本發明涉及包含與褪黑激素聯合的至少一種天然或合成來源的類黃酮的組合物，其用于提高人和獸醫學中用于治療腫瘤、特別是用于治療對目前使用的化療劑有抗性的腫瘤的化療治療的有效性；所述至少一種類黃酮選自包含蘆丁、羥乙基蘆丁(oxerutin)、地奧司明和橙皮苷的組或者選自由它們組成的組，優選蘆丁。

發明背景

目前，腫瘤細胞對化療治療的抗性代表了巨大比例的、連續演化的問題。抗藥性自身在實體瘤和淋巴系統腫瘤中都表現出來，并且可以從治療的開始就出現，或者在對治療產生初始正面反應之后出現。例如，很多時候，化療耐藥性自身在對復發性腫瘤的治療期間表現出來。更嚴重的問題是多重化學抗性，即在用給定化療劑治療后出現對其它化療劑的抗性。

關于化學抗性(其本身在最初響應于化療治療的大多數腫瘤中表現出來)的起源的最可信的假說表示：抗藥性緣于腫瘤細胞水平上的一系列突變，即腫瘤細胞“學習”代謝化療劑、修復化療誘導的DNA損傷和防止化療誘導的細胞凋亡的能力。

一種試圖克服化學抗性問題的方法是組合不同類型的化療劑的療法：然而，在這種情況下，結果也不令人滿意，并且實際上對于各種化療劑的多重耐藥性以越來越高和令人警示的頻率出現。盡管在研究和持續開發新藥以及組合應用，但考慮到癌細胞的易適應性質，化學抗性的問題仍然存在并且顯然是不可避免的[Fojo T.和Bates S.,Cancer Discov；3(1)；20-3,2012]。

因此，亟需克服該問題。

類黃酮是多酚化合物，植物的次生代謝產物。它們通常作為糖苷存在于植物中，并且在同一植物中，糖苷配基可以與不同的糖組合存在。優選地，本發明的類黃酮選自包含蘆丁、羥乙基蘆丁、地奧司明和橙皮苷的組或者選自由它們組成的組。

已證明羥乙基蘆丁可用于促進彈性和降低毛細血管通透性，從而有利于微循環的生理學改善和減少水腫的形成。

橙皮苷是糖基化的黃烷酮，是一種尤其是在柑橘類果實中發現的類黃酮。其在這種果實的果皮和果肉中特別豐富。其糖苷配基稱為橙皮素。橙皮苷已證明是有效的血管保護劑，并提高膠原和結締組織的效率。

地奧司明是半合成分子(從橙皮苷分子開始進行修飾而得到)，屬于類黃酮家族。其是一種靜脈血趨向性(phlebotropic drug)藥物，在顯示出血管結構缺陷(例如慢性靜脈功能不全以及急性和慢性痔瘡疾病)的所有病理學中用作血管保護劑，并在痔切除術后作為輔助療法。

蘆丁的化學名稱為2-(3,4-二羥基苯基)-4,5-二羥基-3-{3,4,5-三羥基-6-[(3,4,5-三羥基-6-甲基-四氫吡喃-2-基)氧基甲基}四氫吡喃-2-基]氧基-色烯-7-酮，是由結合到二糖蘆丁糖上的糖苷配基槲皮素(黃酮醇)構成的類黃酮糖苷。

蘆丁(通常也稱為蕓香苷)在自然界中存在于許多植物中，特別是在柑橘(Citrus)和大黃(Rheum)(生大黃)屬的植物、蕎麥、紅酒、蘆筍、胡椒薄荷、桉樹和許多漿果(例如酸果蔓(大果越桔(Vaccinium macrocarpon))和桑椹)中。

蘆丁對毛細血管壁的增強作用以及更普遍的對微循環的有益作用被用于治療痔瘡和血腫。

最近的研究突出顯示了蘆丁的藥理學性質，特別是其對血小板的抗聚集活性[Navarro-等(2008)；J.Agric.Food Chem.56(9):2970-6]；其抗炎活性[Guardia等(2001)；II Farmaco 56(9):683-7；Chan Hun Jung等(2007)；Arch.Pharmacal Research 30(12):1599-1607]；和抗氧化活性[Metodiewa等(1997)；IUBMB Life 41(5)；1067]。

