脈絡膜血管新生的疫苗療法
【專利摘要】本發明涉及脈絡膜血管新生的疫苗療法，具體地，本發明人嘗試將已知與新生血管形成相關的蛋白之一VEGFR-2的衍生肽施用于表達人HLA-A*0201的模型小鼠(A2/Kb轉基因小鼠)，研究了該肽是否具有疫苗效果。結果，本發明人成功地發現以該肽為抗原的疫苗可有效地抑制脈絡膜新生血管形成，從而完成了本發明。由此，本發明提供含有VEGFR-2來源的肽作為有效成分的用于治療和/或預防脈絡膜新生血管形成所導致的疾病的疫苗。
【專利說明】脈絡膜血管新生的疫苗療法
本申請是申請日為2008年02月15日，申請號為200880012298.0(國際申請號為PCT/JP2008/052487)，名稱為“脈絡膜血管新生的疫苗療法”的發明專利申請的分案申請。
【技術領域】
本發明涉及用于由脈絡膜新生血管形成導致的疾病(新生血管性黃斑病變)的治療和/或預防的藥劑。此外，本發明還涉及脈絡膜新生血管形成的抑制劑。
【背景技術】
起因于脈絡膜新生血管形成(CNV)的滲出型老化相關性黃斑變性(AMD)在發達國家中是導致高度視力障礙的主要原因之一。目前已得到的證據顯示，血管內皮生長因子(VEGF)在CNV的發生中扮演中心角色。例如有報告稱，抑制VEGF產生的化合物或抑制VEGF信號傳導途徑的化合物可以抑制CNV。此外，有報告稱，與包含光線力學療法在內的傳統治療方法相比，抗VEGF抗體顯示出更高的治療有效性。因而，近年來抗VEGF藥物成為針對CNV的藥物療法的主要選擇。 VEGF信號傳導是由兩種受體酪氨酸激酶即VEGFR-1和VEGFR-2介導的。上述任何一種受體均在人CNV膜或實驗小鼠CNV膜上表達。然而，關于CNV中VEGFR-1信號傳導途徑的作用依然存在爭議。例如某項研究報告稱，通過口服施用抗體、基因敲除、SiRNA來抑制VEGFR-1信號傳導，從而抑制了 CNV。此外，其它研究報告稱，在眼內，通過VEGF或作為VEGFR-2配體的胎盤生長因子I (PIGFl)活化VEGFR-1，導致VEGFR-2被SPARC活化，結果導致CNV被活化。
另一方面，關于VEGFR-2，普遍接受的觀點是VEGFR-2信號傳導的活化可促進CNV增殖。即可以認為:通過全身施用或局部施用抗VEGFR-2藥或VEGFR-2抗體，玻璃體內施用siRNA等以VEGFR-2為靶標的新生血管形成抑制策略，可以抑制VEGFR-2的信號傳導，從而也抑制CNV增殖。
然而，現在可利用的抗VEGF藥物存在必須以4周~6周間隔反復進行注射的問題。此外，罹患眼內炎或視網膜剝離等嚴重合并癥的風險較高。因而，需要確立一種用于替代現有的抗VEGF藥物的新治療方法。
已知在腫瘤組織中，使用了人VEGF受體2來源的肽的疫苗誘導出細胞毒性T淋巴細胞(CTL)，該細胞毒性T淋巴細胞對表達VEGFR-2的內皮細胞顯示強力的細胞毒性(專利文獻I)。然而，能夠在脈絡膜中誘導出細胞毒性T淋巴細胞(CTL)的疫苗的存在是未知的。此外，與其他組織一樣，在脈絡膜新生血管形成的機制也存在許多不明之處。
本發明的現有技術文獻如下。
專利文獻 l:W0/2004/024766

【發明內容】

發明所要解決的問題本發明正是鑒于上述情況而完成的，本發明所要解決的問題是提供一種以已知與脈絡膜新生血管形成相關的蛋白質之一 VEGFR-2為靶標的、用于治療和/或預防由脈絡膜新生血管形成導致的疾病(新生血管性黃斑病變)的藥劑。此外，本發明的課題是提供一種脈絡膜新生血管形成的抑制劑。
解決問題的方法
本發明人在解決上述課題的過程中，注意到已知與脈絡膜新生血管形成相關的一種蛋白質——VEGFR-2。具體地，本發明人等嘗試了將以VEGFR-2衍生肽為抗原的疫苗施用于表達人HLA-A*0201的模型小鼠(A2/Kb轉基因小鼠)，并對該疫苗的效果進行確認。結果，本發明人發現，以該肽為抗原的疫苗可抑制脈絡膜新生血管形成。
關于脈絡膜新生血管形成與VEGF之間的關聯已經有許多報告。然而，與其他組織一樣，在脈絡膜新生血管形成的機制也存在許多不明之處，VEGFR-l、VEGFR-2在新生血管形成中起怎樣的作用尚未闡明。特別是盡管已經有關于將VEGFR-1、VEGFR-2應用于針對腫瘤的疫苗療法的報告，但還沒有關于將其應用于針對脈絡膜新生血管的疫苗療法的報告。這表明，本領域技術人員認為，盡管已知VEGFR-1、VEGFR-2來源的肽疫苗可抑制脈絡膜以外的新生血管，但在脈絡膜中未必會顯示相同效果。其中，本發明人等在眾多候選當中選擇VEGFR-2作為靶標，進行了實驗。結果發現，以VEGFR-2衍生肽為抗原的疫苗能夠抑制脈絡膜中的新生血管。而且還發現:以VEGFR-2衍生肽為抗原的疫苗，不僅對重癥患者有效，而且對屬于視力比較良好的早期病例的患者也是有效的。即，本發明提供以下的〔I〕~〔36〕。
[0001]用于治療和/或預防由脈絡膜新生血管形成導致的疾病(新生血管性黃斑病變)的藥劑，其含有下述(a)~(C)中任一項的肽中的至少I種作為有效成分:
(a)包含SEQID NO:1~12中任一項所示的氨基酸序列的肽；
(b)在SEQID NO:1~6中任一項所示的氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入I個或多個氨基酸而成的肽，其中N末端起第2位的氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸、和/或C末端的氨基酸為纈氨酸或亮氨酸，并且`該肽具有誘導細胞毒性T細胞的活性、
(c)在SEQID NO: 7~12中任一項所示的氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入I個或多個氨基酸而成的肽，其中N末端起第2位的氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸或色氨酸，和/或C末端的氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸或甲硫氨酸，并且該肽具有誘導細胞毒性T細胞的活性。
[0002]〔I〕所述的藥劑，其中，由脈絡膜新生血管形成導致的疾病(新生血管性黃斑病變)選自滲出型老化相關性黃斑變性(滲出型加齡黃斑変性)、近視性黃斑變性、視網膜血管樣紋(網膜色素線條癥)、中心性滲出性脈絡膜視網膜病變、各種視網膜色素上皮病變、脈絡膜萎縮、無脈絡膜、脈絡膜骨瘤。
[0003]用于治療和/或預防由脈絡膜新生血管形成導致的疾病(新生血管性黃斑病變)的疫苗，其含有下述(a)或(b)的肽中的至少I種作為有效成分:
(a)包含SEQID NO:1~6中任一項所示的氨基酸序列的肽；
(b)在SEQID NO:1~6中任一項所示的氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入I個或多個氨基酸而成的肽，該肽的N末端起第2位的氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸，和/或C末端的氨基酸為纈氨酸或亮氨酸，并且該肽具有誘導細胞毒性T細胞的活性。
