一種包載重組人生長激素緩釋藥物微囊的制作方法
【專利摘要】本發明的一種包載重組人生長激素的緩釋藥物微囊，是以多臂聚乙二醇-聚酯嵌段聚合物為載體包載重組人生長激素。緩釋藥物微囊的穩定性好，粒徑均一，提高了重組人生長激素的生物利用度，重組人生長激素含量高達46－81%。多臂聚合物具有較小的流體力學體積和較低的黏度，而其降解速率卻比線性聚合物要大，更有利于藥物的負載和輸送。多臂聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物具有好的負載藥物能力和獨特的兩親性，可防止蛋白質的吸附并躲避網狀內皮系統的識別與吞噬，易通過生理屏障，生物活性高，包載重組人生長激素的緩釋藥物微囊的包封率達到91%，制備工藝簡單，不需要復雜的復乳形成過程，原料易得，重復性好，適用于大規模生產。
【專利說明】一種包載重組人生長激素緩釋藥物微囊
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種包載重組人生長激素緩釋藥物微囊，屬于藥物【技術領域】。
技術背景
[0002]1920年，人們發現了生長激素(human growth hormone, hGH )的存在，生長激素是腺垂體細胞分泌的蛋白質，是一種肽類激素，由191個氨基酸殘基構成，相對分子質量為22124道爾頓。生長激素分子構造上具有4個α螺旋，使生長激素可以和其受體有良好結合。1958年，人們發現可以將人生長激素用于治療侏儒癥，但是，由于當時僅僅能夠從尸體的腦垂體中提取出人生長激素，數量有限，難以保證臨床用量，而限制了其應用。1986年，波耶爾通過基因重組的技術成功的合成了重組人生長激素(recombinant human growthhormone, rhGH )，其結構與人垂體分泌的生長激素完全相同。這樣便實現了重組人生長激素的大規模生產和應用。
[0003]正常情況下，生長激素呈脈沖式分泌，生長激素的分泌受下丘腦產生的生長激素釋放素的調節，還受性別、年齡和晝夜節律的影響，睡眠狀態下分泌明顯增加。生長激素的主要生理功能是促進神經組織以外的所有其他組織生長、促進機體合成代謝和蛋白質合成、促進創面愈合等。在臨床上，廣泛應用重組人生長激素預防和治療因生長激素缺乏導致的兒童生長發育遲緩、呆小癥、先天性卵巢發育不全(即Turner綜合癥)、老年人免疫功能的低下、慢性腎臟疾病、手術或燒傷患者的創面愈合遲緩等病癥。
[0004]雖然重組人生長激素臨床應用廣泛，但由于它是蛋白質類藥物，在體內外環境可能經受多種復雜的化學降解和物理變化而失活，如凝聚、沉淀、消旋化、水解、脫酰氨基等。加之腎臟的排泄，使重組人生長激素在體內的半衰期短，因而治療上述疾病一般都需要長期多次用藥。目前，普遍采取一周三次或一天一次注射的方式給藥。頻繁注射給藥容易導致患者的順應性降低，同時加重了其經濟負擔。針對重組人生長激素用藥周期長，且使用不方便的缺點，開發長效穩定的重組人生長激素是進一步拓寬生長激素應用范圍的關鍵所在。目前所采取的方法主要是聚乙二醇化，即通過重組人生長激素上的氨基、羧基或巰基與端甲氧基聚乙二醇共價鍵合，有效阻止蛋白水解酶與重組人生長激素的直接接觸，降低了其降解程度，進而降低了其清除率，改善了其穩定性，增加了其循環時間，減少了給藥次數。Ross Clark等人于1996年最早研究了聚乙二醇偶聯重組人生長激素的方法和活性(Journal of Biological Chemistry,1996，271，21969-21977)。
