一種從半枝蓮中提取降糖物質的方法及其應用的制作方法
【專利摘要】本發明涉及從半枝蓮中提取降糖物質的方法及其應用，有效解決從半枝蓮提取用于制備降糖藥物的物質，方法是，將半枝蓮粉碎成藥粉，用8倍藥粉重量的、體積濃度為75%的乙醇浸泡0.5h，回流提取2次，棄去濾渣，得提取液，提取液減壓濃縮至無醇味，用乙醇調整藥液醇濃度為95%，靜置12h，沉淀棄去；上清液濃縮至無醇味，調整藥液濃度為相當于含生藥0.6g/ml，得樣品液；樣品液上AB-8型大孔吸附樹脂柱，先用水洗脫，得洗脫液Ⅰ棄去；續用體積濃度為10%的乙醇洗脫，得洗脫液Ⅱ棄去；繼續用體積濃度為80%的乙醇洗脫，得洗脫液Ⅲ，減壓回收乙醇，濃縮干燥，得半枝蓮總黃酮，本發明原料豐富，制備方法簡單，制備的半枝蓮總黃酮具有降糖作用，有效用于制備降糖藥物。
【專利說明】一種從半枝蓮中提取降糖物質的方法及其應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及醫藥，特別是一種從半枝蓮中提取降糖物質的方法及其應用。
【背景技術】
[0002]糖尿病是由環境因素和遺傳因素相互作用而引起的以慢性高血糖為共同特征的慢性代謝性疾病，國內對其病征通常稱作“高血糖”。長期的高血糖會導致微血管內皮產生病變，伴隨的蛋白質、脂肪代謝異常會引起心、腦、腎、神經、血管等組織結構和功能的異常，甚至會造成器官功能衰竭而危及生命。果味給它的別名叫“沉默的殺手”，特別是成人型的糖尿病，糖尿病患者平均可減少十年壽命。并且發生的并發癥可遍布全身，糖尿病的并發癥包括:自律性神經失調，神經障礙，腦血栓，腦梗塞。白內障，蛀牙，口腔炎，支氣管炎，皮膚病，心肌梗塞，尿毒癥，足病變等。亞洲糖尿病學會透露，截至2012年，中國患糖尿病的總人數已達到9240萬，并且具有以下特征:I發病率高，可達9.7% ；2年輕化趨勢，青壯年缺乏運動，導致糖尿病高發；3存在治療誤區，中國糖尿病患者注射胰島素的時間普遍較晚。中國是人口大國，人口所占比例大，同時中國人也是糖尿病的好發人群，研究顯示，在富裕國家，華人患病率多在10%以上，且近20年糖尿病的發病率上升迅速，已引起衛生部門和廣大醫務人員的重視。
[0003]糖尿病是由不同病因導致的代謝疾病，特征是由于胰島素分泌缺陷或胰島素作用缺陷引起的慢性高血糖狀態及碳水化合物、脂肪和蛋白質代謝紊亂。其慢性并發癥有腎臟病變、神經病變等，因口服抗糖尿病藥方便、快捷、無痛苦、可持續長期應用等優點，臨床應用很廣泛，目前常用的治療糖尿病及并發癥的藥物有一下幾類:1雙胍類，通過肝細胞膜G蛋白恢復胰島素對腺苷酸環化酶活性的抑制作用，減少了肝糖原的異聲和肝葡萄糖輸出，促進肌細胞葡萄糖的無氧酵解，增加肌肉等外周組織對葡萄糖的攝取，加強組織對胰島素的敏感性，對正常人則無降 糖作用。代表藥物有二甲雙胍等，二甲雙胍可增加乳酸在血液中的積聚，可致乳酸中毒并伴有胃腸道的不良反應。2磺脲類，主要作用于胰腺β細胞釋放胰島素。代表藥物有格列苯脲、格列齊特、格列喹酮等。3葡萄糖糖苷酶抑制劑，代表藥物有阿卡波糖、米格列醇等，在胃腸道內競爭性抑制葡萄糖苷酶，延緩腸腔內雙糖、低聚糖及多糖釋放葡萄糖，輕度抑制食欲，最終降低餐后血糖，且不引起低血糖。4胰島素增敏劑，代表藥物有羅格列酮、吡格列酮等，是可提高骨骼肌和脂肪細胞對葡萄糖的吸收和降低肝糖的輸出，提高對胰島素的敏感性，改善胰島素抵抗狀態，改善糖代謝，降低血糖值。5非磺脲類類促胰島素分泌藥，代表藥物有瑞格列奈、那格列奈等，與胰島β細胞膜上特異性受體結合，使胰腺β細胞去極化，從而促進胰島素分泌。6 二肽基肽酶-4抑制劑，代表藥物有西他列汀，可一直DPP-4的活性，可保護腸促胰島素不被降解，刺激胰腺β細胞再生。
