高品質穿心蓮內酯組份的制備方法
【專利摘要】本發明涉及一種高品質穿心蓮內酯組份的制備方法，是將穿心蓮藥材粉碎后經甲醇回流提取、再經過水沉、反相色譜和親水色譜的純化制得穿心蓮內酯組份，產物為淡黃色；其主要成分為穿心蓮內酯，新穿心蓮內酯，脫氧穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯。采用高效液相色譜外標法測定穿心蓮內酯組份中四個主要內酯的含量占總質量的75％以上，其中穿心蓮內酯占總內酯組份的41～44％，新穿心蓮內酯占總內酯組份的14～21％，脫氧穿心蓮內酯占總內酯組份的18～25％，脫水穿心蓮內酯為余量。此方法具有工藝簡單、易操作、成本低、可工業化生產等突出優點。
【專利說明】高品質穿心蓮內酯組份的制備方法
【【技術領域】】
[0001]本發明屬于醫藥【技術領域】，涉及一種從穿心蓮藥材中提取分離高品質穿心蓮內酯組份的方法，特別涉及一種依次用反相色譜、親水色譜分離制備高品質穿心蓮內酯組份的方法。
【【背景技術】】
[0002]穿心蓮Andrographis paniculata(Burm.f)Nees.是爵床科植物穿心蓮的全草或葉，干燥地上部分入藥。性寒味苦，具有消炎抗菌、涼血消腫功效，主治感冒發熱，咽喉腫痛，口舌生瘡，熱淋澀痛等，是重要的“中藥抗生素”。穿心蓮的主要化學成分為二萜內酯類化合物和黃酮類化合物，穿心蓮葉主要為二萜內酯類化合物，其中含量最多的為穿心蓮內酯(Andrographolide),還包括新穿心蓮內酯(NeoandrographoIide)、脫氧穿心蓮內酯(Deoxyandrographolide)和脫水穿心蓮內酯(14-Deoxy-ll,12-didehydroandrographoIide)等，穿心蓮根的主要活性成分為黃酮類化合物。
[0003]近年來對穿心蓮的研究，主要集中于穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的提取分離、精制、衍生、含量測定等方面。穿心蓮活性成分的提取常用的有滲漉法、浸潰法、堿水提取法、超聲提取法及微波輔助提取法等；穿心蓮活性成分的提純常用的有活性炭脫色、正相溶劑萃取、Sehadex LH-20柱色譜、硅膠柱純化等。而極少有研究是關于穿心蓮內酯組份的提取精制。
[0004]目前市場上在售的穿心蓮產品涵蓋了片劑、膠囊、滴丸、注射液等多種劑型，其中穿心蓮片和穿心蓮膠囊是通過工藝提取制備得穿心蓮浸膏，制成相應劑型；穿心蓮滴丸的主要成分為穿心蓮內酷。市場分析研究表明，穿心蓮注射液在穿心蓮廣品中占有最大的市場份額。穿琥寧、炎琥寧、蓮必治等穿心蓮注射液`是以穿心蓮內酯為原料，經過一定工藝制備而成，但臨床試驗及研究表明，其不穩定性和某些副作用導致曾輝煌一時的穿心蓮注射液遭遇瓶頸期。喜炎平是穿心蓮總內酯通過磺化而得的磺酸鹽注射劑，由于其在治療手足口病中的獨特療效，喜炎平廣獲市場認可，2011年銷售量已經突破8000萬支，又由于喜炎平抗炎、抗病毒的顯著療效及其可靠的安全性，已成為國內中藥抗炎、抗病毒類藥物的主要品種，未來市場空間巨大。
【
【發明內容】
】
[0005]本發明的目的在于克服現有技術的不足，提供一種高品質穿心蓮內酯組份的制備方法。
[0006]本發明的目的是通過以下技術方案來實現的:
[0007]一種高品質穿心蓮內酯組份的制備方法，其具體步驟為:
[0008](I)回流提取:將穿心蓮葉粉碎后用甲醇水溶液回流提取兩次，合并兩次提取液；
[0009]所述的甲醇水溶液的體積濃度為70~100%，用量為10~15倍量(v:m)；
[0010]所述的提取時間為每次I~3小時；[0011](2)水沉:直接向步驟(1)所得提取液中加入純水稀釋至甲醇體積濃度為30~80 %，充分攪拌后靜置，過濾，取濾液；
[0012]所述的靜置條件為:靜置溫度為O~4°C,靜置時間為6~15小時；
