腸道病毒71型的vp2抗原的中和表位多肽及其用途
【專利摘要】本發明屬于免疫生物學領域，涉及一種腸道病毒71型的VP2抗原的中和表位多肽及其用途。具體地，涉及一種抗原表位多肽，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO：1－7中任一序列所示。本發明還涉及所述中和表位多肽在制備治療和/或預防和/或診斷手足口病的藥物中的用途。本發明的中和表位多肽具有良好的中和活性和免疫原性，具有應用于治療和/或預防和/或診斷手足口病的藥物的潛力。
【專利說明】腸道病毒71型的VP2抗原的中和表位多肽及其用途
【技術領域】
[0001]本發明屬于免疫生物學領域，涉及一種腸道病毒71型的VP2抗原的中和表位多肽及其用途。
【背景技術】
[0002]手足口病是全球性傳染病，世界大部分地區均有此病流行的報道。早期發現的手足口病的病原體主要為柯薩奇病毒A16型(以下簡稱CA16)，腸道病毒71型(以下簡稱EV71)最早是在1969年首次從美國加利福尼亞患有中樞神經系統疾病的嬰兒糞便標本中分離獲得，但一直到1974年EV71才被鑒定并命名。此后EV71與CA16交替出現，成為手足口病的主要病原體。
[0003]EV71傳染性強，易引起暴發或流行。自病毒發現以來在全世界已至少造成十多次爆發流行，波及到美洲、歐洲、澳洲和亞洲的四十多個國家和地區。20世紀70年代中期，保加利亞、匈牙利相繼暴發以中樞神經系統為主要臨床特征的EV71流行，1975年保加利亞報告病例750例，其中149人致癱，44人死亡。20世紀90年代后期，EV71開始東亞地區流行。1997年馬 來西亞發生了主要由EV71引起的手足口病流行，4 一 8月共有2628人發病，4 一6月有29例病人死亡。1998年，我國臺灣地區發生EV71感染引起的手足口病和皰疹性咽峽炎流行，監測哨點共報告129106例病例，80%有手足口病和中樞神經癥狀。其中重癥病人405例，死亡78例。
[0004]我國大陸地區自1995年武漢病毒研究所首次從手足口病人中分離出EV71病毒以來，全國很多地區均有報道。2008年3月在安徽阜陽地區流行的也是EV71。由于疫情的嚴重性和社會的廣泛關注，衛生部已經將手足口病列入傳染病防治法規定的丙類傳染病，并緊急成立了防控組。
[0005]EV71病毒顆粒大致呈球形，為正二十面體結構，無包膜和突起，直徑約27nm，其蛋白外殼由結構蛋白VP1、VP2、VP3和VP4構成，抗原決定因子基本上位于暴露在病毒顆粒表面的VP1、VP2、VP3上，VP4序列高度保守，包裹在衣殼內部。
[0006]近年來，EV71引起的手足口病，發病率和死亡率呈逐年上升趨勢，因此，開發針對手足口病的快速診斷試劑與安全有效的預防和治療性藥物(例如疫苗)具有重大意義。

【發明內容】

[0007]本發明人經過了深入的研究和創造性的勞動，例如利用不同時間、不同地點分離到的EV71不同的代表株免疫小鼠，進行單克隆抗體的制備，已制備出790株雜交瘤細胞株，其均能夠產生對EV71有特異性反應的單抗(單克隆抗體)。本發明人進一步利用基于ELISP0T的EV71高通量中和實驗方法對上述單抗的中和活性進行鑒定，發現有2株單抗對部分目前所用的EV71各代表株均有中和活性，說明EV71病毒可能存在高保守性的中和位點，這為EV71的中和表位鑒定提供了突破口，具有制備抗EV71抗體或疫苗的潛力。由此提供了下述發明:[0008]本發明的一個方面涉及一種多肽，其氨基酸序列如下面的SEQ IDNO:1 — 8中任一序列所示:
[0009]
【權利要求】
