本發(fā)明涉及一種從植物中提取有效成分的方法，特別涉及一種枸樹有效成分的提取方法及其制備化妝品的用途。

背景技術(shù)：

枸樹，【拉丁學(xué)名】Broussonetia papyrifera (Linn.) L'Hér. ex Vent；【別稱】構(gòu)桃樹、構(gòu)乳樹、楮樹、楮實(shí)子、沙紙樹、谷木、谷漿樹、假楊梅；為落葉喬木，高10 - 20m；樹皮暗灰色；小枝密生柔毛。樹冠張開，卵形至廣卵形；樹皮平滑，淺灰色或灰褐色，不易裂，全株含乳汁。構(gòu)樹具有速生、適應(yīng)性強(qiáng)、分布廣、易繁殖、熱量高、輪伐期短的特點(diǎn)。其根系淺，側(cè)根分布很廣，生長快，萌芽力和分蘗力強(qiáng)，耐修剪?？刮廴拘詮?qiáng)。在中國的溫帶、熱帶均有分布，不論平原、丘陵或山地都能生長，其葉是很好的豬飼料，其韌皮纖維是造紙的高級(jí)原料，材質(zhì)潔白，其根和種子均可入藥，樹液可治皮膚病，經(jīng)濟(jì)價(jià)值很高。

從20 世紀(jì) 80 年代開始，構(gòu)樹廣受國內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注，其化學(xué)成分及藥理活性研究取得較大進(jìn)展。枸樹含有的多種活性組分，具有廣泛的生理藥理功能，如促進(jìn)學(xué)習(xí)，改善記憶；抗血小板凝集；抑制芳香化酶（顯示具有治療乳腺癌，前列腺癌的作用）；抑制類脂氧化和血管平滑肌增殖(顯示具有治療動(dòng)脈硬化和心血管疾病的作用)；抗氧化作用；抑制酪氨酸酶活性（美白肌膚）以及抑菌作用等。枸樹根、莖、葉中含有大量的黃酮類化合物，學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，從枸樹中分離的黃酮類組分具有強(qiáng)烈抑制Fe²⁺引起的小鼠腦勻漿類脂過氧化作用和多種抗氧化功能。從本植物分離得到大量黃酮類化合物，并分離得到一些生物堿、木脂素、香豆素、萜、揮發(fā)油 、脂肪酸、脂和氨基酸及其他類化合物，藥理研究表明多個(gè)成分具有抗血小板聚集、抑制芳香化酶、抗氧化、抗菌、抗炎、抑制蛋白酪氨酸磷酸酶 1B、細(xì)胞毒等活性?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明構(gòu)樹中所含的黃酮類化合物具有很好的抑菌作用，現(xiàn)今絕大多數(shù)構(gòu)樹提取物活性研究集中于其單獨(dú)抑菌效果。

關(guān)于從枸樹提取有效成分的文獻(xiàn)如下：

中國專利，申請(qǐng)?zhí)枺?01110405187.X；申請(qǐng)人：江蘇中煙工業(yè)有限責(zé)任公司；發(fā)明名稱：一種枸樹果實(shí)精油在卷煙加香加料中的應(yīng)用；摘要：本發(fā)明公開了一種枸樹果實(shí)精油在卷煙加香加料中的應(yīng)用。枸樹果實(shí)精油按以下步驟提取制得：將枸樹果實(shí)洗凈后攪碎，將攪碎后的漿液轉(zhuǎn)移至燒瓶中；向燒瓶中加入溶劑 A，水浴蒸餾浸提；將浸提液冷卻后用紗布過濾，濾液減壓抽提，將濾液濃縮，得枸樹果實(shí)精油。 按體積比為 1∶1在枸樹果實(shí)精油中加入溶劑 B，得稀釋液，按照煙絲總重量的 0.05％～0.5％將該稀釋液在加香加料過程中添加到煙絲中。 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：可提高卷煙的吸食品質(zhì)，提高香氣質(zhì)，豐富煙香，與煙草本香諧調(diào)。枸樹果實(shí)來源于天然植物，不存在化學(xué)品污染問題，其提取方法簡易、便于操作，制作成本低廉，且其應(yīng)用不改變現(xiàn)有的卷煙加工工藝，具有實(shí)際生產(chǎn)意義和價(jià)值。