體外研究已經證明蘆丁能夠抑制血管內皮生長因子，因而充當血管生成抑制劑[Luo等(2008)；Nutrition and Cancer 60(6)；800-9]。

近來，Boutogaa等[Leukemia Research 35(2011)1093-1101]描述了含有蘆丁的巖漠野甘草(Hammada scoparia)提取物能夠誘導粘附性白血病細胞的凋亡。EP 2 119 434描述了蘆丁用于治療急性骨髓性白血病、預防腫瘤復發和/或預防實體瘤轉移發生的用途。沒有報道蘆薈對于對化療劑有抗性的腫瘤細胞的作用。

WO 200178783描述了包含槲皮素和許多藥用植物的提取物的抗腫瘤組合物，但沒有提及針對化學抗性細胞的活性。

具體實施方式

實際上已經發現，在褪黑激素的存在下，選自包含蘆丁、羥乙基蘆丁、地奧司明和橙皮苷的組或者選自由它們組成的組的化合物重建了抗性腫瘤細胞系、優選女性乳腺癌細胞系對化療治療的敏感性。

因此，本發明涉及用于治療對化療有抗性的腫瘤、優選實體瘤和女性乳腺癌的組合物，其包含一種混合物，所述混合物包含以下物質或者由以下物質組成：(i)至少一種類黃酮，其選自包含蘆丁、羥乙基蘆丁、地奧司明和橙皮苷的組或者選自由它們組成的組；和(ii)褪黑激素。有利地，所述混合物包含蘆丁和褪黑激素或者由它們組成。

本發明還涉及一種組合物，其用作用于治療對化療有抗性的腫瘤的化療劑的佐劑，即，提高人和獸醫學中用于治療腫瘤、優選實體瘤的化療治療的有效性，特別是在對目前使用的化療劑有抗性的情況下；所述組合物包含一種混合物，所述混合物包含以下物質或者由以下物質組成：(i)至少一種類黃酮，其選自包含蘆丁、羥乙基蘆丁、地奧司明和橙皮苷的組或者選自由它們組成的組；和(ii)褪黑激素。有利地，使用所述組合物作為佐劑能夠減少待施用的化療劑的使用劑量和每日劑量。

本發明還涉及至少一種類黃酮和褪黑激素的聯合，所述類黃酮選自包含蘆丁、羥乙基蘆丁、地奧司明和橙皮苷的組或者選自由它們組成的組，所述聯合的形式也適于單獨或相繼施用蘆丁和褪黑激素。

本發明還涉及一種用于治療化學抗性腫瘤的組合物，其包含一種混合物，所述混合物包含以下物質或者由以下物質組成：(i)至少一種類黃酮，其選自包含蘆丁、羥乙基蘆丁、地奧司明和橙皮苷的組或者選自由它們組成的組；(ii)褪黑激素；(iii)化療劑；和/或(iv)選自包含牛蒡苷元、牛蒡子苷、小檗堿、小檗胺、血根堿、白屈菜赤堿和鉤果草(Harpagophytum procumbens)(南非鉤麻，其抑制PGE2的合成)的組或者選自由它們組成的組的至少一種化合物，這些化合物如上所述，或者為含有所述化合物的植物提取物的形式。所述組合物還用于提高在人和獸醫學中用于治療腫瘤、優選實體瘤的化療治療的有效性，特別是在對目前使用的化療劑有抗性的情況下。

本發明還涉及至少一種類黃酮、褪黑激素和化療劑的聯合，所述類黃酮選自包含蘆丁、羥乙基蘆丁、地奧司明和橙皮苷的組或者選自由它們組成的組，所述聯合的形式適于單獨或相繼施用類黃酮、褪黑激素和化療劑。

選自包含蘆丁、羥乙基蘆丁、地奧司明和橙皮苷的組或者選自由它們組成的組的所述至少一種類黃酮可根據本發明與褪黑激素和所有已知化療劑聯合，特別用于治療實體瘤，所述化療劑在化療方案中單獨或聯合使用。這種化療劑的實例包括環磷酰胺、5-氟尿嘧啶、甲氨蝶呤、鉑絡合物(順鉑、奧沙利鉑、卡鉑等)、紫杉烷、多柔比星、表柔比星和米托蒽醌，或者由它們組成。在一個實施方式中，選自包含蘆丁、羥乙基蘆丁、地奧司明和橙皮苷的組或者選自由它們組成的組的至少一種化合物與褪黑激素和化療劑(其包含環磷酰胺或由環磷酰胺組成)聯合以恢復或提高抗性腫瘤細胞系對化療治療的敏感性，或用于治療腫瘤，優選用于治療實體瘤。

