預(yù)防再激活的結(jié)核病tb疫苗的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開可向潛伏感染個(gè)體施用以預(yù)防結(jié)核病復(fù)合群微生物物種（結(jié)核分枝桿菌（Mycobacterium?tuberculosis）、牛分枝桿菌（M.bovis）、非洲分枝桿菌（M.africanum））引起的潛伏結(jié)核病感染的再激活的疫苗或者免疫原性組合物。本發(fā)明是基于在感染的不同階段組成型表達(dá)的大量結(jié)核分枝桿菌來源的蛋白和蛋白片段。本發(fā)明涉及這些多肽、其免疫活性片段和編碼它們的基因用于免疫組合物諸如疫苗的用途。
【專利說明】預(yù)防再激活的結(jié)核病TB疫苗
[0001] 本申請是申請日為2010年4月23日，申請?zhí)枮?201080017717. 7"，發(fā)明名稱為 "預(yù)防再激活的結(jié)核病TB疫苗"的申請的分案申請。 發(fā)明領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明公開可向潛伏感染個(gè)體施用以通過靶向組成型表達(dá)的抗原諸如ESAT6、 CFP10和來自ESX-1分泌系統(tǒng)的其他抗原而預(yù)防結(jié)核病復(fù)合群微生物（tuberculosis complex microorganisms)物種（結(jié)核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis)、牛分枝桿 菌(M. bovis)、非洲分枝桿菌（M. africanum))引起的潛伏結(jié)核病感染的再激活的疫苗。
[0003] -般背景
[0004] 由結(jié)核分枝桿菌（M. tuberculosis)引起的人類結(jié)核病是一個(gè)嚴(yán)重的全球性健康 問題，根據(jù)WH0,其造成每年約3百萬人死亡。在二十世紀(jì)60年代和70年代期間，全世界新 的結(jié)核病（TB)病例發(fā)生率已經(jīng)處于下降中，但在近十年中，部分由于AIDS的來臨和結(jié)核分 枝桿菌的多藥抗性菌株的出現(xiàn)，這種趨勢已經(jīng)發(fā)生明顯的改變。
[0005] 結(jié)核病復(fù)合群（tuberculosis complex)的生物體可引起多種疾病，但最常見的侵 入途徑是通過吸入細(xì)菌。這在肺中開始感染，最終可擴(kuò)散到身體其他部位。通常，這種感染 在生長方面被免疫系統(tǒng)限制，使得大多數(shù)感染個(gè)體除了最終減退的咳嗽和發(fā)熱以外顯示極 少的體征。大約30%的個(gè)體不能容納感染，將發(fā)展原發(fā)性疾病，這在許多情況中最終將是致 命的。然而，認(rèn)為甚至表面上控制感染的那些個(gè)體仍保持被感染，很可能持續(xù)其余生。當(dāng)然， 已經(jīng)健康了數(shù)年或甚至數(shù)十年的個(gè)體可能突然發(fā)展結(jié)核病，該結(jié)核病被證明是多年前其感 染的相同生物體引起的。結(jié)核分枝桿菌和TB復(fù)合群的其他生物體的獨(dú)特之處在于，分枝桿 菌可躲避免疫應(yīng)答，以難治的非復(fù)制或緩慢復(fù)制期存活長時(shí)間。這稱為潛伏TB，目前是非常 嚴(yán)重的全球性健康問題，估計(jì)影響全世界人群的大約1/3 (Anon.，2001)。
