一種人參中人參總皂苷的分離純化方法
【專利摘要】本發明公開了一種人參中人參總皂苷的分離純化方法，屬于中藥領域，分離方法由以下步驟構成：樣品溶液的制備、大孔樹脂分離純化、弱堿性陰離子交換樹脂純化；本發明方法簡單易行，得到的人參總皂苷含量高、顏色淺適宜成為中藥注射劑及凍干粉等劑型的原料，得到的人參皂苷有很好的生理活性。
【專利說明】一種人參中人參總皂苷的分離純化方法

【技術領域】
[0001] 本發明屬于中藥領域，具體涉及中藥有效成分的分離方法。

【背景技術】
[0002] 人參為五加科多年生草本植物。多秋季采挖，洗凈經曬干或烘干。栽培的俗稱"園 參";播種在山林野生狀態下自然生長的稱"林下山參"，習稱"籽海"。性甘、味苦。歸脾、 肺、心、腎經，具有大補元氣，復脈固脫，補脾益肺等功效。
[0003] 迄今為止從人參藥材中分離出人參皂苷46種，人參皂苷是人參的主要活性成分， 人參皂苷Rg3具有很強擬制腫瘤細胞增殖作用，以其為主要成分制成的參一膠囊是一種抗 癌新藥；人參皂苷Rh2也有抗腫瘤活性；Rgl :可快速緩解疲勞、改善學習記憶、延緩衰老，具 有興奮中樞神經作用、抑制血小板凝集作用；Rbl :西洋參（花旗參）的含量最多，具影響動 物睪丸的潛力，亦會影響小鼠的胚胎發育，具有增強膽堿系統的功能，增加乙酰膽堿的合成 和釋放以及改善記憶力作用；Rb2 :具有DNA，、RNA的合成促進作用、腦中樞調節具有抑制 中樞神經，降低細胞內鈣，抗氧化，清除體內自由基和改善心肌缺血再灌注損傷等作用；Rc : 是一種人參中的固醇類分子。具有抑制癌細胞的功能，可增加精蟲的活動力；Re :抑制中樞 神經，促進DNA，RNA合成，升高血漿皮質酮的作用，擴張血管；Rf、Rd減少乙酰膽堿引起的豚 鼠離體子宮的收縮。
[0004] 人參藥材的分離純化大部分都是用大孔吸附樹脂進行分離、富集、純化，但是大孔 吸附樹脂純化后得到的人參總皂苷含量低，顏色深，不易于制成中藥注射劑或凍干粉。