根據優選的實施方式，選自包含蘆丁、羥乙基蘆丁、地奧司明和橙皮苷的組或者選自由它們組成的組的至少一種化合物與褪黑激素、環磷酰胺和甲氨蝶呤聯合使用，以恢復或提高抗性腫瘤細胞系對化療治療的敏感性，或用于治療腫瘤、優選用于治療實體瘤。優選地，蘆丁與褪黑激素、環磷酰胺和甲氨蝶呤聯合使用。

實體瘤由緊密的組織塊組成，其生長并且與由懸浮的細胞組成的液體腫瘤不同。實體瘤具有類似于健康組織的特定結構，并且包含兩個相互依賴的部分：實質和間質。在一些實體瘤(包括源自上皮細胞的那些實體瘤)中，存在將腫瘤細胞塊與間質分開的基底層；然而，這種基底層常常是不完整的。雖然實體瘤代表了大多數的人類腫瘤，但是對于表征它們的遺傳和染色體突變了解甚少；首先是因為從惡性腫瘤組織獲得令人滿意的染色體制備物是非常困難的，其次是因為這些腫瘤細胞的核型常常表現出大量奇怪的染色體。這使得在腫瘤表型發生完全演化時，難以區分原發性遺傳變化與后來出現的遺傳變化。然而，盡管存在這些困難，細胞培養、染色體顯帶和雜交的新技術(例如CGH(比較基因組雜交)、FISH(熒光原位雜交)和SKY(光譜核型分析))已經促進了對實體瘤中遇到的細胞遺傳異常的分子表征的顯著增加。這些技術已經揭示了腫瘤細胞中的大量染色體重排以及特異性染色體改變與特定類型的實體瘤(尤其是間充質腫瘤)之間的密切關聯。即使我們的知識仍然有限，但許多所涉及的基因已被克隆和分析。腫瘤細胞分為良性和惡性；根據原始組織，將這兩種類型的細胞進一步分成間充質、上皮、神經系統、胚胎和生殖腫瘤細胞。除了這些腫瘤，還存在未知細胞學起源的那些腫瘤。

根據本發明的另一方面，本發明涉及一種組合物，其包含：(i)選自包含蘆丁、羥乙基蘆丁、地奧司明和橙皮苷的組或者選自由它們組成的組的至少一種類黃酮；(ii)褪黑激素；和(iii)選自包含環磷酰胺、5-氟尿嘧啶、甲氨蝶呤、鉑絡合物(順鉑、奧沙利鉑、卡鉑等)、紫杉烷、多柔比星、表柔比星和米托蒽醌的組或者選自由它們組成的組的至少一種化療劑；和/或(iv)選自小檗科、罌粟科的至少一種生物堿和來自菊科的木酚素。

根據本發明的另一方面，本發明涉及一種組合物，其包含與褪黑激素和至少一種化合物聯合的至少一種類黃酮，所述類黃酮優選地選自包含蘆丁、羥乙基蘆丁、地奧司明和橙皮苷的組或者選自由它們組成的組，所述化合物選自小檗科、罌粟科和菊科的木酚素。

根據本發明的一個方面，本發明涉及含有以下物質的聯合或者由該聯合組成的組合物：小檗科和/或罌粟科的生物堿，菊科的木酚素，以及一種選自包含羥乙基蘆丁、地奧司明、橙皮苷和蘆丁的組或者選自由它們組成的組的化合物；或者，本發明涉及包含以下物質的聯合或者由該聯合組成的組合物：小檗科和/或罌粟科的生物堿，菊科的木酚素，一種選自包含羥乙基蘆丁、地奧司明、橙皮苷和蘆丁的組或者選自由它們組成的組的化合物，以及一種選自包含天然或合成物質或者由這些物質組成的組的化合物，這些天然或合成物質選自包含芹菜素、蘆筍(熊果酸)、姜黃素、番茄紅素、紅辣椒(辣椒辣素)、白藜蘆醇、綠茶(山茶苷B)和鉤藤屬物種(Uncaria sspp.)的組或者選自由它們組成的組；和/或褪黑激素；優選褪黑激素。