【題名】雜交枸樹根黃酮類物質(zhì)的提取及其抑菌活性研究【作者】徐夢(mèng)宇， 咸淑慧，王榮鎮(zhèn)，張慧，郭承華【機(jī)構(gòu)】煙臺(tái)大學(xué)化學(xué)生物理工學(xué)院【刊名】食 品科技，2011年第36卷第4期，第194-196頁【摘要】研究雜交構(gòu)樹根中黃酮類提取物的最優(yōu)抑菌條件，同時(shí)進(jìn)行提取物與抗生素的聯(lián)合抑菌活性的探究。采用大孔吸附樹脂層析方法對(duì)提取物進(jìn)行分離純化，依次用 20%、40%、60%和80%乙醇進(jìn)行洗脫，得到性狀不同的洗脫物。利用濾紙片法對(duì)上述 4 種洗脫物進(jìn)行抑菌試驗(yàn)，并采用洗脫液濃度-藥液濃度-藥液溶劑 3 因素分析。其產(chǎn)率依次為 1.407%、 1.435%、0.2858%、0.08441%。上述提取物具有一定抑菌活性，且與青霉素同時(shí)使用時(shí)，會(huì)不同程度地抑制青霉素的抑菌效果。

中國專利，申請(qǐng)?zhí)枺?01410153776.7；申請(qǐng)人：河北以嶺醫(yī)藥研究院有限公司；發(fā)明名稱：一種構(gòu)樹葉總黃酮的應(yīng)用；摘要：本發(fā)明公開了一種構(gòu)樹葉總黃酮的應(yīng)用，屬于藥物用途領(lǐng)域，該藥物對(duì)于腦缺血或心肌缺血有明顯的抑制作用，可以長期服用，無副作用。其中，公開了：構(gòu)樹葉總黃酮的制備方法由以下步驟制成：A、稱取構(gòu)樹葉，加 12 倍量 60% 乙醇浸泡 30 分鐘，回流提取 3 次，每次 2 小時(shí)，過濾，濾液減壓濃縮，加 5 倍量水，混勻，冷藏，過濾，濾液備用；B、大孔吸附樹脂純化：步驟 A 所得濾液用鹽酸調(diào) ph=3-4，用大孔吸附樹脂進(jìn)行純化，上樣流速為 2 倍柱體積每小時(shí)，飽和 1 小時(shí)，水洗脫 6 倍柱體積，40% 乙醇洗脫 6 倍柱體積，40%乙醇洗脫液回收，減壓濃縮，得到濃縮液，備用；C、聚酰胺純化：大孔吸附樹脂純化后的濃縮液用聚酰胺進(jìn)行純化，上樣流速為 1 倍柱體積每小時(shí)，飽和 1 小時(shí)，20% 乙醇洗脫 10 倍柱體積，60% 乙醇洗脫 15 倍柱體積，60%乙醇洗脫液回收，減壓干燥成干膏粉碎過 60 目篩，即得。

上述公開文獻(xiàn)從不同角度對(duì)提取枸樹有效成分進(jìn)行了論述，申請(qǐng)?zhí)枮?01110405187.X的專利是先溶劑提取，后采用水浴蒸餾浸提再經(jīng)濃縮得到；而題名為雜交枸樹根黃酮類物質(zhì)的提取及其抑菌活性研究的文獻(xiàn)則是先采用乙醇浸題，再用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，最后用大孔吸附樹脂收集濃縮；專利申請(qǐng)?zhí)枮?01410153776.7的專利則是先采用乙醇浸提，再用大孔樹脂純化，最后用聚酰胺純化；上述三種不同的提取方法得到不同用途的枸樹有效成分，但是有的方法提取不完全，使得枸樹資源未能充分利用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種從枸樹葉提取有效成分的方法，是運(yùn)用纖維素酶和復(fù)配蛋白酶使植物細(xì)胞壁疏松、破裂、減小傳質(zhì)阻力，加速有效成分黃酮類物質(zhì)和多酚類的釋放，利用弱堿性小分子團(tuán)水再次對(duì)枸樹渣殘存的有效成分進(jìn)行浸提，微濾膜純化提取液等現(xiàn)代生物工程技術(shù)制備的枸樹根及莖提取物，富含多酚、黃酮等抗氧化成分和抗菌消炎成分，提取和分離得率高，可用于制備化妝品。

