一種含有透明質酸的皮膚保濕劑的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種含有透明質酸的皮膚保濕劑。本發明的透明質酸收率高、透光率好，蛋白質含量低，葡萄糖醛酸含量高，易溶解，保濕效果好，制備的含有透明質酸的皮膚保濕劑對皮膚的滲透性好，能夠迅速有效的滋潤干燥皮膚，不粘膩。
【專利說明】一種含有透明質酸的皮膚保濕劑

【技術領域】
[0001]本發明涉及生物多糖提取及應用【技術領域】，特別是涉及一種含有透明質酸的皮膚保濕劑。

【背景技術】
[0002]皮膚在正常情況下，由于角質層的吸水作用和屏障功能，再加上汗腺及皮脂腺分泌的脂類物質的覆蓋作用，水分不易流失，角質層可以保持一定的含水量。引起角質層缺水而導致皮膚干燥的原因主要有兩個:一是氣候干燥，相對濕度低；二是皮膚正常的吸水作用和屏障功能愛到損害。引起后者的因素有皮膚的老化、環境和化學品的傷害、皮膚的病變以及干性皮膚的屬性。
[0003]為皮膚提供保濕是護膚化妝品的主要用途，防止皮膚缺水的方法一種是在皮膚表面形成能與水強烈結合的保水物質，使角質層保濕，另一種使用水不溶的物質，在皮膚表面形成一層潤滑膜，起封閉作用，防止水分蒸發，從而使角質層保持一定的含水量。在應用上前者稱為保濕劑，后者稱為潤膚劑或調理劑。
[0004]透明質酸，簡稱為HA，是由葡萄糖醛酸和乙酰氨基葡萄糖通過β-(I — 3)和β-α — 4)糖苷鍵連接而成的酸性粘多糖。其具有高保濕性、粘彈性和生物相容性等優良性質，尤其是具有獨特的保濕性能，目前已經被廣泛應用于醫藥、日化、食品等領域，是國內外生物化工界熱點產品之一。
[0005]國內目前有十幾家透明質酸的生產廠家，且這些企業大多數是用動物組織提取法。但由于原料有限，且原料中H A的含量低，同時H A又還與硫酸軟骨素等粘多糖共存于生物組織中，致使其收率低、提純難、成本過高、產品質量差，且難以應用于大規模生產。隨著H A需求量的不斷增大，迫切要求生產大量的高質量H Α，動物組織提取法己不能適應這種要求。目前還有微生物發酵法生產透明質酸采用的工藝發酵周期長、產物相對分子量低、產品透光率差、蛋白質含量高、葡萄糖醛酸含量低。有的透明質酸的形態為纖維狀，不易溶解。很難達到應用于化妝品領域的標準。


【發明內容】

[0006]本發明的目的就是針對上述存在的缺陷而提供一種含有透明質酸的皮膚保濕劑。本發明的透明質酸收率高、透光率好，蛋白質含量低，葡萄糖醛酸含量高，易溶解，保濕效果好，制備的含有透明質酸的皮膚保濕劑對皮膚的滲透性好，能夠迅速有效的滋潤干燥皮膚，不粘膩。
[0007]本發明的一種含有透明質酸的皮膚保濕劑技術方案為，該保濕劑含有透明質酸，所述透明質酸采用獸疫鏈球菌{Streptococcus zooepi demi cus) AffAO O 8發酵制備,獸疫鏈球菌{Streptococcus zooep1feffiiciAsOAWAOOS在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏編號是:CGMCCN0.9111，保藏日期是2014年04月29日。