【發明內容】

[0005] 本發明的目的是提供一種人參中人參總皂苷的分離純化方法。
[0006] 本發明所采用的技術方案是： 一種人參中人參總皂苷的分離純化方法，由以下步驟構成： A、 樣品溶液的制備：取人參藥材粉碎，乙醇浸泡，乙醇回流提取三次，合并上述提取液， 減壓回收乙醇，過濾，濃縮，即得樣品溶液； B、 大孔樹脂分離純化：稱取處理好的大孔吸附樹脂裝柱，取樣品溶液上樣，流速為 2?3BV/h，然后依次用pH8-9的氨水溶液、20%乙醇洗脫雜質，再用80%的乙醇3 BV洗脫，收 集洗脫液I; C、 弱堿性陰離子交換樹脂純化：取步驟B中所得洗脫液上弱堿性陰離子交換樹脂柱， 收集洗脫液II，濃縮至稠膏，減壓干燥，即得。
[0007] 作為優選方式，所述步驟B中大孔吸附樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂，AB-8型大孔 吸附樹脂與生藥質量比為2. 5:1。
[0008] 作為優選方式，所述步驟C中樹脂與藥材質量比為1:1. 5,陰離子柱子徑高比=1 : 10,流速為3?4BV。
[0009] 作為優選方式，所述步驟C中弱堿性陰離子交換樹脂為D301。
[0010] 作為優選方式，人參總皂苷的分離純化方法由以下步驟構成： A、 樣品溶液的制備：取人參藥材粉碎，乙醇浸泡lh，第一次10倍量70%乙醇回流提取1 小時；第二次8倍量70%乙醇回流提取1小時；第三次8倍量70%乙醇回流提取0. 5小時， 合并上述提取液，減壓回收乙醇，過濾，濃縮，即得樣品溶液； B、 大孔樹脂分離純化：稱取處理好的AB-8型大孔吸附樹脂裝柱，AB-8型大孔吸附樹脂 與生藥質量比為2. 5:1，取樣品溶液上樣，流速為2?3BV/h，然后加3 BV pH8-9的氨水溶液、 5 BV 20%乙醇洗脫雜質，再用80%的乙醇3 BV洗脫，收集洗脫液I ; C、 弱堿性陰離子交換樹脂純化：取步驟B中所得洗脫液I上D301弱堿性陰離子交換樹 脂柱，藥材與樹脂質量比為1. 5:1，陰離子柱子徑高比=1 :10,流速為3~4BV，收集洗脫液II， 濃縮至稠膏，60°C減壓干燥，即得。
[0011] 為了驗證本方法的效果，做了以下實驗 1. 試劑與藥材大孔吸附樹脂AB-8,弱堿性陰離子交換樹脂由滄州寶恩吸附材料科技 有限公司提供。甲醇、乙腈為色譜醇，水為超純水。人參對照品：人參皂苷RgpR^RLRbp Rc、Rb2、Rd購于中國藥品生物藥品檢驗所(供含量測定用）。人參藥材產地：集安、文浩。
[0012] 2?分離純化 2. 1樣品溶液的制備 取人參藥材Ikg粉碎，放入燒瓶中；加70%浸泡lh。第一次10倍量70%乙醇回流提取 1小時；第二次8倍量70%乙醇回流提取1小時；第三次8倍量70%乙醇回流提取0. 5小時。 合并上述提取液，過濾，減壓回收乙醇，至無乙醇味，加水定容至4000ml (濃度0. 25g/ml)， 冷藏24h ;冷藏液取出，放置常溫，過濾，過濾液加水定容5000ml，濃度0. 2g/ml備用。
[0013] 2. 2大孔樹脂柱處理：取AB-8型大孔吸附樹脂2. 5kg即（1:2. 5)，用95%乙醇浸泡， 攪拌，去除液面漂浮物。然后將大孔樹脂裝入柱底墊紗布的玻璃柱中，用95%的乙醇洗滌， 直至流出液加入等量的水不渾濁為止。用水洗脫大孔樹脂柱至無醇味，備用。
[0014] 2. 3弱堿性陰離子交換樹脂D301的處理： (1)弱堿性取陰離子交換樹脂D301 lkg，用4~5%氫氧化鈉溶液緩慢流過樹脂，用量為 樹脂體積的:T5倍，每小時1. 5倍體積流過。
[0015] (2)用去離子水沖洗，出水pH值為中性。
[0016] (3)用4~5%鹽酸溶液緩慢流過陰離子交換樹脂，用量為樹脂體積的3~5倍，每小時 1. 5倍體積流過。
[0017] (4)用去離子水沖洗，出水pH值為6~7。
[0018] (5)用4~5%氫氧化鈉溶液緩慢流過陰離子交換樹脂，用量為樹脂體積的3~5倍，每 小時1. 5倍體積流過。
[0019] (6)用去離子水沖洗，出水pH值為中性。
[0020] 2. 4上樣：取濃縮液通過處理好的AB-8大孔吸附樹脂柱，控制流速2~3倍樹脂體 積/h，流出液棄去。加pH8~9的氨水溶液3倍量柱體積洗脫，再用20%乙醇5倍量柱體積， 洗脫流出液棄去。加80%的乙醇3倍量柱體積洗脫，收集流出液。
[0021] 2. 5上弱堿性陰離子交換樹脂：取AB-8樹脂流出液上弱堿性陰離子離子交換樹脂 柱，(樹脂：藥材=1:1. 5)，陰離子柱子徑高比=1:10,流速為3~4倍柱體積，收集流出液，濃縮 至稠膏，60°C減壓干燥，即得，為淡黃色粉末。
[0022] 3人參皂苷的含量測定 3. 1對照品的配制 3. I. I HPLC對照品的配制：精密稱取人參皂苷對照品!^、!^、!^、!^、!^、!^、!^適量， 用甲醇配成濃度分別為0. 2mg/ml的混標溶液。
[0023] 3. I. 2 UV對照品的制備：精密稱取人參皂苷對照品Re適量，用甲醇配成濃度為 0.2mg/ml的溶液，備用。
[0024] 3. 2樣品的制備：精密稱取2. 5所得人參皂苷30. Omg，用甲醇定容至IOml容量瓶 中，備用。
[0025] 3. 3人參皂苷含量測定色譜條件：流動相乙腈-水梯度洗脫色譜柱為Waters Symmetry C18 (4. 6mmx250mm，5 u m)，檢測波長 203nm ;流速 lml/min ;柱溫 30°C。