[0006] 目前唯一可供臨床使用的疫苗是BCG，該疫苗的效力仍然有些爭議。雖然BCG在原 代感染的動物模型中一直表現(xiàn)良好，但它顯然未能控制TB流行。與此一致，BCG接種表現(xiàn) 為提供抵抗兒科TB (由于原代感染）的保護(hù)，而對抵抗成年疾病(通常是童年獲得的潛伏感 染的再激活)提供極小或沒有保護(hù)。還已顯示，向目前對分枝桿菌敏感或潛伏感染的個(gè)體接 種疫苗是無效的。
[0007] 結(jié)核分枝桿菌感染的過程主要經(jīng)歷3個(gè)時(shí)期，如圖1所示。在急性期，細(xì)菌在器官 中增殖，直到免疫應(yīng)答增強(qiáng)到其可控制感染的點(diǎn)，此時(shí)細(xì)菌負(fù)荷（bacterial load)達(dá)到峰 值并開始下降。此后，在細(xì)菌負(fù)荷穩(wěn)定維持在低水平時(shí)形成潛伏期。在這個(gè)時(shí)期，目前認(rèn)為 結(jié)核分枝桿菌由活躍的增殖趨于休眠期，基本上轉(zhuǎn)變?yōu)榉菑?fù)制狀態(tài)并維持在肉芽腫內(nèi)。
[0008] 然而，近來已經(jīng)變得明顯的是，即使在特征為恒定的低細(xì)菌數(shù)目的感染階段，至少 部分細(xì)菌群體仍保持活性代謝的狀態(tài)（Talaat AM等2007)。因此，盡管有強(qiáng)的免疫應(yīng)答，這 些細(xì)菌存活，保持活性代謝和復(fù)制。所以，在感染個(gè)體中，存在非復(fù)制細(xì)菌（因?yàn)槲挥诎麅?nèi)， 免疫系統(tǒng)可能難以檢測到）與緩慢復(fù)制細(xì)菌之間的平衡，所述緩慢復(fù)制細(xì)菌具有活性但改 變的表達(dá)譜，試圖適應(yīng)在免疫宿主中遇到的敵對環(huán)境。處于這一階段的細(xì)菌通常不被TB領(lǐng) 域中目前正開發(fā)的大多數(shù)預(yù)防性疫苗所靶向，例證是當(dāng)?shù)湫偷念A(yù)防性疫苗被提供給潛伏感 染的實(shí)驗(yàn)動物時(shí)缺乏活性（Turner2000 )。
[0009] 在一些情況中，由于病原菌和感染進(jìn)入再激活階段，這一平衡被傾斜，在再激活階 段細(xì)菌開始快速復(fù)制并且感染個(gè)體中的細(xì)菌數(shù)目增加。在潛伏感染個(gè)體中、在非常強(qiáng)的免 疫壓力下復(fù)制的細(xì)菌是本發(fā)明接種策略的靶。處于這一潛伏感染階段的細(xì)菌通常不被TB 領(lǐng)域中目前正開發(fā)的大多數(shù)預(yù)防性疫苗所靶向，例證是當(dāng)預(yù)防性疫苗被提供給潛伏感染的 實(shí)驗(yàn)動物時(shí)缺乏活性（Turner等2000)。這不令人驚訝，因?yàn)楝F(xiàn)在已知強(qiáng)的宿主免疫應(yīng)答導(dǎo) 致許多抗原諸如主要預(yù)防性疫苗抗原Ag85和PstS的下調(diào)（Rogerson, BJ等2006)。對于 Ag85B，已經(jīng)顯示，在感染后存在Ag85B表達(dá)的最初短暫增加，但在感染后2周，細(xì)菌Ag85B 表達(dá)水平已經(jīng)從峰值期間的0. 3轉(zhuǎn)錄子/CFU結(jié)核分枝桿菌下降到0. 02轉(zhuǎn)錄子/CFU，且這 一低水平在感染后持續(xù)至少達(dá)100天。因此在感染后2周的任何時(shí)間點(diǎn)，少于2%的細(xì)菌積 極地表達(dá)Ag85B (同前)。Ag85B的低表達(dá)由以下支持：感染后3周或之后肺中能夠響應(yīng)于 Ag85B產(chǎn)生IFN-g的T細(xì)胞數(shù)目快速下降。
