1,1.0,5.0和10.0mg/ml)對細胞的影響，并拍照；
[0082]4.觀察結(jié)果:
[0083]lmg/ml濃度的中藥組合物作用于永生化肝細胞L02細胞后，從形態(tài)上觀察細胞無明顯變化，當藥物濃度增加至5mg/ml時，L02細胞發(fā)生死亡并脫落；人肺癌A549細胞在lmg/ml的藥物濃度下約1/3細胞存活,而在5mg/ml和10mg/ml的藥物濃度下幾乎有很少細胞存活；人肺癌NC1-H460細胞與A549細胞情況類似，在低濃度時甚至比A549細胞更加敏感。[0084][5]臺盼藍染色
[0085]1.正常的活細胞，胞膜結(jié)構(gòu)完整，能夠排斥臺盼藍，使之不能夠進入胞內(nèi)；而喪失活性或細胞膜不完整的細胞，胞膜的通透性增加，可被臺盼藍染成藍色。通常認為細胞膜完整性喪失，即可認為細胞已經(jīng)死亡，這與中性紅作用相反。因此，借助臺盼藍染色可以非常簡便、快速地區(qū)分活細胞和死細胞；
[0086]2.將生長在對數(shù)期的細胞鋪6孔板，放入孵箱培養(yǎng)至細胞長到80%~90%時，分別加不同濃度的中藥200μ I (0.01,0.1,1.0,5.0和10.0mg/ml )，其中對照組加200 μ I PBS ；
[0087]3.孵箱培養(yǎng)48小時，顯微鏡下觀察不同濃度藥物對細胞的影響。分別收集上清，胰酶分別消化不同藥物濃度處理的細胞，合并上清和消化下來的細胞；800rpm離心10分鐘，棄上清；加入5ml PBS重懸,800rpm離心10分鐘，棄上清；加入Iml PBS重懸；
[0088]4.分別取10 μ I樣品溶液和0.4%的臺盼藍溶液混勻染色3~6分鐘，然后進行血球計數(shù)板計數(shù)活細胞和死細胞數(shù)目，著色的是死細胞，沒著色的是活細胞；每株細胞系至少重復(fù)3次；
[0089]5.實驗結(jié)果:
[0090]表1人永生化肝細胞系L02臺盼藍計數(shù)結(jié)果
[0091]
【權(quán)利要求】
1.一種治療癌癥的中藥組合物，由下述原料按相應(yīng)的重量份配比組成:腫節(jié)風15份，生地20份，焦瓦楞15份，海蛤殼30份，赭石子10份，威靈仙10份，白頭翁12份，無花果12份，焦麥芽20份，荊芥穗10份，生薏仁30份，柳樹根60份，炙內(nèi)金15份，夏枯草12份，木賊草40份，山萸肉20份，防風10份，王不留行15份。
2.權(quán)利要求1所述的中藥組合物，所述中藥組合物由以下原料按相應(yīng)重量制成:腫節(jié)風15克，生地20克，焦瓦楞15克，海蛤殼30克，赭石子10克，威靈仙10克，白頭翁12克，無花果12克，焦麥芽20克，荊芥穗10克，生薏仁30克，柳樹根60克，炙內(nèi)金15克，夏枯草12克，木賊草40克，山萸肉20克，防風10克，王不留行15克。
3.一種制備權(quán)利要求1或2所述的中藥組合物的方法，包括以下步驟: a)將權(quán)利要求1所述種類和分量的原料用清水沖洗兩遍，以去掉灰塵、農(nóng)藥、化肥殘留; b)用溫水浸泡，100°C煎二遍，成流浸膏狀、稀釋三倍，搖勻得浸膏； c)將所述浸膏低溫密閉或貯存。
4.權(quán)利要求1或2所述的中藥組合物，所述藥物組合物按常規(guī)工藝加入輔料制成片劑、膠囊劑、顆粒劑、滴丸、微丸、分散片、口腔崩解片、丸劑或口服液體制劑，所述輔料包括溶劑、崩解劑、矯味劑、防腐劑、著色劑、粘合劑、潤滑劑和基質(zhì)中的一種或幾種。
5.權(quán)利要求1或2所述的中藥組合物在制備治療癌癥藥物中的應(yīng)用。
6.權(quán)利要求1或2所述的中藥組合物在制備治療肺癌藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61K35/56GK103479933SQ201310272903
【公開日】2014年1月1日 申請日期:2013年6月28日 優(yōu)先權(quán)日:2013年6月28日
【發(fā)明者】劉鴻生, 張曉東, 葉麗虹 申請人:天津弘昇藥物研究有限公司