[0013](3)反相色譜純化:直接向步驟(2)所得濾液中加入純水稀釋后上樣，進行反相色譜純化；上樣量與填料的質量比為1:20~1:80，依次用甲醇水溶液進行梯度洗脫，每次洗脫體積為2~5個柱體積；收集合并有效甲醇洗脫液，減壓濃縮至近干得稠膏；
[0014]所述的甲醇水溶液的體積濃度為30~70% ；
[0015]所述的反相色譜填料粒徑為5~60 μ m ;[0016](4)親水色譜純化:將步驟(3)所得稠膏用乙酸乙酯或乙腈溶解后進行親水色譜純化，上樣量與填料質量比為1:3~1:6，依次用洗脫溶液進行梯度洗脫，每次洗脫體積為3~10個柱體積，收集合并有效洗脫液并減壓濃縮，干燥得淡黃色穿心蓮內酯組份干粉。
[0017]其中，淡黃色穿心蓮內酯組份干粉的成分主要為穿心蓮內酯、新穿心蓮內酯、脫氧穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯，四種成分以外標法定量，含量占總質量的75%以上，其中穿心蓮內酯占總內酯組份的41~44%，新穿心蓮內酯占總內酯組份的14~21%，脫氧穿心蓮內酯占總內酯組份的18~25%，脫水穿心蓮內酯為余量。
[0018]所述的洗脫溶液為體積濃度為I~20%的甲醇-乙酸乙酯混合溶液或者乙腈、I%~15 %的甲醇-乙腈混合溶液。
[0019]所述的親水色譜填料粒徑為5~60 μ。
[0020]與現有技術相比，本發明的積極效果是:
[0021](I)穿心蓮內酯組份純度高:由于穿心蓮藥材總內酯含量高達1%~3%，本發明針對內酯組份特性，有選擇性地進行提取分離，制備所得穿心蓮總內酯組份的含量占總質量的75%以上。
[0022](2)溶劑利用率高，成本低:本發明通過四步操作完成對高品質穿心蓮內酯組份的提取制備，前三步操作中向溶液中直接加水即可進行下一步操作，不存在溶劑倒換現象，溶劑利用率高，工業生產時可大幅降低成本。
[0023](3)反相及親水色譜技術聯用:依次利用反相及親水色譜技術進行分離純化，充分利用填料及內酯組份特性，達到高純度的分離結果。
[0024](4)方法簡單易行，操作簡便:本發明涉及的制備高品質穿心蓮內酯組份的方法，儀器自動化程度高，操作方便簡單，可適用于大規模生產。
【【具體實施方式】】
[0025]以下提供本發明一種高品質穿心蓮內酯組份的制備方法的【具體實施方式】。
[0026]實施例1
[0027]IOg穿心蓮葉適當粉碎后，每次加入6倍量80%甲醇溶液回流提取兩次，每次2小時，合并墨綠色提取液。向所得提取液中直接加入一定量水稀釋至甲醇體積濃度為60%，在4°C冰箱內靜置10小時后過濾，得黃綠色濾液。
[0028]向所得濾液中直接加入水稀釋至甲醇體積濃度為40%并平均分為兩批進行反相色譜純化。每批上樣固體質量為0.96g，反相色譜填料質量為20g。先用3VB體積濃度為40%的甲醇將大部分強極性雜質及色素洗脫去除，然后依次用5VB體積濃度為55%的甲醇、2VB體積濃度為60%的甲醇對穿心蓮主要內酯組份進行洗脫并收集，合并55%甲醇和60%甲醇洗脫液，減壓濃縮至近干得稠膏，質量為0.57g。所得稠膏用IOmL乙酸乙酯溶解后進行親水色譜純化，親水填料質量為3g。先用8VB甲醇-乙酸乙酯(5:95v:v)對穿心蓮內酯，脫氧穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯組份進行洗脫并收集，再用4V B甲醇-乙酸乙酯(10:90v:v)對新穿心蓮內酯進行洗脫并收集，合并所有洗脫液，減壓濃縮后干燥得的最終產物淡黃色干粉，質量為0.35g。經高效液相色譜外標法測定，該組份中穿心蓮總內酯含量占產物總質量的80 %，其中穿心蓮內酯占總內酯組份的43 %，新穿心蓮內酯占總內酯組份的14%，脫氧穿心蓮內酯占總內酯組份的23%，脫水穿心蓮內酯占總內酯組份的20%。