[0010] 相反，一些抗原貫穿不同感染階段更穩(wěn)定地(組成型)表達(dá)，一個(gè)實(shí)例是ESAT6。在 最初感染階段后，ESAT-6表達(dá)水平穩(wěn)定在0. 8轉(zhuǎn)錄子/CFU結(jié)核分枝桿菌。這是比Ag85B 高得多的轉(zhuǎn)錄水平，這一水平穩(wěn)定地保持達(dá)感染后至少100天（Rogerson, BJ等2006)。再 一次地，轉(zhuǎn)錄數(shù)據(jù)被免疫數(shù)據(jù)支持，免疫數(shù)據(jù)顯示在感染后期階段在感染部位，T細(xì)胞對 ESAT-6的強(qiáng)的識別（同前)。這一組成型表達(dá)模式是個(gè)重要特征，說明這些分子實(shí)現(xiàn)對于病 原體至關(guān)重要的必需功能，這些功能依賴于需要組成型表達(dá)以使病原體在免疫宿主中存活 的基因。這些分子是本發(fā)明的基礎(chǔ)，對于向潛伏感染個(gè)體施用的疫苗是尤其重要的抗原，因 為它們靶向細(xì)菌生命周期的所有階段，因而具有盡可能寬的活性基礎(chǔ)。這與集中于鑒定在 非復(fù)制持續(xù)期間被分枝桿菌上調(diào)的抗原的現(xiàn)有思路不同（Andersen，P. 2007、W002048391、 W004006952、Lin MY 和 Ottenhoff TH2008;Leyten EM.等 2006)。盡管這些抗原在非復(fù)制 持續(xù)期間被上調(diào)，它們可能不總是免疫識別可獲得的，因?yàn)閺姆菑?fù)制細(xì)菌可獲得的量低于 檢測或觸發(fā)保護(hù)性免疫效應(yīng)功能的合理閾值。
[0011] 相反，來自ESX-1分泌系統(tǒng)的多種蛋白已經(jīng)顯示為高度免疫原性和以高水平表 達(dá)。ESX-1在多種病原性分枝桿菌中是保守的，并參與結(jié)核桿菌（tubercle bacilli)的 毒性。個(gè)體ESX-1蛋白在分泌ESAT-6、CFP10和EspA中的貢獻(xiàn)已被充分記載（Pym AS等 2003 ;Guinn ΚΙ 等，2004 ;Stanley, SA 等 2003 ;Brodin, Ρ·等 2006 ;MacGurn JA 等 2005 ; Raghavan，S.等2008)，效應(yīng)分子的功能已顯示為膜裂解，從吞噬體逃逸和細(xì)菌擴(kuò)散（Gao LY 等 2004;Smith J.等 2008)。
[0012] 控制潛伏性感染的免疫應(yīng)答的所有特性和引起再活化的因素基本上是未知的。 然而，有一些證據(jù)證明與主導(dǎo)細(xì)胞類型的轉(zhuǎn)變有關(guān)。雖然CD4T細(xì)胞對急性期的感染控 制是必要的和足夠的，但研究揭示⑶8T細(xì)胞反應(yīng)在潛伏期更為重要（van Pinxteren LA 等·2000)。
[0013] 本領(lǐng)域的技術(shù)人員將會容易地理解，一種基因的表達(dá)不足以使其成為一種好的候 選疫苗。確定一種蛋白在結(jié)核分枝桿菌潛伏感染期間是否被免疫系統(tǒng)識別的唯一方法是制 備出這種給定的蛋白，并按照這里描述的適當(dāng)試驗(yàn)對該蛋白進(jìn)行測試。在這方面，我們的研 究組已經(jīng)證實(shí)，被分枝桿菌強(qiáng)表達(dá)的抗原諸如ESAT-6 (早期分泌抗原靶-6)在所有感染階 段個(gè)體中被識別，事實(shí)上尤其在潛伏感染個(gè)體中被識別（Boesen, Ravn, Doherty2002)。然而 在自然感染期間引發(fā)的ESAT-6特異性T細(xì)胞雖然可能大量存在，但作為抵抗傳染病的保護(hù) 性Τ細(xì)胞，它們幾乎全部是所謂的效應(yīng)表型，即具有非常有限的壽命和低活性的終末分化Τ 細(xì)胞（Seder R，等2008)。這顯著不同于本研究中證實(shí)的防止ΤΒ的再激活的疫苗促進(jìn)的高 質(zhì)量、所謂的多功能T細(xì)胞。