[0004]用于治療和/或預防由脈絡膜新生血管形成導致的疾病(新生血管性黃斑病變)的疫苗，其含有下述(a)或(b)的肽中的至少I種作為有效成分:
(a)包含SEQID NO:7~12中任一項所示的氨基酸序列的肽；
(b)在SEQID NO: 7~12中任一項所示的氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入I個或多個氨基酸而成的肽，該肽的N末端起第2位的氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸或色氨酸，和/或C末端的氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸或甲硫氨酸，并且該肽具有誘導細胞毒性T細胞的活性、
[0005]〔3〕所述的疫苗，其施用于HLA抗原為HLA-A02的受試者。
[0006]〔4〕所述的疫苗,其施用于HLA抗原為HLA-A24的受試者。
[0007]〔5〕或〔6〕所述的疫苗，其中，由脈絡膜新生血管形成導致的疾病(新生血管性黃斑病變)選自滲出型老化相關性黃斑變性、近視性黃斑變性、視網膜血管樣紋、中心性滲出性脈絡膜視網膜病變、各種視網膜色素上皮病變、脈絡膜萎縮、無脈絡膜、脈絡膜骨瘤。
[0008]用于抑制脈絡膜新生血管形成的藥劑，其含有下述(a)~(C)中任一項所述的肽中的至少I種作為有效成分:
(a)包含SEQID NO:1~12中任一項所示的氨基酸序列的肽；
(b)在SEQID NO:1~6中任一項所示的氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入I個或多個氨基酸而成的肽，該肽的N末端起第2位的氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸，和/或C末端的氨基酸為纈氨酸或亮氨酸，并且該肽具有誘導細胞毒性T細胞的活性；
(c)在SEQID NO: 7~12中任一項所示的氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入I個或多個氨基酸而成的肽，該肽的N末端起第2位的氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸或色氨酸，和/或C末端的氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸或甲硫氨酸，并且該肽具有誘導細胞毒性T細胞的活性。
[0009]用于抑制脈絡膜新生血管形成的疫苗，其含有下述(a)或(b)的肽中的至少I種作為有效成分:
(a)包含SEQID NO:1~6中任一項所示的氨基酸序列的肽；
(b)在SEQID NO:1~6中任一項所示的氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入I個或多個氨基酸而成的肽，該肽的N末端起第2位的氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸，和/或C末端的氨基酸為纈氨酸或亮氨酸，并且該肽具有誘導細胞毒性T細胞的活性。
[0010]用于抑制脈絡膜新生血管形成的疫苗，其含有下述(a)或(b)的肽中的至少I種作為有效成分:
(a)包含SEQID NO:7~12中任一項所示的氨基酸序列的肽；
(b)在SEQID NO: 7~12中任一項所示的氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入I個或多個氨基酸而成的肽，其中N末端起第2位的氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸或色氨酸，和/或C末端的氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸或甲硫氨酸，并且該肽具有誘導細胞毒性T細胞的活性。
[0011]〔9〕所述的疫苗，其施用于HLA抗原為HLA-A02的受試者。
[0012]〔 10〕所述的 疫苗，其施用于HLA抗原為HLA-A24的受試者。
[0013]用于治療和/或預防由脈絡膜新生血管形成導致的疾病(新生血管性黃斑病變)的方法，其包括給受試者施用含有下述(a)~(C)中任一項所述的肽中的至少I種作為有效成分的藥劑的步驟:(a)包含SEQID NO:1~12中任一項所示的氨基酸序列的肽；
(b)在SEQID NO:1~6中任一項所示的氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入I個或多個氨基酸而成的肽，其中N末端起第2位的氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸，和/或C末端的氨基酸為纈氨酸或亮氨酸，并且該肽具有誘導細胞毒性T細胞的活性；
(c)在SEQID NO: 7~12中任一項所示的氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入I個或多個氨基酸而成的肽，其中N末端起第2位的氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸或色氨酸，和/或C末端的氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸或甲硫氨酸，并且該肽具有誘導細胞毒性T細胞的活性。
[0014]〔13〕所述的方法，其中由脈絡膜新生血管形成導致的疾病(新生血管性黃斑病變)選自滲出型老化相關性黃斑變性、近視性黃斑變性、視網膜血管樣紋、中心性滲出性脈絡膜視網膜病變、各種視網膜色素上皮病變、脈絡膜萎縮、無脈絡膜、脈絡膜骨瘤。
[0015]用于由脈絡膜新生血管形成導致的疾病(新生血管性黃斑病變)的治療和/或預防的方法，其包括給受試者施用含有下述(a)或(b)的肽中的至少I種作為有效成分的疫苗的步驟:
(a)包含SEQID NO:1~6中任一項所示的氨基酸序列的肽；
(b)在SEQID NO:1~6中任一項所示的氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入I個或多個氨基酸而成的肽，其中N末端起第2位的氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸，和/或C末端的氨基酸為纈氨酸或亮氨酸，并且該肽具有誘導細胞毒性T細胞的活性。
[0016]用于治療和/或預防由脈絡膜新生血管形成導致的疾病(新生血管性黃斑病變)的方法，其包括給受試者施用含有下述(a)或(b)的肽中的至少I種作為有效成分的疫苗的步驟:
(a)包含SEQID NO:7~12中任一項所示的氨基酸序列的肽；
(b)在SEQID NO: 7~12中任一項所示的氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入I個或多個氨基酸而成的肽，其中N末端起第2位的氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸或色氨酸，和/或C末端的氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸或甲硫氨酸，并且該肽具有誘導細胞毒性T細胞的活性。