具體而言，本發明的組合物優選地含有木酚素牛蒡苷元和/或牛蒡苷，生物堿小檗堿、和/或小檗胺、和/或血根堿、和/或白屈菜赤堿，和/或一種選自包含羥乙基蘆丁、地奧司明、橙皮苷和蘆丁的組或者由它們組成的組的化合物；或者，本發明的組合物優選地含有木酚素牛蒡苷元和/或牛蒡苷，生物堿小檗堿、和/或小檗胺、和/或血根堿、和/或白屈菜赤堿，和/或一種選自包含羥乙基蘆丁、地奧司明、橙皮苷和蘆丁的組或者由它們組成的組的化合物，以及一種選自包含天然或合成物質或者由其組成的組的化合物，這些物質選自包含芹菜素、蘆筍(熊果酸)、姜黃素、番茄紅素、紅辣椒(辣椒辣素)、白藜蘆醇、綠茶(山茶苷B)和鉤藤屬物種或者由它們組成的組；和/或褪黑激素；優選褪黑激素。

根據本發明的另一方面，本發明涉及包含以下物質或由以下物質組成的組合物：(i)至少一種類黃酮，其優選選自包含蘆丁、羥乙基蘆丁、地奧司明和橙皮苷的組或者選自由它們組成的組；(ii)褪黑激素；和/或(iv)至少一種生物堿，其選自包含牛蒡苷元、牛蒡苷、小檗堿、小檗胺、血根堿、白屈菜赤堿和鉤果草(南非鉤麻，其抑制PGE2的合成)的組或者選自由它們組成的組，這些化合物如上所述，或者是含有所述化合物的植物提取物的形式。

根據另一實施方式，本發明涉及包含以下物質或由以下物質組成的組合物：(i)至少一種類黃酮，其優選選自包含蘆丁、羥乙基蘆丁、地奧司明和橙皮苷的組或者選自由它們組成的組；(ii)褪黑激素；(iii)至少一種化療劑，其選自包含環磷酰胺、5-氟尿嘧啶、甲氨蝶呤、鉑絡合物(順鉑、奧沙利鉑、卡鉑等)、紫杉烷、多柔比星、表柔比星和米托蒽醌的組或者選自由它們組成的組；以及(iv)至少一種生物堿，其選自包含牛蒡苷元、牛蒡苷、小檗堿、小檗胺、血根堿、白屈菜赤堿和鉤果草(南非鉤麻，其抑制PGE2的合成)的組或者選自由它們組成的組，這些化合物如上所述，或者是含有所述化合物的植物提取物的形式。優選地，所述組合物包含蘆丁、褪黑激素、環磷酰胺、甲氨蝶呤、牛蒡苷元、牛蒡苷、小檗堿、小檗胺、血根堿和白屈菜赤堿。

優選地，本發明的組合物還包含至少一種選自包含芹菜素、蘆筍(熊果酸)、姜黃素、番茄紅素、紅辣椒(辣椒辣素)、白藜蘆醇、綠茶(山茶苷B)和鉤藤屬物種或者由它們組成的組的化合物。

本發明的組合物特別可用于預防和/或治療瘤形成和用于預防/抑制對增殖抑制劑(antiblastics)的化學抗性和/或對放射療法的放射抗性。

本發明的組合物特別可用作用于治療對化療有抗性的腫瘤、優選實體瘤的化療劑的佐劑。

本發明的組合物特別可用于提高人和獸醫學中用于治療腫瘤的化療治療的有效性，特別是在對目前使用的化療劑有抗性的情況下。

申請人驚奇地發現，本發明的組合物顯著降低了化學抗性人腫瘤細胞的細胞活力。具體而言，褪黑激素的強抗炎活性增強了本發明的類黃酮、類黃酮和提取物的聯合以及類黃酮和化療劑的聯合的抗腫瘤活性。具體而言，褪黑激素有助于提高敏感性或逆轉腫瘤細胞對常規化療劑的抗性。這種多靶點治療方法減少了化學抗性腫瘤細胞的發展，并且這也歸因于褪黑激素的不同藥理學活性，其包括抗氧化、抗炎、抑瘤和免疫調節性質。此外，鑒于在腫瘤微環境中炎癥細胞影響轉移物的形成，褪黑激素憑借阻斷腫瘤細胞侵入其他遠端組織的能力而充當抗轉移劑。藉此，本發明的組合物不僅可以有效地用于治療已經產生化學抗性的腫瘤，而且可以用于預防腫瘤細胞發展出化學抗性和轉移物的形成。

因此，本專利申請的一個目的是提供一種化療治療，其在治療化學抗性腫瘤時比醫學中常用的治療更有效，其使得能夠減少或甚至完全消除腫瘤治療中所需的化療藥物的量(特別是在化學抗性腫瘤的情況下)，并且其可用于預防化學抗性的發展和轉移物的形成。