[0014] 它遠(yuǎn)不同于可用作接觸后疫苗的所有高表達(dá)和免疫原性的蛋白，因?yàn)樵S多這種蛋 白將引發(fā)超敏反應(yīng)，反而惡化情況。這在Kock的原始結(jié)核菌素疫苗的臨床試驗(yàn)中清楚地證 實(shí)。疫苗作為接觸后疫苗向患有不同形式疾病包括皮膚TB和肺部TB的患者提供。試驗(yàn)完 全失敗，參與的幾個(gè)患者因?yàn)閲?yán)重的超敏反應(yīng)而死亡（Guttstadt A. 1891)。在數(shù)百種已知 在初次感染期表達(dá)并作為疫苗被測試的抗原中，少于半打的抗原表現(xiàn)出明顯的潛力。迄今 為止僅有一種抗原已經(jīng)被證實(shí)具有作為接觸后疫苗的所有潛質(zhì)（Lowrie, 1999)。然而這個(gè) 疫苗僅在作為DNA疫苗（目前還未被批準(zhǔn)用于人類的實(shí)驗(yàn)技術(shù)）施用時(shí)起作用。而且，該技 術(shù)被證明是有爭議的，因?yàn)橛衅渌芯拷M聲稱使用該方案接種疫苗誘導(dǎo)了非特異性的保護(hù) 或甚至使疾病惡化（Turner, 2000)。
[0015] 因此，防止感染個(gè)體的疾病再激活的有效接觸后接種策略是高度期望的。
[0016] 發(fā)明概述
[0017] 本發(fā)明涉及由可向潛伏感染個(gè)體施用以通過靶向組成型表達(dá)的抗原諸如ESAT6、 CFP10和EspA預(yù)防結(jié)核病復(fù)合群微生物物種（結(jié)核分枝桿菌、牛分枝桿菌、非洲分枝桿菌） 引起的潛伏結(jié)核病感染的再激活的疫苗治療結(jié)核病復(fù)合群物種（結(jié)核分枝桿菌、牛分枝桿 菌、非洲分枝桿菌)引起的感染。ESAT6、CFP10和EspA相互依賴地都是分泌所需的，都屬于 已知是毒性必需的ESX-1分泌系統(tǒng)。這些分泌的抗原對于細(xì)菌散播和裂解細(xì)胞膜是決定性 的。ESAT6、CFP10和EspA也是在疾病不同階段組成型表達(dá)的抗原-而例如Ag85的表達(dá)在 感染后立刻被下調(diào)。令人驚訝地，免疫原性、組成型表達(dá)的抗原當(dāng)作為接觸后疫苗施用時(shí)預(yù) 防潛伏結(jié)核病感染的再激活，從而保持感染潛伏。
[0018] 本發(fā)明的第一方面涉及一種疫苗或免疫原性組合物，所述疫苗或免疫原性組合物 接觸后地施用于潛伏感染個(gè)體，預(yù)防結(jié)核病的再激活，所述疫苗或免疫原性組合物包含在 結(jié)核分枝桿菌(M. tuberculosis)感染期間組成型表達(dá)的抗原或編碼所述抗原的核酸。
[0019] 在一些實(shí)施方案中，所述組成型表達(dá)的抗原可屬于ESX-1分泌系統(tǒng)，選自以下組 成的組：
[0020] i)SEQ ID N0. 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、32、33 和 34 ;
[0021] ii) (i)中任一序列的免疫原性部分，如，T細(xì)胞表位；和