本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的：

枸樹有效成分的提取方法，包括如下步驟：

1）首先清除枸樹葉的泥土及雜草，將枸樹葉用自來水洗干凈，陰干，然后利用超細(xì)機(jī)械粉碎機(jī)將枸樹葉進(jìn)行粉碎處理，達(dá)到1000-2000目，得到枸樹葉粉末；

2）按照枸樹葉粉末的重量，加入5-10倍量的水浸泡步驟1）得到的枸樹葉粉末，同時(shí)在加熱反應(yīng)釜中加入枸樹粉末重量1‰-5‰的纖維素酶，調(diào)整pH為6-7，溫度為40-50℃，攪拌速度為20-35rpm，酶解2-4hr；纖維素酶酶解后再加入枸樹葉重量1‰-5‰的復(fù)配蛋白酶，調(diào)整pH為6-7，溫度為40-50℃，攪拌速度為20-35rpm，酶解2-4hr；復(fù)配蛋白酶酶解后，在90-100℃高溫下處理 2～5min 使復(fù)配蛋白酶失活；離心，得酶解液和枸樹渣；

3）采用弱堿性小分子團(tuán)水對(duì)步驟2）中的枸樹渣，每公斤枸樹渣加入5-8升弱堿性小分子團(tuán)水；在15-25℃的溫度下提取1-2小時(shí)，再次分離出提取液和枸樹渣；

4）合并步驟2）和步驟3）的枸樹渣，得到混合枸樹渣，而混合枸樹渣用作豬飼料；合并步驟2）的酶解液和步驟3）的提取液，得到混合提取液，將混合提取液過無機(jī)陶瓷微濾膜，無機(jī)陶瓷微濾膜孔徑為0.1-1μm，微濾操作中，控制混合提取液的溫度為40-60℃，壓力為0.2-0.4 MPa，得到微濾液；再用體積濃度為60%的乙醇溶液對(duì)微濾液進(jìn)行洗脫，得到洗脫液；將洗脫液進(jìn)行減壓濃縮處理，回收乙醇，減壓干燥成干膏粉碎過 60 目篩，得到枸樹提取物。

所述的弱堿性小分子團(tuán)水是采用申請(qǐng)?zhí)枮?01010253226.4，發(fā)明名稱為“一種天然的永恒的弱堿性小分子團(tuán)水的制作設(shè)備及其方法”的專利中所述的方法制備得到，其制作過程包括以下步驟：步驟 1：將水由進(jìn)水管通入制作設(shè)備內(nèi)，水依序流經(jīng)過濾器和小分子團(tuán)水發(fā)生器，由出水管流出；步驟 2：調(diào)整出水管上的水流量調(diào)節(jié)閥門，將出水管內(nèi)的水流量調(diào)整為 20-80mL/min，酸堿度調(diào)整管中空腔體內(nèi)的水流調(diào)整呈串珠斷掉式下落；步驟 3：容器在酸堿度調(diào)整管下端的出水口接水，即可得到弱堿性小分子團(tuán)水。在本發(fā)明中，采用弱堿性小分子團(tuán)水對(duì)枸樹渣殘存的有效成分進(jìn)行浸提，提高有效成分的得率，具有提取過程溫和、安全、綠色環(huán)保的特點(diǎn)，同時(shí)也避免了常規(guī)強(qiáng)酸強(qiáng)堿提取帶來的危害。