屬于菊科的植物(牛蒡(Arctium lappa)、藏掖花(Cnicus benedictus)和水母雪蓮(Saussurea medusa)或其他風毛菊屬(Saussurea)的物種)的特征在于其含有牛蒡苷元和牛蒡苷(因其抗腫瘤作用而已知的分子)。牛蒡的提取物在癌癥治療和預防中的用途描述于例如CN 1560265中。風毛菊屬作為抗腫瘤劑的用途描述于例如專利申請WO 2006 032380中。從水母雪蓮的地上部分提取的木酚素的抗腫瘤活性描述在Cancer Letters,New York,USA.Vol 158,N°1,1.1.2000,第53～59頁中。

屬于小檗科的植物(歐洲小檗(Berberis vulgaris)、印度小檗(Berberis aristata)、小檗屬的其他物種和冬青葉十大功勞(Mahonia aquifolium))含有活性物質，例如小檗堿和小檗胺。前者抑制化學抗性和放射抗性、新血管生成和端粒酶；其具有抗高膽固醇血癥、抗糖尿病和心臟保護效果。然而，其具有可誘導MDR(多藥耐藥性)的嚴重缺點。為了抵消這種不希望的效果，可以使用小檗胺，除了已經提到的小檗堿的心臟保護效果之外，小檗胺還顯示出了針對MDR的特異性抗腫瘤效果和抗心律失常效果。另見在Alternative and Complementary Therapies,Mary Ann Liebert,Larchmont,New York,USA.Vol 8,N°6,1.12.2002,第336～340頁中出版的論文，其總結了關于含有小檗胺的植物的抗MDR應用的知識。歐洲小檗果實的細胞毒性效應已描述于Int.J.Cancer Res.(Vol 2,N°1,2006,第1～9頁)。

屬于罌粟科的植物(花菱草(Eschscholzia californica)、博落回(Macleaya cordata)或木罌粟(Bocconia frutescens))含有白屈菜赤堿和血根堿。白屈菜赤堿對TNF-α的產生具有抑制效果：盡管這種效果不適于早期的腫瘤，但在末前期和末期是有價值的，因為其抑制了在末前期和末期腫瘤患者中常見的厭食、惡病質和痛覺過敏。而且，白屈菜赤堿減少線粒體呼吸(已知其在腫瘤細胞的線粒體中已較差)。血根堿抑制NF-kB和AP-1[Biochem.Pharmacol.2004Sep 15；68(6):1101-11]：兩者通常是靜默因子，其由于暴露于抗腫瘤增殖抑制劑或電離輻射而被激活。含有白屈菜赤堿的博落回或白屈菜(Chelidonium majus)(不允許作為食品補充劑的植物)的抗腫瘤提取物的制備描述于CN 1470513中。苯并菲啶生物堿(例如白屈菜赤堿和血根堿)以及原小檗堿生物堿(例如小檗堿)的抗腫瘤活性還描述于Planta Medica,Vol 69(2),1.2.2003,第97～108頁。

因此，本發明涉及含有與適當的賦形劑混合的牛蒡苷元、牛蒡苷、小檗堿、小檗胺、血根堿、白屈菜赤堿和蘆丁的組合物。

除蘆丁以外，活性成分可以以基本上純的且分離的形式存在，或以至少三種不同的植物提取物的形式存在，所述植物中，一種屬于菊科，一種屬于小檗科，一種屬于罌粟科。

屬于菊科的植物優選為牛蒡、藏掖花和水母雪蓮。

屬于小檗科的植物優選為歐洲小檗、印度小檗和冬青葉十大功勞。

屬于罌粟科的植物優選地選自包含花菱草、博落回和木罌粟的組。

本發明涉及一種用于治療瘤形成和預防/抑制對增殖抑制劑的化學抗性和/或對放射療法的放射抗性的組合物，其包含一種混合物，所述混合物包含以下物質或者由以下物質組成：(i)選自包含蘆丁、羥乙基蘆丁、地奧司明和橙皮苷的組或者選自由它們組成的組的至少一種化合物；和/或(ii)褪黑激素；和/或(iv)選自包含牛蒡苷元、牛蒡苷、小檗堿、小檗胺、血根堿和白屈菜赤堿的組或者選自由它們組成的組的至少一種化合物，這些化合物如上所述，或者是含有所述化合物的植物提取物的形式。優選地，所述混合物包含以下物質或者由以下物質組成：(i)選自包含蘆丁、羥乙基蘆丁、地奧司明和橙皮苷的組或者選自由它們組成的組的至少一種類黃酮；(ii)褪黑激素；和/或(iv)選自包含牛蒡苷元、牛蒡苷、小檗堿、小檗胺、血根堿和白屈菜赤堿的組或者選自由它們組成的組的至少一種化合物，這些化合物如上所述，或者是含有所述化合物的植物提取物的形式。