[0022] iii)與⑴或（ii)中任一序列具有至少70%序列同一性且同時(shí)具有免疫原性的 氨基酸序列類似物。
[0023] 在一些實(shí)施方案中，所述組合物可包含免疫原性部分的混合物，諸如2、3、4、5、6、 7、8、9、10、11、12或13種免疫原性部分的混合物。
[0024] 在一些實(shí)施方案中，所述抗原選自以下組成的組：SEQ ID N0. 19、20、21、22、23、 24、25、26、27、28、29、30 和 31。
[0025] 在一些實(shí)施方案中，所述多肽可與分枝桿菌科的細(xì)菌表達(dá)的抗原融合。
[0026] 在一些實(shí)施方案中，所述融合配偶體可以是組成型表達(dá)的抗原。
[0027] 在一些實(shí)施方案中，所述組合物可包含與CFP10融合的ESAT6。
[0028] 在一些實(shí)施方案中，所述組合物可包含選自以下的另外的遞送系統(tǒng)：活的重組疫 苗，即基因修飾的生物體諸如表達(dá)分枝桿菌基因的細(xì)菌或病毒；免疫原性遞送系統(tǒng)，諸如 DNA疫苗，即表達(dá)上述蛋白的基因或基因片段的質(zhì)粒；蛋白疫苗，即在遞送系統(tǒng)諸如佐劑中 遞送的蛋白本身或來源于蛋白本身的合成肽。
[0029] 在一些實(shí)施方案中，所述佐劑可包含DDA/TDB和/或聚I:C。
[0030] 在一些實(shí)施方案中，所述氨基酸序列可被脂化以允許所述多肽的自佐劑作用。
[0031] 本發(fā)明的第二方面涉及一種選自以上第一方面中定義的組的抗原，所述抗原用于 治療潛伏結(jié)核病。
[0032] 本發(fā)明的第三方面涉及一種治療動物包括人類的由毒性分枝桿菌，例如，由結(jié)核 分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis)、非洲分枝桿菌（Mycobacterium africanum)或 牛分枝桿菌（Mycobacterium bovis)引起的結(jié)核病感染的再激活的方法，所述方法包括向 動物施用本申請第一方面的疫苗或免疫原性組合物。
[0033] 在一些實(shí)施方案中，所述疫苗或免疫原性組合物可在感染后諸如急性感染階段期 間或急性感染階段之后和/或潛伏感染階段期間施用。
[0034] 在一些實(shí)施方案中，所述方法可包括鑒定潛伏感染毒性分枝桿菌的受治療者的步 驟。
[0035] 在一些實(shí)施方案中，所述潛伏感染毒性分枝桿菌的受治療者可以以諸如以下的診 斷方案鑒定：Mantoux結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)（TST)、Quantiferon試驗(yàn)、體外檢測對HBHA的響 應(yīng)或在以組成型表達(dá)的抗原刺激后檢測IP10。
[0036] 本發(fā)明的第四方面涉及選自以上第一方面中定義的組的抗原用于制備接觸后疫 苗的用途，所述接觸后疫苗抵抗由結(jié)核病復(fù)合群的物種如結(jié)核分枝桿菌、牛分枝桿菌和非 洲分枝桿菌引起的潛伏感染的再激活。
[0037] 在一些實(shí)施方案中，所述疫苗可以是用于感染后諸如急性感染階段期間或急性感 染階段之后和/或潛伏感染階段期間施用。
[0038] 在一些實(shí)施方案中，所述疫苗可包含以上第一方面中定義的免疫原性部分。
[0039] 發(fā)明詳述
[0040] 本發(fā)明公開一種疫苗或免疫原性組合物，所述疫苗或免疫原性組合物接觸后地施 用于潛伏感染個(gè)體，預(yù)防結(jié)核病的再激活，所述疫苗或免疫原性組合物包含在結(jié)核分枝桿 菌感染期間組成型表達(dá)的抗原或編碼所述抗原的核酸。
