一種實熱證動物模型的制備方法
【專利摘要】本發明提供一種實熱證動物模型的制備方法，涉及中醫動物模型領域。所述實熱證動物模型的制備方法，將大鼠連續灌胃黃芪黨參提取物后皮下注射松節油，得到實熱證動物模型。本發明提供的實熱證動物模型的制備方法，得到的實熱證動物模型血液中的FT3、FT4濃度顯著升高，在交感神經和內分泌方面具有較大變化，更接近熱證的本質。
【專利說明】一種實熱證動物模型的制備方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及中醫動物模型領域，具體涉及一種實熱證動物模型的的制備方法。
【背景技術】
[0002]我國最早的中醫理論著作《黃帝內經》中對熱證的病因進行了描述:“人之傷于寒也，則為病熱”。《傷寒論》中的真熱假寒證即“身大寒，反不欲近衣者，寒在皮膚，熱在骨髓也”。熱證的形成機理很多，有陽勝則熱、陰虛生熱、陰盛格陽于外則熱、氣虛生熱等；證型有實熱、虛熱、真熱假寒、上熱下寒等；治療有清熱瀉火、滋陰清熱、清泄里熱、清上溫下等。有學者指出實熱證早期交感神經和垂體-腎上腺系統機能增強，隨后垂體-甲狀腺機能也提高。另外，有人研究發現實熱證以免疫功能亢進為主。同時，熱證與能量代謝也密切相關，尤其是甲狀腺功能和鈉泵活性等。
[0003]“證”的研究是中醫理論研究的重要組成部分，制作典型證型的動物模型是中醫理論研究的重要手段之一。熱證是屬于其中開展較早的，研究也較為廣泛的領域之一。近年來，國內學者對熱證動物模型的研制做了許多有益的探索，產生了一些原創性的造模方法。但是，現有技術中，中醫實熱證動物模型在交感神經和內分泌方面沒有明顯變化，與熱證本
質有一定差距。

【發明內容】

[0004]本發明的目的是提供一種實熱證動物模型的制備方法，采用該方法制備的實熱證動物模型血液中的FT3、FT4濃度顯著升高，在交感神經和內分泌方面具有較大變化，更接近熱證的本質。
[0005]本發明的目的采用如下技術方案實現。
[0006]一種實熱證動物模型的制備方法，將大鼠連續灌胃黃芪黨參提取物后皮下注射松節油，得到實熱證動物模型。
[0007]在本發明中，所述黃芪黨參提取物采用如下方法制備:將黃芪和黨參按質量比為1:0.8~1.2混合，煎煮后濃縮得到黃芪黨參提取物。
[0008]在本發明中，所述黃芪黨參提取物的生藥濃度為0.5~1.5g/mL，最好為lg/mL。
[0009]在本發明中，黃芪黨參提取物制備過程中的煎煮次數為1-3次，最好為兩次。
[0010]在本發明中，大鼠連續灌胃黃芪黨參提取物10~18日，最好為14日；每日灌胃劑量為每日0.5~1.5ml/50g,最好為ml/50gl。
[0011]在本發明中，所述大鼠皮下注射松節油I~3次，劑量為I~3ml/只。
[0012]在本發明中，用于造模的大鼠體重為240_280g。用于造模的大鼠采用如下條件飼養得到:動物飼養于SPF環境。室溫25± I°C，濕度65±5%，每天光照10_14h，黑暗10_14h。飼以無菌全顆粒飼料，并自由飲水。
[0013]最后一次灌胃給藥黃芪黨參 提取物與皮下注射松節油的時間間隔為12~36小時，優選為24小時。[0014]采用本發明方法制備的實熱證動物模型，其血液中的FT3、FT4濃度顯著升高，甲狀腺亢進，甲狀腺激素分泌增多，基礎代謝或氧消耗升高，使體內熱產生增多。因此，本發明方法得到的大鼠實熱證模型與現有的實熱證模型相比，在交感神經和內分泌方面具有較大變化，更接近熱證的本質。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0015]圖1顯示了各組大鼠FT3濃度隨時間的變化。
[0016]圖2顯示了各組大鼠FT4濃度隨時間的變化。
【具體實施方式】
[0017]以下結合實施例來進一步解釋本發明，但實施例并不對本發明做任何形式的限定。
[0018]1.實驗藥品與試劑
