蛇足石杉內(nèi)生真菌菌株及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種蛇足石杉內(nèi)生真菌Eurotiaceae?Penicillium?L10Q37菌株，其保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏日期為2014年1月12日，保藏編號為CCTCC?NO.M2014021。本發(fā)明真菌發(fā)酵后得到的發(fā)酵產(chǎn)物以及發(fā)酵液提取物和菌體提取物均具有抗乙酰膽堿酯酶活性，可用于制備治療阿爾茨海默疾病的藥物。
【專利說明】蛇足石杉內(nèi)生真菌菌株及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及微生物學(xué)及化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種蛇足石杉內(nèi)生真菌EurotiaceaePenicillium sp.L10Q37 菌株及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]老年癡呆癥(Alzheimer’ s disease, AD)是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，臨床表現(xiàn)為記憶功能衰退、社交識別能力出現(xiàn)故障。研究發(fā)現(xiàn)，有10%~15%的老年人患有不同程度的癡呆，其中60%~70%為老年癡呆。到目前為止，老年癡呆發(fā)病機(jī)制尚未明確。膽堿能神經(jīng)損傷假說是被世界上較為認(rèn)可的老年癡呆癥致病機(jī)制，基于該假說而開發(fā)的乙酰膽堿酯酶(acetylcholine, AChE)抑制劑能有效地改善老年癡呆癥,成功用于臨床的有他克林(Tacrine)、多奈哌齊(Donepezil)、利伐司替明(Rivastigmine)、加蘭他敏(Galanthamine)、和石杉喊甲(Huperzine A)等。
[0003]人腦有數(shù)千億個(gè)神經(jīng)元，它們縱橫交錯(cuò)、相互交聯(lián)，乙酰膽堿是它們之間傳遞化學(xué)信息的一種重要的神經(jīng)遞質(zhì)。它傳導(dǎo)的信息與人的認(rèn)知、學(xué)習(xí)、記憶功能密切相關(guān)，其代謝過程的紊亂與AD癥的發(fā)病密切相關(guān)。
[0004]乙酰膽堿存在于軸突囊泡，它由乙酰轉(zhuǎn)化酶參與合成，隨著神經(jīng)沖動的傳導(dǎo)，乙酰膽堿被釋放到突觸間隙，再與突觸后膜上的多種受體結(jié)合，經(jīng)過一系列的生化反應(yīng)，引起突觸后膜電位的變化， 形成電信號向下一級傳遞。研究表明，90%患有AD病的患者在神經(jīng)沖動傳輸過程中缺乏乙酰膽堿，而乙酰膽堿酯酶的功能就是分解乙酰膽堿。所有抑制乙酰膽堿酯酶的作用是控制和緩解老年性癡呆癥的關(guān)鍵。
[0005]植物內(nèi)生真菌是指那些在其生活史的一定階段或全部階段生活于健康植物的各種組織和器官內(nèi)部的真菌，不僅包括了互惠共利的和中性的內(nèi)共生真菌，也包括了那些潛伏在宿主體內(nèi)的病原菌。目前，在所有研究過內(nèi)生真菌的植物中都發(fā)現(xiàn)內(nèi)生真菌，少則十幾種，多則近百種。研究發(fā)現(xiàn)內(nèi)生真菌能產(chǎn)生許多活性次級代謝產(chǎn)物，從而能夠增強(qiáng)植物的抗逆性，并且這些活性次級代謝產(chǎn)物經(jīng)常具有多種生物活性。據(jù)統(tǒng)計(jì)，從內(nèi)生真菌中發(fā)現(xiàn)新活性化合物的比例為51 %，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過土壤微生物的38 %。研究證明藥用植物內(nèi)生真菌能夠產(chǎn)生與宿主植物相同或相似的藥用活性成分，特別是還發(fā)現(xiàn)許多新的活性成分，是宿主植物所不具備的，而且，微生物還具有生長周期短、容易培養(yǎng)，易分離活性成分等優(yōu)勢。另外，從植物內(nèi)生真菌發(fā)酵產(chǎn)物中可以大量獲得所需藥物，能克服天然藥材不足的問題。因而，植物內(nèi)生真菌作為潛在的藥物資已成為發(fā)現(xiàn)新天然活性物質(zhì)的重要資源。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明提供了一種蛇足石杉內(nèi)生真菌Eurotiaceae Penicillium sp.L10Q37菌株，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏日期為2014年I月12日，保藏編號為CCTCCN0.M2014021 ο本發(fā)明蛇足石杉內(nèi)生真菌Eurotiaceae Penicillium sp.L10Q37菌株分離自云南產(chǎn)蛇足石杉根部，分離純化后保藏于武漢大學(xué)中國典型培養(yǎng)物保藏中心。[0007]本發(fā)明蛇足石杉內(nèi)生真菌Eurotiaceae Penicillium sp.L10Q37菌株具抗乙酰膽
堿酯酶活性。
