本發明涉及一種地榆苷元注射劑及其制備方法和用途，屬藥物領域。

背景技術：

骨髓抑制是臨床上常見的造血系統疾病，它可發生于各系統腫瘤性疾病的放射治療及(或)化學治療、電離輻射引起的放射損傷、病毒性肝炎、微小病毒感染或藥物(氯霉素、苯、磺胺、抗癲癰藥、鎮靜劑、抗甲狀腺藥、抗糖尿病藥、抗瘧疾、安眠藥)等因素。骨髓抑制可引起骨髓微環境、造血干細胞、造血細胞生長因子等的損傷，粒、紅、巨核細胞系統一系、二系或三系細胞受抑制。粒細胞缺乏會引起嚴重感染；紅細胞明顯減少會引起嚴重貧血；血小板明顯下降引起嚴重出血，甚至導致死亡。

目前，臨床上對于骨髓抑制，尤其是放化療引起的骨髓抑制，尚缺乏有效的治療手段。因此，尋找到有效的藥物來緩解骨髓抑制，成為了一個亟待解決的問題。

地榆苷元是從薔薇科地榆屬植物地榆(Sanguisorba officinalis L.)或長葉地榆[S.officinalis L.var.longifolia(Bertol.)Yu et Li]的根中提取得到的一種活性成分，是地榆皂苷I和地榆皂苷II的苷元，化學名：3β，19α-羥基烏索-12烯-28-羧酸，其結構式如下所示：

然而，迄今尚未見以地榆苷元為活性成分制備注射劑，用于治療和/或預防骨髓抑制的公開報道。

技術實現要素：

為解決上述問題，本發明提供了一種地榆苷元注射劑，其特征在于：它是包含下述原料制備而成的制劑：

地榆苷元、增溶劑。

進一步地，它是包含下述重量配比的原料制備而成的制劑：

地榆苷元0.5-10份、增溶劑0.001-60份。

進一步地，所述地榆苷元與增溶劑的重量配比為1:0.005～300。

進一步地，所述的增溶劑為吐溫80、聚氧乙烯蓖麻油EL或泊洛沙姆188；所述的pH調節劑為氫氧化鈉。

進一步地，所述注射劑中地榆苷元的濃度為0.2mg/mL。

進一步地，所述的注射劑是注射液、粉針劑、水針劑或大輸液。

進一步地，包括下述步驟：

按配比稱取地榆苷元分散于注射用水中，加入相應配比的增溶劑、pH調節劑，調節pH至10，攪拌溶解，再加入注射用水，過濾、滅菌，即得本發明注射劑。

本發明還提供了所述注射劑用于制備治療和/或預防骨髓抑制的藥物的用途。

進一步地，所述的藥物是治療和/或預防化學物質導致的骨髓抑制的藥物。

進一步地，所述的藥物是升高血細胞和/或骨髓造血干細胞的藥物。

進一步地，所述的藥物是升高外周血白細胞、中性粒細胞、紅細胞、血小板和/或血紅蛋白的藥物。

發明人前期研究發現，地榆苷元存在溶解度低、口服胃腸吸收率小等問題，造成該成分口服生物利用度低，限制了該成分升高血細胞效果的發揮。

發明人經過對劑型及其配方的研究，通過本發明制備的地榆苷元注射劑解決了地榆苷元溶解度低的問題，提高了地榆苷元生物利用度，進而提高其升高血細胞的療效，對地榆苷元的新劑型開發及更好的臨床應用具有十分重要的意義。

顯然，根據本發明的上述內容，按照本領域的普通技術知識和慣用手段，在不脫離本發明上述基本技術思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。

以下通過實施例形式的具體實施方式，對本發明的上述內容再作進一步的詳細說明。但不應將此理解為本發明上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本發明上述內容所實現的技術均屬于本發明的范圍。

附圖說明

圖1為各實驗組小鼠骨髓造血干細胞計數比較。

具體實施方式

實施例1本發明注射劑的制備

按下述配比稱取原料：

地榆苷元1.5g、吐溫80 10g、pH調節劑適量。

制備方法如下：

取地榆苷元分散于10mL注射用水中，加入吐溫80、氫氧化鈉，調節pH至10，攪拌溶解，再加入注射用水至7500mL使溶液中地榆苷元的濃度為0.2mg/mL，用0.22um微孔濾膜過濾、滅菌，即得本發明注射劑。