[0008]目前該獸疫鏈球菌在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，地址:北京市朝陽區北辰西路I號院3號，郵編:100101，其保藏編號是:CGMCCN0.9111，菌種的拉丁文名稱是Streptococcus zooepidemicus,參據的微生物(株):AWA008,保藏日期是2014年04月29日。
[0009]本發明所述的獸疫鏈球菌菌株特征:呈球形或卵圓形，呈鏈狀排列，有莢膜，無芽孢，無鞭毛，革蘭氏染色陽性。
[0010]所述的一種含有透明質酸的皮膚保濕劑，包括按重量比的以下成分:透明質酸
0.5-2%，甘油2-3%，三乙醇胺0.1-1%，羥乙基纖維素0.5-1.5%，甲基葡萄糖1_2%，香料
0.001-0.3%,余量為去尚子水。
[0011]所述的一種含有透明質酸的皮膚保濕劑，進一步的，包括按重量比的以下成分:透明質酸1.0-1.5%，甘油2-2.5%，三乙醇胺0.3-0.8%，羥乙基纖維素1.0-1.3%，甲基葡萄糖
1.2-1.6%，香料0.005-0.1%，余量為去離子水。
[0012]所述的一種含有透明質酸的皮膚保濕劑，優選的，包括按重量比的以下成分:透明質酸1.3%，甘油2.2%，三乙醇胺0.5%，羥乙基纖維素1.1%，甲基葡萄糖1.4%，香料0.01%,余量為去離子水。
[0013]所述透明質酸采用獸疫鏈球菌發酵制備包括以下步驟:
(O搖瓶種子液培養:將斜面菌種接種于裝有滅菌培養液的IL錐形瓶中，37°C培養12-16小時，鏡檢觀察菌體生長良好，無雜菌污染，即可接種于種子罐中；
(2)菌種擴配:將培養液加入到種子罐中，進行蒸汽滅菌后，設定溫度36.3°C、pH6.86，按無菌要求在種子罐里加入菌種，維持罐壓0.05MPa,培養12-16小時，鏡檢觀察菌體生長良好，無雜菌污染，即可接種于發酵罐中；
(3)發酵:將一半發酵培養液加入到發酵罐中，進行蒸汽滅菌后，設定溫度36.3°C、pH6.86，維持罐壓0.05MP，將種子罐的培養基全部壓入到發酵罐中，記錄pH值，在pH下降時加入另一半發酵培養液，保持各項指標，發酵液PH每分鐘下降幅度小于0.01時結束發酵，檢測發酵液粘度，將發酵液壓入沉淀罐中；
(4)前沉淀:向沉淀罐里在攪拌情況下緩緩地加入95%的酒精，至產生雪花狀沉淀，控制在47-50度(折至20°C時的酒精度)，收集沉淀物；
(5)溶解:用氯化鈉溶液將沉淀物溶解，調節pH至9.3-9.5，加入EDTA、活性炭、珍珠巖，攪拌均勻；
(6)過濾:將溶解后的料液壓入1#大板框過濾一遍后，過濾液調pH9.3-9.5。再加入白硅藻土和珍珠巖后，攪拌均勻后，壓入2#大板框過濾第二遍。二遍過濾液中加入硅藻土，攪拌均勻后，料液通過不銹鋼板打循環澄清后，過濾第三遍，澄清度在99.5%以上，然后過濾液通過聚丙烯濾芯過濾至潔凈間沉淀罐；
(7)后沉淀:料液調pH至7.0-7.3，攪拌下緩緩地加入95%酒精至沉淀產生，控制酒精度數47-50度即可。靜止20-40分鐘后將上清液打入廢酒精罐；
(8)脫水離心:用75%-80%的pH值在7.0-7.3之間的酒精脫水6_7次，然后再用90%的酒精脫水2-3次，脫水后酒精度數到90%以上，靜止I小時左右，打走上清液，取樣測pH值，并控制在7.0-7.3之間。攪拌15-20分鐘后離心；