[0008]本申請的發(fā)明人從蛇足石杉中分離其內(nèi)生真菌,將內(nèi)生真菌發(fā)酵獲得發(fā)酵產(chǎn)物，然后對發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行抗乙酰膽堿酯酶活性測定，結(jié)果篩選到一株內(nèi)生真菌L10Q37，該菌株的發(fā)酵產(chǎn)物提取物具有較強(qiáng)的抗乙酰膽堿酯酶活性，IC5tl值為8.83ug/ml。經(jīng)形態(tài)學(xué)鑒定，ITS測序和系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建，表明L10Q37為散囊菌科青霉屬(Eurotiaceae Penicillium)。本發(fā)明所述的Eurotuaceae Penicillium L10Q37已于2014年I月12日，保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心(簡稱CCTCC)，保藏編號為CCTCC M2014021。上述菌株的生物學(xué)形態(tài)描述為:在PDA培養(yǎng)基菌落呈，最初氣生菌絲淡色，漸變?yōu)榍嗌痪渚o密，圓形，邊緣不整齊，背面黃褐色，如圖1所示；電鏡下可見該菌株菌絲無分枝，分生孢子梗粗糙，有橫隔，有幾輪不對稱的小梗，小梗呈放射狀，頂端產(chǎn)生分生孢子、細(xì)小橢圓形，如圖2所示。
[0009]本發(fā)明上述蛇足石杉內(nèi)生真菌Eurotiaceae Penicillium sp.L10Q37菌株的遺傳特性，該內(nèi)生真菌5.8rDNA序列為，如SEQ ID N0.1所示:
[0010]
【權(quán)利要求】
1.一種蛇足石杉內(nèi)生真菌Eurotiaceae Penicillium sp.L10Q37菌株,保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏日期為2014年I月12日，保藏編號為CCTCC N0.M2014021。
2.如權(quán)利要求1所述的蛇足石杉內(nèi)生真菌EurotiaceaePenicillium sp.L10Q37菌株，其特征在于，其具抗乙酰膽堿酯酶活性。
3.由蛇足石杉內(nèi)生真菌EurotiaceaePenicillium sp.L10Q37菌株發(fā)酵獲得的發(fā)酵產(chǎn)物和/或發(fā)酵產(chǎn)物提取物。
4.如權(quán)利要求3所述的發(fā)酵產(chǎn)物和/或發(fā)酵產(chǎn)物提取物，其特征在于，所述發(fā)酵產(chǎn)物和/或發(fā)酵產(chǎn)物提取物具抗乙酰膽堿酯酶活性。
5.如權(quán)利要求3所述的發(fā)酵產(chǎn)物和/或發(fā)酵產(chǎn)物提取物，其特征在于，所述發(fā)酵產(chǎn)物提取物包括從所述發(fā)酵產(chǎn)物中獲得的發(fā)酵液提取物、菌體提取物。
6.蛇足石杉內(nèi)生真菌EurotiaceaePenicillium sp.L10Q37菌株的發(fā)酵產(chǎn)物的發(fā)酵方法，其特征在于，包括:菌種活化過程、種子液制備過程和發(fā)酵培養(yǎng)過程；其中， 菌種活化:取Eurotiaceae PenicilliumL10Q37斜面保藏菌種，采用劃線法接種于固體PDA斜面培養(yǎng)基，于28°C下培養(yǎng)3-4天；按此法連續(xù)活化三次； 種子液的制備:無菌操作，挑取已活化的斜面菌種，接種于PDA液體培養(yǎng)基，28°C，150rpm恒溫?fù)u床培養(yǎng)48h ;發(fā)酵液用4層滅菌處理紗布過濾，得到均一的一級種子液；將一級種子以10%的接種量接入液體PDA培養(yǎng)基，280C，150rpm恒溫?fù)u床培養(yǎng)48h，得到二級種子液； 發(fā)酵培養(yǎng)過程:在30L通氣攪拌式發(fā)酵罐內(nèi)加入20L液體PDA培養(yǎng)基，在121°C滅菌20min冷卻至28°C后，以I %的量接入二級種子液，發(fā)酵獲得發(fā)酵產(chǎn)物；發(fā)酵參數(shù)為:通氣量I: 0.2，溫度28°C，轉(zhuǎn)速150rpm，發(fā)酵時(shí)間10天。
7.蛇足石杉內(nèi)生真菌EurotiaceaePenicillium sp.L10Q37菌株在抑制乙酰膽堿酯酶活性中的應(yīng)用。
8.如權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述抑制乙酰膽堿酯酶活性的制劑包含所述發(fā)酵產(chǎn)物或其提煉物，或包含所述發(fā)酵液提取物或其提煉物，或包含所述菌體提取物或其提煉物。
9.蛇足石杉內(nèi)生真菌MoniliaceaePenicillium sp.L10Q37菌株在制備治療AD癥的藥物中的應(yīng)用。
10.如權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，所述治療AD癥的藥物包含所述發(fā)酵產(chǎn)物或其提煉物，或包含所述發(fā)酵液提取物或其提煉物，或包含所述菌體提取物或其提煉物。
【文檔編號】A61K36/06GK103937688SQ201410165639
【公開日】2014年7月23日 申請日期:2014年4月23日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月23日
【發(fā)明者】黎萬奎, 王浙健, 王莉莉, 馬昭, 唐承晨, 夏曉蓉, 胡之璧, 王崢濤 申請人:上海中醫(yī)藥大學(xué)