[0017]〔15〕所述的方法，其施用于HLA抗原為HLA-A02的受試者。
[0018]〔16〕所述的方法,其施用于HLA抗原為HLA-A24的受試者。
[0019]〔17〕或〔18〕所述的方法，其中，由脈絡膜新生血管形成導致的疾病(新生血管性黃斑病變)選自滲出型老化相關性黃斑變性、近視性黃斑變性、視網膜血管樣紋、中心性滲出性脈絡膜視網膜病變、各種視網膜色素上皮病變、脈絡膜萎縮、無脈絡膜、脈絡膜骨瘤。
[0020]用于抑制脈絡膜新生血管形成的方法，其包括給受試者施用含有下述(a)~(C)中任一項的肽中的至少I種作為有效成分的藥劑的步驟:
(a)包含SEQID NO:1~12中任一項所示的氨基酸序列的肽；
(b)在SEQID NO:1~6中任一項所示的氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入I個或多個氨基酸而成的肽，其中N末端起第2位的氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸，和/或C末端的氨基酸為纈氨酸或亮氨酸，并且該肽具有誘導細胞毒性T細胞的活性；
(c)在SEQID NO: 7~12中任一項所示的氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入I個或多個氨基酸而成的肽，該肽的N末端起第2位的氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸或色氨酸，和/或C末端的氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸或甲硫氨酸，并且該肽具有誘導細胞毒性T細胞的活性。
[0021]用于抑制脈絡膜新生血管形成的方法，其包括給受試者施用含有下述(a)或(b)的肽中的至少I種作為有效成分的疫苗的步驟:
(a)包含SEQID NO:1~6中任一項所示的氨基酸序列的肽；
(b)在SEQID NO:1~6中任一項所示的氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入I個或多個氨基酸而成的肽，該肽的N末端起第2位的氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸，和/或C末端的氨基酸為纈氨酸或亮氨酸，并且該肽具有誘導細胞毒性T細胞的活性。
[0022]用于抑制脈絡膜新生血管形成的方法，其包括給受試者施用含有下述(a)或(b)的肽中的至少I種作為有效成分的疫苗的步驟:
(a)包含SEQID NO:7~12中任一項所示的氨基酸序列的肽；
(b)在SEQID NO: 7~12中任一項所示的氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入I個或多個氨基酸而成的肽，其中N末端起第2位的氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸或色氨酸，和/或C末端的氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸或甲硫氨酸，并且該肽具有誘導細胞毒性T細胞的活性。
[0023]〔21〕所述的方法，其施用于HLA抗原為HLA-A02的受試者。
[0024]〔22〕所述的方法，其施用于HLA抗原為HLA-A24的受試者。
[0025]下述(a)~(C)中任一項所述的肽在制造用于治療和/或預防由脈絡膜新生血管形成導致的疾病(新生血管性黃斑病變)的藥劑中的用途: (a)包含SEQID NO:1~12中任一項所示的氨基酸序列的肽；
(b)在SEQID NO:1~6中任一項所示的氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入I個或多個氨基酸而成的肽，其中N末端起第2位的氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸，和/或C末端的氨基酸為纈氨酸或亮氨酸，并且該肽具有誘導細胞毒性T細胞的活性；
(c)在SEQID NO: 7~12中任一項所示的氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入I個或多個氨基酸而成的肽，其中N末端起第2位的氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸或色氨酸，和/或C末端的氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸或甲硫氨酸，并且該肽具有誘導細胞毒性T細胞的活性。
[0026]〔25〕所述的用途，其中，由脈絡膜新生血管形成導致的疾病(新生血管性黃斑病變)選自滲出型老化相關性黃斑變性、近視性黃斑變性、視網膜血管樣紋、中心性滲出性脈絡膜視網膜病變、各種視網膜色素上皮病變、脈絡膜萎縮、無脈絡膜、脈絡膜骨瘤。
[0027]下述(a)或(b)的肽在制造用于治療和/或預防由脈絡膜新生血管形成導致的疾病(新生血管性黃斑病變)的疫苗中 的用途:
(a)包含SEQID NO:1~6中任一項所示的氨基酸序列的肽；
(b)在SEQID NO:1~6中任一項所示的氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入I個或多個氨基酸而成的肽，其中N末端起第2位的氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸，和/或C末端的氨基酸為纈氨酸或亮氨酸，并且該肽具有誘導細胞毒性T細胞的活性。
[0028]下述(a)或(b)的肽在制造用于治療和/或預防由脈絡膜新生血管形成導致的疾病(新生血管性黃斑病變)的疫苗中的用途:
(a)包含SEQ ID NO:7~12中任一項所示的氨基酸序列的肽；(b)在SEQ ID NO: 7~12中任一項所示的氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入I個或多個氨基酸而成的肽，該肽的N末端起第2位的氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸或色氨酸，和/或C末端的氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸或甲硫氨酸，并且該肽具有誘導細胞毒性T細胞的活性。
[0029]〔27〕所述的用途，其中，所述疫苗用于施用給HLA抗原為HLA-A02的受試者。
[0030]〔28〕所述的用途，其中，所述疫苗用于施用給HLA抗原為HLA-A24的受試者。