(9)干燥:將離心好的物料放入干燥罐，設定溫度30°C，抽真空干燥3小時后，每小時升溫5°C，設溫60°C時停止，檢測水分，水分小于7%后出罐。
[0014]步驟(1)、(2)、(3)中的培養液包括按重量百分比的葡萄糖3-5%、酵母粉1.5-2%,七水硫酸鎂1_2%、四水硫酸錳0.01-0.1%、磷酸二氫鉀0.1-0.5%、磷酸氫二鈉0.5-0.8%、碳酸鈣0.1-1%、氯化鋅0.05-0.1%，余量為水。
[0015]步驟②氯化鈉溶液濃度為1_5%。
[0016]步驟②中，加入EDTA、活性炭、珍珠巖質量比為，1: 10-15: 20-30。
[0017]優選的,加入EDTA、活性炭、珍珠巖質量比為，1:11: 25。
[0018]步驟③中，白硅藻土和珍珠巖的質量比為1:1-10。
[0019]優選的，白硅藻土和珍珠巖的質量比為1:1.5。
[0020]步驟(6)中過濾液通過0.22微米聚丙烯濾芯過濾至潔凈間沉淀罐。
[0021]本發明的有益效果為:本發明的含有透明質酸的皮膚保濕劑對皮膚的滲透性好，能夠迅速有效的滋潤干燥皮膚，不粘膩。本發明中含有的天透明質酸保持水分的能力強。具有高度生物兼容性，與其他成分配合，具有保濕、柔膚、抗皺、增白、清爽的功效。本發明產品手感特別滑爽能快速滲透進入皮膚組織，使皮膚具有光澤和清爽濕潤效果。皮膚的滲透快速，賦予皮膚滋潤感。本發明產品能迅速改善肌膚的水分保持力，激發細胞的活力，具有保持肌膚滋潤，光滑，防止皮膚干燥和發暗的效果。
[0022]本發明采用復合誘變技術篩選出透明質酸產率高的菌種，結合發酵技術，透明質酸產品產出率高，可達7-9g/L。發酵得到的透明質酸易于分離純化，生產周期短。采用添加活性炭、珍珠巖、白硅藻土、EDTA結合大板框過濾技術去除透明質酸中的雜質，添加劑常見易得，操作相對簡單，雜質含量更低。使用75-80%酒精對物料進行了 6-7次脫水，90%酒精對物料進行2-3次脫水。這樣逐步脫水不但減少了透明質酸中的水分，易于干燥，而且洗去了物料中殘留的少量雜質，蛋白質含量更低，產品純度高。使用酒精多次脫水達到90%以上時后，可得粉末狀無定型沉淀，干燥后產品溶解性好，堆積密度適中。透明質酸產品質量符合化妝品領域的標準。
[0023]【具體實施方式】:
為了更好地理解本發明，下面用具體實例來詳細說明本發明的技術方案，但是本發明并不局限于此。
[0024]實施例1
本發明的一種含有透明質酸的皮膚保濕劑技術方案為，一種獸疫鏈球菌{Streptococcus zooepi demi cus ) AWA008,其在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，其保藏編號是:CGMCCN0.9111，保藏日期是2014年04月29日。
[0025]目前該獸疫鏈球菌在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，地址:北京市朝陽區北辰西路I號院3號，郵編:100101，其保藏編號是:CGMCCN0.9111，菌種的拉丁文名稱是Streptococcus zooepidemicus,參據的微生物(株):AWA008,保藏日期是2014年04月29日。
[0026]本發明所述的獸疫鏈球菌菌株特征:呈球形或卵圓形，呈鏈狀排列，有莢膜，無芽孢，無鞭毛，革蘭氏染色陽性。
