阿魏酰低聚糖及其制備方法及應用的制作方法
【專利摘要】本發明涉及一種具有抗腫瘤和免疫增強活性的阿魏酰低聚糖及其制備方法及用途。具體方法為：向60g/L麥麩液中添加10g/L木聚糖和1g/L蛋白胨制得培養基；利用該培養基進行液態發酵，控制起始發酵pH4.0、起始溫度33℃，在發酵至36h時，將pH和溫度分別調控為6.0和29℃，發酵至84h，制得阿魏酰低聚糖。本發明制得的阿魏酰低聚糖具有抗腫瘤活性及免疫增強活性，可用作制備保健食品及天然藥物，同時也提升了麥麩利用的附加值。
【專利說明】阿魏酰低聚糖及其制備方法及應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及ー種具有抗腫瘤和免疫增強活性的阿魏酰低聚糖及其制備方法和用途，屬于天然藥物領域。
【背景技術】
[0002]阿魏酰低聚糖(FOs)是ー類廣泛存在于禾本科植物中的不同糖鏈位置上的羥基與阿魏酸(FA)羧基酯化形成的功能性低聚糖。FOs具有阿魏酰基與親水性的低聚糖基團，兼具水溶性和耐熱性。目前的研究主要集中在其制備方法及抗氧化的生物活性上，由于FOs具有較強的抗氧化性和生物活性，其抗氧化活性強于阿魏酸及膳食纖維，對Fe2+、H2O2和羥自由基具有較強的清除能力，FOs還具有抑制金黃色葡萄球菌的生長、増殖雙歧桿菌和對蛋白非酶糖基化反應具有抑制作用等功能，因而，FOs在保健食品和醫藥エ業中具有廣闊的應用前景，但其體內生物活性有待深入研究，低聚糖的生物活性與其結構有著密切的關系，FOs組分及聚合度對抗腫瘤活性及免疫增強活性的影響未見報道。
【發明內容】

[0003]有鑒于此，提供ー種具有抗腫瘤和免疫增強活性的阿魏酰低聚糖及其制備方法和用途實為必要。
[0004]ー種具有抗腫瘤和免疫增強活性的阿魏酰低聚糖，由以下方法制得:
[0005](I)配置培養基:向60g/L麥麩液中添加10g/L木聚糖和lg/L蛋白胨；
[0006](2)發酵培養基:利用該培養基進行液態發酵，控制起始發酵pH4.0、起始溫度33°C，在發酵至36h時，將pH和溫度分別調控為6.0和29°C，發酵至84h，制得阿魏酰低聚糖。
[0007]上述阿魏酰低聚糖由聚合度分別為6、5、4，由分子量分別為1118、986、854的阿魏酰阿拉伯糖基木六糖(FAX6)、阿魏酰阿拉伯糖基木五糖(FAX5)、阿魏酰阿拉伯糖基木四糖(FAX4)構成。
[0008]上述具有抗腫瘤和免疫增強活性的阿魏酰低聚糖在制備抗腫瘤藥物中增強免疫保健品中的用途。
[0009]本發明提供一種制備阿魏酰低聚糖的方法，由其制得的阿魏酰低聚糖具有抗腫瘤活性及免疫增強活性，將阿魏酰低聚糖在保健食品及醫藥中的應用變為現實，同時也提升了麥麩利用的附加值。
【具體實施方式】
[0010]下面結合具體實施例對本發明進行進ー步說明
[0011]制備具有抗腫瘤和免疫增強活性的阿魏酰低聚糖，具體方法為:向60g/L麥麩液中添加10g/L木聚糖和lg/L蛋白胨制得培養基；利用該培養基進行液態發酵，控制起始發酵pH4.0、起始溫度33 °C，在發酵至36h時，將pH和溫度分別調控為6.0和29°C，發酵至84h，制得阿魏酰低聚糖。