所述的復(fù)配蛋白酶為木瓜蛋白酶和堿性蛋白酶按照1:1的重量比混合而成。

本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步為：

1、在本發(fā)明中，首先利用纖維素酶和復(fù)配蛋白酶使植物細(xì)胞壁疏松、破裂、減小傳質(zhì)阻力，加速有效成分黃酮類物質(zhì)和多酚類的釋放，從而提高提取效率，同時(shí)調(diào)節(jié)適宜的溫度和 pH 值，在溫和的提取條件下即可使枸樹葉有效成分快速浸出，提取效率較高；接著采用弱堿性小分子團(tuán)水對(duì)枸樹渣殘存的有效成分進(jìn)行浸提，提高有效成分的得率；再緊接著利用無機(jī)陶瓷微濾膜，能較好地去除枸樹提取液中的微粒、淀粉、果膠和蛋白質(zhì)等大分子雜質(zhì)，進(jìn)一步提高有效成分的純度；最后利用乙醇溶液洗脫，將洗脫液減壓濃縮，回收乙醇，噴霧干燥，得到枸樹提取物。

2、本發(fā)明枸樹提取物中，黃酮類化合物的含量在55%以上，多酚類化合物在30%以上，回收率達(dá)到95%以上，而傳統(tǒng)的醇-樹脂法，總黃酮含量在50%以上，多酚類化合物含量在25%以上，回收率達(dá)90%以上。因此，可以看出，采用本發(fā)明的提取方法，黃酮類的含量從50%提高到55%，多酚類化合物含量也從25%提高到30%，其回收率也從90%提高到95%。

3、通過本發(fā)明的提取方法得到的枸樹提取物，富含多酚、黃酮等抗氧化成分和抗菌消炎成分，可用于制備化妝品，可高效清除皮膚細(xì)胞新陳代謝所堆積的自由基，提高人體排毒和防御機(jī)能，使衰老細(xì)胞的活力得以恢復(fù)，加快清除死亡的皮膚細(xì)胞，促進(jìn)皮膚細(xì)胞的新生，延緩肌膚衰老。從而使因?yàn)槟挲g增長導(dǎo)致的面部黃斑變淺進(jìn)而消失，毛孔收縮、變小甚至消失，面部粗細(xì)皺紋改善。長期使用會(huì)使皮膚白嫩、光滑，彈性恢復(fù)、富有青春光澤。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

枸樹有效成分的提取方法，包括如下步驟：

1）首先清除枸樹葉的泥土及雜草，將枸樹葉用自來水洗干凈，陰干，然后利用超細(xì)機(jī)械粉碎機(jī)將枸樹葉進(jìn)行粉碎處理，達(dá)到1000-2000目，得到枸樹葉粉末；

2）按照枸樹葉粉末的重量，加入5倍量的水浸泡步驟1）得到的枸樹葉粉末，同時(shí)在加熱反應(yīng)釜中加入枸樹粉末重量1‰的纖維素酶，調(diào)整pH為6-7，溫度為40℃，攪拌速度為35rpm，酶解4hr；纖維素酶酶解后再加入枸樹葉重量1‰的復(fù)配蛋白酶，調(diào)整pH為6-7，溫度為40℃，攪拌速度為35rpm，酶解4hr；復(fù)配蛋白酶酶解后，在90℃高溫下處理5min 使復(fù)配蛋白酶失活；離心，得酶解液和枸樹渣；

3）采用弱堿性小分子團(tuán)水對(duì)步驟2）中的枸樹渣，每公斤枸樹渣加入5升弱堿性小分子團(tuán)水；在15℃的溫度下提取2小時(shí)，再次分離出提取液和枸樹渣；

4）合并步驟2）和步驟3）的枸樹渣，得到混合枸樹渣，而混合枸樹渣用作豬飼料；合并步驟2）的酶解液和步驟3）的提取液，得到混合提取液，將混合提取液過無機(jī)陶瓷微濾膜，無機(jī)陶瓷微濾膜孔徑為0.1-1μm，微濾操作中，控制混合提取液的溫度為40℃，壓力為0.4 MPa，得到微濾液；再用體積濃度為60%的乙醇溶液對(duì)微濾液進(jìn)行洗脫，得到洗脫液；將洗脫液進(jìn)行減壓濃縮處理，回收乙醇，減壓干燥成干膏粉碎過 60 目篩，得到枸樹提取物。

