本發明涉及生物醫藥領域，具體而言，本發明涉及構建兔創傷止血動物模型的方法和利用該動物模型評價止血產品的方法。

背景技術：

目前市場上有很多用于止血的產品，但是對于這些止血產品的使用評價則沒有統一的規定。

技術實現要素：

本發明旨在至少在一定程度上解決相關技術中的技術問題之一。為此，本發明的一個目的在于提出構建兔創傷止血動物模型的方法和利用該動物模型評價止血產品的方法，利用該兔創傷止血動物模型可以有效地對止血產品進行評價，進而為止血藥物的篩選和評價提供可靠依據。

為此，在本發明的一個方面，本發明提出了一種構建兔創傷止血動物模型的方法。根據本發明的實施例，該方法包括：將兔禁食不禁水24h；將所述兔進行稱重和麻醉處理；將經過所述麻醉處理的所述兔左側臥，暴露右側，于肝臟相應部位進行備皮處理；沿右側最后肋骨平行處切口3～6cm，鈍性分離腹外斜肌和內斜肌，暴露并剪開腹膜，暴露肝臟；以及于右葉肝臟的壁面切出小方口，剝離表層，形成出血創面，以便得到兔創傷止血動物模型。

根據本發明的實施例，發明人發現，通過采用上述構建兔創傷止血動物模型的方法，所獲得的動物模型可以有效地對多種止血產品進行測試評價，從而對止血產品的止血性能進行評價，對止血產品的研發提供指導。

另外，根據本發明上述實施例的構建兔創傷止血動物模型的方法還可以具有如下附加的技術特征：

在本發明的一些實施例中，所述兔的體重為2.8～3.2kg。

在本發明的一些實施例中，所述麻醉處理包括：采用3wt％戊巴比妥鈉溶液按照0.5mL/kg的劑量對所述兔進行第一靜脈注射；于3min后采用陸眠寧II按照0.1mL/kg的劑量對所述兔進行第二靜脈注射。

在本發明的一些實施例中，所述備皮處理得到的備皮區域為8cm×15cm。

在本發明的一些實施例中，沿右側最后肋骨平行處切口長度為3～6cm，優選5cm。

在本發明的一些實施例中，所述小方口的大小為1cm×1cm。

在本發明的一些實施例中，剝離所述表層3～4mm。

在本發明的另一方面，本發明提出了一種用于評價止血產品的方法。根據本發明的實施例，該方法包括：根據前面所述的方法構建得到兔創傷止血動物模型；對所述兔創傷止血動物模型施加所述止血產品。

由此，采用上述實施例構建得到的兔創傷止血動物模型可以有效地對止血產品進行篩選和評價。

另外，根據本發明上述實施例的用于評價止血產品的方法還可以具有如下附加的技術特征：

在本發明的一些實施例中，對所述兔創傷出血動物模型施加所述止血產品按照下列步驟進行：用紗布在所述出血創面處按壓止血30s；取下紗布并立即在所述出血創面上施加所述止血產品；用紗布按壓并持續3min直至無血液滲出。

在本發明的一些實施例中，上述實施例的用于評價止血產品的方法進一步包括：在施加所述止血產品后，關閉腹腔，并對創口進行消毒；對所述兔肌肉注射青霉素鈉注射液，以便預防感染。

在本發明的一些實施例中，所述止血產品為止血粉、止血棉和止血紗布中的至少之一。

本發明的附加方面和優點將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變得明顯，或通過本發明的實踐了解到。

具體實施方式

下面詳細描述本發明的實施例。下面描述的實施例是示例性的，僅用于解釋本發明，而不能理解為對本發明的限制。實施例中未注明具體技術或條件的，按照本領域內的文獻所描述的技術或條件或者按照產品說明書進行。所用試劑或儀器未注明生產廠商者，均為可以通過市購獲得的常規產品。

此外，術語“第一”、“第二”僅用于描述目的，而不能理解為指示或暗示相對重要性或者隱含指明所指示的技術特征的數量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隱含地包括至少一個該特征。

在本發明的一個方面，本發明提出了一種構建兔創傷止血動物模型的方法。根據本發明的實施例，該方法包括：將兔禁食不禁水24h；將所述兔進行稱重和麻醉處理；將經過所述麻醉處理的所述兔左側臥，暴露右側，于肝臟相應部位進行備皮處理；沿右側最后肋骨平行處切口3～6cm，鈍性分離腹外斜肌和內斜肌，暴露并剪開腹膜，暴露肝臟；以及于右葉肝臟的壁面切出小方口，剝離表層，形成出血創面，以便得到兔創傷止血動物模型。

根據本發明的實施例，發明人發現，通過采用上述構建兔創傷止血動物模型的方法，所獲得動物模型可以有效地對多種止血產品進行測試評價，從而對止血產品的止血性能進行評價，對止血產品的研發提供指導。

