鱗葉紫堇有效部位及其制備方法和應用，屬于植物提取物技術領域。
背景技術：
鱗葉紫堇（Corydalis calcicola W. W. Smith）為罌粟科紫堇屬植物，無毛生草本，產四川西南部（木里）和云南西北部（麗江、維西、中甸、德欽），生于海拔2900~4800米的灌叢、高山草甸或石灰巖流石灘的石縫中 [參見：中國植物志.第三十二卷.北京:科學出版社,1999，32：197]。鱗葉紫堇是一種常用中藥，為歷代本草記載, 清熱利膽、清熱解毒。治心血管系統的疾病、敗血癥，外用于創傷感染 ，治少陽膽經有熱、口干苦、兩脅不舒、心煩、熱毒病證，如瘡癰腫毒、創傷感染等。
惡性腫瘤是嚴重危害人類健康的重大疾病之一，已成為人類致死的首要原因。惡性癌細胞的防治已成為醫學界所關注的重要課題。但是，惡性腫瘤發病隱匿，病因復雜，病理變化多樣，對其治療仍局限于癌癥疾病的多樣性及反復性。然而，盡管不同的癌癥的致癌原因可能不盡相同，但其組織觀察均表現出相似的細胞周期紊亂以及迅速不可控制的細胞生長及轉移。因此，對參與細胞周期調控的一些家族蛋白的研究在推動癌癥治療中成為重要因素。其中，細胞分裂周期激酶（Cdk/cyclins）作為真核細胞周期的主要調控蛋白，負責推動相應階段的細胞分裂。CDC25 磷酸蛋白酶（CDC25 phosphatases）作為細胞分裂周期蛋白激酶家族（Cdk/cyclins）的活化蛋白酶，在真核細胞的分裂周期中起了十分重要的調節作用。目前臨床研究表明，這一家族的蛋白酶在多種癌癥組織中均表現出過量的表達，且往往與較差的癌癥早期預測有關，這些均使CDC25磷酸蛋白酶成為具有巨大潛力的癌癥治療藥物靶標。近年來，許多關于CDC25磷酸蛋白酶家族的酶學研究為相關抑制劑及癌癥藥物的研發提供了相當重要的信息。
申請人在研究中發現：目前抗腫瘤藥物的原料較少，特別是用于制備抑制CDC25酶藥物的中藥原料較為匱乏，發現新藥原料是迫切需要解決的問題。現有技術中鱗葉紫堇主要有清熱利膽、清熱解毒之功。目前，尚未見到關于鱗葉紫堇抑制CDC25酶的活性方面的研究和應用的報道。
技術實現要素：
本發明要解決的技術問題是：克服現有技術的不足，提供鱗葉紫堇有效部位及其制備方法和應用，該鱗葉紫堇有效部位能有效抑制CDC25A酶和CDC25B酶的活性，用于制備抑制CDC25酶藥物，具有較好的抗腫瘤作用。
本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：該鱗葉紫堇有效部位，其特征在于：選自鱗葉紫堇乙酸乙酯部位、鱗葉紫堇正丁醇部位、鱗葉紫堇水相萃取部位中的一種或兩種以上的任意質量比的混合物。
該鱗葉紫堇有效部位，其特征在于：選自鱗葉紫堇正丁醇部位，或者鱗葉紫堇正丁醇部位與鱗葉紫堇乙酸乙酯部位任意質量比的混合物。
該鱗葉紫堇有效部位的制備方法，其特征在于，包括下述步驟：將鱗葉紫堇全草粉碎，加入體積百分比濃度65%~95%乙醇溶液回流提取，將所得提取液濃縮、干燥，得浸膏；將浸膏加蒸餾水分散，得浸膏分散液，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇作為溶劑萃取浸膏分散液，揮發溶劑后得鱗葉紫堇乙酸乙酯部位、鱗葉紫堇正丁醇部位；將萃取后的浸膏分散液濃縮、干燥，得鱗葉紫堇水相萃取部位。