[0031]〔29〕或〔30〕所述的用途，其中，由脈絡膜新生血管形成導致的疾病(新生血管性黃斑病變)選自滲出型老化相關性黃斑變性、近視性黃斑變性、視網膜血管樣紋、中心性滲出性脈絡膜視網膜病變、各種視網膜色素上皮病變、脈絡膜萎縮、無脈絡膜、脈絡膜骨瘤。
[0032]下述(a)~(C)中任一項所述的肽在制造用于抑制脈絡膜新生血管形成的藥劑中的用途:
(a)包含SEQID NO:1~12中任一項所示的氨基酸序列的肽；
(b)在SEQID NO:1~6中任一項所示的氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入I個或多個氨基酸而成的肽，其中N末端起第2位的氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸，和/或C末端的氨基酸為纈氨酸或亮氨酸，并且該肽具有誘導細胞毒性T細胞的活性；
(c)在SEQID NO: 7~12中任一項所示的氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入I個或多個氨基酸而成的肽，其中N末端起第2位的氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸或色氨酸，和/或C末端的氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸或甲硫氨酸，并且該肽具有誘導細胞毒性T細胞的活性。
[0033]下述(a)或(b)的肽在制造用于抑制脈絡膜新生血管形成的疫苗中的用途:
(a)包含SEQID NO:1~6中任`一項所示的氨基酸序列的肽；
(b)在SEQID NO:1~6中任一項所示的氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入I個或多個氨基酸而成的肽，其中N末端起第2位的氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸，和/或C末端的氨基酸為纈氨酸或亮氨酸，并且該肽具有誘導細胞毒性T細胞的活性。
[0034]下述(a)或(b)的肽在制造用于抑制脈絡膜新生血管形成的疫苗中的用途:
(a)包含SEQID NO:7~12中任一項所示的氨基酸序列的肽；
(b)在SEQID NO: 7~12中任一項所示的氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入I個或多個氨基酸而成的肽，其中N末端起第2位的氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸或色氨酸，和/或C末端的氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸或甲硫氨酸，并且該肽具有誘導細胞毒性T細胞的活性。
[0035]〔33〕所述的用途，其中，所述疫苗用于施用給HLA抗原為HLA-A02的受試者。
[0036]〔34〕所述的用途,其中，所述疫苗用于施用于HLA抗原為HLA-A24的受試者。
[0037]用于治療和/或預防由脈絡膜新生血管形成導致的疾病(新生血管性黃斑病變)的下述(a)~(C)中任一項所述的肽:
(a)包含SEQID NO:1~12中任一項所示的氨基酸序列的肽；
(b)在SEQID NO:1~6中任一項所示的氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入I個或多個氨基酸而成的肽，其中N末端起第2位的氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸，和/或C末端的氨基酸為纈氨酸或亮氨酸，并且該肽具有誘導細胞毒性T細胞的活性；
(c)在SEQID NO: 7~12中任一項所示的氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入I個或多個氨基酸而成的肽，其中N末端起第2位的氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸或色氨酸，和/或C末端的氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸或甲硫氨酸，并且該肽具有誘導細胞毒性T細胞的活性。
[0038]〔37〕所述的肽，其中，由脈絡膜新生血管形成導致的疾病(新生血管性黃斑病變)選自滲出型老化相關性黃斑變性、近視性黃斑變性、視網膜血管樣紋、中心性滲出性脈絡膜視網膜病變、各種視網膜色素上皮病變、脈絡膜萎縮、無脈絡膜、脈絡膜骨瘤。
[0039]用于治療和/或預防由脈絡膜新生血管形成導致的疾病(新生血管性黃斑病變)的下述(a)或(b)的肽:
(a)包含SEQID NO:1~6中任一項所示的氨基酸序列的肽；
(b)在SEQID NO:1~6中任一項所示的氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入I個或多個氨基酸而成的肽，其中N末端起第2位的氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸，和/或C末端的氨基酸為纈氨酸或亮氨酸，并且該肽具有誘導細胞毒性T細胞的活性。
[0040]用于治療和/或預防由脈絡膜新生血管形成導致的疾病(新生血管性黃斑病變)的下述(a)或(b)的肽:
(a)包含SEQID NO:7~12中任一項所示的氨基酸序列的肽；
(b)在SEQID NO: 7~12中任一項所示的氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入I個或多個氨基酸而成的肽，其中N末端起第2位的氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸或色氨酸，和/或C末端的氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸或甲硫氨酸，并且該肽具有誘導細胞毒性 T細胞的活性。
[0041]〔39〕所述的肽，其中，所述的疫苗用于施用給HLA抗原為HLA-A02的受試者。
[0042]〔40〕所述的肽，其中，所述疫苗用于施用給HLA抗原為HLA-A24的受試者。
[0043]〔41〕或〔42〕所述的肽，其中，由脈絡膜新生血管形成導致的疾病(新生血管性黃斑病變)選自滲出型老化相關性黃斑變性、近視性黃斑變性、視網膜血管樣紋、中心性滲出性脈絡膜視網膜病變、各種視網膜色素上皮病變、脈絡膜萎縮、無脈絡膜、脈絡膜骨瘤。
[0044]用于抑制脈絡膜新生血管形成的下述(a)~(C)中任一項所述的肽:
(a)包含SEQID NO:1~12中任一項所示的氨基酸序列的肽；
(b)在SEQID NO:1~6中任一項所示的氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入I個或多個氨基酸而成的肽，其中N末端起第2位的氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸，和/或C末端的氨基酸為纈氨酸或亮氨酸，并且該肽具有誘導細胞毒性T細胞的活性；