根據本發明的具體實施例，兔的體重為2.8～3.2kg。

根據本發明的具體實施例，將兔進行稱重之后對兔進行麻醉處理。具體地，可以根據兔的體重給以適當劑量的麻藥進行麻醉。根據本發明的具體實施例，麻醉處理具體可以按照下列步驟進行：采用3wt％戊巴比妥鈉溶液按照0.5mL/kg的劑量對所述兔進行第一靜脈注射；于3min后采用陸眠寧II按照0.1mL/kg的劑量對所述兔進行第二靜脈注射。根據本發明的具體實施例，具體可以根據兔體重，通過上述二次麻醉進行追加麻醉，進而有效維持手術時間。該手術時間約為1小時。發明人還發現，首先采用3wt％戊巴比妥鈉溶液進行預麻醉，然后采用陸眠寧II進行二次麻醉，可以有效地達到手術需要的時間麻醉效果，麻醉時效約為1小時，進而保證手術順利進行完畢。

根據本發明的具體示例，在后續的構建模型的過程中，可以根據兔的麻醉深度多次追加首次劑量1/4的陸眠寧II進行麻醉。由此可以保證構建模型的順利完成。

根據本發明的具體實施例，進一步地，將經上述麻醉處理后的兔左側臥，暴露右側，于肝臟相應部位進行備皮處理。由此可以有效地尋找到兔的肝臟。

根據本發明的具體實施例，備皮處理具體操作為于肝臟相應部位進行剃毛，得到的備皮區域為8cm×15cm，由此可以便于后續切口暴露出肝臟。發明人發現，如果備皮區域過小，則無法獲得足夠大的切口區域，進而無法有效地暴露肝臟。根據本發明的具體示例，剃毛并清潔皮膚后，用碘酊對剃除毛的部位進行消毒，再用75％的酒精進行二次消毒、脫碘。備皮處理完成后，在備皮位置鋪上創巾，暴露切口部位。

根據本發明的具體實施例，備皮處理后，沿右側最后肋骨平行處切口3～6cm，鈍性分離腹外斜肌和腹內斜肌，暴露并剪開腹膜，暴露肝臟。根據本發明的具體示例，通過在沿右側最后肋骨平行處切口可以有效地暴露肝臟，同時不會損傷肋骨。根據本發明的具體示例，鈍性分離腹外斜肌和腹內斜肌過程中如遇可見大血管需結扎止血，防止出血量較大而影響實驗。

另外，發明人發現，根據兔的體型大小可以適當調節切口大小，具體長度控制在3～6cm比較合適。通常采用體重適中的兔，其切口大小可以為5cm。由此可以暴露出適當大小的肝臟，且便于后續在肝臟表面形成出血創面。發明人發現，切口過小，則手術視野太小，不便于手術操作，并且無法暴露出肝臟；切口過大則會導致創傷嚴重，出血過多，影響實驗進行。

根據本發明的具體實施例，暴露肝臟后，于右葉肝臟的壁面切出小方口，剝離表層，形成出血創面，以便得到兔創傷止血動物模型。

根據本發明的具體實施例，為了方便操作，選擇在右葉肝臟的壁面進行制造出血創面，首先在右葉肝臟的壁面切出小方口。根據本發明的具體示例，小方口的大小可以為1cm×1cm，由此可以形成適當大小的出血創面。發明人發現，如果小方口的面積大于1cm×1cm會導致出血面積過大，出血嚴重，可能任何止血產品都達不到理想的效果，進而不能夠有效地對止血產品進行評價。如果出血面積小于1cm×1cm，出血面積過小，一般的止血產品都能夠達到止血效果，進而無法對止血產品進行合理的篩選和評價。為此，發明人通過反復試驗發現，規定創口面積大小為1cm×1cm，可以有效地對止血產品進行評價。

根據本發明的具體實施例，進一步地，成功切出小方口后，剝離小方口處的表層，具體地，剝離的厚度為3～4mm。由此可以形成出血量和出血速度合適的出血創面。根據本發明的具體示例，發明人發現，剝離的厚度為3～4mm，首先不會碰及大動脈，同時3～4mm的深度，小靜脈和小動脈血管比較豐富，可以達到預期的出血效果。

由此，根據本發明上述實施例的構建兔創傷止血動物模型的方法是發明人通過大量實驗研究得出的，利用上述方法可以有效地在兔的肝臟壁面形成出血創面，該出血創面的面積大小和深度適宜，可以有效地用于止血產品的篩選和評價。另外，本發明上述實施例構建的兔創傷止血動物模型可以適用于上述各止血產品的篩選和評價，例如可以用于止血粉、止血棉和止血紗布等。因此，該兔創傷止血動物模型的適用性更加廣泛。

在本發明的另一方面，本發明提出了一種用于評價止血產品的方法。根據本發明的具體實施例，該方法包括：根據前面所述的方法構建得到兔創傷止血動物模型；對所述兔創傷止血動物模型施加所述止血產品。

根據本發明的具體實施例，上述實施例的用于評價止血產品的方法中，對所述兔創傷出血動物模型施加所述止血產品按照下列步驟進行：用紗布在所述出血創面處按壓止血30s；取下紗布并立即在所述出血創面上施加所述止血產品；用紗布按壓并持續3min直至無血液滲出。