優選的，所述的回流提取為超聲波輔助回流提取，超聲波輔助回流提取的具體操作為：將粉碎后的鱗葉紫堇全草加入體積百分比濃度65%~95%乙醇溶液超聲波提取0.5~3小時，過濾，濾渣加入體積百分比濃度65%~95%乙醇溶液回流提取1~3次，合并提取液，即得。
該鱗葉紫堇有效部位的應用，其特征在于：在制備抑制CDC25酶藥物方面的應用。
所述抑制CDC25酶藥物是通過鱗葉紫堇乙酸乙酯部位、鱗葉紫堇正丁醇部位、鱗葉紫堇水相萃取部位中的一種或兩種以上的任意質量比的混合物，與藥用輔料混合制成的口服制劑或注射制劑。
所述的注射制劑為脂質體注射劑、納米粒注射劑或微球注射劑。
所述的口服制劑為散劑、片劑、顆粒劑、膠囊劑或溶液劑。
申請人對于本發明的說明如下：
現有技術中，鱗葉紫堇常規用途為清熱利膽、解毒的功效，未見其有抗腫瘤功效的相關報道。申請人通過大量研究發現：鱗葉紫堇中的部分提取物還具有抗菌、抗腫瘤的作用，但是其功效不明顯，不能確定其具體的有效部位。因此通過怎樣的溶劑、采用怎樣制備方法，才能獲得抑制CDC25酶活性效果最好的有效部位，是必須要解決的問題。申請人通過研究發現：采用本發明制備方法，篩選出的鱗葉紫堇乙酸乙酯部位、鱗葉紫堇正丁醇部位、和鱗葉紫堇水相萃取部位，其抑制CDC25酶效果較好。經申請人進一步分析，鱗葉紫堇乙酸乙酯部位對于CDC25A酶和CDC25B酶的抑制效果最優。
制備方法中，可以只采用回流提取。優選采用超聲波輔助回流提取，具有較高的收率和提取效率。超聲波輔助回流提取的具體操作為：超聲波提取后，過濾獲得超聲波提取液和濾渣，向濾渣中加質量百分比濃度65%~95%乙醇水溶液回流提取，合并超聲波提取液和回流提取液。進一步的說明，回流提取的具體操作為：向回流加熱裝置中直接加入粉碎后的藥材或加入超聲波提取后的濾渣，加入乙醇水溶液，加熱提取，放冷過濾得一次提取液和濾渣；再向濾渣中加入乙醇水溶液，加熱、進行第二次回流提取，放冷過濾得二次提取液和濾渣（以上為回流提取2次）；合并多次提取液，即得回流提取液。優選的，每次回流提取0.5~2小時；每次回流提取時所加乙醇溶液沒過藥材表面1cm~2cm。回流提取的溫度為乙醇回流提取的常規溫度，需高于乙醇的沸點，優選為80℃~100℃。
制備方法中，浸膏為粗提取物，采用不同的溶劑萃取浸膏分散液，指的是依次將石油醚加入浸膏分散液萃取分離獲得石油醚萃取液、將乙酸乙酯加入浸膏分散液萃取分離獲得乙酸乙酯萃取液、將正丁醇加入浸膏分散液萃取分離獲得正丁醇萃取液；取乙酸乙酯萃取液和正丁醇萃取液分別揮發去除溶劑后，所得即選自鱗葉紫堇乙酸乙酯部位和鱗葉紫堇正丁醇部位；將萃取后剩余的浸膏分散液（溶劑為水），揮發去除溶劑即得鱗葉紫堇水相萃取部位。水相萃取部位也可以稱作水相萃取物，水相萃取部位易溶于水；而相對的，石油醚、乙酸乙酯和正丁醇為有機相，石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位對應易溶于石油醚、乙酸乙酯和正丁醇。其中，鱗葉紫堇乙酸乙酯部位含有游離生物堿、黃酮類化合物；鱗葉紫堇正丁醇部位含有皂苷和酚類化合物；鱗葉紫堇水相萃取部位含有多糖和有機酸類化合物。揮去溶劑即揮發去除溶劑。揮去溶劑可以采用常壓加熱使溶劑（石油醚、乙酸乙酯和正丁醇）揮發。優選的，揮去溶劑采用減壓濃縮，該方法效率高，并且能避免熱敏性成分因高溫喪失藥性。
