拔出牙齒的方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及拔出牙齒的方法，包括將待拔出的牙齒周?chē)慕M織與包含能夠破壞牙齒周?chē)难乐茼g帶的試劑，諸如膠原酶的組合物接觸，隨后拔出牙齒。
【專(zhuān)利說(shuō)明】拔出牙齒的方法 發(fā)明領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及拔出牙齒的方法，包括將待拔出的牙齒周?chē)慕M織與包含能夠破壞牙 齒周?chē)难乐茼g帶的試劑，諸如膠原酶的組合物接觸，隨后拔出牙齒。本發(fā)明還涉及在酶促 拔出之后用牙種植體（dentalimplant)代替牙齒的方法。
[0002] 發(fā)明背景
[0003] 用于拔出牙齒的各種牙科程序是本領(lǐng)域已知的。通常，這些方法包括用牙挺 (dentalelevator)使牙齒脫位直到足夠地破壞牙周韌帶，并使支撐牙槽骨足夠加寬以使 牙齒足夠松動(dòng)，由此準(zhǔn)備除去。牙齒的除去通常通過(guò)用拔牙鉗應(yīng)用間歇性向頂?shù)暮蜋M向力 來(lái)完成。當(dāng)牙齒不容易接近時(shí)（例如，因?yàn)槠湓谘例l線(xiàn)下?lián)p壞），可包括手術(shù)過(guò)程，需要抬高 覆蓋牙齒的軟組織并用鉆頭除去周?chē)€骨組織的一些，以接近要拔出的牙齒。
[0004] 在此類(lèi)常規(guī)牙科程序期間及之后，通常發(fā)生出血、液體滲出或流出，或其他形式的 流體損失。此外，在程序期間骨組織被除去或受損。結(jié)果，腫脹和剩余出血在愈合期間持續(xù) 存在。通常，當(dāng)拔牙程序中對(duì)周?chē)慕M織的損傷更大時(shí)，這些副作用更加明顯。
[0005]Komatsu(J.Biomech.，40:634-644, 2007)公開(kāi)了膠原分子和原纖維在牙齒-PDL 骨段中I3DL的應(yīng)力松弛期間的排列。
[0006]Komatsu等人（J.Biomech.，40 : 2700-2706, 2007;以及J.Dental Biomech.，doi: 10. 406/2010/502318)公開(kāi)了膠原酶體外減少由PDL膠原纖維占據(jù)的更大 面積，減少纖維的雙折射延遲并減少PDL樣品中的PDL纖維面積。
[0007] 對(duì)最小化拔牙的不良后果，包括疼痛、組織損傷和/或創(chuàng)傷，并使能夠方便重建缺 牙區(qū)域，同時(shí)減少處理時(shí)間且更短的愈合期存在未滿(mǎn)足的需要。
[0008] 發(fā)明概沭
[0009] 本發(fā)明涉及用于降低需要其的受試者中與拔牙相關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)的方法，包括將有效體 積的包含有效量的能夠破壞牙齒周?chē)难乐茼g帶的試劑諸如膠原酶的組合物應(yīng)用進(jìn)所述 牙齒的牙周韌帶空間，由此降低需要其的受試者中與拔牙相關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)和過(guò)度疼痛。
[0010] 本發(fā)明部分地基于以下的意外發(fā)現(xiàn)：通過(guò)將能夠切斷牙齒周?chē)难乐茼g帶的試劑 局部應(yīng)用進(jìn)入牙齒周?chē)慕M織拔出牙齒，與使用常規(guī)方法拔出牙齒需要的力相比需要投入 顯著更小的力。此外，由于其有利的特性，諸如，減少出血、減少牙槽變形、以及最小化對(duì)牙 槽骨的損傷，本發(fā)明的方法可確保較佳的患者舒適度，并因此，患者順從性。
[0011] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了用于在有此需要的受試者中拔出牙齒的方法， 包括：(a)將包含有效量試劑的組合物應(yīng)用進(jìn)入所述牙齒周?chē)慕M織，該試劑能夠破壞牙 齒周?chē)难乐茼g帶；以及（b)拔出所述牙齒。
[0012] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，試劑是酶,所述酶能夠裂解（cleave)或水解膠原肽鍵。在 又另一個(gè)實(shí)施方案中，酶是蛋白水解酶。在又另一個(gè)實(shí)施方案中，酶是蛋白酶。在又另一個(gè) 實(shí)施方案中，酶是能夠水解或以其他方式裂解膠原中肽鍵的蛋白水解酶。在又另一個(gè)實(shí)施 方案中，酶選自由以下組成的組：分散酶、膠原酶、蛋白酶K、透明質(zhì)酸酶及其組合。每個(gè)可 能性代表了本發(fā)明的獨(dú)立實(shí)施方案。
[0013] 在又另一個(gè)實(shí)施方案中，組合物還包含選自由以下組成的組的試劑：止痛藥、麻醉 齊IJ、抗生素、麻醉藥、維生素、生長(zhǎng)因子和調(diào)味劑。每個(gè)可能性代表了本發(fā)明的獨(dú)立實(shí)施方 案。
[0014] 在又另一個(gè)實(shí)施方案中，拔出包括應(yīng)用與所述牙齒的長(zhǎng)軸平行的拔出力，由此最 小化牙齒周?chē)慕M織的損傷、出血和骨損失。在又另一個(gè)實(shí)施方案中，拔出沒(méi)有應(yīng)用旋轉(zhuǎn) 力。
[0015] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，應(yīng)用包括接觸牙齒周?chē)难乐茼g帶空間處的至少一個(gè)部 位。在另一個(gè)實(shí)施方案中，接觸包括將所述組合物注射進(jìn)入內(nèi)牙周韌帶。
[0016] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，拔出所述牙齒的步驟在應(yīng)用所述組合物之后的15分鐘至3 小時(shí)內(nèi)進(jìn)行。
[0017] 在又另一個(gè)實(shí)施方案中，能夠破壞牙齒周?chē)难乐茼g帶的試劑是膠原酶。
[0018] 在又另一個(gè)實(shí)施方案中，能夠破壞牙齒周?chē)难乐茼g帶的試劑是針對(duì)膠原蛋白的 抗體。
[0019] 在又另一個(gè)實(shí)施方案中，所述膠原酶選自由以下組成的組：膠原酶I、膠原酶II、 膠原酶III及其組合。每個(gè)可能性代表了本發(fā)明的獨(dú)立實(shí)施方案。在又另一個(gè)實(shí)施方案中， 所述組合物包括膠原酶I對(duì)膠原酶II的1:1的質(zhì)量比。在又另一個(gè)實(shí)施方案中，所述組合 物具有0.01至3ml的有效體積。在又另一個(gè)實(shí)施方案中，所述組合物具有0.01至2ml的 有效體積。
[0020] 在又另一個(gè)實(shí)施方案中，需要其的所述受試者是患有出血性紊亂的受試者。
[0021] 在又另一個(gè)實(shí)施方案中，該方法還包括通過(guò)將牙種植體放置在拔出所述牙齒后獲 得的空腔處代替所述牙齒。
[0022] 在又另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了用于在有此需要的受試者中拔出牙齒的方 法，包括：(a)將包含有效量膠原酶的組合物注射進(jìn)入牙齒周?chē)难乐茼g帶處的多個(gè)部位； 以及（b)在注射所述組合物之后至少15分鐘時(shí)拔出所述牙齒。
[0023] 在又另一個(gè)實(shí)施方案中，該方法還包括將牙種植體放置在拔出所述牙齒后獲得的 空腔處。
[0024] 在又另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了用牙種植體代替牙齒的方法，包括：(a)將 包含有效量膠原酶的組合物應(yīng)用至牙齒周?chē)难乐茼g帶；(b)在應(yīng)用所述組合物之后至少 15分鐘時(shí)拔出所述牙齒；以及（C)將牙種植體放置在拔出所述牙齒后獲得的空腔處。