[0041] 優(yōu)選地所述組合物包含屬于ESX-1分泌系統(tǒng)的組成型表達(dá)的抗原，ESAT6 (SEQ ID NO. D.CFP10 (SEQ ID NO. 2),EspA (SEQ ID NO. 3),Rv3614c (SEQ ID NO. 4),Rv3615c (SEQ ID NO. 5),EspR (SEQ ID NO. 6), Rv3868 (SEQ ID NO. 7), Rv3869 (SEQ ID NO. 8), Rv3870 (SEQ ID NO. 9), Rv3871 (SEQ ID NO. 10), Rv3872 (SEQ ID NO. 11), Rv3873 (SEQ ID NO. 12)、Rv3876 (SEQ ID NO. 13)、Rv3877 (SEQ ID NO. 14)、Rv3878 (SEQ ID NO. 15)、 Rv3879c (SEQ ID NO. 16)、Rv3880c (SEQ ID NO. 17)、Rv3881c (SEQ ID NO. 18)、Rv3882c (SEQ ID N032)、Rv3883c (SEQ ID N033)、Rv3865c (SEQ ID N034);或這些序列中任一序 列的免疫原性部分，如T細(xì)胞表位；或與任一序列具有至少70%序列同一性且同時(shí)具有免疫 原性的氨基酸序列類似物。
[0042] 可選地，所述組合物包含免疫原性部分的混合物，所述免疫原性部分優(yōu)選地選自 以下組成的組：SEQ ID Ν0·19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30 和 31。
[0043] 本發(fā)明的另一實(shí)施方案是組合物，其中所述多肽與分枝桿菌科的細(xì)菌表達(dá)的抗原 融合，優(yōu)選地其中所述融合配偶體是組成型表達(dá)的抗原。優(yōu)選的融合蛋白包含與CFP10融 合的ESAT6。
[0044] 根據(jù)本發(fā)明的組合物優(yōu)選地包含選自以下的另外的遞送系統(tǒng)：活的重組疫苗，即 基因修飾的生物體諸如表達(dá)分枝桿菌基因的細(xì)菌或病毒；免疫原性遞送系統(tǒng)，諸如DNA疫 苗，即表達(dá)上述蛋白的基因或基因片段的質(zhì)粒；蛋白疫苗，即在遞送系統(tǒng)諸如佐劑中遞送的 蛋白本身或來源于蛋白本身的合成肽。佐劑優(yōu)選地選自以下組成的組：二甲基雙十八烷基 溴化銨（dimethyldioctadecylammonium bromide) (DDA)、Quil Α、聚 I:C、氫氧化錯(cuò)、弗氏 不完全佐劑、IFN-γ、IL-2、IL-12、單磷酰脂質(zhì)A (MPL)、海藻糖二霉菌酸酯（TDM)、海藻糖二 山崳酸酯（dibehenate)和胞壁酰二肽（MDP)，最優(yōu)選地促進(jìn)多功能T細(xì)胞應(yīng)答的佐劑諸如 DDA/TDB和IC31。最優(yōu)選的佐劑包含DDA/TDB和/或聚I :C。可選地所述氨基酸序列被脂 化以允許所述多肽的自佐劑作用（self-adjuvanting effect)。
[0045] 本發(fā)明還公開用于治療潛伏結(jié)核病和預(yù)防感染的再激活的上述抗原。
[0046] -種治療動物包括人類的由毒性分枝桿菌，如，由結(jié)核分枝桿菌、非洲分枝桿菌或 牛分枝桿菌引起的結(jié)核病感染的再激活的方法，所述方法包括向動物施用上述的疫苗或免 疫原性組合物，其中所述疫苗或免疫原性組合物在感染后，諸如急性感染階段期間或急性 感染階段之后和/或潛伏感染階段期間施用。