優選的劑型為口服制劑或注射劑。口服制劑和注射制劑為最佳給藥途徑，此處所述口服制劑為經腸胃道給藥制劑，優選的，口服制劑為緩釋、控釋型口服制劑。也可以為非腸胃給藥的其他，如呼吸道給藥制劑（噴霧劑、氣霧劑、粉霧劑）；皮膚給藥制劑（外用溶液劑、洗劑、搽劑、軟膏劑、硬膏劑、糊劑、貼劑）；膜給藥制劑（滴眼劑、 滴鼻劑、眼用軟膏、含漱劑、舌下片劑）；腔道給藥制劑（栓劑）。注射制劑可以為常規注射制劑。根據藥物傳遞系統進行分類，優選的，本發明的注射制劑為脂質體注射劑、納米粒注射劑或微球注射劑；其他的，本發明的注射劑還可以為微囊注射劑、聚合物膠束注射劑、微乳或亞微乳注射劑、亞微粒注射劑或凝膠注射劑，以上藥物傳遞系統的注射劑能延長藥物載體在體內的循環時間、延長載藥微粒在吸收部位的停留時間、控制藥物在釋放初期的突釋效應。藥用輔料包括藥物載體，以及溶劑、增溶劑、助溶劑、乳化劑、助懸劑、澄清劑、反絮凝劑、矯味劑、著色劑、防腐劑、化學滅菌劑、吸附劑、助濾劑、抗氧劑、pH調節劑、等滲調節劑、稀釋劑、粘合劑、潤濕劑、崩解劑、潤滑劑、助流劑、抗粘著劑、緩釋劑、控釋劑、包衣材料、成膜材料、膠囊材料中的一種或多種。
與現有技術相比，本發明的鱗葉紫堇有效部位及其制備方法和應用所具有的有益效果是：
1、該鱗葉紫堇有效部位能有效抑制CDC25A酶和CDC25B酶的活性，用于制備抑制CDC25酶藥物，具有較好的抗腫瘤作用。申請人經大量研究確定：現有技術中具有清熱解毒之功的鱗葉紫堇，還具有抗腫瘤的功效。并且申請人首次在CDC25A酶和CDC25B酶上進行藥效篩選，通過大量研究確定鱗葉紫堇乙酸乙酯部位、鱗葉紫堇正丁醇部位、鱗葉紫堇水相萃取部位中的一種或兩種以上的任意質量比的混合物均具有較好的抑制CDC25A酶和CDC25B酶活性，其CDC25A酶存活率7.6~9.4%、CDC25B酶存活率12.8~14.2%，適宜開發成抗腫瘤藏藥新藥。進一步的，申請人通過研究確定：鱗葉紫堇正丁醇部位，或者鱗葉紫堇正丁醇部位和鱗葉紫堇乙酸乙酯部位具有較好的抑制CDC25酶活性，并且具有較好的抑制腫瘤效果，優選鱗葉紫堇正丁醇部位和鱗葉紫堇乙酸乙酯部位按質量比3：1混合物，其中劑量（500mg/kg/d）的抑瘤率均高于相同劑量下鱗葉紫堇正丁醇部位、鱗葉紫堇乙酸乙酯部位的抑瘤率。綜上所述，申請人經研究首次發現鱗葉紫堇的新功效，并通過研究確定其所抑制的酶的種類，設計制備方法并最終獲得對CDC25A酶和CDC25B酶均具有較好抑制效果的有效部位，以上過程是付出了大量的創造性勞動的。
2、該鱗葉紫堇有效部位的制備方法提取方便，提取效率高。制備方法中，申請人設計加入體積百分比濃度65%~95%乙醇溶液進行超聲波輔助回流提取，提高了提取效率；萃取中，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇作為溶劑萃取浸膏分散液，采用以上溶劑萃取順序所得的鱗葉紫堇乙酸乙酯部位、鱗葉紫堇正丁醇部位和鱗葉紫堇水相萃取部位具有較好的抑制CDC25酶的效果。