根據優選的實施方式，本發明的混合物包含以下物質或者由以下物質組成：(i)蘆丁；(ii)褪黑激素；和/或(iv)化合物牛蒡苷元、牛蒡苷、小檗堿、小檗胺、血根堿和白屈菜赤堿，這些化合物如上所述，或者為含有所述化合物的植物提取物的形式。

優選地，本發明的組合物/混合物還包含：選自包含芹菜素、蘆筍(熊果酸)、姜黃素、番茄紅素、紅辣椒(辣椒辣素)、白藜蘆醇、綠茶(山茶苷B)和鉤藤屬物種的組或者選自由它們組成的組的至少一種化合物。

根據優選的方面，除了與褪黑激素聯合的選自包含蘆丁、羥乙基蘆丁、地奧司明和橙皮苷的組或者由它們組成的組的至少一種類黃酮之外，本發明的組合物/混合物將含有來源于以下植物的提取物：

a)牛蒡，特別是來自種子；

b)歐洲小檗；

c)花菱草。

根據優選的方面，來源于屬于不同科的各植物的提取物將以20％～60％的比例存在。

從提取物中分離的化合物的每日劑量通常將包含在以下范圍內：

牛蒡苷元和牛蒡苷：0.1g/日～1.0g/日

小檗堿和小檗胺：0.1g/日～1.0g/日

血根堿和白屈菜赤堿：0.01g/日～0.250g/日，優選0.020g/日～0.150g/日

蘆丁：0.1g/日～0.2g/日。

根據本發明，所用的植物提取物的形式可以是油性浸軟液、醇提取物、干提取物(通過用乙醇或用甲醇或用超臨界CO₂提取獲得)、液體提取物或母酊劑。

本發明的組合物可以用作適當配制用于口服施用的食品補充劑、醫療裝置或藥物組合物，并且將根據制藥領域熟知的常規方法(例如在"Remington's Pharmaceutical Handbook",Mack Publishing Co.,N.Y.,USA中描述的那些方法)使用對其最終用途而言可接受的賦形劑、稀釋劑、填充劑和抗結塊劑來制備。施用形式的實例是軟膠囊(密封的含液體的膠囊)或半剛性或剛性膠囊(具有兩部分包衣，含有粉末或顆粒)、軟錠劑、片劑、糯米紙囊劑(wafer)、顆粒劑、單劑量小袋粉末、糖漿劑和小瓶。

為了提高生物利用度，優選的是組合物的至少一種組分為微粉化形式。微粉化化合物使用制藥領域中公知的常規方法制備。優選地，在微粉化化合物中，顆粒的平均直徑小于10μm；更優選地，顆粒的平均直徑小于5μm，進一步優選其小于1μm。

本發明還涉及牛蒡苷元、牛蒡苷、小檗堿、小檗胺、血根堿、白屈菜赤堿、褪黑激素與至少一種類黃酮的聯合在制備用于治療瘤形成和用于預防/抑制對增殖抑制劑的化學抗性和/或對放射療法的放射抗性的組合物中的用途，所述類黃酮優選地選自包含羥乙基蘆丁、地奧司明、橙皮苷和蘆丁的組或者由它們組成的組。

本發明的一些實施方式FRn在下面闡述：

FR1.用于治療化學抗性腫瘤的蘆丁，其與化療劑和/或牛蒡苷元、牛蒡苷、小檗堿、小檗胺、血根堿、白屈菜赤堿和鉤果草(南非鉤麻，其抑制PGE2的合成)聯合，這些化合物如上所述，或者為含有所述化合物的植物提取物的形式。