[0025] 在又另一個(gè)實(shí)施方案中，應(yīng)用包括將所述組合物注射進(jìn)入所述牙齒周?chē)难乐茼g 帶處的至少一個(gè)部位。在又另一個(gè)實(shí)施方案中，應(yīng)用包括將所述組合物注射進(jìn)入所述牙齒 周?chē)难乐茼g帶處的多個(gè)部位。在又另一個(gè)實(shí)施方案中，應(yīng)用包括將所述組合物注射進(jìn)入 所述牙齒周?chē)难乐茼g帶處的2至8個(gè)部位。
[0026] 在又另一個(gè)實(shí)施方案中，該方法還包括在拔出所述牙齒之前，將有效量的鈍化劑 應(yīng)用進(jìn)入所述牙齒周?chē)慕M織。在又另一個(gè)實(shí)施方案中，所述鈍化劑是螯合劑。
[0027] 在又另一個(gè)實(shí)施方案中，所述鈍化劑是乙二胺四乙酸（EDTA)及其衍生物。在又另 一個(gè)實(shí)施方案中，所述鈍化劑是EDTA。
[0028] 在又另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了用于拔出牙齒的試劑盒，包括第一容器、第 二容器和使用說(shuō)明書(shū)，所述第一容器包含組合物，所述組合物包含進(jìn)入所述牙齒周?chē)慕M 織的有效量的試劑；所述第二容器包括包含有效量的鈍化劑的組合物；所述使用說(shuō)明書(shū)列 出了該試劑盒的各組分的用途和使用順序。
[0029] 在又另一個(gè)實(shí)施方案中，試劑盒還包括包含選自由以下組成的組的試劑的容器： 止痛藥、麻醉劑、抗生素、麻醉藥、維生素、生長(zhǎng)因子、調(diào)味劑及其組合。
[0030] 在又另一個(gè)實(shí)施方案中，試劑盒還包括用于拔出所述牙齒的牙科工具。
[0031] 在又另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了試劑用于松動(dòng)需要其的受試者的牙齒的牙 周韌帶的用途，包括向牙齒周?chē)难乐茼g帶應(yīng)用能夠破壞所述牙齒的所述牙周韌帶的試 齊IJ，由此松動(dòng)將所述牙齒錨定在其牙槽的牙周韌帶。
[0032] 在又另一個(gè)實(shí)施方案中，試劑是能夠裂解或水解牙齒周?chē)难乐茼g帶處的肽鍵的 酶。在又另一個(gè)實(shí)施方案中，所述試劑是蛋白水解酶。在又另一個(gè)實(shí)施方案中，酶選自由以 下組成的組：分散酶、膠原酶、蛋白酶K、透明質(zhì)酸酶及其組合。在又另一個(gè)實(shí)施方案中，酶 是膠原酶。在又另一個(gè)實(shí)施方案中，所述膠原酶選自由以下組成的組：膠原酶I、膠原酶II、 膠原酶III及其組合。在又另一個(gè)實(shí)施方案中，所述組合物包括膠原酶I對(duì)膠原酶II的 1:1的質(zhì)量比。在又另一個(gè)實(shí)施方案中，所述組合物具有〇. 01至3ml的有效體積。
[0033] 在又另一個(gè)實(shí)施方案中，所述組合物還包括選自由以下組成的組的試劑：止痛藥、 麻醉劑、抗生素、麻醉藥、維生素、生長(zhǎng)因子、調(diào)味劑及其組合。
[0034] 在又另一個(gè)實(shí)施方案中，能夠破壞牙齒周?chē)难乐茼g帶的試劑是針對(duì)膠原蛋白的 抗體。
[0035] 在又另一個(gè)實(shí)施方案中，應(yīng)用包括接觸牙齒周?chē)难乐茼g帶空間處的至少一個(gè)部 位。
[0036] 在又另Iv實(shí)施方案中，所述受試者患有出血性素亂。
[0037] 在又另一個(gè)實(shí)施方案中，用途還包括在拔出所述牙齒之前，將有效量的鈍化劑應(yīng) 用進(jìn)入所述牙齒周?chē)慕M織。在又另一個(gè)實(shí)施方案中，所述鈍化劑是乙二胺四乙酸。在又 另一個(gè)實(shí)施方案中，用途包括在應(yīng)用所述組合物之后的10分鐘至3小時(shí)應(yīng)用有效量的鈍化 劑。
[0038] 在又另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的用途和方法減少了需要其的受試者中與拔牙相 關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)。
[0039] 在又另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的用途和方法通過(guò)允許在需要其的受試者中直接 放置牙種植體加速拔出的牙齒的恢復(fù)。
[0040] 附圖簡(jiǎn)述
[0041] 圖1示出了從豬下頜骨的牙間隙區(qū)域獲得的牙齦組織的切片。
[0042] 圖2示出了來(lái)自豬下頜骨的牙間隙區(qū)域的牙齦組織（A)、與PBS溫育3小時(shí)之后 (圖B)、以及與PBS溫育24小時(shí)（圖C)或與膠原酶溫育3小時(shí)之后（圖D)以及與膠原酶 溫育24小時(shí)（圖E)的切片。
[0043] 圖3是用于可視化膠原變性的實(shí)驗(yàn)設(shè)置的圖解（A)和代表性切片（B)。
[0044] 圖4示出了在注射墨汁（A)后當(dāng)在光學(xué)顯微鏡下觀(guān)察的固定的H&E染色的組織樣 本，以及在注射PBS(B)或不同濃度的膠原酶（C-F)后當(dāng)在偏振光下在顯微鏡下觀(guān)察到的天 狼猩紅染色的組織樣本。
[0045] 圖5示出了注射后包含嵌入在骨槽中的牙齒的下頜骨樣本的固定的、脫鈣的切 片。
[0046] 圖6是韌帶內(nèi)注射的圖解描述。
[0047] 圖7示出了用于測(cè)量拔牙需要的力的量的電子裝置（A)。該裝置的特寫(xiě)視圖（B) 顯示了握住牙冠的齒（箭頭）。還示出了握持下頜骨的兩個(gè)軸移動(dòng)工具，具有四個(gè)可調(diào)節(jié)的 螺釘。
[0048] 本發(fā)明的其他目標(biāo)、特征和優(yōu)勢(shì)從以下描述將變得清晰。
[0049] 發(fā)明詳沭
[0050] 本發(fā)明提供了通過(guò)酶促或生化切斷將牙齒錨定至其牙槽的牙周韌帶纖維而拔出 牙齒或牙齒的斷根的片段的方法。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明方法包括使牙周韌帶空間 與包含能夠破壞牙齒周?chē)难乐茼g帶的試劑的組合物接觸。在一個(gè)實(shí)施方案中，試劑是膠 原酶且PDL由膠原制成，使得膠原酶破壞膠原中的肽鍵。因此，根據(jù)本發(fā)明的方法的拔牙導(dǎo) 致在拔牙程序期間最小化并甚至避免在頰舌和近中遠(yuǎn)側(cè)方向應(yīng)用旋轉(zhuǎn)壓力和脫位力的需 要。
[0051] 應(yīng)當(dāng)理解，如本文所用的術(shù)語(yǔ)"牙齒"包括，但不限于，健康的牙齒、受損的牙齒、患 病的牙齒、牙齒的片段，諸如，牙齒的斷根。
[0052] 如本文所用的術(shù)語(yǔ)"牙周韌帶"，通常縮寫(xiě)為T(mén)OL，是指一組特化的結(jié)締組織纖維， 其基本上將牙齒的牙骨質(zhì)附著至其位于的牙槽骨。各韌帶具有〇.15 - 0. 38mm的寬度。主 要由I型和III型膠原蛋白組成，PDL纖維成束聚集并根據(jù)其位置命名，例如牙槽嵴纖維、 水平纖維、斜纖維、根尖周纖維、和根間纖維。
[0053] 牙周韌帶是屬于牙齒附件系統(tǒng)的牙周組織的一部分，支撐牙齒的結(jié)構(gòu)，有助于將 牙齒附著到周?chē)M織，并允許感覺(jué)觸摸和壓力。其由牙骨質(zhì)、牙周韌帶、牙槽骨、和牙齦組 成。這其中，牙骨質(zhì)是唯一的為牙齒的一部分。牙周韌帶將牙槽骨連接到牙骨質(zhì)。牙槽骨 包圍牙根以提供支撐并創(chuàng)建了通常稱(chēng)為牙槽（alveolus)或"牙槽（socket)"。臥在骨上的 是牙齦或齒齦，其在嘴中容易可見(jiàn)。