實施例2本發明注射劑的制備

按下述配比稱取原料：

地榆苷元2.5g、聚氧乙烯蓖麻油EL 60g、pH調節劑適量。

制備方法如下：

取地榆苷元分散于10mL注射用水中，加入聚氧乙烯蓖麻油EL、氫氧化鈉，調節pH至10，攪拌溶解，再加入注射用水至12500mL使溶液中地榆苷元的濃度為0.2mg/mL，用0.22um微孔濾膜過濾、滅菌，即得本發明注射劑。

實施例3本發明注射劑的制備

按下述配比稱取原料：

地榆苷元10g、泊洛沙姆188 60g、pH調節劑適量。

制備方法如下：

取地榆苷元分散于10mL注射用水中，加入泊洛沙姆188、氫氧化鈉，調節pH至10，攪拌溶解，再加入注射用水至50000mL使溶液中地榆苷元的濃度為0.2mg/mL，用0.22um微孔濾膜過濾、滅菌，即得本發明注射劑。

以下通過具體實驗證明本發明的有益效果。

實驗例1采用不同輔料制備的地榆苷元注射劑的質量評價

本研究根據地榆苷元的性質，選用吐溫80、聚氧乙烯蓖麻油EL、泊洛沙姆188、丙二醇、維生素C為輔料，制成地榆苷元注射劑。

制備方法如下：取地榆苷元0.2g分散于100mL注射用水中，分別加入不同的輔料(吐溫80、聚氧乙烯蓖麻油EL、泊洛沙姆188、丙二醇、維生素C)、氫氧化鈉，調節pH至10，攪拌溶解，再加入注射用水至1000mL使溶液中地榆苷元的濃度為0.2mg/mL，用0.22um微孔濾膜過濾、滅菌，即得本發明注射劑，結果見表1。

熱原按《中國藥典》(2010年版)熱原檢查法測定。

澄明度按《中國藥典》(2010年版)可見異物檢查法項下的燈檢法檢查。

地榆苷元含量，采用HPLC法測定，色譜條件：Agilent extend-C18色譜柱(250×4.6mm，5μm)；流動相：乙腈-0.5％磷酸(70:30)。流速：0.8mL·min-1，柱溫：40℃，檢測波長：205nm，進樣量：10μL。

表1 采用不同輔料制備的地榆苷元注射劑的質量評價

注：與吐溫80組比較，*P<0.05。

實驗結果：采用本發明輔料吐溫80、聚氧乙烯蓖麻油EL、泊洛沙姆188制備的地榆苷元注射劑，熱源檢查合格，澄明度檢查合格，地榆苷元含量測定顯示含量較高，表明采用本發明輔料吐溫80、聚氧乙烯蓖麻油EL、泊洛沙姆188制備的地榆苷元注射劑符合制劑要求，且最大程度保留地榆苷元成分。其它二種輔料丙二醇、維生素C制備的地榆苷元注射劑，熱源檢查合格，澄明度檢查不合格，地榆苷元含量測定顯示含量較低。

實驗例2采用不同量輔料制備的地榆苷元注射劑的質量評價

制備方法如下：取地榆苷元0.2g分散于100mL注射用水中，分別加入不同量的增溶劑(吐溫80)、氫氧化鈉，調節pH至10，攪拌溶解，再加入注射用水至1000mL使溶液中地榆苷元的濃度為0.2mg/mL，用0.22um微孔濾膜過濾、滅菌，即得本發明注射劑，結果見表2。

表2 采用不同量增溶劑制備的地榆苷元注射劑的質量評價

注：與1.0mg組比較，*P<0.05。

實驗結果：僅在本發明地榆苷元0.2g和增溶劑用量為1.0mg-60g比例下制備的地榆苷元注射劑熱源合格，澄明度符合要求，含量高，制劑最佳，可制備符合要求的地榆苷元注射劑。