3、本發明拓展了抑制CDC25A酶和CDC25B酶藥物的原料渠道，擴大了鱗葉紫堇的用途，使鱗葉紫堇發展成為抑制CDC25A酶和CDC25B酶藥物的新原料，可顯著提高鱗葉紫堇的附加值。
具體實施方式
實施例1~3是本發明的鱗葉紫堇有效部位及其制備方法和應用的具體實施方式，其中實施例1為最佳實施例。
實施例1
制備方法，包括下述步驟：將鱗葉紫堇全草粉碎，采用體積百分比濃度75%~85%乙醇溶液超聲波提取1小時，然后過濾獲得超聲波提取液和濾渣，濾渣加質量百分比濃度75%~85%乙醇水溶液回流提取3次，每次0.5小時，合并超聲波提取液和回流提取液、濃縮干燥得浸膏；將浸膏加蒸餾水分散，得浸膏分散液，然后依次采用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇作為溶劑萃取浸膏分散液，取乙酸乙酯萃取液和正丁醇萃取液分別揮發溶劑，得到鱗葉紫堇乙酸乙酯部位、鱗葉紫堇正丁醇部位；將浸膏分散液萃取后剩余液體濃縮、干燥，得鱗葉紫堇水相萃取部位。
實施例2
制備方法，包括下述步驟：將鱗葉紫堇全草粉碎，采用體積百分比濃度85%~95%乙醇溶液超聲波提取3小時，然后過濾獲得超聲波提取液和濾渣，濾渣加質量百分比濃度85%~95%乙醇水溶液回流提取3次，每次1小時，合并超聲波提取液和回流提取液、濃縮干燥得浸膏；將浸膏加蒸餾水分散，得浸膏分散液，然后依次采用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇作為溶劑萃取浸膏分散液，取乙酸乙酯萃取液和正丁醇萃取液分別揮發溶劑，得到鱗葉紫堇乙酸乙酯部位、鱗葉紫堇正丁醇部位；將浸膏分散液萃取后剩余液體濃縮、干燥，得鱗葉紫堇水相萃取部位。
實施例3
制備方法，包括下述步驟：將鱗葉紫堇全草粉碎，采用體積百分比濃度65~75%乙醇溶液超聲波提取0.5小時，然后過濾獲得超聲波提取液和濾渣，濾渣加質量百分比濃度65%~75%乙醇水溶液回流提取2次，每次2小時，合并超聲波提取液和回流提取液、濃縮干燥得浸膏；將浸膏加蒸餾水分散，得浸膏分散液，然后依次采用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇作為溶劑萃取浸膏分散液，取乙酸乙酯萃取液和正丁醇萃取液分別揮發溶劑，得到鱗葉紫堇乙酸乙酯部位、鱗葉紫堇正丁醇部位；將浸膏分散液萃取后剩余液體濃縮、干燥，得鱗葉紫堇水相萃取部位。
將實施例1~3萃取所得石油醚萃取液分別揮去溶劑，得實施例1~3鱗葉紫堇石油醚部位，留作后續性能測試使用。
性能測試