[0054] 牙骨質(zhì)是覆蓋嵌入牙槽骨中的牙根的牙質(zhì)的組織。在根內(nèi)的是牙根管，由牙髓占 據(jù)的空間，其從牙冠腔的頂部向下延伸進(jìn)入各牙根管的底部，并經(jīng)由根尖孔通向牙周組織。 暴露在牙齦上的牙的部分是牙冠。覆蓋牙冠的牙釉質(zhì)被白色物質(zhì)高度礦化。在牙釉質(zhì)下面 的是牙本質(zhì)，其是微觀(guān)多孔的硬組織。位于牙齒中部的牙髓腔容納主要由結(jié)締組織、神經(jīng)網(wǎng) 絡(luò)和血管組成的牙髓。
[0055] 例如由于外傷或由于由細(xì)菌代謝物對(duì)牙齒硬組織的脫礦質(zhì)（齲齒），任何牙齒可 變得受損或腐爛。隨著腐爛繼續(xù)，細(xì)菌常常通過(guò)多孔牙本質(zhì)遷移并感染牙髓。轉(zhuǎn)而，對(duì)感染 的免疫應(yīng)答可接著，導(dǎo)致血管擴(kuò)大并擠壓進(jìn)入牙齒的神經(jīng)。結(jié)果是牙髓的發(fā)炎（牙髓炎）。
[0056] 可影響牙齒的另一種狀況是牙周（牙齦）疾病。牙周疾病的主要原因是由在牙齒 和牙齦上自然形成的細(xì)菌的不可見(jiàn)粘層的噬斑的沉積引起的感染。噬斑包含產(chǎn)生刺激患者 的免疫系統(tǒng)的毒素的細(xì)菌。例如，由于炎癥介質(zhì)像誘導(dǎo)骨吸收和基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP)活 化的前列腺素E2的過(guò)度產(chǎn)生，慢性感染過(guò)程中受損的宿主反應(yīng)是牙周組織的破壞的主要 問(wèn)題。破壞膠原蛋白中肽鍵的MMP，例如，MMP-I和MMP-8,蛋白水解酶（膠原酶）的活化導(dǎo) 致牙周組織的破壞。最終，牙齒可變得松動(dòng)，并可必須被除去。
[0057] 當(dāng)影響口腔及其解剖結(jié)構(gòu)的這些或其他狀況發(fā)生時(shí)，用于干預(yù)的各種牙科程序是 已知的。這些程序由普通的牙科執(zhí)業(yè)醫(yī)生、牙髓病專(zhuān)家、口腔修復(fù)科醫(yī)師、頜面外科醫(yī)生和 牙周病醫(yī)師常規(guī)進(jìn)行。
[0058] 用于除去或拔出牙齒的主要指征是當(dāng)牙冠受損或腐爛至使用任何臨床可用口腔 修復(fù)方法將不允許未來(lái)重建的程度時(shí)。因?yàn)橥砥诘难乐埽ㄑ例l）疾病也可指示拔牙。除去 或拔出牙齒的另一個(gè)常見(jiàn)的原因是，當(dāng)牙齒的存在導(dǎo)致?lián)頂D、或咬合不正、或阻止另一個(gè)牙 齒（例如，智齒）長(zhǎng)出，或準(zhǔn)備正畸治療（"支架"）時(shí)。指示拔牙的另一種狀況是非可治療 的根尖周膿腫。
[0059] 有時(shí)，如果牙齒的牙冠在齦下破損，或牙槽中存在牙根殘留物，或如果拔牙選擇的 牙齒沒(méi)有完全長(zhǎng)出牙齦以上，首先除去一些覆蓋的牙齦和骨組織以接近待拔出的牙齒可以 是必要的。
[0060] 在對(duì)牙質(zhì)的損傷是不可逆的情況，常常指示除去或拔出牙齒。在簡(jiǎn)單的拔出期間， 牙醫(yī)首先用牙挺舉起牙齒，并然后用牙鉗抓住牙齒，且來(lái)回?fù)u動(dòng)牙齒。這搖擺運(yùn)動(dòng)通過(guò)破壞 保持牙齒錨定至周?chē)啦酃堑难乐茼g帶纖維使牙齒從牙槽骨中松動(dòng)。然后從牙槽中拔出牙 齒，留下空曠的牙槽。
[0061] 代替牙齒的方法包括拔牙后立即植入牙種植體。牙種植體是一種"根"的裝置，通 常由鈦制成，用于牙科以支持類(lèi)似牙齒的修復(fù)。為了立即植入種植體，無(wú)創(chuàng)傷拔牙是關(guān)鍵， 以保持拔牙槽的壁，并改善植入物的初期穩(wěn)定性。
[0062] 如在牙科領(lǐng)域中熟知的，在拔牙期間由醫(yī)師施加的壓力對(duì)以下的鄰近組織具有毀 滅性創(chuàng)傷效應(yīng)：諸如但不限于：軟牙齦和牙槽下的牙槽骨。在某些情況下，在拔牙期間由醫(yī) 生施加的壓力破碎牙齒組件，諸如：冠或根，增加拔牙的難度、整體骨質(zhì)流失、和術(shù)后愈合時(shí) 間。本發(fā)明使無(wú)創(chuàng)傷拔牙的過(guò)程容易，由此避免或至少減少機(jī)械拔牙過(guò)程的不利影響。 [0063]在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了用于拔出需要其的受試者中的牙齒的方法，包 括以下步驟：a)將包含有效量試劑的組合物應(yīng)用進(jìn)入所述牙齒周?chē)慕M織，所述試劑能夠 破壞牙齒周?chē)难乐茼g帶；以及b)拔出所述牙齒。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法提 供了許多優(yōu)勢(shì)，包括，但不限于，最小化對(duì)選自牙齦、骨、和/或血管的周?chē)M織的創(chuàng)傷，最 小化與拔牙相關(guān)的疼痛以及最小化機(jī)械程序的持續(xù)時(shí)間。
[0064]根據(jù)一些實(shí)施方案，周?chē)M織是指待拔出的組織周?chē)慕M織，所述組織選自牙齦、 骨、和/或血管。
[0065]根據(jù)特定的實(shí)施方案，以可預(yù)測(cè)的、可重復(fù)的且有效的方式減少程序的持續(xù)時(shí)間。 拔牙的持續(xù)時(shí)間的減少由使用的酶的量來(lái)確定并且暴露于酶的持續(xù)時(shí)間如可由熟練的技 術(shù)人員容易地確定。
[0066] 根據(jù)某些實(shí)施方案，與拔牙相關(guān)的創(chuàng)傷在以下鄰近的組織中是明顯的：諸如牙齦、 底層骨板、口腔內(nèi)的血管或口腔中和/或面部的任何其他組織。
[0067]本發(fā)明的方法的另外的優(yōu)勢(shì)包括，避免手動(dòng)切斷gingivodental纖維的步驟，包 括，以骨膜起子手動(dòng)切斷gingivodental纖維，和阻止破碎的根尖的形成。
[0068] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法通過(guò)最小化在拔牙之前對(duì)牙齦和下顎骨的切 片的需要有益于減少需要其的受試者中與拔牙相關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)。此外，本發(fā)明的方法允許最小 化伴隨拔牙的創(chuàng)傷并減少本發(fā)明的方法拔牙之前麻醉劑的劑量。此外，本發(fā)明的方法提供 了用于拔牙的無(wú)痛的方法或減少疼痛的平臺(tái)。事實(shí)上，本發(fā)明的方法需要用于拔牙的極少 的機(jī)械壓力（力）。
[0069] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，與拔牙相關(guān)聯(lián)的風(fēng)險(xiǎn)，包括，出血、腫脹、疼痛、拔牙部位的 感染（干槽癥），以及損害口中其他牙齒或組織（牙齦或頰），以及其他。由于拔牙程序和 /或麻醉，與拔牙相關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)還可包括，頜骨骨折、對(duì)TMJ(下頜關(guān)節(jié)）的暫時(shí)性或永久性損 傷、口腔的暫時(shí)性或永久性麻木、和危及生命的并發(fā)癥。此外，與拔牙相關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)可以是延 長(zhǎng)的出血、擦傷、竇暴露（sinusexposure)和口腔竇連通、神經(jīng)損傷、牙齒或牙齒的一部分 進(jìn)入上頜竇的位移，干槽癥（齒槽骨炎）。