實驗例3本發明地榆苷元注射劑藥效學研究

1實驗材料

1.1受試藥物本發明地榆苷元注射劑A組(按照實施例1制備)、B組(按照實施例2制備)、C組(按照實施例3制備)、地榆苷元10％DMSO-生理鹽水組、環磷酰胺。

1.2實驗動物KM-小鼠：18.5～22.5g。

1.3實驗儀器：全自動血球分析儀；BS-600L電子天平：規格：600g/0.1g，

上海友聲衡器有限公司。

1.4統計方法

用SPSS 17.0軟件進行統計分析。數據以均數±標準差表示，組間采用單因素方差分析，方差齊者組間進行LSD檢驗，方差不齊者進行Tamhane’s T2檢驗。

2實驗方法

2.1實驗動物分組及模型制備

所有動物適應性喂養1周后按體重隨機分為：空白組；模型組；地榆苷元注射劑A、B、C組，制成2.5mg·kg^-1混懸液，臨用前配制；地榆苷元組：地榆苷元粉末，用10％DMSO-生理鹽水溶解，配制成2.5mg·kg^-1混懸液，臨用前配制。實驗第1天，除空白組外，其余各組小鼠按50mg·kg^-1劑量腹腔注射環磷酰胺生理鹽水溶液，連續3天，空白組小鼠尾靜脈注射等體積生理鹽水。

2.2給藥

各實驗組自實驗第1天開始按劑量、給藥方式給予相應藥物，空白組和模型組小鼠尾靜脈注射等體積生理鹽水，連續7天。

2.3標本采集

實驗第8天，各實驗組小鼠眼眶取血，用裝有EDTA抗凝劑的0.5mlEP管收集待測。

2.4檢測指標及方法

外周血象檢測：采用全自動血球計數儀對各實驗組小鼠外周血白細胞(WBC)、中性粒細胞(NEUT)紅細胞(RBC)、血小板(PLT)、血紅蛋白(HGB)進行計數。

骨髓造血干細胞計數(以骨髓細胞CD34+抗原表達量計)用含牛血清白蛋白濃度為0.2％的PBS緩沖液沖出小鼠右側股骨骨髓細胞，取出106個細胞離心，棄上清，加入30μL正常小鼠血清以封閉非特異結合位點，再加入10μL FITC標記的大鼠抗小鼠CD34+抗體，對照管加入10μL相應對照抗體，4℃避光反應30min。加入2mL紅細胞裂解液，作用5min，洗細胞2次，加入終濃度為3μg/mL的PI染液，采用流式細胞儀檢測骨髓細胞CD34+抗原表達。

3實驗結果

3.1外周血主要血細胞計數比較，見表3、表4。

表3 各實驗組小鼠外周血血細胞數量

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01；注：與地榆苷元組比較，^△P<0.05，^△△P<0.01。

結果顯示，與模型組比較，地榆苷元注射劑A組、地榆苷元注射劑B組、地榆苷元注射劑C組小鼠造血干細胞數量均有顯著升高(P<0.05)，地榆苷元組無顯著性差異；與地榆苷元組比較，地榆苷元注射劑A組、地榆苷元注射劑B組、地榆苷元注射劑C組小鼠外周血WBC、RBC、PLT數量均有顯著升高(P<0.05)。

表4 各實驗組小鼠外周血血細胞數量

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01；注：與地榆苷元組比較，^△P<0.05，^△△P<0.01。

結果顯示，與模型組比較，地榆苷元注射劑A組、地榆苷元注射劑B組、地榆苷元注射劑C組小鼠外周血NEUT和HGB數量均有顯著升高(P<0.05)，地榆苷元組無顯著性差異；與地榆苷元組比較，地榆苷元注射劑A組、地榆苷元注射劑B組、地榆苷元注射劑C組組小鼠外周血NEUT和HGB數量均有顯著升高(P<0.05)

3.2、骨髓造血干細胞計數比較

從圖1可知，與模型組比較，本發明地榆苷元注射劑組小鼠造血干細胞數量均有顯著升高(P<0.05)，地榆苷元組無顯著性差異；與地榆苷元組比較，本發明地榆苷元注射劑組小鼠造血干細胞數量均有顯著升高(P<0.05)。

以上實驗結果表明，本發明地榆苷元注射劑可以有效升高血細胞，藥效明顯優于直接用地榆苷元原藥給藥。

綜上所述，本發明制備的地榆苷元注射劑解決了地榆苷元溶解度低的問題，提高了地榆苷元生物利用度，進而提高其升高血細胞的療效，對地榆苷元更好的臨床應用具有十分重要的意義。