[0029]實施例2 [0030]20g穿心蓮葉適當粉碎后，加入5倍量85%甲醇溶液回流提取兩次，每次2.5小時，合并墨綠色提取液。向所得提取液中直接加入水稀釋至甲醇體積濃度為50%，在4°C冰箱內靜置9小時后過濾，得黃綠色濾液。
[0031]向所得濾液中直接加入水稀釋至甲醇體積濃度為30%并將所得濾液平均分為四批進行反相色譜純化。每批上樣固體質量為0.98g，反相色譜填料質量為20g。先用3VB體積濃度為30%的甲醇將大部分強極性雜質及色素洗脫去除，然后依次用3VB體積濃度為55%的甲醇、3VB體積濃度為60%的甲醇對穿心蓮主要內酯組份進行洗脫并收集，合并55%甲醇和60%甲醇洗脫液，減壓濃縮至近干得稠膏，質量為1.2g。所得稠膏用20mL乙酸乙酯溶解后平均分成兩批進行親水色譜純化，親水色譜填料質量為3g。先用7VB甲醇-乙酸乙酯(5:95v:v)對穿心蓮內酯，脫氧穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯組份進行洗脫并收集，再用5VB甲醇-乙酸乙酯(10:90v:v)對新穿心蓮內酯進行洗脫并收集，合并所有洗脫液，減壓濃縮后真空干燥得的最終產物淡黃色干粉，質量為0.64g。經高效液相色譜外標法測定，該組份中穿心蓮總內酯含量占產物總質量的76%，其中穿心蓮內酯占總內酯組份的43%，新穿心蓮內酯占總內酯組份的17 %，脫氧穿心蓮內酯占總內酯組份的21 %，脫水穿心蓮內酯占總內酯組份的19%。
[0032]實施例3
[0033]15g穿心蓮葉適當粉碎后，加入7倍量80%甲醇溶液回流提取兩次，每次2小時，合并墨綠色提取液。向所得提取液中直接加入水稀釋至甲醇體積濃度為65%，在4°C冰箱內靜置12小時后過濾，得黃綠色濾液。
[0034]所得濾液中直接加入水稀釋至甲醇體積濃度為40%并平均分為三批進行反相色譜純化。每批上樣固體質量為1.10g，反相色譜填料質量為20g。先用3VB體積濃度為40%的甲醇將大部分強極性雜質及色素洗脫去除，然后依次用4VB體積濃度為55%的甲醇、3VB體積濃度為60 %的甲醇對穿心蓮主要內酯組份進行洗脫并收集，合并55 %甲醇和60 %甲醇的洗脫液，減壓濃縮至近干得稠膏，質量為0.86g。所得稠膏用IOmL乙腈溶解后進行親水色譜的純化，親水色譜填料質量為3g。先用8VB乙腈對穿心蓮內酯，新穿心蓮內酯，脫氧穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯組份進行洗脫并收集，再用4VB甲醇-乙腈(5:95v:v)對新穿心蓮內酯進行洗脫并收集，合并所有洗脫液，減壓濃縮后真空干燥得的最重產物淡黃色干粉，質量為0.45g。經高效液相色譜外標法測定，該組份中穿心蓮總內酯含量占產物總質量的75%，其中穿心蓮內酯占總內酯組份的44%，新穿心蓮內酯占總內酯組份的21%，脫氧穿心蓮內酯占總內酯組份的18%，脫水穿心蓮內酯占總內酯組份的17%。[0035]實施例4
[0036]30g穿心蓮葉適當粉碎后，加入5倍量90%甲醇溶液回流提取兩次，每次2小時，合并墨綠色提取液。向所得提取液中直接加入水稀釋至甲醇體積濃度為40%，在4°C冰箱內靜置6小時后過濾，得黃綠色濾液。
[0037]將所得濾液平均分為六批進行反相色譜純化。每批上樣固體質量為1.20g,反相色譜填料質量為20g。先用4VB體積濃度為40%的甲醇將大部分強極性雜質及色素洗脫去除，然后依次用2VB體積濃度為55%的甲醇、3VB體積濃度為60%的甲醇對穿心蓮主要內酯組份進行洗脫并收集，合并有效洗脫液，減壓濃縮至近干得稠膏，質量為1.77g。所得稠膏用27mL乙腈溶解后平均分為三批進行親水色譜純化，親水填料質量為3g。先用IOVB乙腈對穿心蓮內酯，新穿心蓮內酯，脫氧穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯組份進行洗脫并收集，再用4VB甲醇-乙腈(10:90v:v)對新穿心蓮內酯進行洗脫并收集，合并所有洗脫液，減壓濃縮后真空干燥得的最終產物淡黃色干粉，質量為1.05g。經高效液相色譜外標法測定，該組份中穿心蓮總內酯含量占總質量的75%，其中穿心蓮內酯占總內酯組份的41 %，新穿心蓮內酯占總內酯組份的15 %，脫氧穿心蓮內酯占總內酯組份的25 %，脫水穿心蓮內酯占總內酯組份的19%。