[0004]但西藥治療多具有副作用，會帶來肝腎毒性，隨著糖尿病患者的患病率不斷上升，以往的西藥帶來的副作用及胰島素使用過程中國難以控制，使得很多專家學者開始尋找治療糖尿病的新藥，從中藥中篩選有效成分是一條新的有效途徑，成為國內外專家的研究熱點。[0005]中醫認為糖尿病屬于消渴的范疇，早在《內經》中，對本病之病因、病機、證治都有了明確的論述。糖尿病臨床癥狀表現復雜多變，是由于多個臟腑功能失調所致，與脾、腎的關系最為密切。現代研究發現，血瘀與糖尿病的發生發展有著重要的影響，血瘀貫穿于糖尿病的始終。糖尿病病程中導致血瘀的原因大致如下:1陰虛致瘀，陰虛是糖尿病重要病機之一，陰津不足，由于津血同源，津虧則血少，導致血液循環澀滯，血脈運行不暢而產生血瘀。2燥熱致瘀，糖尿病患者由于陰津虧耗，水虧火旺，多有燥熱熾盛，煎熬陰血，使血液濃縮，脈道壅塞而產生血瘀。3氣虛致瘀，糖尿病患者燥熱內熾，不僅傷津亦可耗氣，導致氣陰兩虛，氣虛則推動無力，血行遲緩而產生血瘀。4氣滯致瘀，情志不暢最易導致氣機郁滯，氣滯影響血脈運行而產生血瘀。5久病必瘀，糖尿病做為一種慢性終身性疾病，其病程遷延，日久不愈，中醫認為久病入絡，絡脈瘀滯，血行不暢而產生血瘀。血瘀一旦形成，又可做為新的致病因素進一步引起糖尿病的發展和加重。而熱毒在糖尿病病程的發生發展過程中起到重要作用，臨床上糖尿病患者都伴隨著燥熱，體質偏頗，加以勞心過度，情志抑郁，勞力不足，及外感溫熱毒邪，均可導致火熱傷陰耗氣，而火熱熾盛，或蘊結日久，即可化為熱毒。經過認真的研究并完善了 “活血化瘀、清熱解毒”的治則治療糖尿病的治療大法。
[0006]半枝蓮為唇形科植物半枝蓮的干燥地上部分，具清熱解毒、活血祛瘀、消腫止痛、抗癌等功能。蔣儀《藥鏡拾遺賦》記載"半支蓮解蛇傷之仙草"。民間除治毒蛇咬傷外，尚用治腫瘤，有一定的近期療效。《校正本草綱目》記載“此草開紫白色花，草紫紅色，對結對葉，七八月采用”。半枝蓮含有多種化學成分，富含黃酮類、皂苷類、多糖類、氨基酸類等，且其黃酮的含量具有季節差異性。具有抑菌、抗炎、抗內毒素、增強免疫等作用，但尚未見半枝蓮單味藥或半枝蓮提取物作用于糖尿病以及如何制備提取物，至今未見有公開報導。

【發明內容】

[0007]針對上述情況，為克服現有技術之缺陷，本發明之目的就是提供一種從半枝蓮中提取降糖物質的方法及其應用，可有效解決從半枝蓮提取用于制備降糖藥物的物質。
[0008]本發明解決的技術方案是，半枝蓮提取物在制備降糖藥物中的應用，該提取物是，將半枝蓮粉碎成過60-80目篩的藥粉，用8倍藥粉重量的、體積濃度為75%的乙醇浸泡
0.5h，回流提取2次，第I次1.5h，第2次Ih ;棄去濾渣，得提取液，提取液減壓濃縮至無醇味，用體積濃度為99%的乙醇調整藥液醇濃度為95%，靜置12h，沉淀棄去；上清液濃縮至無醇味，調整藥液濃度為相當于含生藥0.6g/ml，得樣品液；樣品液上AB-8型大孔吸附樹脂柱，上樣量與樹脂體積的比例為1:10，樹脂柱徑高比為1:10 ;先用8倍柱體積的水洗脫，得洗脫液I棄去；續用8倍量柱體積的、體積濃度為10%的乙醇洗脫，得洗脫液II棄去；繼續用8倍量柱體積的、體積濃度為80%的乙醇洗脫，得洗脫液III，減壓回收乙醇，濃縮干燥，得半枝蓮總黃酮(物質)，含量> 60% ;該半枝蓮總黃酮有效用于制備降糖藥物，實現半枝蓮總黃酮在制備降糖藥物中的應用。
[0009]本發明原料豐富，制備方法簡單，制備的半枝蓮總黃酮具有降糖作用，有效用于制備降糖藥物，開拓治療糖尿病的新用途，是降`糖藥物上的創新。