[0027]所述的獸疫鏈球菌制備透明質酸的生產工藝，包括以下步驟:
(O搖瓶種子液培養:將斜面菌種接種于裝有滅菌培養液的IL錐形瓶中，37°C培養12-16小時，鏡檢觀察菌體生長良好，無雜菌污染，即可接種于種子罐中；(2)菌種擴配:將培養液加入到種子罐中，進行蒸汽滅菌后，設定溫度36.3°C、pH6.86，按無菌要求在種子罐里加入菌種，維持罐壓0.05MPa,培養12-16小時，鏡檢觀察菌體生長良好，無雜菌污染，即可接種于發酵罐中；
(3)發酵:將一半發酵培養液加入到發酵罐中，進行蒸汽滅菌后，設定溫度36.3°C、pH6.86，維持罐壓0.05MP,將種子罐的培養基全部壓入到發酵罐中，記錄pH值，在pH下降時加入另一半發酵培養液，保持各項指標，發酵液PH每分鐘下降幅度小于0.01時結束發酵，檢測發酵液粘度，將發酵液壓入沉淀罐中；
(4)前沉淀:向沉淀罐里在攪拌情況下緩緩地加入95%的酒精，至產生雪花狀沉淀，控制在47-50度(折至20°C時的酒精度)，收集沉淀物；
(5)溶解:用氯化鈉溶液將沉淀物溶解，調節pH至9.3-9.5，加入EDTA、活性炭、珍珠巖，攪拌均勻；
(6)過濾:將溶解后的料液壓入1#大板框過濾一遍后，過濾液調pH9.3-9.5。再加入白硅藻土和珍珠巖后，攪拌均勻后，壓入2#大板框過濾第二遍。二遍過濾液中加入硅藻土，攪拌均勻后，料液通過不銹鋼板打循環澄清后，過濾第三遍，澄清度在99.5%以上，然后過濾液通過聚丙烯濾芯過濾至潔凈間沉淀罐；
(7)后沉淀:料液調pH至7.0-7.3，攪拌下緩緩地加入95%酒精至沉淀產生，控制酒精度數47-50度即可。靜止20-40分鐘后將上清液打入廢酒精罐；
(8)脫水離心:用75%-80%的pH值在7.0-7.3之間的酒精脫水6_7次，然后再用90%的酒精脫水2-3次，脫水后酒精度數到90%以上，靜止I小時左右，打走上清液，取樣測pH值，并控制在7.0-7.3之間。攪拌15-20分鐘后離心；
(9)干燥:將離心好的物料放入干燥罐，設定溫度30°C，抽真空干燥3小時后，每小時升溫5°C，設溫60°C時停止，檢測水分，水分小于7%后出罐。
[0028]步驟(1)、(2)、(3)中的培養液包括按重量百分比的葡萄糖3%、酵母粉1.5%、七水硫酸鎂1%、四水硫酸錳0.05%、磷酸二氫鉀0.3%、磷酸氫二鈉0.8%、碳酸鈣0.2%、氯化鋅
0.08%，余量為水。
[0029]步驟(5)氯化鈉溶液濃度為3%。
[0030]步驟(5)中，加入EDTA、活性炭、珍珠巖質量比為，1:11: 25。
[0031]步驟(6)中，白硅藻土和珍珠巖的質量比為1:1.5。
[0032]步驟(6)中過濾液通過0.22微米聚丙烯濾芯過濾至潔凈間沉淀罐。
[0033]1.本發明采用復合誘變技術篩選出透明質酸產率高的菌種，結合發酵技術，透明質酸產品產率達9g/L。發酵得到的透明質酸易于分離純化，生產周期短。
[0034]2.本發明采用添加活性炭、珍珠巖、白硅藻土、EDTA結合大板框過濾技術去除透明質酸中的雜質，添加劑常見易得，操作相對簡單，雜質含量更低(蛋白質< 0.1%、重金屬
20ppm、砷鹽< 2ppm)。