【權利要求】
1. 一種人參中人參總皂苷的分離純化方法，其特征在于由以下步驟構成： A、 樣品溶液的制備：取人參藥材粉碎，乙醇回流提取三次，合并上述提取液，減壓回收 乙醇，過濾，濃縮，即得樣品溶液； B、 大孔樹脂分離純化：稱取處理好的大孔吸附樹脂裝柱，取樣品溶液上樣，流速為 2?3BV/h，然后依次用pH8-9的氨水溶液、20%乙醇洗脫雜質，再用80%的乙醇3 BV洗脫，收 集洗脫液I; C、 弱堿性陰離子交換樹脂純化：取步驟B中所得洗脫液I上弱堿性陰離子交換樹脂 柱，收集洗脫液II，濃縮至稠膏，減壓干燥，即得。
2. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟B中大孔吸附樹脂為AB-8型大孔 吸附樹脂，AB-8型大孔吸附樹脂與生藥質量比為2. 5:1。
3. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟C中樹脂與藥材質量比為1:1. 5， 陰離子柱子徑高比=1 :1〇,流速為3?4BV。
4. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟C中弱堿性陰離子交換樹脂為 D301。
5. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于由以下步驟構成： A、 樣品溶液的制備：取人參藥材粉碎，第一次10倍量70%乙醇，浸泡lh，回流提取1小 時；第二次8倍量70%乙醇回流提取1小時；第三次8倍量70%乙醇回流提取0. 5小時，合 并上述提取液，減壓回收乙醇，過濾，濃縮，即得樣品溶液； B、 大孔樹脂分離純化：稱取處理好的AB-8型大孔吸附樹脂裝柱，AB-8型大孔吸附樹脂 與生藥質量比為2. 5:1，取樣品溶液上樣，流速為2?3BV/h，然后加3 BV pH8-9的氨水溶液、 5 BV 20%乙醇洗脫雜質，再用80%的乙醇3 BV洗脫，收集洗脫液I ; C、 弱堿性陰離子交換樹脂純化：取步驟B中所得洗脫液I上D301弱堿性陰離子交換樹 脂柱，藥材與樹脂質量比為1. 5:1，陰離子柱子徑高比=1 :10,流速為3~4BV，收集洗脫液II， 濃縮至稠膏，60°C減壓干燥，即得。
【文檔編號】A61K36/258GK104415070SQ201310387213
【公開日】2015年3月18日 申請日期:2013年8月30日 優先權日:2013年8月30日
【發明者】蔡艷, 宋劍, 賈繼明, 王貴金, 裴彩云 申請人:河北以嶺醫藥研究院有限公司