分別各取0.4mg干燥后的鱗葉紫堇石油醚部位、鱗葉紫堇乙酸乙酯部位、鱗葉紫堇正丁醇部位、鱗葉紫堇水相萃取部位，各自溶解于100μL的二甲基亞砜（DMSO）中形成DMSO溶液，超聲5分鐘。再分別取1μL溶解樣品的DMSO溶液，分別加入緩沖液99μL，分別得到鱗葉紫堇石油醚部位的緩沖溶液、鱗葉紫堇乙酸乙酯部位的緩沖溶液、鱗葉紫堇正丁醇部位的緩沖溶液和鱗葉紫堇水相萃取部位的緩沖溶液。緩沖液的配方為：分別取0.2423gTris-HCl、0.5138gNaCl、0.0330gBSA、0.0154gDTT、0.0167g EDTA于50mL燒杯中，加蒸餾水溶解并混勻，再加入0.5mol/L NaOH水溶液將pH調節至 8.4，然后定容至100mL容量瓶中，于4℃保存，作為儲備緩沖液（buffer）。
一、抑制CDC25A酶和CDC25B酶實驗。
主要實驗材料為：
CDC25A酶、CDC25B酶，北京樂博生物科技有限公司產品；
Tris-HCl，上海杰美基因醫藥科技有限公司；
EDTA，上海居里生物科技有限公司；
DTT，上海生工生物工程股份有限公司；
BSA，上海江萊生物科技有限公司；
DMSO，上海伊卡生物技術有限公司；
NaCl（分析純），天津紅巖化學試劑廠；
NaOH（分析純），天津河東區紅巖試劑廠。
主要實驗儀器為：
FLUOstar Omega全自動多功能酶標儀，廣東省廣州伯齊生物科技有限公司；
MP511型pH計電計，上海三信有限公司；
BRAND8道移液槍，浙江杭州匯爾儀器有限公司；
500μL移液槍、50μL移液槍，上海榮泰生化儀器有限公司；
電子天平XPE105，梅特勒-托利多儀器有限公司。
以實施例1得到的鱗葉紫堇各部位為測試物，檢測鱗葉紫堇各部位抑制HDAC1酶的活性。
其方法是：分別取2.7μL 330μmol/L FDP、1.8μL 100μmol/L測試物、2μL 0.1μmol/L CDC25A/CDC25B、11.5μL FDP buffer組成18μL體系的實驗組；然后取2.7μL 330μmol/L FDP、2μL 0.1μmol/L CDC25A/CDC25B、13.3μL FDP buffer組成18μL體系的對照組1；再取2.7μL 330μmol/L FDP、1.8μL 100μmol/L測試物、13.5μL FDP buffer組成18μL體系的對照組2；將需要加CDC25A/CDC25B酶的體系于37℃條件下孵育60min，之后加酶，于同樣條件下反應60min，待反應完全，檢測在485nm激發光作用下反應產物于520nm處的熒光強度；其中對照組1在不加入測試物在同樣條件下進行。酶存活效率（%）= 實驗組測定值/對照組1測定值×100%；其中酶存活效率越低，說明測試樣品對組蛋白磷酸化酶CDC25A/CDC25B的抑制效果越強。
表1 鱗葉紫堇有效部位抑制CDC25A酶和CDC25B酶的活性測試結果
。
表1中* P＜0.01，通過表1可以看出：鱗葉紫堇乙酸乙酯部位、鱗葉紫堇正丁醇部位和鱗葉紫堇水相萃取部位對于CDC25A酶CDC25B酶存在較好的抑制效果。
二、抗腫瘤活性測試。
利用MTT法測定鱗葉紫堇有效部位對人腫瘤細胞的細胞毒活性。分別取實施例1所得鱗葉紫堇浸膏、石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水相萃取部位適量，作為受試藥物，DMSO溶解后，利用MTT法分別測定對人結腸癌HCT-8、人肝癌Bel-7402細胞、人胃癌BGC-803細胞、人肺腺癌A549細胞和人卵巢癌A2780細胞生長的抑制率。