[0070] 應(yīng)當(dāng)注意，本發(fā)明的方法還有效地減少與創(chuàng)傷手術(shù)相關(guān)的心理效應(yīng)。此外，本發(fā)明 的方法減少了全身性副作用，允許在私人診所治療全身受損的患者并適合于與感染和/或 炎癥相關(guān)的牙齒。
[0071 ] 如本文所用，術(shù)語(yǔ)"拔出"，包括，但不限于，通常在局部麻醉下，對(duì)可見(jiàn)于口中的牙 齒進(jìn)行的簡(jiǎn)單的機(jī)械拔出，并且僅需要使用儀器舉起和/或抓住牙齒的可見(jiàn)部分，以及，涉 及外科手術(shù)的拔出，例如，在除去不能容易接近的牙齒的情況下，因?yàn)槠湓谘例l線(xiàn)下被破壞 或因?yàn)樗鼪](méi)有完全長(zhǎng)出。
[0072] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，利用本發(fā)明的方法的拔出導(dǎo)致覆蓋牙槽的原開(kāi)放性傷口的 加速的愈合。在另一個(gè)實(shí)施方案中，利用本發(fā)明的方法的拔出導(dǎo)致牙齦軟組織的加速的填 充。在另一個(gè)實(shí)施方案中，利用本發(fā)明的方法的拔出導(dǎo)致牙槽隨骨重建加速的閉合。
[0073] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了用于在需要其的受試者中在拔出所述牙齒后 獲得的空腔處植入牙種植體的方法。在另一個(gè)實(shí)施方案中，用于在需要其的受試者中植入 牙種植體的方法包括以下步驟：a)將包含有效量試劑的組合物應(yīng)用至牙齒周?chē)难乐茼g 帶，所述試劑能夠切斷牙齒周?chē)腡OL，例如，所述試劑是膠原酶；b)在應(yīng)用所述組合物后 至少15分鐘時(shí)拔出所述牙齒；以及c)在拔出所述牙齒后獲得的空腔處植入牙種植體。
[0074] 本發(fā)明用于植入牙種植體的方法對(duì)牙槽骨周?chē)墓前逡鸬膿p失最小，并因此提 高成功植入（移植）的機(jī)會(huì)。此外，本發(fā)明的方法提高了牙種植體植入的可行性，而沒(méi)有任 何支撐骨增強(qiáng)手術(shù)的需要。
[0075] 不受限于任何機(jī)制或理論，本發(fā)明基于以下概念：松動(dòng)將牙齒錨定至其牙槽的牙 周韌帶，導(dǎo)致需要由牙醫(yī)進(jìn)行拔牙程序的拔出程序，以使用用于拔出的減小的力和/或壓 力。本發(fā)明還基于以下概念：松動(dòng)將牙齒錨定至其牙槽的牙周韌帶導(dǎo)致特征為口腔中組織 撕裂最小的拔出程序。此外，松動(dòng)將牙齒錨定至其牙槽的牙周韌帶（PDL)導(dǎo)致特征為口腔 中出血最小的拔出程序，并放棄多余的來(lái)回?fù)u動(dòng)牙齒直到破壞牙周韌帶。
[0076] 推測(cè)，PDL的松動(dòng)通過(guò)使PDL與包含膠原酶或由膠原酶組成的組合物接觸來(lái)實(shí)現(xiàn)， 由于膠原酶是具有消化膠原蛋白的特定能力的酶。膠原酶可從由溶組織梭菌（Clostridium histolyticum)發(fā)酵隨后純化來(lái)獲得。膠原酶可通過(guò)色譜技術(shù)來(lái)純化。可選地，膠原酶可提 供為無(wú)菌的凍干粉。任選地，膠原酶包括50ABC單位/ml的最低測(cè)定。
[0077] 根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，能夠破壞牙齒周?chē)难乐茼g帶的試劑是酶。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施 方案，所述酶能夠裂解或水解膠原蛋白肽鍵。根據(jù)又另一個(gè)實(shí)施方案，酶是蛋白水解酶。在 又另一個(gè)實(shí)施方案中，酶選自由以下組成的組：分散酶、膠原酶、蛋白酶K、透明質(zhì)酸酶及其 組合。每個(gè)可能性代表了本發(fā)明的獨(dú)立實(shí)施方案。
[0078] 根據(jù)又另一個(gè)實(shí)施方案中，組合物還包含選自由以下組成的組的試劑：止痛藥、麻 醉劑、抗生素、麻醉藥、維生素、生長(zhǎng)因子和調(diào)味劑。每個(gè)可能性代表了本發(fā)明的獨(dú)立實(shí)施方 案。
[0079] 組合物還可包含藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。
[0080] 根據(jù)又另一個(gè)實(shí)施方案，方法還包括在拔出所述牙齒之前將有效量的鈍化劑應(yīng)用 至所述牙齒周?chē)慕M織，并隨后應(yīng)用能夠破壞牙齒周?chē)难乐茼g帶的試劑。根據(jù)又另一個(gè) 實(shí)施方案中，所述鈍化劑是螯合劑。
[0081] 如本文所用的術(shù)語(yǔ)"螯合劑"，包括但不限于，能夠鈍化金屬酶的天然或合成的試 劑。
[0082] 根據(jù)又另一個(gè)實(shí)施方案，所述鈍化劑是乙二胺四乙酸（EDTA)或其類(lèi)似物或衍生 物。根據(jù)又另一個(gè)實(shí)施方案中，所述鈍化劑是EDTA。
[0083] 如本文所用的術(shù)語(yǔ)"其類(lèi)似物或衍生物"包括EDTA的合適的生物活性變體。在本 發(fā)明的上下文中，化學(xué)修飾包括以化學(xué)實(shí)體、基團(tuán)或部分的修飾。此外，每一種特定的化合 物，諸如本文所述的那些，可產(chǎn)生具有相似活性和因此根據(jù)本發(fā)明的有用性的類(lèi)似物或衍 生物的整個(gè)家族。同樣地，單一化合物，諸如本文所述的那些，可代表根據(jù)本發(fā)明有用的化 合物的更大種類(lèi)的單一家族成員。因此，本發(fā)明不僅完全包括了本文描述的化合物，而且包 括了此類(lèi)化合物的類(lèi)似物及衍生物，特別是通過(guò)本領(lǐng)域通常已知的方法可鑒定的以及由本 領(lǐng)域熟練的技術(shù)人員可識(shí)別的那些。
[0084] 膠原酶可以以液體包括液體載體應(yīng)用、滴入或注入進(jìn)PDL空間。應(yīng)用后，可固定患 者的頭部，以避免大幅度運(yùn)動(dòng)，持續(xù)數(shù)分鐘，例如4至120分鐘，以盡量減少膠原酶溶液從 PDL空間的擠出泄漏。允許膠原酶對(duì)PDL足夠、但不過(guò)度的作用時(shí)間，產(chǎn)生良好的臨床結(jié)果。
[0085] 本發(fā)明的膠原酶組合物可通過(guò)混合特定數(shù)目的活性單位或特定質(zhì)量的優(yōu)選純化 的酶來(lái)制備。膠原酶是為其活性需要緊密結(jié)合鋅且松散結(jié)合鈣的金屬蛋白酶，并已知通過(guò) 在生理?xiàng)l件下水解膠原蛋白的三螺旋區(qū)域消化膠原蛋白。在一些實(shí)施方案中，膠原酶，由被 稱(chēng)為膠原酶AUXI和膠原酶ABCI和膠原酶AUXII和膠原酶ABCII的兩種微生物膠原酶 組成。應(yīng)理解，術(shù)語(yǔ)"膠原酶I"、"ABCI"、"AUX1"，"膠原酶AUXI"和"膠原酶ABCI"意 思相同，并可互換使用。類(lèi)似地，術(shù)語(yǔ)"膠原酶II"、"ABCII"、"AUX11"、"膠原酶AUXII"、 和"膠原酶ABCII"是指相同的酶，并也可互換使用。這些膠原酶由細(xì)菌細(xì)胞分泌。通過(guò)色 譜方法將其從溶組織梭菌培養(yǎng)物上清液中分離并純化。兩種膠原酶是特殊的蛋白酶并共享 相同的EC號(hào)（E.C3. 4. 24. 3)。