【具體實施方式】
[0010]以下結合具體情況對本發明的【具體實施方式】作詳細說明。[0011]本發明在具體實施中，由以下技術方案給出:半枝蓮提取物在制備降糖藥物中的應用，該提取物是，將半枝蓮粉碎成過60-80目篩的藥粉，用8倍藥粉重量的、體積濃度為75%的乙醇浸泡0.5h，回流提取2次，第I次1.5h，第2次Ih ;棄去濾渣，得提取液，提取液減壓濃縮至無醇味，用體積濃度為99%的乙醇調整藥液醇濃度為95%，靜置12h，沉淀棄去；上清液濃縮至無醇味，調整藥液濃度為相當于含生藥0.6g/ml，得樣品液；樣品液上AB-8型大孔吸附樹脂柱，上樣量與樹脂體積的比例為1:10，樹脂柱徑高比為1:10 ;先用8倍柱體積的水洗脫，得洗脫液I棄去；續用8倍量柱體積的、體積濃度為10%的乙醇洗脫，得洗脫液II棄去；繼續用8倍量柱體積的、體積濃度為80%的乙醇洗脫，得洗脫液III，減壓回收乙醇，濃縮干燥，得半枝蓮總黃酮(物質)，含量> 60% ;該半枝蓮總黃酮有效用于制備降糖藥物，實現半枝蓮總黃酮在制備降糖藥物中的應用。
[0012]本發明方法簡單，原材料豐富，易于制備半枝蓮總黃酮，該總黃酮具有降糖作用，可用于制備降糖藥物，并經實驗取得了滿意的效果，有關實驗資料如下:
[0013]對特殊膳食誘導加鏈脲佐菌素造大鼠糖尿病模型
[0014]I藥物試劑
[0015]本發明半枝蓮黃酮；
[0016]鹽酸二甲雙胍片，上海信誼藥廠有限公司生產，批號120523 ;羧甲基纖維素鈉，天津市福晨化學試劑廠生產，批號20090826 ;鏈脲佐菌素，sigma公司生產，批號Z120315 ；生理鹽水，鄭州永和制藥有限公司，批號12042401 ;冰乙酸(分析純)，天津市恒興化學試劑制造有限公司生產，批號20110103 ;甲醛，煙臺市雙雙化工有限公司生產，批號20111101 ；血糖試劑盒，中生北控生物科技股份有限公司生產，批號120511 ;S0D試劑盒，南京建成生物工程研究所生產，批號20130115 ;尿蛋白定量試劑盒，南京建成生物工程研究所生產，批號20130121 ； (GSH)試劑盒，南京建成生物工程研究所生產，批號20130117 ;尿素氮(BUN)試劑盒，南京建成生物工程研 究 所生產，批號20130105 ;肌酐(Cr)試劑盒，南京建成生物工程研究所生產，批號20130115 ;丙二醛(MDA)測試盒，南京建成生物工程研究所生產，批號20130119 ;糖化血清蛋白(GSP)測試盒，南京建成生物工程研究所生產，批號20130121 ；總膽固醇試劑盒,北京北化康泰臨床試劑有限公司生產,批號20121203 ;高密度脂蛋白膽固醇試劑盒，北京北化康泰臨床試劑有限公司生產，批號20120827 ;甘油三脂試劑盒，北京北化康泰臨床試劑有限公司生產，批號20121212 ;低密度脂蛋白膽固醇試劑盒，北京北化康泰臨床試劑有限公司生產，批號20121106 ;RatIAA ELISA Kit試劑盒，R&D公司生產，L0T:20130101A ；Rat INS ELISA Kit 試劑盒，R&D 公司生產，L0T:20130101A。
[0017]2實驗儀器
[0018]FA (N)/JA (N)系列電子天平，上海民橋精密儀器有限公司；UV — 2000紫外可見分光光度計，上海天美科學儀器有限公司生產；TGL-16G臺式離心機，上海安亭科學儀器廠生產；DZKW-4型電子恒溫水浴鍋，北京中興偉業儀器有限公司生產；KDC-160HR高速冷凍離心機，科大創新股份有限公司中佳分公司生產；10RAD-680酶標儀，680Microplate Reader,Bio-Rad Laboratories ;可調式移液器，由上海雷勃分析儀器有限公司生產。