[0047] 所述方法可包括如以諸如以下的診斷方案鑒定潛伏感染毒性分枝桿菌的受治療 者的步驟：Mantoux結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)（TST)、Quantiferon試驗(yàn)、體外檢測對HBHA的響應(yīng) 或以組成型表達(dá)的抗原刺激后檢測IP10。
[0048] 本發(fā)明還公開上述抗原用于制備接觸后疫苗或免疫原性組合物的用途，所述接觸 后疫苗或免疫原性組合物抵抗由結(jié)核病復(fù)合群物種如結(jié)核分枝桿菌、牛分枝桿菌和非洲分 枝桿菌引起的潛伏感染的再激活，其中所述疫苗或免疫原性組合物是用于感染后諸如急性 感染階段期間或急性感染階段之后和/或潛伏感染階段期間施用并包含一種或多種上述 的免疫原性部分。
[0049] 分枝桿菌作為病原體的成功是因?yàn)樗c其宿主相互作用的復(fù)雜和精巧方式-部 分地由專門的ESX-1細(xì)菌蛋白-分泌系統(tǒng)控制的過程。ESX-1系統(tǒng)遞送細(xì)菌蛋白（例如 ESAT-6、CFP10和EspA)到宿主細(xì)胞，這對于毒性是關(guān)鍵的。從桿菌分泌后，ESAT-6蛋白在 吞噬體膜上形成孔，允許桿菌逃離吞噬體限制而進(jìn)入胞質(zhì)，從而促進(jìn)細(xì)胞間擴(kuò)散。
[0050] 組成型表達(dá)模式是個(gè)重要特征，說明這些分子實(shí)現(xiàn)對于病原體至關(guān)重要的必需功 能，這些功能依賴于需要組成型表達(dá)以使病原體在免疫宿主中存活的基因。這些分子是本 發(fā)明的基礎(chǔ)，對于向潛伏感染個(gè)體施用的疫苗是尤其重要的抗原，因?yàn)樗鼈儼邢蚣?xì)菌生命 周期的所有階段，因而具有盡可能寬的活性基礎(chǔ)。
[0051] ESAT6、CFP10和EspA相互依賴地都是分泌所需的，都屬于已知是毒性必需的 ESX-1分泌系統(tǒng)。這些分泌的抗原對于細(xì)菌散播和裂解細(xì)胞膜是決定性的。ESAT6、CFP10 和EspA也是在疾病不同階段組成型表達(dá)的抗原-而例如Ag85的表達(dá)在感染后立刻被下 調(diào)。免疫原性、組成型表達(dá)的抗原當(dāng)作為治療疫苗施用時(shí)預(yù)防潛伏結(jié)核病感染的再激活，從 而保持感染潛伏。
[0052] 定義
[0053] 多功能T細(xì)胞
[0054] 術(shù)語多功能T細(xì)胞被理解為同時(shí)表達(dá)所有細(xì)胞因子IFN-Y、IL-2和TNF-α，或 IL-2加另外兩種細(xì)胞因子IFN- γ和TNF- a的至少一種的T細(xì)胞。
[0055] 多肽
[0056] 單詞"多肽"在本發(fā)明中具有其通常的含義。即任何長度的氨基酸鏈，包括全長蛋 白、寡肽、短肽及其片段，其中氨基酸殘基經(jīng)由共價(jià)的肽鍵連接。
[0057] 多肽可以是經(jīng)化學(xué)修飾的，被糖基化、脂化(例如Mowat等1991年所述的用棕櫚酰 基氧基琥拍酰亞胺或Lustig等1976年所述的用十二燒酰氯化學(xué)脂化（lipidation))、包含 輔基或者包含另外的氨基酸如組氨酸標(biāo)簽或信號肽。