[0035]3.本發明使用75-80%酒精對物料進行了 6_7次脫水，90%酒精對物料進行2_3次脫水。這樣逐步脫水不但減少了透明質酸中的水分，易于干燥，而且洗去了物料中殘留的少量雜質，蛋白質含量更低，產品純度高，能達到99.0%以上。
[0036]4.本發明使用酒精多次脫水達到90%以上時后，可得粉末狀無定型沉淀，干燥后產品溶解性好，溶解速度快，降解慢，堆積密度適中(堆積密度0.4~0.6g/ml)。
[0037]5.本發明生產工藝簡單，原輔料常見易得，生產易于控制，雜質含量更低，適合工業化大規模生產，收率高，并且大大降低了生產成本。
[0038]實施例2
本發明的一種含有透明質酸的皮膚保濕劑，含有的透明質酸為實施例1制備的透明質酸，具體包括按重量比的以下成分:
透明質酸1.3%，甘油2.2%，三乙醇胺0.5%，羥乙基纖維素1.1%，甲基葡萄糖1.4%，香料
0.01%,余量為去尚子水。
[0039]本發明的含有透明質酸的皮膚保濕劑對皮膚的滲透性好，能夠迅速有效的滋潤干燥皮膚，不粘膩。本發明中含有的天透明質酸保持水分的能力強。具有高度生物兼容性，與其他成分配合，具有保濕、柔膚、抗皺、增白、清爽的功效。本發明產品手感特別滑爽能快速滲透進入皮膚組織，使皮膚具有光澤和清爽濕潤效果。皮膚的滲透快速，賦予皮膚滋潤感。本發明產品能迅速改善肌膚的水分保持力，激發細胞的活力，具有保持肌膚滋潤，光滑，防止皮膚干燥和發暗的效果。
[0040]實施例3
本發明的一種含有透明質酸的皮膚保濕劑，含有的透明質酸為實施例1制備的透明質酸，具體包括按重量比的以下成分:
透明質酸1.5%，甘油2%，三乙醇胺0.8%，羥乙基纖維素1.0%，甲基葡萄糖1.2%，香料 0.1%，余量為去尚子水。
[0041]本發明的含有透明質酸的皮膚保濕劑對皮膚的滲透性好，能夠迅速有效的滋潤干燥皮膚，不粘膩。本發明中含有的天透明質酸保持水分的能力強。具有高度生物兼容性，與其他成分配合，具有保濕、柔膚、抗皺、增白、清爽的功效。本發明產品手感特別滑爽能快速滲透進入皮膚組織，使皮膚具有光澤和清爽濕潤效果。皮膚的滲透快速，賦予皮膚滋潤感。本發明產品能迅速改善肌膚的水分保持力，激發細胞的活力，具有保持肌膚滋潤，光滑，防止皮膚干燥和發暗的效果。
【權利要求】
1.一種含有透明質酸的皮膚保濕劑，其特征在于，該保濕劑含有透明質酸，所述透明質酸采用獸疫鏈球菌^Streptococcus zooepidemicus) AffAOO8發酵制備，獸疫鏈球菌{Streptococcus zooepi demi cus ) AffAO O 8 保藏編號是:CGMCCN0.9111,保藏日期是 2014 年04月29日。
2.根據權利要求1所述的一種含有透明質酸的皮膚保濕劑，其特征在于，包括按重量比的以下成分:透明質酸0.5-2%，甘油2-3%，三乙醇胺0.1-1%，羥乙基纖維素0.5-1.5%，甲基葡萄糖1_2%，香料0.001-0.3%，余量為去離子水。
3.根據權利要求2所述的一種含有透明質酸的皮膚保濕劑，其特征在于，包括按重量比的以下成分:透明質酸1.0-1.5%，甘油2-2.5%，三乙醇胺0.3-0.8%，羥乙基纖維素1.0-1.3%，甲基葡萄糖1.2-1.6%，香料0.005-0.1%，余量為去離子水。