[0019]3實驗動物
[0020]SPF級wi star大鼠，雄性，體重180_220g，由山東魯杭醫藥股份有限公司質監中心提供，動物合格證號:0013774，許可證號:SCXK魯20080002，實驗室合格證號SYXK(豫)2010-001。
[0021]4試驗方法
[0022]采用舌下靜脈注射鏈脲佐菌素加特殊膳食誘導的方法來建立大鼠II型糖尿病模型，任取12只作為空白組，不造模，其余大鼠為糖尿病組大鼠。糖尿病組大鼠喂養高糖高脂飼料(飼料組成:高糖高脂飲食(蔗糖:豬油:奶粉:雞蛋:普通飼料=30: 20: 4: 2: 63))，空白組大鼠僅喂食普通飼料。4周后10%水合氯醛0.3ml/100g麻醉糖尿病組大鼠，舌下靜脈25mg/kg鏈脲佐菌素，空白組僅注射檸檬酸緩沖液。注射5天后尾靜脈取血測血糖值，選取血糖值> 16.0mmol/L并明顯具有多飲多食多尿癥狀的大鼠為造模成功大鼠。根據血糖值隨機均勻分組，空白組和模型組給予同劑量0.1%CMC，二甲雙胍組、連翹木脂素大、中、小劑量組；半枝蓮黃酮大、中、小劑量組；紫花地丁黃酮大、中、小劑量組分別給予相應藥物。每天給藥I次，連續給藥30天,分別于給藥的第10、20、30天測空腹6小時血糖值，于月末，上代謝籠接取大鼠24小時尿液，測定尿蛋白含量。第31天，禁食后12h，灌胃后2h，取血，3500r/min，離心10分鐘，分離血清，嚴格按照試劑盒說明書測血清中胰島素、胰島素抗體、糖基化血清蛋白、尿肌酐、尿素氮、S0D、丙二醛、谷胱甘肽、甘油三酯、總膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇等指標，取胸腺、脾臟、胰腺、腎臟，分別10%福爾馬林液固定，石蠟包埋，切片，HE染色，光鏡下觀察病理變化。
[0023]5統計方法
[0024]數據分析用SPSS 13.0 for windows醫用統計包進行數據資料的統計學處理,計量資料用平均數土標準差(i±s)表示，各組間比較采用單因素方差分析，方差檢驗齊者用最小顯著差數(LSD)法,方差不齊者用Games-Howell法檢驗,等級資料采用Ridit檢驗。
[0025]6 結果
[0026]表I對特殊膳食加鏈脲佐菌素所致大鼠糖尿病模型谷胱甘肽、丙二醛、S0D、糖化
血清蛋白的影響(X 土S,N= 12)
[0027]
【權利要求】
1.一種從半枝蓮中提取降糖物質的方法，該提取物是，將半枝蓮粉碎成過60-80目篩的藥粉，用8倍藥粉重量的、體積濃度為75%的乙醇浸泡0.5h，回流提取2次，第I次1.5h，第2次Ih ;棄去濾渣，得提取液，提取液減壓濃縮至無醇味，用體積濃度為99%的乙醇調整藥液醇濃度為95%，靜置12h，沉淀棄去；上清液濃縮至無醇味，調整藥液濃度為相當于含生藥0.6g/ml，得樣品液；樣品液上AB-8型大孔吸附樹脂柱，上樣量與樹脂體積的比例為1:10，樹脂柱徑高比為1:10 ;先用8倍柱體積的水洗脫，得洗脫液I棄去；續用8倍量柱體積的、體積濃度為10%的乙醇洗脫，得洗脫液II棄去；繼續用8倍量柱體積的、體積濃度為80%的乙醇洗脫，得洗脫液III，減壓回收乙醇，濃縮干燥，得半枝蓮總黃酮。
2.權利要求1所述 方法提取的半枝蓮總黃酮在制備降糖藥物中的應用。
【文檔編號】A61P3/10GK103432202SQ201310421147
【公開日】2013年12月11日 申請日期:2013年9月16日 優先權日:2013年9月16日
【發明者】苗明三 申請人:河南中醫學院