(c)SEQID NO:7~12中任一項所示的氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入I個或多個氨基酸而成的肽，其中N末端起第2位的氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸或色氨酸，和/或C末端的氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸或甲硫氨酸，并且該肽具有誘導細胞毒性T細胞的活性。
[0045]用于抑制脈絡膜新生血管形成的下述(a)或(b)的肽:
(a)包含SEQID NO:1~6中任一項所示的氨基酸序列的肽；
(b)在SEQID NO:1~6中任一項所示的氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入I個或多個氨基酸而成的肽，其中N末端起第2位的氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸，和/或C末端的氨基酸為纈氨酸或亮氨酸，并且該肽具有誘導細胞毒性T細胞的活性。
[0046]用于抑制脈絡膜新生血管形成的下述(a)或(b)的肽:(a)包含SEQID NO:7~12中任一項所示的氨基酸序列的肽；
(b)在SEQID NO: 7~12中任一項所示的氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入I個或多個氨基酸而成的肽，其中N末端起第2位的氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸或色氨酸，和/或C末端的氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸或甲硫氨酸，并且該肽具有誘導細胞毒性T細胞的活性。
[0047]〔45〕所述的肽，其中，所述疫苗用于施用給HLA抗原為HLA-A02的受試者。
[0048]〔46〕所述的肽，其中，所述疫苗用于施用給HLA抗原為HLA-A24的受試者。
附圖簡要說明
圖1是顯示第7天時PBS施用組、IFA單獨施用組、肽疫苗接種組各自的熒光眼底造影中來自脈絡膜新生血管的熒光的漏出指數的圖表。
圖2為顯示第7天的PBS施用組、IFA單獨施用組、肽疫苗接種組各自的熒光眼底造影的一個例子的照片。
圖3為顯示第7天的PBS施用組、IFA單獨施用組、肽疫苗接種組各自的熒光眼底造影中脈絡膜新生血管的截面面積的圖表。
圖4是顯示第7天的PBS施用組、IFA單獨施用組、肽疫苗接種組各自的脈絡膜伸展標本的一個例子的照片。 發明的【具體實施方式】
本發明涉及含有VEGFR-2衍生肽作為有效成分，用于治療和/或預防由脈絡膜新生血管形成導致的疾病(新生血管性黃斑病變)的藥劑(以下也稱“本發明的藥劑”)。如上所述，本發明是基于本發明人等的下述發現:以VEGFR-2衍生肽為抗原的疫苗可有效地抑制脈絡膜新生血管形成。
人VEGFR-2的氨基酸序列是公知的，例如記載于美國專利第5，861，301號。獲知該專利文獻所述的信息的本領域技術人員均可容易地獲得人VEGFR-2。
本發明的藥劑中所含的VEGFR-2衍生肽優選為9聚體或10聚體形式的部分肽。作為這樣的肽，更具體地可以列舉:
(a)包含SEQID NO:1~12中任一項所示的氨基酸序列的肽。
對于本發明的肽沒有特殊限制，只要其具有誘導針對VEGFR-2表達細胞的CTL的活性即可。即，本發明的肽還包括:
(b)在SEQID NO:1~6中任一項所示的氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入I個或多個氨基酸而成的肽，其中該肽的N末端起第2位的氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸，和/或C末端的氨基酸為纈氨酸或亮氨酸，并且該肽具有誘導細胞毒性T細胞的活性。而且，在肽的N末端和/或C末端還可以添加I~2個氨基酸。
此外，本發明的肽還包括:
(c)在SEQID NO: 7~12中任一項所示的氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入I個或多個氨基酸而成的肽，其中該肽的N末端起第2位的氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸或色氨酸，和/或C末端的氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸或甲硫氨酸，并且該肽具有誘導細胞毒性T細胞的活性。
在對氨基酸殘基進行修飾時，理想的是使之突變為保持氨基酸側鏈的性質的其它氨基酸。例如，作為氨基酸側鏈的性質，可以列舉如下:疏水性氨基酸(A、1、L、M、F、P、W、Y、V)、親水性氨基酸(R、D、N、C、E、Q、G、H、K、S、T)、具有脂肪族側鏈的氨基酸(G、A、V、L、1、P)、具有含羥基側鏈的氨基酸(S、T、Y)、具有含硫側鏈的氨基酸(C、M)、具有含羧酸以及酰胺側鏈的氨基酸(D、N、E、Q)、具有含堿性基團側鏈的氨基酸(R、K、H)、以及具有含芳香族側鏈的氨基酸(H、F、Y、W)(括號內為氨基酸的單字母符號)。上述各組內的氨基酸之間的取代稱為保守取代。已知具有對某個氨基酸序列實施I或數個氨基酸殘基的缺失、添加和/或用其它氨基酸加以取代來進行修飾而得到的氨基酸序列的多肽能夠保持其生物學活性(Mark，D.F.et al., Proc Natl Acad Sci USA(1984)81:5662-6;Zoller, M.J.and Smith, M., NucleicAcids Res.(1982) 10:6487-500;Wang, A.et al., Science (1984)224:1431-3;Dalbadie-McFarland, G.et al., Proc Natl Acad Sci USA (1982) 79:6409-13)。對于突變的氨基酸數沒有特殊限制，通常為7個以內，優選為5個以內，更優選為3個以內(例如2個以內)。氨基酸序列的同一性可以使用例如Karlin and Altschul的算法BLAST (Proc Natl Acad SciUSA (1993) 90:5873-7)來確定。
而且，在本發明中，特別優選包含SEQ ID N0:2所述的氨基酸序列的肽。 此外，本發明的肽可以通過基于氨基酸序列、從任意的位置開始進行肽合成來獲得。肽的合成可以根據常規的肽化學中使用的方法來進行。常規使用的合成方法在例如PeptideSynthesis, Interscience, New York, 1966;The Proteins, Vol2, Academic Press Inc., NewYork, 1976; ”午卜''合成、丸善(株)、1975; ”午卜''合成基礎i実験、丸善(株)、1985;醫薬品O開発続第14卷.”。午卜''合成、広川書店、1991等文獻、以及國際公開W099/67288號等公報中有所記載。