[0038]以上所述僅是本發明的優選實施方式，應當指出，對于本【技術領域】的普通技術人員，在不脫離本發明構思的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為本發明的保護范圍內。
【權利要求】
1.一種高品質穿心蓮內酯組份的制備方法，其特征在于，其具體步驟為:(1)回流提取:將穿心蓮葉粉碎后用甲醇水溶液回流提取兩次，合并兩次提取液；(2)水沉:直接向步驟(1)所得提取液中加入純水稀釋至甲醇體積濃度為30~80%，充分攪拌后靜置，過濾，取濾液；(3)反相色譜純化:直接向步驟(2)所得濾液中加入純水稀釋后上樣，進行反相色譜純化；上樣量與填料的質量比為1:20~1:80，依次用甲醇水溶液進行梯度洗脫，每次洗脫體積為2~5個柱體積；收集合并有效甲醇洗脫液，減壓濃縮至近干得稠膏；(4)親水色譜純化:將步驟(3)所得稠膏用乙酸乙酯或乙腈溶解后進行親水色譜純化，上樣量與填料質量比為1:3~1:6，依次用洗脫溶液進行梯度洗脫，每次洗脫體積為3~10個柱體積，收集合并有效洗脫液并減壓濃縮，干燥得淡黃色穿心蓮內酯組份干粉。
2.如權利要求1所述的一種高品質穿心蓮內酯組份的制備方法，其特征在于，在所述步驟(1)中，所述的甲醇水溶液的體積濃度為70~100%，用量為10~15倍量。
3.如權利要求1所述的一種高品質穿心蓮內酯組份的制備方法，其特征在于，在所述步驟(1)中，所述的提取時間為每次I~3小時。
4.如權利要求1所述的一種高品質穿心蓮內酯組份的制備方法，其特征在于，在所述步驟⑵中，所述的靜置條件為:靜置溫度為O~4°C,靜置時間為6~15小時。
5.如權利要求1所述的一種高品質穿心蓮內酯組份的制備方法，其特征在于，在所述步驟(3)中，所述的甲醇水溶液的體積濃度為30~70%。
6.如權利要求1所述的一種高品質穿心蓮內酯組份的制備方法，其特征在于，在所述步驟(3)中，所述的反相色譜填料粒徑為5~60 μ m。
7.如權利要求1所述的一種高品質穿心蓮內酯組份的制備方法，其特征在于，在所述步驟(4)中，所述的淡黃色穿心蓮內酯組份干粉的成分主要為穿心蓮內酯、新穿心蓮內酯、脫氧穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯。
8.如權利要求1所述的一種高品質穿心蓮內酯組份的制備方法，其特征在于，在所述步驟(4)中，所述的淡黃色穿心蓮內酯組份干粉的成分主要為穿心蓮內酯、新穿心蓮內酯、脫氧穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯；穿心蓮內酯占總內酯組份的41~44 %，新穿心蓮內酯占總內酯組份的14~21%，脫氧穿心蓮內酯占總內酯組份的18~25%，脫水穿心蓮內酯為余量。
9.如權利要求1所述的一種高品質穿心蓮內酯組份的制備方法，其特征在于，在所述步驟⑷中，所述的洗脫溶液為體積濃度為I~20%的甲醇-乙酸乙酯混合溶液或者乙腈、I%~15 %的甲醇-乙腈混合溶液。
10.如權利要求1所述的一種高品質穿心蓮內酯組份的制備方法，其特征在于，在所述步驟(4)中,所述的親水色譜填料粒徑為5~60 μ m。
【文檔編號】A61K36/19GK103585208SQ201310577892
【公開日】2014年2月19日 申請日期:2013年11月18日 優先權日:2013年11月18日
【發明者】金郁, 付青, 朱文亞, 梁鑫淼, 柯燕雄 申請人:華東理工大學