FR2.如FR1所述用途的蘆丁，其中所述化療劑選自環磷酰胺、5-氟尿嘧啶、甲氨蝶呤、鉑絡合物、紫杉烷、多柔比星、表柔比星和米托蒽醌。

FR3.包含與適當的賦形劑混合的牛蒡苷元、牛蒡苷、小檗堿、小檗胺、血根堿、白屈菜赤堿和蘆丁的組合物，這些化合物如上所述，或者為含有所述化合物的植物提取物的形式。

FR4.如FR3所述的組合物，其含有來源于以下植物的提取物：

a)屬于菊科的植物，其選自包含牛蒡、藏掖花和水母雪蓮的組；

b)屬于小檗科的植物，其選自包含歐洲小檗、印度小檗和冬青葉十大功勞的組；

c)屬于罌粟科的植物，其選自包含花菱草、博落回或木罌粟的組。

FR5.如FR4所述的組合物，其含有來源于于以下植物的提取物：

a)牛蒡；

b)歐洲小檗；

c)花菱草。

FR6.牛蒡苷元、牛蒡苷、小檗堿、小檗胺、血根堿、白屈菜赤堿和蘆丁的組合，用于治療瘤形成和用于預防/抑制對增殖抑制劑的化學抗性和/或對放射療法的放射抗性，這些化合物如上所述，或者為含有所述化合物的植物提取物的形式。

在腺癌和癌的抗性細胞系中研究了至少一種類黃酮(優選地選自包含羥乙基蘆丁、地奧司明、橙皮苷和蘆丁的組或者由它們組成的組)與褪黑激素和合成化療劑(環磷酰胺/甲氨蝶呤)和/或牛蒡苷元、牛蒡苷、小檗堿、小檗胺、血根堿和白屈菜赤堿(在表中用術語“提取物”表示)聯合時的聯合活性，并與化學敏感性腫瘤細胞系和細胞系細胞進行了比較。

本發明涉及一種3g/劑量、優選1g/劑量～2g/劑量的組合物，其包含一種混合物，所述混合物包含以下物質或者由以下物質組成：提取物，優選其濃度為450ng/ml～850ng/ml，例如650ng/ml；蘆丁，優選其濃度為10μM～100μM，例如20μM、30μM、40μM和50μM；環磷酰胺和/或甲氨蝶呤，優選其濃度為500ng/l～1500ng/l，優選850ng/ml、1000ng/ml或1300ng/ml；和褪黑激素，其濃度為0.1g。

本發明的其他實施方式FRn在下面闡述：

FRa.用于治療化學抗性腫瘤的蘆丁，其與以下物質聯合：

(i)化療劑；和/或

(ii)牛蒡苷元、牛蒡苷、小檗堿、小檗胺、血根堿、白屈菜赤堿和鉤果草(南非鉤麻，其抑制PGE2的合成)，這些化合物如上所述，或者為含有所述化合物的植物提取物的形式；和/或

(iii)另一種化合物，其選自包含芹菜素、蘆筍(熊果酸)、姜黃素、番茄紅素、紅辣椒(辣椒辣素)、白藜蘆醇、綠茶(山茶苷B)和鉤藤屬物種的組或者由它們組成的組，或褪黑激素。

FRb.如Fra所述用途的蘆丁，其中，所述化療劑選自環磷酰胺、5-氟尿嘧啶、甲氨蝶呤、鉑絡合物、紫杉烷、多柔比星、表柔比星和米托蒽醌；優選其為環磷酰胺。

FRc.如Fra所述用途的蘆丁，其中所述蘆丁與以下物質聯合：

(i)化療劑，其選自包含環磷酰胺、5-氟尿嘧啶、甲氨蝶呤、鉑絡合物、紫杉烷、多柔比星、表柔比星、米托蒽醌的組或者由其組成的組；優選其為環磷酰胺；和

(ii)牛蒡苷元、牛蒡苷、小檗堿、小檗胺、血根堿和白屈菜赤堿，這些化合物如上所述或者為含有所述化合物的植物提取物的形式；以及

(iii)另一種化合物，例如褪黑激素。

FRd.用于治療化學抗性腫瘤的組合物，其中，所述組合物含有如一個實施方式FRa、FRb或FRc所述的蘆丁。

FRe.如FRd所述用途的組合物，所述組合物包含與適當的賦形劑混合的牛蒡苷元、牛蒡苷、小檗堿、小檗胺、血根堿、白屈菜赤堿和蘆丁，這些化合物如上所述或者為含有所述化合物的植物提取物的形式。