[0086] 膠原酶AUXI具有由具有115kDa的分子量的約1000個(gè)氨基酸組成的單一多肽 鏈。膠原酶AUXII還具有由具有IlOkDa的分子量的約1000個(gè)氨基酸組成的單一多肽鏈。 盡管文獻(xiàn)中指示，在膠原酶AUXI和AUXII的區(qū)域中存在序列同源性，但兩種多肽似乎沒(méi) 有免疫學(xué)交叉反應(yīng)性，如由蛋白質(zhì)印跡分析所指示的。藥物物質(zhì)（膠原酶濃縮物）具有約 1比1質(zhì)量比的膠原酶AUXI和AUXII。膠原酶濃縮物具有1. 528的消光系數(shù)。
[0087]因此，本發(fā)明的膠原酶組合物可含一種或更多種類(lèi)型的膠原酶，例如，膠原酶I、膠 原酶II、膠原酶III或其組合。膠原酶組合物還可包含針對(duì)所有類(lèi)型的膠原酶的廣泛的特 異性。膠原酶組合物可包含膠原酶I對(duì)膠原酶II的1比1質(zhì)量比、膠原酶I對(duì)膠原酶II 的1. 5-10比1質(zhì)量比、膠原酶I對(duì)膠原酶II的1比1. 5-10質(zhì)量比、膠原酶I和膠原酶II 的1比2比、以及其他的選項(xiàng)。在一些實(shí)施方案中，組合幾種類(lèi)型的膠原酶改進(jìn)了由不同膠 原酶提供的協(xié)同活性，導(dǎo)致優(yōu)異的治療益處。
[0088] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的膠原酶是具有針對(duì)膠原蛋白的協(xié)同活性的膠原酶I和膠原酶II的組合。在另一個(gè)實(shí)施方案中，膠原酶活性通過(guò)酶水解合成肽或膠原蛋白底 物的能力來(lái)測(cè)量。本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到，除本文所公開(kāi)的那些以外的酶測(cè)定也可被用 于界定并制備功能上等同的酶組合物。
[0089] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，藥物制劑包含與一種或更多種藥學(xué)上可接受的載體或賦形 劑一起配制的治療有效量的本發(fā)明的膠原酶組合物。
[0090] 如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)"藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑"意指任何類(lèi)型的無(wú)毒的惰 性固體、半固體或液體填充劑、稀釋劑、包封材料或制劑助劑。可用作藥學(xué)上可接受的載體 的材料的一些實(shí)例為糖，諸如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，諸如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉；纖 維素及其衍生物，諸如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素和醋酸纖維素；粉狀黃蓍膠；麥芽；明 膠；滑石；二醇，諸如丙二醇；酯類(lèi)，諸如油酸乙酯和月桂酸乙酯；瓊脂；緩沖劑諸如氫氧化 鎂和氫氧化鋁；藻酸；無(wú)熱原水；等滲鹽水；林格氏溶液；乙醇，和磷酸鹽緩沖溶液，以及其 他無(wú)毒的相容的潤(rùn)滑劑，諸如月桂基硫酸鈉和硬脂酸鎂，以及根據(jù)配制者的判斷，著色劑、 釋放劑、包衣劑、芳香劑、防腐劑和抗氧化劑也可存在于組合物中。
[0091] 本發(fā)明的藥物組合物可局部、皮下、韌帶內(nèi)、齦內(nèi)、或經(jīng)由植入的容器來(lái)施用。組 合物可注射或通過(guò)直接滴入應(yīng)用進(jìn)入PDL空間。如本文所用的術(shù)語(yǔ)"局部施用（local administration) "和"局部施用（topicaladministration) "可互換，并且可包括任何上 述的直接應(yīng)用。
[0092] 可注射的制品，例如，無(wú)菌可注射水性或油性懸浮液，可根據(jù)已知的技術(shù)使用合適 的分散劑或潤(rùn)濕劑和懸浮劑配制。無(wú)菌可注射制品還可以是無(wú)毒的藥學(xué)上可接受的稀釋劑 或溶劑中的無(wú)菌可注射溶液、懸浮液或乳液。可應(yīng)用的可接受的媒介物和溶劑是水、林格氏 溶液、USP和等滲氯化鈉溶液。此外，無(wú)菌、不揮發(fā)性油通常用作溶劑或懸浮介質(zhì)。為了這 個(gè)目的，可應(yīng)用任何溫和的不揮發(fā)性油，包括合成的甘油單酯或甘油二酯。此外，脂肪酸諸 如油酸可用于制備注射劑。
[0093] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，在藥學(xué)上可接受的，包括對(duì)膠原酶惰性的液體載體或凝膠 載體中應(yīng)用膠原酶。在另一個(gè)實(shí)施方案中，液體載體是緩沖液。在另一個(gè)實(shí)施方案中，液體 載體是等滲溶液。在另一個(gè)實(shí)施方案中，液體載體是鹽水。在另一個(gè)實(shí)施方案中，液體載體 是含水的NaCVCaCl2緩沖液。在另一個(gè)實(shí)施方案中，液體載體是葡聚糖溶液。在另一個(gè)實(shí) 施方案中，在heptastich溶液中應(yīng)用膠原酶。
[0094] 可注射制劑可進(jìn)行滅菌，例如，通過(guò)細(xì)菌截留過(guò)濾器過(guò)濾、或通過(guò)以在使用前可溶 解或分散于無(wú)菌水或其他無(wú)菌可注射介質(zhì)中的無(wú)菌固體組合物的形式摻入滅菌劑。無(wú)菌溶 液還可冷凍干燥，以備后用。
[0095] 用于施用本發(fā)明的膠原酶的劑型包括凝膠劑、溶液劑或噴霧劑。當(dāng)可需要時(shí)，膠原 酶可與藥學(xué)上可接受的載體和任何需要的防腐劑或緩沖劑在無(wú)菌條件下進(jìn)行混合。在一些 實(shí)施方案中，凝膠，除了包含本發(fā)明的膠原酶，還包含賦形劑，諸如動(dòng)物和植物脂肪、油、蠟、 石蠟、淀粉、黃蓍膠、纖維素衍生物、聚乙二醇、聚硅酮、膨潤(rùn)土、硅酸、滑石和氧化鋅，或其混 合物。在一些實(shí)施方案中，噴霧劑，除了包含本發(fā)明的化合物，還包含賦形劑，諸如乳糖、滑 石、硅酸、氫氧化鋁、硅酸鈣和聚酰胺粉、或這些物質(zhì)的混合物。在一些實(shí)施方案中，噴霧劑， 另外包含常規(guī)推進(jìn)劑，諸如但不限于氯氟化烴。
[0096]在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的膠原酶是用乳糖配制的凍干的可注射的組合物。 在一個(gè)實(shí)施方案中，每毫克可注射膠原酶與l_4mg的乳糖一起配制。在另一個(gè)實(shí)施方案中， 每毫克的注射膠原酶具有約1000-3000SRC單位和使用合成底物pzGPGGPA用效力測(cè)定測(cè)量 的 10000-51000 單位。
[0097]在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的膠原酶組合物是用蔗糖、約6.0-8. 0的pH水平下 的Tris配制的凍干的可注射組合物。
[0098]在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的膠原酶組合物由韌帶內(nèi)注射施用。在另一個(gè)實(shí)施 方案中，本發(fā)明的膠原酶組合物由計(jì)算機(jī)控制的注射遞送系統(tǒng)施用進(jìn)入PDL空間。在另一 個(gè)實(shí)施方案中，膠原酶組合物浸漬到齦線(xiàn)，并由此施用至PDL空間。
[0099]在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的膠原酶組合物還包含抗生素、抗炎劑、防腐劑、麻 醉劑或其任何組合。