本發明的肽還可以采用公知的基因工程方法來合成。基因工程合成方法的一個例子是這樣的方法，即將插入了編碼目的肽的DNA的載體導入適當的宿主細胞，來制備轉化細胞。通過從該轉化細胞回收產生的肽，可以獲得本發明的肽。
此外，本發明的肽也可以通過先制備融合蛋白質、再用合適的蛋白酶將其分解來獲得。制備融合蛋白質的方法可以采用本領域技術人員公知的方法，只要將編碼本發明的肽的多核苷酸與編碼其它肽的多核苷酸以符合閱讀框的方式連接起來，然后將其導入表達載體，在宿主中進行表達即可。作為用于與本發明的肽相融合的其它肽，可以使用例如FLAG (Hopp, T.P.et al., BioTechnology (1988) 6, 1204-1210)、6 個 His(組氨酸)殘基構成的6XHis、10XHis、流感凝集素(HA)、人c-myc的片段、VSV-GP的片段、pl8HIV的片段、T7標簽、HSV標簽、E標簽、SV40T抗原的片段、Ick標簽、α -微管蛋白的片段、B標簽、蛋白C的片段等公知的肽。此外，本發明的肽還可以是與GST(谷胱甘肽硫轉移酶)、ΗΑ(流感凝集素)、免疫球蛋白恒定區、β_半乳糖苷酶、MBP(麥芽糖結合蛋白)等的融合蛋白質的形式。通過將如此制備的融合蛋白質用適當的蛋白酶進行處理，并回收目的肽，可以獲得本發明的肽。肽的回收可以采用本領域技術人員公知的方法、例如親和層析等來進行。
此外，本發明的肽具有通過在體外或體內接觸具有抗原呈遞能力的細胞而誘導細胞毒性T細胞的活性(細胞性T細胞誘導活性)。特別是，本發明的肽優選具有與被認為在日本人中大量表達的Α-02或Α-24型等HLA抗原的高親和性。Α-02或Α-24型等HLA抗原分別包括Α-0201、Α-2402等亞型。作為對HLA_A*0201具有高結合親和性的肽，可以列舉出SEQID NO:1 ~6 的肽(W0/2004/024766)。
此外，本發明的肽不僅包括對HLA-A*0201具有高結合親和性的肽，還包括對其它種類的HLA抗原(例如HLA-A*2402)具有高結合親和性的肽。在這樣的肽中，例如作為對HLA-A*2402具有高結合親和性的肽，可以列舉例如SEQ ID NO:7~12的肽。
如果某蛋白質衍生的肽作為疫苗的有效性得以確認，那么本領域技術人員就能夠容易地從同一蛋白質中尋找與HLA抗原結合親和性高的其它肽、并確認作為疫苗的效果。此外，本領域技術人員還可以容易地從同一蛋白質中尋找與HLA-A*0201以外的HLA抗原具有高結合親和性的肽，并開發可適用于各種人種的疫苗。本領域技術人員中公知，若某蛋白質衍生的肽激活針對該蛋白質的免疫反應，那么同一蛋白質衍生的與其它HLA抗原顯示高親和性的肽只要具有誘導針對該蛋白質CTL的活性，就也可以激活針對該蛋白質的免疫反應。更具體地說，當VEGFR-2衍生肽(例如SEQ ID NO: 2等)激活針對VEGFR-2的免疫反應并抑制新生血管時，VEGFR-2衍生的顯示與其它HLA抗原的高親和性的肽(例如顯示對HLA-A24的高親和性的肽)只要具有針對VEGFR-2的CTL誘導活性，也可激活針對VEGFR-2的免疫反應并抑制新生血管，這是本領域技術人員中公知的。
本發明的肽與HLA抗原之間的結合可以這樣測定:分離細胞表面具有HLA抗原的細胞例如樹狀細胞，采用常規方法測定肽對細胞的結合。
此外，還可以使用可在互聯網上利用的軟件例如記載于Parker K.C.，J.1mmunol.152, 163-75 (1994)中的軟件等,來在計算機上(in silico)計算各種肽與HLA抗原之間的結合親和性。而且，與HLA抗原的結合親和性可以采用例如Parker, K.C.，J.1mmunol.，152，163-75(1994) ; Nukaya, 1.，Int.J.Cancer, 80，92-7(1999)等所述的方法來測定。
在臨床上，可以通過預先調查需要治療的患者的HLA抗原類型，適宜地選擇出與之結合親和性高，或者抗原呈遞介導的細胞毒性T細胞(CTL)誘導活性高的肽。在本發明的肽中還包括采用這樣的方法選擇出的肽。
此外，在本發明中，所謂治療，是指在現實地發生由脈絡膜新生血管形成導致的疾病(新生血管性黃斑病變)所特有的·癥狀的患者中減輕所述癥狀。在本發明中對于減輕的程度沒有特殊限定，即使程度甚為輕微，但只要能減輕癥狀，就包含在本發明的治療的含義中。
此外，在本發明中，所謂預防，是指預先抑制由脈絡膜新生血管形成導致的疾病(新生血管性黃斑病變)所特有的癥狀的進展。在本發明中，對于抑制進展的程度沒有特殊限制，即使程度甚為輕微，但只要能抑制進展，就包含在本發明的預防的含義中。
因脈絡膜中的新生血管而引起的疾病(新生血管性黃斑病變)的癥狀包括視力下降。該癥狀是否減輕可以通過視力檢查來進行判定。而且，可以通過熒光眼底造影檢查或者使用光干涉斷層裝置檢查，來評價脈絡膜新生血管的活動性。
本發明的肽可以單獨地在治療和/或預防中使用。或者，也可以采用通常使用的制劑學方法來制劑化。此時，除了本發明的肽之外，還可以適宜包含通常在醫藥中使用的載體、賦形劑等。例如，可以以與水或者其它藥學可接受的液體所成的無菌性溶液或懸濁液劑的注射劑的形式非口服地使用。例如，可以考慮通過與藥理學上可接受的載體或者介質，具體地有滅菌水或生理鹽水、植物油、乳化劑、混懸劑、表面活性劑、穩定劑、香味劑、賦形劑、溶媒(vehicles)、防腐劑、粘合劑等適宜地組合，并以通常接受的制藥實踐所要求的單位用量形式進行混和，來進行制劑。調節這些制劑中的有效成分量以獲得指示范圍內的適當劑量。
本發明的肽可以作為單獨I種或2種以上的組合，用作能夠在生物體內誘導CTL的疫苗。具體地說，本發明涉及含有VEGFR-2衍生肽作為有效成分，用于治療和/或預防由脈絡膜新生血管形成導致的疾病(新生血管性黃斑病變)的疫苗。通過施用本發明的肽，可以將該肽高密度地呈遞在抗原呈遞細胞的HLA抗原中，并誘導出可與所呈遞的肽與HLA抗原的復合體特異性反應的CTL，從而提高針對脈絡膜中的血管內皮細胞的攻擊力。或者，可以通過從患者提取樹突細胞，并用本發明的肽加以刺激，來獲得細胞表面上存在本發明的肽的抗原呈遞細胞，將其再次施用于患者，在患者中誘導CTL，從而提高針對靶標細胞的攻擊力。
當本發明的肽作為疫苗使用時，可以與佐劑一起施用以建立有效的細胞免疫，也可以與其它抗癌劑等有效成分一起施用，此外還可以做成顆粒狀的劑型來施用。佐劑可以使用文獻(Johnson AG., Clin.Microbiol.Rev., 7:277-289, 1994)所述的佐劑等。此外，還可以考慮脂質體制劑、結合在數μ m直徑的珠子上的顆粒狀制劑、結合在脂質上的制劑等。
本領域技術人員可以根據需要施用本發明的疫苗的患者(受試者)的癥狀，來適宜地設計本發明的疫苗的施用方法、施用量、施用期間。本發明的疫苗可以全身施用，也可以局部施用。全身施用包括例如口服施用、皮內施用、皮下施用、靜脈注射。此外，局部施用包括例如施用于脈絡膜附近。
此外，對于施用量沒有限定，包括例如0.0Olmg~lOOOmg、優選0.0Olmg~lOOOmg、更優選0.1mg~10mg。此外，疫苗優選數日至數月施用I次，但不限于此。