4.根據權利要求2所述的一種含有透明質酸的皮膚保濕劑，其特征在于，包括按重量比的以下成分:透明質酸1.3%，甘油2.2%，三乙醇胺0.5%，羥乙基纖維素1.1%，甲基葡萄糖1.4%，香料0.01%，余量為去離子水。
5.根據權利要求1所述的一種含有透明質酸的皮膚保濕劑，其特征在于，所述透明質酸采用獸疫鏈球菌發酵制備包括以下步驟: (O搖瓶種子液培養:將斜面菌種接種于裝有滅菌培養液的IL錐形瓶中，37°C培養12-16小時，鏡檢觀察菌體生長良好，無雜菌污染，即可接種于種子罐中； (2)菌種擴配:將培養液加入到種子罐中，進行蒸汽滅菌后，設定溫度36.3°C、pH6.86，按無菌要求在種子罐里加入菌種，維持罐壓0.05MPa，培養12-16小時，鏡檢觀察菌體生長良好，無雜菌污染，即可接種于發酵罐中； (3)發酵:將一半發酵培養液加入到發酵罐中，進行蒸汽滅菌后，設定溫度36.3°C、pH6.86，維持罐壓0.05MP，將種子罐的培養基全部壓入到發酵罐中，記錄pH值，在pH下降時加入另一半發酵培養液，保持各項指標，發酵液PH每分鐘下降幅度小于0.01時結束發酵，檢測發酵液粘度，將發酵液壓入沉淀罐中； (4)前沉淀:向沉淀罐里在攪拌情況下緩緩地加入95%的酒精，至產生雪花狀沉淀，控制在47-50度，收集沉淀物； (5)溶解:用氯化鈉溶液將沉淀物溶解，調節pH至9.3-9.5，加入EDTA、活性炭、珍珠巖，攪拌均勻； (6)過濾:將溶解后的料液壓入1#大板框過濾一遍后，過濾液調pH9.3-9.5 ； 再加入白硅藻土和珍珠巖后，攪拌均勻后，壓入2#大板框過濾第二遍； 二遍過濾液中加入硅藻土，攪拌均勻后，料液通過不銹鋼板打循環澄清后，過濾第三遍，澄清度在99.5%以上，然后過濾液通過聚丙烯濾芯過濾至潔凈間沉淀罐； (7)后沉淀:料液調pH至7.0-7.3，攪拌下緩緩地加入95%酒精至沉淀產生，控制酒精度數47-50度即可； 靜止20-40分鐘后將上清液打入廢酒精罐； (8)脫水離心:用75%-80%的pH值在7.0-7.3之間的酒精脫水6_7次，然后再用90%的酒精脫水2-3次，脫水后酒精度數到90%以上，靜止I小時左右，打走上清液，取樣測pH值，并控制在7.0-7.3之間； 攪拌15-20分鐘后離心；(9)干燥:將離心好的物料放入干燥罐，設定溫度30°C，抽真空干燥3小時后，每小時升溫5°C，設溫60°C時停止，檢測水分，水分小于7%后出罐。
6.根據權利要求5所述的一種含有透明質酸的皮膚保濕劑，其特征在于，步驟(1)、(2)、(3)中的培養液包括按重量百分比的葡萄糖3-5%、酵母粉1.5-2%、七水硫酸鎂1-2%、四水硫酸錳0.01-0.1%、磷酸二氫鉀0.1-0.5%、磷酸氫二鈉0.5-0.8%、碳酸鈣0.1_1%、氯化鋅0.05-0.1%，余量為水。
7.根據權利要求5所述的一種含有透明質酸的皮膚保濕劑，其特征在于，步驟(5)中，加入EDTA、活性炭、珍珠巖質量比為，1: 10-15: 20-30。
8.根據權利要求5所述的一種含有透明質酸的皮膚保濕劑，其特征在于，步驟(6)中，白硅藻土和珍珠巖的質量比 為1:1-10。
【文檔編號】A61K8/73GK104069020SQ201410257195
【公開日】2014年10月1日 申請日期:2014年6月11日 優先權日:2014年6月11日
【發明者】韓秀云 申請人:濱州安華生物工程有限公司