[0100] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，如本文所用的術(shù)語(yǔ)本發(fā)明的化合物的"治療有效量"和"有 效量"是可互換的，并且是指賦予松動(dòng)錨定指定牙齒的PDL的化合物的量。通常，將不同的 量和/或濃度的本發(fā)明的組合物應(yīng)用至不同的牙齒（即臼齒與門(mén)齒）。因此，取決于待拔出 的特定牙齒以及還取決于年齡（兒童、成人，等）及本領(lǐng)域技術(shù)人員評(píng)估的牙齒狀況，用不 同量和/或濃度實(shí)現(xiàn)治療效應(yīng)。
[0101] 然而，應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明的組合物的總劑量將由主治醫(yī)師在合理的醫(yī)學(xué)判斷范圍 內(nèi)決定。對(duì)于任何特定患者的具體的治療有效劑量水平將取決于多種因素，包括待治療的 紊亂和紊亂的嚴(yán)重程度；所采用的具體化合物的活性；所采用的具體的組合物；患者的年 齡、體重、一般健康狀況、性別和飲食；所采用的具體化合物的施用時(shí)間、施用途徑、和排泄 速率；治療的持續(xù)時(shí)間；與所采用的具體化合物組合或同時(shí)使用的藥物；以及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中 熟知的類(lèi)似因素。在另一個(gè)實(shí)施方案中，還原酶的量和濃度對(duì)于松動(dòng)PDL有效。在另一個(gè) 實(shí)施方案中，本文所用的術(shù)語(yǔ)"松動(dòng)"包括軟化、放松、或破裂。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā) 明的方法減少了PDL所施加的一直保持牙齒和牙齦緊貼的張力。
[0102] 在一些實(shí)施方案中，膠原酶的有效量和濃度是至少1，〇〇〇個(gè)ABC單位/ml載體、至 少2, 000個(gè)ABC單位/ml載體、至少3, 000個(gè)ABC單位/ml載體、在2, 000個(gè)至約8, 000個(gè) ABC單位/ml載體的范圍內(nèi)、在3, 000個(gè)至約25, 000個(gè)ABC單位/ml載體的范圍內(nèi)。通常， 膠原酶的量越低，濃度就應(yīng)越大。因此，如果在特定情況下，期望使用2, 000個(gè)ABC單位， 8, 000至20, 000單位/ml的濃度將是可取的。
[0103]在另一個(gè)實(shí)施方案中，應(yīng)用的/注射的組合物總體積不超過(guò)約lml。在另一個(gè)實(shí) 施方案中，應(yīng)用的/注射的組合物的總體積不超過(guò)約〇. 8ml。在另一個(gè)實(shí)施方案中，應(yīng)用的 /注射的組合物的總體積不超過(guò)約〇.5ml。在另一個(gè)實(shí)施方案中，應(yīng)用的/注射的組合物的 總體積不超過(guò)約〇. 4ml。在另一個(gè)實(shí)施方案中，應(yīng)用的/注射的組合物的總體積不超過(guò)約 0.lml。在另一個(gè)實(shí)施方案中，應(yīng)用的/注射的組合物的總體積不超過(guò)約0.05ml。在另一個(gè) 實(shí)施方案中，應(yīng)用的/注射的組合物的總體積不超過(guò)約〇.Olml。在另一個(gè)實(shí)施方案中，應(yīng)用 的/注射的組合物的總體積不超過(guò)約0. 005ml。在另一個(gè)實(shí)施方案中，應(yīng)用的/注射的組合 物的總體積不超過(guò)約〇.OOlml。在另一個(gè)實(shí)施方案中，應(yīng)用的/注射的組合物的總體積不超 過(guò)約 0. 0005ml。
[0104] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，在多個(gè)位置和部分中，在至少兩個(gè)位置和部分中，在至少三 個(gè)位置和部分中，或在至少四個(gè)位置和部分中應(yīng)用了（例如，通過(guò)注射）膠原酶組合物的總 劑量/牙齒的PDL空間。在另一個(gè)實(shí)施方案中，在指定拔出的牙齒周?chē)牟煌课粦?yīng)用了 膠原酶組合物的總劑量/牙齒的PDL空間。在另一個(gè)實(shí)施方案中，對(duì)至少8個(gè)部分或部位 進(jìn)行應(yīng)用，例如通過(guò)注射。
[0105] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，指定拔出的牙齒周?chē)牟煌课豢拷舜耍ū舜碎g隔小于 2_)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，通過(guò)注射應(yīng)用組合物，其中注射器的注射針不以銳角插入而以 直角插入到PDL空間，以保證膠原酶在PDL空間的小體積內(nèi)的良好分布。
[0106] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，需要其的受試者是人受試者。在另一個(gè)實(shí)施方案中，受試者 是寵物、哺乳動(dòng)物或農(nóng)場(chǎng)動(dòng)物。
[0107] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，需要其的受試者是需要拔牙的受試者。在另一個(gè)實(shí)施方案 中，需要其的受試者是具有至少一個(gè)牙齒受到齲齒嚴(yán)重?fù)p傷的受試者。在另一個(gè)實(shí)施方案 中，需要其的受試者是患有牙周疾病的受試者。在另一個(gè)實(shí)施方案中，需要其的受試者是具 有至少一個(gè)牙齒有根尖周感染的受試者，所述根尖周感染既不可根管上也不可由手術(shù)來(lái)維 持，并且已引起了廣泛的炎癥（例如上頜竇或軟組織的）或囊腫。在另一個(gè)實(shí)施方案中，需 要其的受試者是具有至少一個(gè)牙齒由創(chuàng)傷損傷（牙周區(qū)域內(nèi)的多發(fā)性骨折、縱行骨折、以 及廣泛的骨缺失）的受試者。在另一個(gè)實(shí)施方案中，需要其的受試者為患有擁擠或長(zhǎng)出受 阻的受試者（由于正畸的原因應(yīng)拔出乳牙和恒牙）。在另一個(gè)實(shí)施方案中，需要其的受試者 通過(guò)口腔修復(fù)治療來(lái)治療，以維持正常的咬合（伸長(zhǎng)的或嚴(yán)重傾斜的牙齒，特別是與先前 的接觸）。
[0108] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，需要其的受試者是患有癌癥、在腫瘤外科手術(shù)期間、并且至 少一個(gè)牙齒位于腫瘤的區(qū)域內(nèi)的受試者。在另一個(gè)實(shí)施方案中，需要其的受試者是經(jīng)歷病 灶恢復(fù)（在神經(jīng)痛的情況下，經(jīng)常進(jìn)行拔出而無(wú)臨床和放射學(xué)檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)）的受試者。在另 一個(gè)實(shí)施方案中，需要其的受試者是患有三叉神經(jīng)痛（trigeminalneuralgia)(三叉神經(jīng) 痛（prosopalgia))的受試者。在另一個(gè)實(shí)施方案中，需要其的受試者是患有局灶性感染的 受試者（醫(yī)師會(huì)根據(jù)潛在疾病決定）。在另一個(gè)實(shí)施方案中，需要其的受試者是患有心內(nèi)膜 炎的受試者。在另一個(gè)實(shí)施方案中，需要其的受試者是患有急性風(fēng)濕熱的受試者。在另一 個(gè)實(shí)施方案中，需要其的受試者是患有急性腎小球腎炎的受試者。