所述的弱堿性小分子團(tuán)水是采用申請(qǐng)?zhí)枮?01010253226.4，發(fā)明名稱為“一種天然的永恒的弱堿性小分子團(tuán)水的制作設(shè)備及其方法”的專利中所述的方法制備得到，其制作過程包括以下步驟：步驟 1：將水由進(jìn)水管通入制作設(shè)備內(nèi)，水依序流經(jīng)過濾器和小分子團(tuán)水發(fā)生器，由出水管流出；步驟 2：調(diào)整出水管上的水流量調(diào)節(jié)閥門，將出水管內(nèi)的水流量調(diào)整為 20-80mL/min，酸堿度調(diào)整管中空腔體內(nèi)的水流調(diào)整呈串珠斷掉式下落；步驟 3：容器在酸堿度調(diào)整管下端的出水口接水，即可得到弱堿性小分子團(tuán)水。

所述的復(fù)配蛋白酶為木瓜蛋白酶和堿性蛋白酶按照1:1的重量比混合而成。

實(shí)施例2

枸樹有效成分的提取方法，包括如下步驟：

1）首先清除枸樹葉的泥土及雜草，將枸樹葉用自來水洗干凈，陰干，然后利用超細(xì)機(jī)械粉碎機(jī)將枸樹葉進(jìn)行粉碎處理，達(dá)到1000-2000目，得到枸樹葉粉末；

2）按照枸樹葉粉末的重量，加入8倍量的水浸泡步驟1）得到的枸樹葉粉末，同時(shí)在加熱反應(yīng)釜中加入枸樹粉末重量3‰的纖維素酶，調(diào)整pH為6-7，溫度為45℃，攪拌速度為30rpm，酶解3hr；纖維素酶酶解后再加入枸樹葉重量3‰的復(fù)配蛋白酶，調(diào)整pH為6-7，溫度為45℃，攪拌速度為30rpm，酶解3hr；復(fù)配蛋白酶酶解后，在95℃高溫下處理 4min 使復(fù)配蛋白酶失活；離心，得酶解液和枸樹渣；

3）采用弱堿性小分子團(tuán)水對(duì)步驟2）中的枸樹渣，每公斤枸樹渣加入7升弱堿性小分子團(tuán)水；在20℃的溫度下提取1.5小時(shí)，再次分離出提取液和枸樹渣；

4）合并步驟2）和步驟3）的枸樹渣，得到混合枸樹渣，而混合枸樹渣用作豬飼料；合并步驟2）的酶解液和步驟3）的提取液，得到混合提取液，將混合提取液過無機(jī)陶瓷微濾膜，無機(jī)陶瓷微濾膜孔徑為0.1-1μm，微濾操作中，控制混合提取液的溫度為50℃，壓力為0.3 MPa，得到微濾液；再用體積濃度為60%的乙醇溶液對(duì)微濾液進(jìn)行洗脫，得到洗脫液；將洗脫液進(jìn)行減壓濃縮處理，回收乙醇，減壓干燥成干膏粉碎過 60 目篩，得到枸樹提取物。

所述的弱堿性小分子團(tuán)水是采用申請(qǐng)?zhí)枮?01010253226.4，發(fā)明名稱為“一種天然的永恒的弱堿性小分子團(tuán)水的制作設(shè)備及其方法”的專利中所述的方法制備得到，其制作過程包括以下步驟：步驟 1：將水由進(jìn)水管通入制作設(shè)備內(nèi)，水依序流經(jīng)過濾器和小分子團(tuán)水發(fā)生器，由出水管流出；步驟 2：調(diào)整出水管上的水流量調(diào)節(jié)閥門，將出水管內(nèi)的水流量調(diào)整為 20-80mL/min，酸堿度調(diào)整管中空腔體內(nèi)的水流調(diào)整呈串珠斷掉式下落；步驟 3：容器在酸堿度調(diào)整管下端的出水口接水，即可得到弱堿性小分子團(tuán)水。

所述的復(fù)配蛋白酶為木瓜蛋白酶和堿性蛋白酶按照1:1的重量比混合而成。

實(shí)施例3

枸樹有效成分的提取方法，包括如下步驟：

1）首先清除枸樹葉的泥土及雜草，將枸樹葉用自來水洗干凈，陰干，然后利用超細(xì)機(jī)械粉碎機(jī)將枸樹葉進(jìn)行粉碎處理，達(dá)到1000-2000目，得到枸樹葉粉末；