FRf.如FRd或FRe所述用途的組合物，所述組合物含有來源于以下植物的提取物：

a)屬于菊科的植物，其選自包含牛蒡、藏掖花和水母雪蓮的組；

b)屬于小檗科的植物，其選自包含歐洲小檗、印度小檗和冬青葉十大功勞的組；

c)屬于罌粟科的植物，其選自包含花菱草、博落回和木罌粟的組。

FRg.如FRf所述用途的組合物，所述組合物含有來源于于以下植物的提取物：

a)牛蒡；

b)歐洲小檗；

c)花菱草。

FRh.一種組合物，所述組合物包含牛蒡苷元、牛蒡苷、小檗堿、小檗胺、血根堿、白屈菜赤堿和蘆丁或者由其組成，這些化合物如上所述，或者為含有所述化合物的植物提取物的形式；所述組合物還包含：一種額外化合物，其選自包含芹菜素、蘆筍(熊果酸)、姜黃素、番茄紅素、紅辣椒(辣椒辣素)、白藜蘆醇、綠茶(山茶苷B)和鉤藤屬物種的組或者由它們組成的組，或褪黑激素；優選褪黑激素；所述組合物用于治療瘤形成和用于預防/抑制對增殖抑制劑的化學抗性和/或對放射療法的放射抗性。

具體而言，使用了化學抗性人腫瘤細胞MDA-MB-231(乳腺癌)、ECV-304(膀胱癌)、HuH-7(肝細胞癌)和HTB-43(咽的鱗狀細胞癌)、化學敏感性腫瘤細胞MCF-7(乳腺癌)和非腫瘤健康人哺乳動物成纖維細胞(HMF)。

表1～3中示出的結果證明了腫瘤細胞對化療劑的抗性和與提取物和/或與蘆丁聯合的化療劑的有效性之間的直接成比例、但非線性的關系。

表1

表2

表3

下表4顯示了從用單獨的或與環磷酰胺聯合的槲皮素(蘆丁的糖苷配基)處理的MDA-MB-231細胞獲得的數據。不同于用蘆丁時發現的那樣，明顯表明沒有協同效應。

表4

表5.在用規定化合物處理后24、48和72小時測量化學抗性MDA-MB-231人腫瘤細胞(乳腺癌)的活力。在表5中，化合物“環”是環磷酰胺，而化合物“甲”是甲氨蝶呤。

測試條件：5×10³個細胞，xCELLigence試驗

表6.在用規定化合物處理后24、48和72小時測量化學敏感性MCF-7腫瘤細胞(乳腺癌)的活力。在表6中，化合物“環”是環磷酰胺，化合物“甲”是甲氨蝶呤。

測試條件：5×10³個細胞，xCELLigence試驗

所獲得的結果表明，褪黑激素增強類黃酮的抗腫瘤活性。如果組合物除了褪黑激素和類黃酮外還包含化療劑和/或提取物，則該效果會更加顯著。

本發明中使用的提取物的制備實施例以及本發明的組合物的實施例在下面闡述。

實施例1–由新鮮植物制備醇提取物

將三種植物(各自為20％～60％的比例)共計530克置于1100ml乙醇/水混合物(40％～90％的乙醇)中，并在混合器中研磨。將所得物“靜置”4至8天的時間，其間小心地確保研磨的植物保持浸沒在溶液中。在該時間結束時，倒出液體部分，壓榨植物部分并收集液體，然后過濾。

由此獲得的提取物具有深綠-褐色的顏色。

實施例2–由干燥植物制備醇提取物

370克～450克的量的干燥植物用于1200ml水醇混合溶液(40％～90％的乙醇)。將所得物“靜置”約2周。在溶劑的浸漬/染色結束時，倒出液體部分，壓榨植物部分并收集液體，然后過濾。

圖1中的柱狀圖是指褪黑激素(M)作用于MDA-MB-231細胞(24小時，測試條件：50×10³個細胞；xCELLigence試驗)。

圖2中的柱狀圖是指褪黑激素(M)作用于MDA-MB-231細胞(48小時，測試條件：50×10³個細胞；xCELLigence試驗)。

圖3中的柱狀圖是指褪黑激素(M)作用于MDA-MB-231細胞(72小時，測試條件：50×10³個細胞；xCELLigence試驗)。

圖4中的柱狀圖是指褪黑激素(M)作用于MCF-7細胞(24小時，測試條件：50×10³個細胞；xCELLigence試驗)。

圖5中的柱狀圖是指褪黑激素(M)作用于MCF-7細胞(48小時，測試條件：50×10³個細胞；xCELLigence試驗)。

圖6中的柱狀圖是指褪黑激素(M)作用于MCF-7細胞(72小時，測試條件：50×10³個細胞；xCELLigence試驗)。