[0109] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，需要其的受試者是患有急性牙齒疼痛的受試者。在另一個(gè) 實(shí)施方案中，需要其的受試者是患有一般性疾病的初始和重度炎性并發(fā)癥的受試者。在另 一個(gè)實(shí)施方案中，需要其的受試者是患有急性感染（膿腫）的受試者。在另一個(gè)實(shí)施方案 中，需要其的受試者是智齒拔出的受試者。在另一個(gè)實(shí)施方案中，需要其的受試者是在正畸 治療結(jié)束前智齒拔出的受試者。
[0110] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，需要其的受試者是患有出血性紊亂的受試者。在另一個(gè)實(shí) 施方案中，需要其的受試者是患有糖尿病的受試者。在另一個(gè)實(shí)施方案中，需要其的受試者 是患有心臟病的受試者。在另一個(gè)實(shí)施方案中，需要其的受試者是患有影響免疫系統(tǒng)疾病 的受試者。
[0111] 根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明提供了用于拔出牙齒的試劑盒，該試劑盒包括包含組 合物的第一容器，所述組合物包含進(jìn)入所述牙齒周?chē)慕M織的有效量的試劑。根據(jù)又另一 個(gè)實(shí)施方案，試劑盒還包括包含選自由以下組成的組的試劑的另外的組合物：止痛藥、麻醉 齊IJ、抗生素、麻醉藥、維生素、生長(zhǎng)因子、調(diào)味劑及其組合。根據(jù)又另一個(gè)實(shí)施方案，試劑盒還 包括包含有效量的鈍化劑的組合物。根據(jù)又另一個(gè)實(shí)施方案，試劑盒還包括用于拔出所述 牙齒的牙科工具。根據(jù)又另一個(gè)實(shí)施方案，試劑盒還包括列出了該試劑盒的各組分的用途 及使用順序的使用說(shuō)明書(shū)。根據(jù)又另一個(gè)實(shí)施方案，使用說(shuō)明書(shū)描述了根據(jù)本發(fā)明的方法 的試劑盒的用途。
[0112] 根據(jù)又另一個(gè)實(shí)施方案，使用說(shuō)明書(shū)描述了根據(jù)本發(fā)明的方法的試劑盒的如下用 途：(a)應(yīng)用包含有效量的能夠破壞牙齒周?chē)难乐茼g帶的試劑的組合物進(jìn)入待拔出的牙 齒周?chē)慕M織，并且任選地，在應(yīng)用之前，將所述組合物與包含選自由以下組成的組的試劑 的所述另外的組合物混合：止痛藥、麻醉劑、抗生素、麻醉藥、維生素、生長(zhǎng)因子、調(diào)味劑及其 組合；(b)任選地，允許在（a)之后和在拔出所述牙齒之前延遲15分鐘至3小時(shí)；（c)任選 地，或可選地，在拔出所述牙齒之前，將鈍化劑的組合物應(yīng)用進(jìn)入所述牙齒周?chē)慕M織；以 及（d)拔出所述牙齒。
[0113] 以下實(shí)施例是為了更充分地說(shuō)明本發(fā)明的某些實(shí)施方案而呈現(xiàn)。然而，其不應(yīng)以 任何方式被解釋為限制本發(fā)明的寬范圍。本領(lǐng)域技術(shù)人員可容易地設(shè)計(jì)出本文公開(kāi)的原則 的許多變化和修改，而不偏離本發(fā)明的范圍。 實(shí)施例
[0114] 實(shí)施例1
[0115] 在體夕卜由月交原酶對(duì)牙齒I組織的切碎（Defragmentation)
[0116]A.使用毫米網(wǎng)格的尺寸測(cè)量
[0117] 為了體外實(shí)驗(yàn)的目的選擇牙齦組織，因?yàn)槠淇扇菀椎匾愿鞣N尺寸獲得并與PDL具 有許多共同特征，其中對(duì)于這種實(shí)驗(yàn)PDL是太薄和易碎的。
[0118] 在處死后幾分鐘之內(nèi)，從豬下頜骨的牙間隙區(qū)域獲得20X3X0. 3mm3的牙齦組織 帶。將帶切成四等分樣本，每個(gè)約5X3X0. 3_3(圖1和圖2A)。
[0119] 使兩份樣本適應(yīng)于0. 5ml的包含5450個(gè)單位/ml膠原酶CLPSA溶液（Worthington BiochemicalCorporation,NJ,USA;圖2D和2E)的磷酸鹽緩沖鹽水（PBS)，并將兩份樣本 適應(yīng)于0. 5mlPBS(圖2B和2C)，并用作對(duì)照。在溫和攪拌下將所有四個(gè)樣本在37°C水浴 中孵育不同的時(shí)間間隔。
[0120] 組織降解的程度通過(guò)在與PBS或與膠原酶溫育3小時(shí)后或24小時(shí)后，通過(guò)將樣本 放置在毫米網(wǎng)格上測(cè)量每個(gè)樣本的總體積來(lái)確定。
[0121] 結(jié)果表明，在溫育3個(gè)小時(shí)后，與膠原酶溫育的樣本的體積減少了多于60%，至 5X3X0.Imm3(圖2D)，而與膠原酶溫育24小時(shí)后切片被切碎為不可測(cè)量的樣本（圖2E)。 對(duì)照樣本的體積在與PBS溫育3小時(shí)或24小時(shí)后相對(duì)于原樣本（圖2A)沒(méi)有發(fā)生變化（分 別圖2B和2C)。
[0122] B.膠原蛋白變性的病理組織學(xué)檢查。
[0123] 膠原蛋白變性可使用蘇木精和曙紅（H&E)染色觀(guān)察，但在偏振光下的天狼猩紅 (PicrosiriusRed，PSR)的可視化是更好地。為此目的，從包含口腔咀嚼粘膜的硬腭獲得鉆 取活組織檢查。將50μ1體積包含2, 500、5, 000、7, 500或10, 000個(gè)單位/ml膠原酶CLPSA 溶液（WorthingtonBiochemicalCorporation,NJ,USA)注射在組織中心的腭皺脊的正下 方，如圖3A所示。
[0124] 為了標(biāo)記注射區(qū)域，在固定之前，平行于膠原蛋白/PBS/墨汁注射的部位，在鉆取 活組織檢查的兩側(cè)，注射印度墨汁，如圖3B中由水平白虛線(xiàn)的兩側(cè)上的星號(hào)所示。為了評(píng) 價(jià)膠原變性的區(qū)域，各切片通過(guò)平行于脊線(xiàn)的水平線(xiàn)（圖3B-白虛線(xiàn)；表1 -脊水平）、和 與水平線(xiàn)交叉且與脊線(xiàn)垂直的垂直線(xiàn)（圖3B-黑線(xiàn)）來(lái)標(biāo)記。
[0125] 對(duì)照組由未處理的（未注射的）樣品和用PBS注射的樣本組成（圖4A和4B)。這 些組在與處理組相似的條件下溫育。鉆取組織樣本在37°C下在PBS中溫育0、2、5、12和24 小時(shí)，然后由福爾馬林固定。
[0126] 固定后，將組織修整，包埋于石蠟中，并在注射部位（標(biāo)記油墨）的水平處縱向切 割成片，然后用蘇木精-曙紅、馬森三色（Masson'strichrome，MT)和天狼猩紅（PSR)染色 并轉(zhuǎn)移至組織病理學(xué)檢查。在處理之前和之后，沿著垂直線(xiàn)（表1-脊垂直）和沿著水平線(xiàn) (表1-脊水平）評(píng)估各切片的尺寸（以_)。代表性的樣本示于圖4中，如下所示：(A)樣 品#56-僅用墨汁注射的對(duì)照，蘇木精&曙紅染色；(B)樣品#31-用PBS注射的對(duì)照，天 狼猩紅（PSR)染色，在偏振光下觀(guān)察；(C)樣品#33 -注射了膠原酶2, 500個(gè)單位/ml，天狼 猩紅（PSR)染色，在偏振光下觀(guān)察；(D)樣品#35-注射了膠原酶5, 000個(gè)單位/ml，天狼猩 紅（PSR)染色，在偏振光下觀(guān)察；(E)樣品#37-注射了膠原酶7, 500個(gè)單位/ml，天狼猩紅 (PSR)染色，在偏振光下觀(guān)察；以及（F)樣品#39-注射了膠原酶10, 000個(gè)單位/ml，天狼猩 紅（PSR)染色，在偏振光下觀(guān)察。