2）按照枸樹葉粉末的重量，加入10倍量的水浸泡步驟1）得到的枸樹葉粉末，同時(shí)在加熱反應(yīng)釜中加入枸樹粉末重量5‰的纖維素酶，調(diào)整pH為6-7，溫度為50℃，攪拌速度為20rpm，酶解2hr；纖維素酶酶解后再加入枸樹葉重量5‰的復(fù)配蛋白酶，調(diào)整pH為7，溫度為50℃，攪拌速度為20rpm，酶解2hr；復(fù)配蛋白酶酶解后，在100℃高溫下處理 2min 使復(fù)配蛋白酶失活；離心，得酶解液和枸樹渣；

3）采用弱堿性小分子團(tuán)水對(duì)步驟2）中的枸樹渣，每公斤枸樹渣加入8升弱堿性小分子團(tuán)水；在25℃的溫度下提取1小時(shí)，再次分離出提取液和枸樹渣；

4）合并步驟2）和步驟3）的枸樹渣，得到混合枸樹渣，而混合枸樹渣用作豬飼料；合并步驟2）的酶解液和步驟3）的提取液，得到混合提取液，將混合提取液過無機(jī)陶瓷微濾膜，無機(jī)陶瓷微濾膜孔徑為0.1-1μm，微濾操作中，控制混合提取液的溫度為60℃，壓力為0.2 MPa，得到微濾液；再用體積濃度為60%的乙醇溶液對(duì)微濾液進(jìn)行洗脫，得到洗脫液；將洗脫液進(jìn)行減壓濃縮處理，回收乙醇，減壓干燥成干膏粉碎過 60 目篩，得到枸樹提取物。

所述的弱堿性小分子團(tuán)水是采用申請(qǐng)?zhí)枮?01010253226.4，發(fā)明名稱為“一種天然的永恒的弱堿性小分子團(tuán)水的制作設(shè)備及其方法”的專利中所述的方法制備得到，其制作過程包括以下步驟：步驟 1：將水由進(jìn)水管通入制作設(shè)備內(nèi)，水依序流經(jīng)過濾器和小分子團(tuán)水發(fā)生器，由出水管流出；步驟 2：調(diào)整出水管上的水流量調(diào)節(jié)閥門，將出水管內(nèi)的水流量調(diào)整為 20-80mL/min，酸堿度調(diào)整管中空腔體內(nèi)的水流調(diào)整呈串珠斷掉式下落；步驟 3：容器在酸堿度調(diào)整管下端的出水口接水，即可得到弱堿性小分子團(tuán)水。

所述的復(fù)配蛋白酶為木瓜蛋白酶和堿性蛋白酶按照1:1的重量比混合而成。

實(shí)施例4、制作枸樹護(hù)膚霜

將實(shí)施例1得到的枸樹提取物每0.5公斤加入淀粉0.3公斤，牛奶0.4公斤，海藻糖0.2公斤，硬脂酸鎂0.3公斤，凡士林0.7公斤，混合均勻以后，作為護(hù)膚霜，起到抗菌消炎作用。

實(shí)施例5、制作枸樹面膜

將實(shí)施例2得到的枸樹提取物每0.5公斤加入維生素E 0.1公斤，牛奶0.4公斤，珍珠層粉0.1公斤，檸檬汁0.2公斤，雞蛋清0.4公斤，橄欖油0.3公斤，蜂蜜0.1公斤，混合均勻以后，作為面膜，長期使用會(huì)使皮膚白嫩、光滑，彈性恢復(fù)、富有青春光澤。

實(shí)施例6、制作枸樹面霜

將實(shí)施例3得到的枸樹提取物每0.5公斤加入茉莉花精油0.05公斤，蜂蜜0.05公斤，黑芝麻油0.05公斤，維生素E 0.01公斤，牛奶0.3公斤，橄欖油0.2公斤，混合均勻以后，作為面霜，長期使用保持皮膚水潤有光澤。