[0012]經液相色譜及氣相色譜分析表明，上述阿魏酰低聚糖由木糖、阿拉伯糖和阿魏酸三種成分組成；紫外光譜分析表明，FOs在MOPS緩沖液中在325nm處具有最大值；紅外光譜分析表明，FOs中存在羥基、酯鍵及阿拉伯糖基等特征基團；電噴霧電離質譜分析表明，FOs聚合度分別為6、5、4，由分子量分別為1118、986、854的阿魏酰阿拉伯糖基木六糖(FAX6)、阿魏酰阿拉伯糖基木五糖(FAX5)、阿魏酰阿拉伯糖基木四糖(FAX4)構成。
[0013]阿魏酰低聚糖抗腫瘤及免疫增強活性藥效學實驗
[0014]一、FOs體外抗腫瘤活性實驗
[0015]1.受試藥物的配制
[0016]精密稱取樣品FOs，加入DMSO溶解，在37°C超聲條件下充分稀釋成均勻溶液，按比例稀釋，濃度范圍為1000ug/ml-7.8ug/ml。
[0017]2.腫瘤細胞株的培養
[0018]細胞株BGC-823和H印G2采用添加10%胎牛血清的RPM1-1640培養液，細胞株A549采用添加10%胎牛血清的F-12Nutrient Mixture培養液，在37.(TC、空氣濃度95%和CO2濃度5%的條件下培養。
[0019]3.細胞生長抑制實驗
[0020]將處于對數生長期的細胞BGC-823、H印G2和A549采用0.02% EDTA消化，制成細胞懸液。以I X IO5的細胞濃度加入96孔培養板100 u I/孔，設三重復孔，置于37°C 5% CO2培養箱內培養。培養24小時后，分別加入終濃度水平從1000ug/ml-7.8ug/ml的樣品FOs，培養48小吋。然后加5mg/ml MTT溶液20 yl/孔，于37°C繼續培養4h，棄去全部上清，カロ入DMSO100 u I/孔，微型振蕩器 上振5min，使結晶完全溶解，用酶聯儀570nn波長處測定吸光度值(A)，計算細胞抑制率。生長抑制率用量效曲線計算的IC5tl(與對照品相比使細胞生長下降50%的藥物濃度)來表示，采用SPSS18.0統計軟件進行統計評價。
[0021 ] 4.FOs對細胞株生長抑制作用
[0022]FOs在體外對人肝癌細胞H印G2、人胃癌細胞BGC-823、人肺腺癌細胞A549的生長均具有一定的抑制作用，且生長抑制率隨藥物濃度的増加呈上升趨勢，如表1、2、3所示。當藥物濃度達到1000 u g/mL吋，FOs對各癌細胞株的抑制活性都最高，且對人肝癌細胞H印G2的生長抑制效果最好。
[0023]表IFOs對人肝癌細胞H印G2生長抑制作用
[0024]
【權利要求】
1.ー種具有抗腫瘤和免疫增強活性的阿魏酰低聚糖，由以下方法制得: (1)配置培養基:向60g/L麥麩液中添加10g/L木聚糖和lg/L蛋白胨； (2)發酵培養基:利用該培養基進行液態發酵，控制起始發酵pH4.0、起始溫度33°C，在發酵至36h吋，將pH和溫度分別調控為6.0和29°C，發酵至84h，制得阿魏酰低聚糖。
2.如權利要求1所述阿魏酰低聚糖，其特征在于:由聚合度分別為6、5、4，分子量分別為1118、986、854的阿魏酰阿拉伯糖基木六糖(FAX6)、阿魏酰阿拉伯糖基木五糖(FAX5)、阿魏酰阿拉伯糖基木四糖(FAX4)構成。
3.如權利要求1所述具有抗腫瘤和免疫增強活性的阿魏酰低聚糖在制備抗腫瘤藥物中的應用。
4.如權利要求1所述具有抗腫瘤和免疫增強活性的阿魏酰低聚糖在制備增強免疫保健品中的應用。
【文檔編號】A61P37/04GK103450290SQ201310354823
【公開日】2013年12月18日 申請日期:2013年8月15日 優先權日:2013年8月15日
【發明者】余曉紅, 顧振新, 李成, 申玉香, 李鳳偉 申請人:鹽城工學院