[0127] 處理后2和5小時(shí)后的組織結(jié)構(gòu)分別總結(jié)于表1和2中。
[0128] 與對(duì)照組相比，所有處理過(guò)的樣品的病理檢查發(fā)現(xiàn)以劑量依賴(lài)方式的較大的膠原 溶解。如圖4所示以及表1和表2中進(jìn)一步描述的，牙齦組織變性的區(qū)域被呈現(xiàn)為淺染色 和較薄膠原束，脂肪組織細(xì)胞膜和嗜曙紅細(xì)胞增多和小動(dòng)脈壁的粒度的淺染色。在用7, 500 個(gè)單位/ml膠原蛋白處理的樣品中觀(guān)察到變性的最大面積（圖4E)。對(duì)照樣品（分別圖4A 和4B)均在正常范圍內(nèi)。
[0129]表1:用墨汁、PBS或膠原酶（Coll.)灃射后2小時(shí)的纟目織結(jié)構(gòu)
[0130]
【權(quán)利要求】
1. 一種用于在需要其的受試者中拔出牙齒的方法，所述方法包括： a) 將包含有效量試劑的組合物應(yīng)用進(jìn)入所述牙齒周?chē)慕M織，所述試劑能夠破壞所述 牙齒周?chē)难乐茼g帶；以及 b) 拔出所述牙齒。
2. 如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述試劑是酶，所述酶能夠裂解或水解所述牙齒周 圍的牙周韌帶處的肽鍵。
3. 如權(quán)利要求1所述的方法，其中拔出包括應(yīng)用平行于所述牙齒的長(zhǎng)軸的拔出力。
4. 如權(quán)利要求3所述的方法，其中拔出沒(méi)有應(yīng)用旋轉(zhuǎn)力。
5. 如權(quán)利要求2所述的方法，其中應(yīng)用包括接觸所述牙齒周?chē)难乐茼g帶空間處的至 少一個(gè)部位。
6. 如權(quán)利要求5所述的方法，其中接觸包括將所述組合物注射進(jìn)入內(nèi)牙周韌帶。
7. 如權(quán)利要求1所述的方法，其中拔出所述牙齒在應(yīng)用所述組合物之后的15分鐘至3 小時(shí)內(nèi)進(jìn)行。
8. 如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述試劑是蛋白水解酶。
9. 如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述酶選自由以下組成的組：分散酶、膠原酶、蛋白 酶K、透明質(zhì)酸酶及其組合。
10. 如權(quán)利要求9所述的方法，其中所述酶是膠原酶。
11. 如權(quán)利要求10所述的方法，其中所述膠原酶選自由以下組成的組：膠原酶I、膠原 酶II、膠原酶III及其組合。
12. 如權(quán)利要求11所述的方法，其中所述組合物包括膠原酶I對(duì)膠原酶II的1:1的質(zhì) 量比。
13. 如權(quán)利要求11所述的方法，其中所述組合物具有0. 01至3ml的有效體積。
14. 如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述組合物還包括選自由以下組成的組的試劑：止 痛藥、麻醉劑、抗生素、麻醉藥、維生素、生長(zhǎng)因子、調(diào)味劑及其組合。
15. 如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述試劑是針對(duì)膠原蛋白的抗體。
16. 如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述受試者患有出血性紊亂。
17. 如權(quán)利要求1所述的方法，所述方法還包括在拔出所述牙齒之前，將有效量的鈍化 劑應(yīng)用進(jìn)入所述牙齒周?chē)慕M織。
18. 如權(quán)利要求17所述的方法，其中所述鈍化劑是乙二胺四乙酸。
19. 如權(quán)利要求1所述的方法，所述方法還包括通過(guò)將牙種植體放置在拔出所述牙齒 后獲得的空腔處代替所述牙齒。
20. 如權(quán)利要求1所述的方法，所述方法包括 a) 將包含有效量膠原酶的組合物注射進(jìn)入所述牙齒周?chē)难乐茼g帶處的多個(gè)部位； 以及 b) 在所述組合物的注射后至少15分鐘時(shí)拔出所述牙齒。
21. 如權(quán)利要求1所述的方法，所述方法包括 a) 將包含有效量試劑的組合物應(yīng)用進(jìn)入所述牙齒周?chē)慕M織，所述試劑能夠破壞所述 牙齒周?chē)难乐茼g帶； b) 在拔出所述牙齒之前，將有效量的鈍化劑應(yīng)用進(jìn)入所述牙齒周?chē)慕M織；以及 C)拔出所述牙齒。
22. 如權(quán)利要求21所述的方法，其中應(yīng)用所述鈍化劑在應(yīng)用所述組合物之后的10分鐘 至3小時(shí)內(nèi)進(jìn)行。
23. 如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述鈍化劑是螯合劑且所述試劑是蛋白酶。
24. 如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述試劑是選自由以下組成的組的酶：分散酶、膠 原酶、蛋白酶K、透明質(zhì)酸酶及其組合。
25. 如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述組合物還包含選自由以下組成的組的試劑： 止痛藥、麻醉劑、抗生素、麻醉藥、維生素、生長(zhǎng)因子和調(diào)味劑。
26. 如權(quán)利要求21所述的方法，所述方法還包括將牙種植體放置在拔出所述牙齒后獲 得的空腔處。
27. 如權(quán)利要求24所述的方法，其中所述試劑是膠原酶。
28. -種用牙種植體代替牙齒的方法，所述方法包括： a) 將包含有效量膠原酶的組合物應(yīng)用至牙齒周?chē)难乐茼g帶； b) 在應(yīng)用所述組合物后至少15分鐘時(shí)拔出所述牙齒；以及 c) 在拔出所述牙齒后獲得的空腔處放置牙種植體。
29. 如權(quán)利要求28所述的方法，其中應(yīng)用包括將所述組合物注射進(jìn)入所述牙齒周?chē)?牙周韌帶處的多個(gè)部位。
30. 如權(quán)利要求28所述的方法，其中所述組合物還包含選自由以下組成的組的試劑： 止痛藥、麻醉劑、抗生素、麻醉藥、維生素、生長(zhǎng)因子和調(diào)味劑。
31. 如權(quán)利要求28所述的方法，所述方法還包括在拔出所述牙齒之前，將有效量的鈍 化劑應(yīng)用進(jìn)入所述牙齒周?chē)慕M織。
32. 如權(quán)利要求31所述的方法，其中應(yīng)用所述鈍化劑在應(yīng)用所述組合物之后的10分鐘 至3小時(shí)內(nèi)進(jìn)行。
33. 如權(quán)利要求31所述的方法，其中所述鈍化劑是乙二胺四乙酸。
34. -種用于拔出牙齒的試劑盒，所述試劑盒包括第一容器、第二容器和使用說(shuō)明書(shū)， 所述第一容器包含組合物，所述組合物包含進(jìn)入所述牙齒周?chē)慕M織的有效量的試劑；所 述第二容器包括包含有效量的鈍化劑的組合物；所述使用說(shuō)明書(shū)列出了所述試劑盒的各組 分的用途和使用順序。
35. 如權(quán)利要求34所述的試劑盒，所述試劑盒還包括包含選自由以下組成的組的試劑 的容器：止痛藥、麻醉劑、抗生素、麻醉藥、維生素、生長(zhǎng)因子、調(diào)味劑及其組合。
36. 如權(quán)利要求34所述的試劑盒，所述試劑盒還包括用于拔出所述牙齒的牙科工具。
【文檔編號(hào)】A61K38/43GK104271152SQ201380023125
【公開(kāi)日】2015年1月7日 申請(qǐng)日期:2013年5月1日 優(yōu)先權(quán)日:2012年5月1日
【發(fā)明者】凱倫·瑪麗恩卡卡爾曼尼, 葉夫根尼·維恩伯格, 約瑟夫·加夫尼 申請(qǐng)人:普羅泰奧里斯有限公司