本發明的藥劑對由脈絡膜新生血管形成導致的疾病(新生血管性黃斑病變)是有效的。作為本發明的藥劑的對象的疾病沒有特殊限定，只要是由脈絡膜新生血管形成導致的疾病(新生血管性黃斑病變)即可，優選包括例如滲出型老化相關性黃斑變性、近視性黃斑變性、視網膜血管樣紋 、中心性滲出性脈絡膜視網膜病變、各種視網膜色素上皮病變、脈絡膜萎縮、無脈絡膜、脈絡膜骨瘤等疾病所伴隨的新生血管性黃斑病變。此外，特別優選滲出型老化相關性黃斑變性。
本發明的藥劑在實施治療后發生視力急劇降低或嚴重并發癥(這是傳統治療方法中存在的問題)的風險較小。因而，本發明的藥劑不僅可以適用于重癥患者，也適用于屬于視力較好的早期病例的患者。視力較好的早期病例視網膜的病損輕微，因而經過治療的視力預后可望遠遠好于傳統的對進展病例進行的治療。
本發明基于下述發現，即以VEGFR-2衍生肽為抗原的疫苗能夠通過誘導細胞毒性T淋巴細胞活性(CTL)從而抑制血管內皮細胞。因而，本發明提供含有VEGFR-2衍生肽作為有效成分的脈絡膜新生血管形成的抑制劑。關于VEGFR-2衍生肽的具體說明如上述。而且，在本發明中，對于抑制的程度沒有特殊限定，即使程度甚為輕微，只要能抑制新生血管形成，就包含在抑制的含義中。
本發明的抑制劑可以以疫苗的形式使用。即，本發明提供含有VEGFR-2衍生肽作為有效成分的用于抑制脈絡膜新生血管形成的疫苗。關于疫苗的施用部位、施用方法、施用量等與疫苗相關的具體說明如上述。
而且，本說明書中引用的全部現有技術文獻，均作為參照并入本說明書中。
實施例
以下，援引實施例對本發明進行進一步說明，但本發明不受這些實施例的限定。〔方法〕
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從CLEA Japan(東京，日本)獲得體重20g~25g的C57bl/6小鼠。全部實驗均基于動物管理和使用的相關委員會、以及視覺和眼科研究會議的關于在眼和視覺研究中使用的聲明來實施。實驗中使用的小鼠表達人HLA-A*0201。
抗原肽
將小鼠分為3組，在第O天以及第10天兩次腋窩皮下接種PBS、免疫佐劑(不完全弗氏佐劑；IFA)、或人VEGF受體2衍生的抗原肽與IFA的混懸物。所述肽是由人VEGFR-2的從第773位起的9個氨基酸VIAMFFWLL(SEQ ID NO: 2)構成的肽，已經在腫瘤模型中確認了其具有抗新生血管形成作用。然后，在第20天，以Φ200μπι、20(Μν、0.02sec的條件，在兩眼的各3個位置用半導體激光誘導CNV。
實駘件CNV
實驗性CNV按別處記載并加以若干變更的方法來制備。簡單描述如下，通過腹腔內注射(lml/kg)鹽酸氯胺酮(Ketalar(注冊商標)、三共，東京，日本)和鹽酸地西拉嗪(Celactal (注冊商標),Bayer,東京，日本)的混合物(1:1)來實施全身麻醉。為了實施光凝固，用0.5%托吡卡胺(Mydrin(注冊商標)M,參天制藥,大阪，日本)1滴來擴散瞳孔。對于每只眼睛，在視神經乳頭周圍的主要視網膜血管之間，使用二極管激光光凝固裝置(DC-3000(注冊商標)、NIDEK，大阪，日本)和裂隙燈發生系統(SL150，Topcon，東京，日本)，各進行6次照射徑200mm、持續時間0.02秒、強度200mW的激光光凝固。
借助熒光素血二管造影法進行的CNV等級評價 在CNV誘導完成3天后(第23天)和7天后(第27天)，使用合計169只動物，考察了對來自CNV病變的漏出的效果(第3天的對照組、低用量組和高用量組的動物分別為n=41只、34只和18只，第7天的對照組、低用量組和高用量組的動物分別為n=51只、15只和10只)。在第3天和第7天，在觀察者對施用毫不知情的情況下，按他處的記載采用熒光素熒光眼底造影法對病變進行檢查。
使用脈絡膜平鋪片(flat mount)進行的CNV尺寸測定
將合計36只小鼠用于脈絡膜平鋪片分析(第3天和第7天的各組的小鼠數分別為n=4只和8只)。自激光處置起3天后和7天后，按以前的記載使用脈絡膜平鋪片測定了 CNV病變的尺寸。對小鼠實施麻醉，用含50mg/ml的FITC偶聯葡聚糖(4.4kDa，50mg/kg體重；Sigma)的磷酸緩沖鹽水(PBS) Iml進行灌流，然后摘取眼球，再除去角膜和晶狀體，小心地將整個視網膜從視杯剝離。從赤道部的一端起切出放射狀的切痕，以鞏膜朝下的方式將視杯平鋪在載玻片上。用熒光顯微鏡(Olympus DPS0)對平鋪后的視杯進行觀察，用CCD照相機拍攝圖像。使用軟件系統(Studio lite)將數據輸入計算機，從計算機鼠標指定CNV區的輪廓，采用NIH的公開圖像處理程序進行了測定。在統計分析方面，將病變尺寸進行平均以對每個個體賦予I個值。 數據以平均土標準差的形式來表示。
統計分析
熒光素熒光眼底造影評分采用Mann-Whitney U檢驗進行了評價。CNV病變的尺寸先用ANOVA然后用Dunnet的因果(post hoc)檢驗進行了評價。在采用的所有形式的統計分析中，均以P〈0.05的值作為有統計學意義。倫理層面的考慮
按照東京大學動物實驗實施規程來努力地減輕小鼠的痛苦，但由于使用了弗氏佐劑以更好地賦予免疫，因此Scientists Center for Animal Welfare的痛苦分類為C級。
〔結果〕
對CNV漏出的效果
在第3天，熒光素漏出的程度在對照組、低用量施用組和高用量施用組之間未見差異。在第7天，與第3天相比，來自非施用組的CNV病變的熒光素漏出增加。高用量組中來自CNV病變的熒光素漏出比對照少(圖1、2)。雖不具有統計學意義，但低用量組動物的CNV病變所顯示出的漏出也少于對照組。
對CNV病變尺寸的效果
第3天的CNV病變尺寸在對照組、低用量組和高用量組之間未見差異，CNV平均病變尺寸在非施用組中第7天大于第3天。與對照組中的CNV病變的尺寸相比，低用量組和高用量組中的CNV病變的尺寸顯著降低(圖3、4)。
本發明人等顯示，肽VIAMFFWLL (9) (SEQ ID NO: 2)抑制VEGF的上調，并抑制CNV增殖。已知VIAMFFWLL(SEQ ID NO: 2)可調節免疫反應。考慮到CNV的活性是由炎癥過程介導的，并考慮到僅在第7天能夠觀察到在體內VIAMFFWLL (SEQ ID NO: 2)對CNV生長的抑制效果，而在第3天卻不能觀察到，認為VIAMFFWLL (SEQ ID N0:2)可能并非是通過抑制新生血管形成本身來抑制CNV， 而是對白血球浸潤等免疫反應產生影響，由此來調節新生血管形成過程。
工業實用性
本發明提供用于由脈絡膜新生血管形成導致的疾病(新生血管性黃斑病變)的治療和/或預防的藥劑(疫苗)。
傳統上，起因于脈絡膜中新生血管的疾病(新生血管性黃斑病變)的治療方法有激光治療、光線力學療法、手術療法、藥物治療等。但是，激光治療會導致中心視力降低，光線力學療法有對視力良好的病例實施治療后視力急劇降低的案例，手術療法也存在外科侵入所帶來的術后合并癥的風險，而藥物療法因為是向眼內注射，因而存在發生眼內炎、視網膜剝離等嚴重度合并癥的風險。在這樣的傳統治療中，因治療伴隨的副作用和合并癥而導致視力降低的風險較高。因而難以對視力較好的早期病例進行治療。