[0058] 因此，每一多肽可由具體的氨基酸表征并由具體的核酸序列編碼。應(yīng)理解，這種序 列包括重組或合成方法制備的類似物和變體，其中這種多肽序列已經(jīng)通過重組多肽中一個(gè) 或多個(gè)氨基酸殘基的取代、插入、添加或者缺失而被修飾，但在這里所描述的任何生物檢測 中仍具有免疫原性。取代優(yōu)選是"保守性的"。這些保守性取代根據(jù)下表定義。在第二列相 同單元格里的氨基酸和優(yōu)選在第三列相同行中的氨基酸，可以彼此取代。第三列中的氨基 酸由單字母代碼表示。
[0059]
【權(quán)利要求】
1. 一種疫苗，所述疫苗施用于潛伏感染個(gè)體，預(yù)防結(jié)核病的再激活，所述疫苗包含在結(jié) 核分枝桿菌(M. tuberculosis)感染期間組成型表達(dá)的抗原或編碼所述抗原的核酸，其中所 述抗原是： i) SEQ ID NO. 4 或 ii) SEQ ID NO. 4的T細(xì)胞表位。
2. 如權(quán)利要求1所述的疫苗，其中所述抗原與分枝桿菌科的細(xì)菌組成型表達(dá)的抗原融 合。
3. 如權(quán)利要求2所述的疫苗，所述疫苗包含與CFP10融合的ESAT6。
4. 如前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的疫苗，所述疫苗包含遞送系統(tǒng)。
5. 如權(quán)利要求4所述的疫苗，其中所述遞送系統(tǒng)是佐劑。
6. 如權(quán)利要求5所述的疫苗，其中所述佐劑包含DDA/TDB和/或聚I:C。
7. 如前述權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的疫苗，其中所述氨基酸序列被脂化以允許所述 多肽的自佐劑作用。
8. 如權(quán)利要求4所述的疫苗，其中所述氨基酸序列被脂化以允許所述多肽的自佐劑作 用。
9. 如權(quán)利要求5所述的疫苗，其中所述氨基酸序列被脂化以允許所述多肽的自佐劑作 用。
10. 如權(quán)利要求6所述的疫苗，其中所述氨基酸序列被脂化以允許所述多肽的自佐劑 作用。
11. 如權(quán)利要求1-10任一項(xiàng)中定義的疫苗，所述疫苗用于治療潛伏結(jié)核病。
12. 權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)中定義的抗原或編碼所述抗原的核酸在制備用于治療動物包 括人類的由毒性分枝桿菌引起的結(jié)核病感染的再激活的疫苗中的用途，其中所述疫苗施用 于所述動物。
13. 如權(quán)利要求12所述的用途，其中所述疫苗在急性感染階段之后和/或潛伏感染階 段期間施用。
14. 選自權(quán)利要求1-10任一項(xiàng)中定義的組的抗原用于制備疫苗的用途，所述疫苗抵抗 由結(jié)核病復(fù)合群的物種引起的潛伏感染的再激活。
15. 如權(quán)利要求14所述的用途，其中所述結(jié)核病復(fù)合群的物種選自由結(jié)核分枝桿菌、 牛分枝桿菌和非洲分枝桿菌組成的組。
16. 如權(quán)利要求14所述的用途，其中所述疫苗是用于急性感染階段之后和/或潛伏感 染階段期間施用。
17. 如權(quán)利要求14-15任一項(xiàng)所述的用途，其中所述疫苗包含一種或多種權(quán)利要求1-3 中定義的抗原。
【文檔編號】A61P31/04GK104107425SQ201410141208
【公開日】2014年10月22日 申請日期:2010年4月23日 優(yōu)先權(quán)日:2009年4月24日
【發(fā)明者】J·迪特里希, 彼得·安德森, 卡里納·溫斯波·倫德貝里, 特呂克·蒂·吉姆·坦·候昂 申請人:國立血清研究所