根據本發明的具體實施例，利用上述實施例的方法構建得到的兔創傷止血動物模型的出血創面需要立即用紗布按壓止血，時間為30s最佳，由此可以暫時止血并防止大量出血，為準備止血產品提供時間。

根據本發明的具體實施例，按壓止血30s后，取下紗布并立即在出血創面上使用待評價的止血產品，并用紗布按壓持續3min。根據本發明的具體示例，在出血創面上使用止血產品后，應立即用紗布按壓，由此可以達到輕微止血和便于止血藥物發揮止血作用。

根據本發明的具體實施例，按壓持續3min后，取下紗布觀察滲血情況，若有血液滲出，再給一次止血產品，并輔以按壓，直至無血液滲出為止。

根據本發明的具體實施例，上述實施例的用于評價止血產品的方法進一步包括：在施加所述止血產品后，關閉腹腔，并對創口進行消毒；對所述兔肌肉注射青霉素鈉注射液，以便預防感染。

根據本發明的具體實施例，止血產品為止血粉、止血棉和止血紗布中的至少一種。由此，本發明上述實施例構建的兔創傷止血動物模型可以適用于上述各止血產品的篩選和評價。

根據本發明的具體實施例，根據上述方法對兔創傷止血動物模型給以止血產品并關閉腹腔后，進一步加強護理，觀察臨床變化，并做好記錄。

根據本發明的具體實施例，在動物模型給以止血產品后分別于不同時間點解剖，觀察肝臟損傷創面的愈合(修復)情況，并取創面組織做病理組織學檢查。以便進一步對止血產品的藥理作用進行比較研究和評價。

下面參考具體實施例，對本發明進行描述，需要說明的是，這些實施例僅僅是描述性的，而不以任何方式限制本發明。

實施例1

構建兔創傷止血動物模型

(1)實驗用新西蘭兔(GB 14922-1994)；體重：3±0.2kg；性別：雌雄不限。

(2)器械和材料：常規外科手術器械、麻醉藥品、急救藥品、消毒藥物、手術室耗材等。

(3)術前禁飼：動物術前24h禁食不禁水。

(4)麻醉：動物稱重，先用3wt％戊巴比妥鈉(sigma,P3761-25g；CAS Number:57-33-0)以0.5mL/kg劑量靜脈注射，進行前期麻醉。3min后靜脈注射陸眠寧Ⅱ(吉林省華牧動物保健品有限公司；2014.04,12)，以0.1mL/kg的劑量執行。

(5)術前采血

麻醉前于前肢采集2mL靜脈血，用于測定血相和血清生化。

(6)備皮

根據麻醉程度，左側臥，暴露右側，于肝臟相應部位剃毛，備皮區8cm×15cm，清潔后用先用碘酊消毒，再用75％的酒精消毒、脫碘。鋪上創巾，暴露切口部位。

(7)暴露肝臟制造出血創面

沿右側最后肋骨平行處切口，長度為5cm，鈍性分離腹外斜肌和腹內斜肌，遇可見大血管需結扎止血，防止出血量較大而影響實驗。暴露并剪開腹膜，暴露肝臟。

于右葉壁面前段切一1cm×1cm的小方口，剝離3～4mm的表層。

實施例2

利用實施例1構建得到的兔創傷止血動物模型對止血產品進行評價

按照實施例1的方法構建五頭兔創傷止血動物模型。

止血產品為止血粉。

評價方法：

(1)在五頭兔創傷止血動物模型的出血創口立即用紗布按壓止血30s，取下后立即在創面上使用止血產品，并用無菌紗布按壓，持續3min，取下紗布觀察滲血情況，若有血液滲出，再給一次止血產品，并輔以按壓，直至無血液滲出為止。

(2)止血切實后，再觀察10min，再無出血后關閉腹腔，創口常規消毒。

(3)術后，每日以20萬IU/kg青霉素鈉，配以0.9％的生理鹽水肌肉注射，預防感染，1次/d。加強護理，觀察臨床變化，并做好記錄。

(4)每頭兔分別于創模后的不同時間點解剖，觀察肝臟損傷創面的愈合(修復)情況，并取創面組織做病理組織學檢查。以便對止血粉的止血性能以及藥理作用進行評價。

在本說明書的描述中，參考術語“一個實施例”、“一些實施例”、“示例”、“具體示例”、或“一些示例”等的描述意指結合該實施例或示例描述的具體特征、結構、材料或者特點包含于本發明的至少一個實施例或示例中。在本說明書中，對上述術語的示意性表述不必須針對的是相同的實施例或示例。而且，描述的具體特征、結構、材料或者特點可以在任一個或多個實施例或示例中以合適的方式結合。此外，在不相互矛盾的情況下，本領域的技術人員可以將本說明書中描述的不同實施例或示例以及不同實施例或示例的特征進行結合和組合。

盡管上面已經示出和描述了本發明的實施例，可以理解的是，上述實施例是示例性的，不能理解為對本發明的限制，本領域的普通技術人員在本發明的范圍內可以對上述實施例進行變化、修改、替換和變型。