[0005]王思勉在中國專利CN1253472C中，以一端為醛基的端甲氧基聚乙二醇與重組人生長激素中N端的α氨基共價鍵合，得到一種聚乙二醇重組人生長激素綴合物。吳自榮等人在中國專利CN1243022C中，將具有谷氨酰胺殘基的重組人生長激素和一端氨基化的單甲氧基聚乙二醇，在轉谷氨酰胺酶的催化下進行反應，在重組人生長激素谷氨酰胺殘基上形成酰胺鍵，從而獲得一種聚乙二醇修飾的重組人生長激素綴合物。CN101385858B，CN10149168 1B, CN1477126A, CN1565624A, CN10809038B 等均采用相似的方法制備聚乙二醇化的重組人生長激素。但是，根據Ross Clark等人的研究結果，并非所有的聚乙二醇化的重組人生長激素都保持原有的活性，某些甚至起到副作用，以至于無法應用。
[0006]藥物緩釋制劑是另一種有效保護蛋白類藥物在體內穩定長效作用的有效策略，主要包括脂質體(CN102188364A，CN101926770B),水凝膠(CN102989034A)和微囊(CN102302455B, CN102370630A)。美國 Genentech 公司于 2000 年推出了 PLGA 緩釋微球產品(Nutropin)。該劑型是將rhGH與二價鋅離子結合形成穩定的Zn_rhGH 二聚體復合物，并采用噴霧冷凍干燥法制得，肌肉注射后可緩釋2周至I個月。邱利炎等人在中國專利CN102302455B中，以聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物，聚乙二醇_聚乳酸羥基乳酸嵌段共聚物為高分子材料，通過油包油包水復乳的方法制備了一種包載水溶性藥物(包括重組人生長激素)的微囊。馬光輝等人在中國專利CN102370630A中，同樣以聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物，聚乙二醇-聚乳酸羥基乳酸嵌段共聚物為高分子材料，通過水包油包水復乳的方法制備了重組人生長激素緩釋藥物微囊。以上所述的各種聚合物，均為單臂聚乙二醇-聚酯類線性聚合物為載體材料。聚合物微囊具有類似脂質體的雙層結構，兩個嵌段共聚物分子成對地規則排列，微囊壁由疏水鏈呈規則聚集，且由分別向壁內和壁外伸展的親水鏈所穩定。聚合物微囊具有高度的穩定性，因而在藥物傳輸方面有著廣泛的應用。
[0007]但是，以單臂聚乙二醇-聚酯類線性聚合物為載體材料制備緩釋藥物微囊，組成上含有聚乙烯醇等乳化劑為輔料，制備方法上需要首先形成復乳，使得制備工藝復雜，穩定性弱，重復性差，生物利用度低。重組人生長激素緩釋藥物微囊中重組人生長激素含量低。尤其是包封率不高，Guanghui Ma等人報道的以單臂聚乙二醇-聚乳酸包載重組人生長激素的緩釋藥物微囊，其包封率在65%以下(Journal of Materials Chemistry, 2011, 21,12691)。

【發明內容】
[0008]為了解決已有技術存在的問題，本發明提供一種包載重組人生長激素緩釋藥物微囊。該包載重組人生長激素緩釋藥物微囊具有穩定性好，粒徑均一，包裹效率高，生物活性高，制備工藝簡單，重復性好的優點。
[0009]本發明提供的一種包載重組人生長激素的緩釋藥物微囊，其組成如下:多臂聚乙二醇-聚酯嵌段聚合物為載體，包載重組人生長激素；多臂聚乙二醇-聚酯嵌段聚合物載體與重組人生長激素的重量百分比為54-19%:46 — 81% ；
所述的多臂聚乙二醇-聚酯嵌段聚合物為多臂聚乙二醇-聚乳酸嵌段聚合物，或多臂聚乙二醇-聚己內酯嵌段聚合物；優選四臂聚乙二醇2__聚乳酸4_、四臂聚乙二醇2_-聚乳酸7_、四臂聚乙二醇2__聚乳酸1(1_、三臂聚乙二醇2__聚乳酸7_、六臂聚乙二醇2_-聚乳酸7_、八臂聚乙二醇2__聚乳酸7_。
[0010]本發明提供的包載重組人生長激素的緩釋藥物微囊的制備方法，包括以下步驟:
(I)所述的緩釋藥物微囊的制法如下:
聚合物空心微囊的制備:將多臂聚乙二醇-聚酯嵌段聚合物置于反應器中，配置成濃度為0.5-2mg/mL的氯仿溶液,攪拌8_10小時,使此溶液中的氯仿蒸發形成聚合物薄膜；進一步，將反應器置于旋轉蒸發器上，在室溫下，以0.09 MPa的真空度除凈氯仿；在持續攪拌條件下，向上述薄膜中加入去離子水，氯仿與去離子水體積比為1:1-4，多臂聚乙二醇-聚酯嵌段聚合物的質量mg與去離子水體積mL的比為1:2-2:1，繼續攪拌24小時，凍干，得到聚合物空心微囊的凍干粉；
(2)包載重組人生長激素的緩釋藥物微囊的制備:以pH=7.4的磷酸緩沖溶液配置濃度為1-5 mg/mL的重組人生長激素溶液；將聚合物空心微囊的凍干粉加入到反應器中，以0.5mL/min的速率向反應器中加入上述配置的重組人生長激素溶液，所述的聚合物空心微囊的凍干粉與重組人生長激素的重量比為1:1至1: 5，持續攪拌24小時，然后，以13000 r/min的速度，4°C條件下，離心除去沒有包載在聚合物微囊內的重組人生長激素，凍干，得到目標產物。
[0011]重組人生長激素緩釋藥物微囊制備過程中，重組人生長激素的包封率采用紫外分光光度法測量，并按照以下公式進行計算:
【權利要求】
1.一種包載重組人生長激素的緩釋藥物微囊，其特征在于，包載重組人生長激素的緩釋藥物微囊為多臂聚乙二醇-聚酯嵌段聚合物為載體，包載重組人生長激素；多臂聚乙二醇-聚酯嵌段聚合物載體與重組人生長激素的重量百分比為54-19%:46 - 81% ;所述的多臂聚乙二醇-聚酯嵌段聚合物為多臂聚乙二醇-聚乳酸嵌段聚合物，或多臂聚乙二醇-聚己內酯嵌段聚合物。
2.如權利要求1所述的一種包載重組人生長激素的緩釋藥物微囊，其特征在于，所述的多臂聚乙二醇-聚酯嵌段聚合物為四臂聚乙二醇2__聚乳酸4_嵌段聚合物；四臂聚乙二醇2__聚乳酸4_嵌段聚合物載體與重組人生長激素的重量百分比為5 4 %: 4 6 %。
3.如權利要求1所述的一種包載重組人生長激素的緩釋藥物微囊，其特征在于，所述的多臂聚乙二醇-聚酯嵌段聚合物為四臂聚乙二醇2__聚乳酸7_嵌段聚合物；四臂聚乙二醇2__聚乳酸7_嵌段聚合物載體與重組人生長激素的重量百分比為43%: 57%。
4.如權利要求1所述的一種包載重組人生長激素的緩釋藥物微囊，其特征在于，所述的多臂聚乙二醇- 聚酯嵌段聚合物為四臂聚乙二醇2__聚乳酸1(|_嵌段聚合物；四臂聚乙二醇2__聚乳酸1(1_嵌段聚合物載體與重組人生長激素的重量百分比為30%: 70%。
5.如權利要求1所述的一種包載重組人生長激素的緩釋藥物微囊，其特征在于，所述的多臂聚乙二醇-聚酯嵌段聚合物為三臂聚乙二醇2__聚乳酸7_ ;三臂聚乙二醇2_-聚乳酸7_載體與重組人生長激素的重量百分比為19%:81%。
6.如權利要求1所述的一種包載重組人生長激素的緩釋藥物微囊的制法，其特征在于，所述的多臂聚乙二醇-聚酯嵌段聚合物為六臂聚乙二醇2__聚乳酸7_嵌段聚合物；六臂聚乙二醇2__聚乳酸7_嵌段聚合物載體與重組人生長激素的重量百分比為28%: 72%。
7.如權利要求1所述的一種包載重組人生長激素的緩釋藥物微囊的制法，其特征在于，所述的多臂聚乙二醇-聚酯嵌段聚合物為八臂聚乙二醇2__聚乳酸7_嵌段聚合物；八臂聚乙二醇2__聚乳酸7_嵌段聚合物載體與重組人生長激素的重量百分比為27%: 73%。
8.如權利要求1所述的一種包載重組人生長激素的緩釋藥物微囊，其特征在于，所述的多臂聚乙二醇-聚酯嵌段聚合物為四臂聚乙二醇2_-聚己內酯7_嵌段聚合物；四臂聚乙二醇2_-聚己內酯7_嵌段聚合物載體與重組人生長激素的重量百分比為45%:55%。
【文檔編號】A61P15/08GK103976982SQ201410238630
【公開日】2014年8月13日 申請日期:2014年6月3日 優先權日:2014年6月3日
【發明者】楊秀云, 李文亮, 李云輝, 焦虎平, 李磊姣, 馬玉芹, 高瑩 申請人:長春理工大學