[0019]黃苗，黨參，大黃，黃連，黃岑，干姜，附子，肉桂，山茱萸，牡丹皮，澤灣，獲茶，山藥，熟地，以上藥材購于亳州市中藥飲片廠，批號:090704。
[0020]生理鹽水:南京小營制藥有限公司。
[0021]松節油:國藥集團化學試劑有限公司。
[0022]抑肽酶溶液，EDTA.Na2 (乙二胺四乙酸二鈉)溶液，FT3放免試劑盒，FT4放免試劑盒，北京華英生物技術研究所提供。
[0023]2.實驗儀器
[0024]放免儀器:r_911全自動放免計數儀(中國科技大學實業總公司，中國)。
[0025]移液器:100-1000μ L, 20-200 μ L, 2-20 μ L, (eppendorf,德國)。
[0026]-40 V超低溫冰箱(海爾，中國)。
[0027]常溫冰箱(海爾，中國)。
[0028]3.實驗動物
[0029]Wistar大鼠，160_200g，SPF級，雄性，南京中醫藥大學實驗動物中心提供[合格證編號 SCXK (滬)2007-0005]。
[0030]Wistar大鼠的正常飼養方法:動物飼養于SPF環境,每籠5只，飼料(普通的大鼠顆粒飼料)與飲水保持充足，室溫25±1°C，濕度65 ±5%，每天光照12h，黑暗12h。
[0031]Wistar大鼠采用正常飼養方法飼養至體重240_280g，用于制備動物模型。
[0032]本發明采用SPSS17.0統計分析軟件對結果數據進行分析。多組間數據比較采用One-WayANOVA檢驗，以P〈0.05為有統計學意義。
[0033]實施例1制備提取物
[0034]1.制備黃芪黨參提取物(以下簡稱HD提取物)
[0035]按表1中的比例分別稱取黃苗，黨參。提取工藝如下:將所有藥材混合，加入10倍量水，加熱煮沸2h，濾過，得濾液I ;藥渣部分加入8倍量水，加熱提取lh，濾過，得濾液II ；合并濾液1、II，濃縮至濃度為Ig生藥/mL，得到HD提取物，保存于4°C冰箱中備用。
[0036]表1黃芪黨參提取物組方構成
[0037]
【權利要求】
1.一種實熱證動物模型的制備方法，其特征在于將大鼠連續灌胃黃芪黨參提取物后皮下注射松節油，得到實熱證動物模型。
2.根據權利要求1所述實熱證動物模型的制備方法，其特征在于所述黃芪黨參提取物采用如下方法制備:將黃芪和黨參按質量比為1: (0.8~1.2)混合，煎煮后濃縮得到黃芪黨參提取物。
3.根據權利要求2所述實熱證動物模型的制備方法，其特征在于所述黃芪黨參提取物的生藥濃度為0.5~1.5g/mL。
4.根據權利要求2或3所述實熱證動物模型的制備方法，其特征在于所述煎煮次數為I~3次。
5.根據權利要求1或2或3所述實熱證動物模型的制備方法，其特征在于大鼠連續灌胃黃芪黨參提取物10~18日，每日灌胃劑量為0.5~1.5ml/50g。
6.根據權利要求1-5之一所述實熱證動物模型的制備方法，其特征在于所述大鼠皮下注射松節油I~3次，每次注射劑量為I~3ml/只。
7.根據權利要求6所述實熱證動物模型的制備方法，其特征在于所述大鼠注射松節油后飼養lh-24h，得到實熱證動物模型。
8.根據權利要求1-7之一所述實熱證動物模型的制備方法，其特征在于所述大鼠為Wistar 大鼠。
9.根據權利要求8所述實熱證動物模型的制備方法，其特征在于用于制備實熱證動物模型的Wistar大鼠體重為240~280 g。
10.根據權利要求9所述實熱證動物模型的制備方法，其特征在于用于制備實熱證動物模型的Wistar大鼠采用如下條件飼養得到:室溫24~26° C，濕度60~70%，每天光照10~14h，黑暗10~14 h0
【文檔編號】A61K36/481GK103860630SQ201410141767
【公開日】2014年6月18日 申請日期:2014年4月9日 優先權日:2014年4月9日
【發明者】張啟春, 朱華旭, 郭立瑋, 錢智磊, 劉蒙竹 申請人:南京中醫藥大學