實驗方法：將對數生長期的細胞，用0.25%胰酶-EDTA消化后，配制成一定濃度的單細胞懸液，根據細胞生長速度的差異，按800~2000個/孔接種于96孔板，每孔加入細胞懸液100μL。24h后，加入含不同濃度受試藥物及相應溶劑對照的新鮮培養基，每孔加100μL（DMSO終濃度<0.1%），每種受試藥物設5~7個劑量組，每組至少設3個平行孔，于37℃繼續培養72h后，棄上清液，每孔加入100μL新鮮配制的含0.5mg/mL MTT的無血清培養基，繼續培養4 h，棄上清液后，每孔加入200μL DMSO溶解MTT甲簪沉淀，微型振蕩器振蕩混勻，用酶標儀在參考波長450nm，檢測波長570nm條件下測定光密度值（OD），以溶劑對照處理的腫瘤細胞為對照組，用以下公式計算受試藥物對腫瘤細胞的抑制率，并按中效方程計算IC50：抑制率=（對照組平均OD值－給藥組平均OD值）÷對照組平均OD值×100%。將制備方法中的浸膏、以及所得的鱗葉紫堇石油醚部位、鱗葉紫堇乙酸乙酯部位、鱗葉紫堇正丁醇部位、鱗葉紫堇水相萃取部位進行體外腫瘤細胞毒活性篩選，結果見表2。
表2 體外腫瘤細胞毒活性篩選結果
。
注：1）、HCT-8為人結腸癌細胞，Bel-7402為人肝癌細胞，BGC-823為人胃癌細胞，A549為人肺癌細胞，A2780為人卵巢癌細胞。2）、>50表明不具有抗細胞毒活性。通過表2可看出：鱗葉紫堇乙酸乙酯部位、鱗葉紫堇正丁醇部位、鱗葉紫堇水相萃取部位確實有較好的抗腫瘤的效果。
三、體外S180荷瘤小鼠抗腫瘤實驗。
1、實施例1各部位的S180荷瘤小鼠抗腫瘤實驗方法如下：
a）5~6周齡昆明小鼠，隨機選鼠分組，每組10只，每組雌雄各半（分籠飼養）；分組名稱為：空白對照組，環磷酰胺組，給藥組；給藥組包括：鱗葉紫堇石油醚部位低、中、高劑量組，鱗葉紫堇乙酸乙酯部位低、中、高劑量組，鱗葉紫堇正丁醇部位低、中、高劑量組，鱗葉紫堇水相萃取部位低、中、高劑量組；對每只小鼠進行皮膚消毒；
b）于右前肢皮下接種S180瘤液0.2ml（S180瘤細胞數在2.0×106~2.2×106范圍內）；
c）步驟b）接種24小時后給藥；空白對照組灌胃給藥10mL/kg注射用生理鹽水；環磷酰胺組腹腔注射環磷酰胺20mg/kg；給藥組采用灌胃給藥實施例1制得的鱗葉紫堇石油醚部位、鱗葉紫堇乙酸乙酯部位、鱗葉紫堇正丁醇部位和鱗葉紫堇水相萃取部位；首次給藥后，隔日稱小鼠首次體重；每組每天給藥1次，每次給藥劑量詳見表3，連續給藥14天；
d）末次給藥1小時后，處死小鼠，稱小鼠末次體重，剝瘤塊稱重，計算抑瘤率。抑瘤率=（空白對照組平均瘤重－給藥組平均瘤重）÷空白對照組平均瘤重×100%，將抑瘤率計算結果錄入表3。
表3 實施例1各部位對小鼠S180實體瘤的影響
。
2、實施例2各部位的S180荷瘤小鼠方法同實施例1，數據錄入表4。
表4 實施例2各部位對小鼠S180實體瘤的影響
。
3、實施例3各部位的S180荷瘤小鼠抗腫瘤實驗的方法同實施例1，數據錄入表5。
表5實施例3各部位對小鼠S180實體瘤的影響
。