而另一方面，使用本發明的藥劑(疫苗)，至少不會出現眼局部的合并癥，上述風險均應不存在。因而，可以對視力較好的早期病例進行治療。而且，在視力較好的早期病例中，視網膜的病損輕微，因而，治療后的視力預后可望遠遠好于比傳統的相對于進展病例進行的治療。
此外，已知在本發明的疾病中，對側眼同樣發生新生血管的頻率很高。但是，對側眼中新生血管的預防方法尚未建立。采用本發明的疫苗療法，可望對于對側眼的預防性治療也具有效果。
【權利要求】
1.一種用于治療和/或預防由脈絡膜新生血管形成導致的疾病(新生血管性黃斑病變)的藥劑，該藥劑含有下述(a)~(C)中任一項所述的肽中的至少I種作為有效成分: (a)包含SEQID NO:1~12中任一項所示的氨基酸序列的肽； (b)在SEQID NO:1~6中任一項所示的氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入I個或多個氨基酸而成的肽，其中N末端起第2位的氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸，和/或C末端的氨基酸為纈氨酸或亮氨酸，并且該肽具有誘導細胞毒性T細胞的活性； (c)在SEQID NO: 7~12中任一項所示的氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入I個或多個氨基酸而成的肽，其中N末端起第2位的氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸或色氨酸，和/或C末端的氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸或甲硫氨酸，并且該肽具有誘導細胞毒性T細胞的活性。
2.權利要求1所述的藥劑，其中，由脈絡膜新生血管形成導致的疾病(新生血管性黃斑病變)選自滲出型老化相關性黃斑變性、近視性黃斑變性、視網膜血管樣紋、中心性滲出性脈絡膜視網膜病變、各種視網膜色素上皮病變、脈絡膜萎縮、無脈絡膜、和脈絡膜骨瘤。
3.一種用于治療和/或預防由脈絡膜新生血管形成導致的疾病(新生血管性黃斑病變)的疫苗，其含有下述(a)或(b)的肽中的至少I種作為有效成分: (a)包含SEQID NO:1~6中任一項所示的氨基酸序列的肽； (b)在SEQID NO:1~6中任一項所示的氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入I個或多個氨基酸而成的肽，其中N末端起第2位的氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸，和/或C末端的氨基酸為纈氨酸或亮 氨酸，并且該肽具有誘導細胞毒性T細胞的活性。
4.一種用于治療和/或預防由脈絡膜新生血管形成導致的疾病(新生血管性黃斑病變)的疫苗，其含有下述(a)或(b)的肽中的至少I種作為有效成分: (a)包含SEQID NO:7~12中任一項所示的氨基酸序列的肽； (b)在SEQID NO: 7~12中任一項所示的氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入I個或多個氨基酸而成的肽，其中N末端起第2位的氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸或色氨酸，和/或C末端的氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸或甲硫氨酸，并且該肽具有誘導細胞毒性T細胞的活性。
5.權利要求3所述的疫苗，其施用于HLA抗原為HLA-A02的受試者。
6.權利要求4所述的疫苗，其施用于HLA抗原為HLA-A24的受試者。
7.權利要求5或6的疫苗，其中，由脈絡膜新生血管形成導致的疾病(新生血管性黃斑病變)選自滲出型老化相關性黃斑變性、近視性黃斑變性、視網膜血管樣紋、中心性滲出性脈絡膜視網膜病變、各種視網膜色素上皮病變、脈絡膜萎縮、無脈絡膜、和脈絡膜骨瘤。
8.一種用于抑制脈絡膜新生血管形成的藥劑，其含有下述(a)~(C)中任一項的肽中的至少I種作為有效成分: (a)包含SEQID NO:1~12中任一項所示的氨基酸序列的肽； (b)在SEQID NO:1~6中任一項所示的氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入I個或多個氨基酸而成的肽，其中N末端起第2位的氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸，和/或C末端的氨基酸為纈氨酸或亮氨酸，并且該肽具有誘導細胞毒性T細胞的活性； (c)在SEQID NO: 7~12中任一項所示的氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入I個或多個氨基酸而成的肽，其中N末端起第2位的氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸或色氨酸，和/或C末端的氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸或甲硫氨酸，并且該肽具有誘導細胞毒性T細胞的活性。
9.用于抑制脈絡膜新生血管形成的疫苗，其含有下述(a)或(b)的肽中的至少I種作為有效成分: (a)包含SEQID NO:1~6中任一項所示的氨基酸序列的肽； (b)在SEQID NO:1~6中任一項所示的氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入I個或多個氨基酸而成的肽，其中N末端起第2位的氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸，和/或C末端的氨基酸為纈氨酸或亮氨酸，并且該肽具有誘導細胞毒性T細胞的活性。
10.用于抑制脈絡膜新生血管形成的疫苗，其含有下述(a)或(b)的肽中的至少I種作為有效成分: (a)包含SEQID NO:7~12中任一項所示的氨基酸序列的肽； (b)在SEQID NO: 7~12中任一項所示的氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入I個或多個氨基酸而成的肽，其中N末端起第2位的氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸或色氨酸，和/或C末端的氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸或甲硫氨酸，并且該肽具有誘導細胞毒性T細胞的活性。
11.權利要求9所述的疫苗，其施用于HLA抗原為HLA-A02的受試者。
12.權利要求10所述的疫苗`，其施用于HLA抗原為HLA-A24的受試者。
【文檔編號】A61P35/00GK103784938SQ201310717200
【公開日】2014年5月14日 申請日期:2008年2月15日 優先權日:2007年2月16日
【發明者】玉置泰裕, 田原秀晃 申請人:腫瘤療法科學股份有限公司