1.一種多肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1 — 8中任一序列所示。
2.—種中和表位多肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1 - 8中任一序列所示。
3.一種多核苷酸，其編碼權利要求1所述多肽或者權利要求2所述中和表位多肽；具體地，所述多核苷酸的序列分別如SEQ ID NO:9 — 16中任一項所不。
4.一種重組載體，其含有權利要求3所述的多核苷酸。
5.一種重組宿主細胞，其含有權利要求4所述的重組載體。
6.一種中和表位多肽偶聯物，包括中和表位多肽和偶聯部分，其中，所述中和表位多肽為權利要求2所述的中和表位多肽，所述偶聯部分為選自放射性核素、藥物、毒素、細胞因子、酶、熒光素、載體蛋白、脂類、和生物素中的一種或多種；具體地，所述中和表位多肽偶聯物為融合蛋白或類病毒顆粒；在一個實施方案中，所述偶聯部分為HBcAg蛋白。
7.—種藥物組合物,其包含一種或多種權利要求2所述的中和表位多肽、和/或一種或多種權利要求6所述的中和表位多肽偶聯物；具體地，所述組合物為疫苗組合物；可選地，所述藥物組合物還包含藥學上可接受的載體或輔料。
8.權利要求2所述的中和表位多肽或者權利要求6所述的中和表位多肽偶聯物或者權利要求7所述的藥物組合物在制備治療和/或預防和/或診斷EV71病毒所致疾病特別是手足口病的藥物或者抗EV71病毒的藥物中的用途；具體地，所述藥物為疫苗。
9.一種雜交瘤細胞株A15B3，其保藏編號為CCTCC NO: C201226，保藏日期為2012年2月20日，保藏單位為中國典型培養物保藏中心(CCTCC)。
10.一種雜交瘤細胞株BB1A5，其保藏編號為CCTCC NO: C201228，保藏日期為2012年2月20日，保藏單位為中國典型培養物保藏中心(CCTCC)。
11.權利要求9或10所述的雜交瘤細胞株產生的抗體。
12.—種抗體，其能夠特異性地結合權利要求2所述的中和表位多肽或者權利要求6所述的中和表位多肽偶聯物；具體地，所述抗體為單克隆抗體；更具體地，為廣譜中和單克隆抗體。
13.根據權利要求12所述的抗體，其為鼠源或人源或羊源或其它動物來源，或為基因工程抗體，例如人源抗體、人源化抗體、嵌合抗體或單鏈抗體。
14.一種抗體偶聯物，包括抗體部分和偶聯部分，其中，所述抗體部分為權利要求11至13中任一項所述的抗體，所述偶聯部分為選自放射性核素、藥物、毒素、細胞因子、酶、熒光素、載體蛋白、脂類、和生物素中的一種或多種。
15.一種藥物組合物，其包含權利要求11至13中任一項所述的抗體或者權利要求14所述的抗體偶聯物；可選地，所述藥物組合物還包含藥學上可接受的載體或輔料。
16.一種試劑盒，其包含權利要求11至13中任一項所述的抗體或者權利要求14所述的抗體偶聯物。
17.權利要求11至13中任一項所述的抗體或者權利要求14所述的抗體偶聯物或者權利要求15所述的藥物組合物在制備治療和/或預防和/或診斷EV71所致疾病特別是手足口病的藥物或者抗EV71病毒的藥物中的用途。
18.—種在體內或體外抗EV71病毒的方法，包括使用有效量的權利要求11至13中任一項所述的抗體或者權利要求14所述的抗體偶聯物或者權利要求15所述的藥物組合物的步驟。
【文檔編號】A61P31/14GK103539839SQ201310291205
【公開日】2014年1月29日 申請日期:2013年7月12日 優先權日:2012年7月13日
【發明者】程通, 徐龍發, 楊立生, 陳毅歆, 杜海蓮, 張軍, 夏寧邵 申請人:廈門大學, 廈門萬泰滄海生物技術有限公司