經申請人統計：給藥組與空白對照組相比，小鼠體重變化無顯著性差異（P>0.05）。表3~5中：S180是指小鼠腹水瘤細胞，表3~5中抑瘤率數值越大表示抗腫瘤效果越好。由表3~5可以看出：首先，實施例1~3均有較好的抗腫瘤效果，實施例1~3中相同部位相同劑量時，各組間的抗腫瘤效果無明顯差別。其次，與空白對照組相比，鱗葉紫堇乙酸乙酯部位中、高劑量組，鱗葉紫堇正丁醇中、高劑量組，鱗葉紫堇水相萃取部位中、高劑量組，環磷酰胺化療組，均可顯著抑制S180腫瘤的生長。
實施例4
將鱗葉紫堇有效部位制備為片劑，采用如下步驟：將鱗葉紫堇乙酸乙酯部位300mg和淀粉100mg混勻，加體積百分比濃度10%的淀粉糊40mg制成軟材，過篩得濕顆粒，干燥得干顆粒，整粒，加硬脂酸鎂4 mg混勻、壓片，即得。
實施例5
沖劑的制備方法：按重量份配比將鱗葉紫堇水相萃取部位5份、蔗糖1份、糊精3份混勻，加入適量質量百分比95%乙醇溶液2~5份，邊加邊攪拌，制得軟材，將軟材干燥、過16目篩，分裝即得。
實施例6
微丸膠囊由以下重量份原料組成：鱗葉紫堇正丁醇部位30份、卵磷脂5份、牛黃膽酸鈉5份、微晶纖維素30份；
微丸膠囊的制備方法：按配比將鱗葉紫堇正丁醇部位、卵磷脂、牛黃膽酸鈉和微晶纖維素混均，倒入乙醇水溶液攪勻獲得軟材，將軟材倒入擠出機中擠出，經滾圓獲得顆粒，擠出轉速250r/min，滾圓轉速800r/min，滾圓時間20min，干燥、過24~30目篩獲得微丸，將微丸灌裝入膠囊殼內，即得。
實施例7
脂質體注射劑的制備方法：
1）在氮氣保護下，將50g膽固醇琥珀酸酯、250g二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、40g大豆卵磷脂、50g泊洛沙姆-188、和10g鱗葉紫堇正丁醇部位溶解于1500ml體積比為1:1的乙醇和正丁醇的有機溶劑中，攪拌使其溶解獲得混懸液；將混懸液通過減壓濃縮揮去有機溶劑，獲得磷脂膜；
2）在氮氣保護下，向磷脂膜中加入8000ml pH為6.8的磷酸鹽緩沖溶液，攪拌，使磷脂膜洗脫并充分溶脹水合，經0.22μm微孔濾膜過濾，得鱗葉紫堇正丁醇部位的脂質體；
3）在無菌條件下，向鱗葉紫堇正丁醇部位的脂質體中，加入100g海藻糖，攪拌均勻，超聲波處理0.5~1小時，加注射用水定容，經0.22μm微孔濾膜過濾，灌裝，即得鱗葉紫堇正丁醇部位的脂質體注射劑。
實施例8
納米粒注射劑的制備方法：取25g鱗葉紫堇乙酸乙酯部位和100g泊洛沙姆407用3000ml 無水乙醇溶解，加入30ml 1mol/L氯化鋅的乙醇溶液，攪拌混合，超聲波處理0.5~1小時使其溶解，獲得混合液；將混合液減壓濃縮揮去溶劑，放入-20℃冰箱冷凍2小時；取出加注射用水定容，超聲波處理0.5~1小時，經0.22μm微孔濾膜過濾，灌裝，即得鱗葉紫堇乙酸乙酯部位的納米粒注射劑。
以上所述，僅是本發明的較佳實施例而已，并非是對本發明作其它形式的限制，任何熟悉本專業的技術人員可能利用上述揭示的技術內容加以變更或改型為等同變化的等效實施例。但是凡是未脫離本發明技術方案內容，依據本發明的技術實質對以上實施例所作的任何簡單修改、等同變化與改型，仍屬于本發明技術方案的保護范圍。