本發明涉及有機合成和藥物化學領域，具體涉及組合物、制備方法及其用途。
背景技術：
白細胞減少癥是由于原因不明和繼發于其他疾病之后而引起的疾病，分為原發性和繼發性兩大類。原發性者原因不明；繼發性者認為其病因可由急性感染，物理、化學因素，血液系統疾病，伴脾腫大的疾病，結締組織疾病，過敏性疾病，遺傳性疾病等，獲得性或原因不明性粒細胞減少等。
白細胞減少的治療目前已有的藥物存在毒性大、安全性低的問題，從天然產物中尋找化合物或先導化合物并進行結構修飾獲得其衍生物，從而得到高效低毒的潛在藥物有重要價值。
本發明涉及的化合物I是一個2011年發表(Meng Shao et al.,2010.Psiguadials A and B,Two Novel Meroterpenoids with Unusual Skeletons from the Leaves of Psidium guajava.Organic Letters 12(2010)5040–5043)的化合物，我們對化合物I進行了結構修飾，獲得了兩個新的衍生物即化合物III和化合物IV，并用化合物III和化合物IV制備了組合物并對該組合物升高白細胞活性進行了評價，其具有升高白細胞活性。
技術實現要素：
本發明公開了一個新的組合物，該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物中化合物III和化合物IV的質量百分數分別為45％和55％。
本發明公開的組合物可以制成藥學上可接受的鹽或藥學上可接受的載體。
本發明的目的是提供組合物在制備升高白細胞藥物中的應用。本發明組合物可以顯著升高失血和化學物品引起的白細胞降低。
以下通過實施例對本發明作進一步詳細的說明，但本發明的保護范圍不受具體實施例的任何限制，而是由權利要求加以限定。
具體實施方式
實施例1 化合物Psiguadial A的制備
化合物Psiguadial A(I)的制備方法參照Meng Shao等人發表的文獻(Meng Shao et al.,2010.Psiguadials A and B,Two Novel Meroterpenoids with Unusual Skeletons from the Leaves of Psidium guajava.Organic Letters 12(2010)5040–5043)的方法。
實施例2 Psiguadial A的O-溴乙基衍生物(II)的合成
將化合物I(474mg，1.00mmol)溶于20mL苯，向溶液中加入四丁基溴化銨(TBAB)(0.16g)，1,2-二溴乙烷(7.520g，40.00mmol)和12mL的50％氫氧化鈉溶液。混合物在35攝氏度攪拌8h。8h之后將反應液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取兩次，合并有機相溶液。然后對有機相溶液依次用水和飽和食鹽水洗滌3次，再用無水硫酸鈉干燥，最后減壓濃縮去除溶劑得到產物粗品。產物粗品用硅膠柱層析純化(流動相為：石油醚/丙酮＝100:0.5，v/v)，收集棕色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的棕色粉末(502mg，73％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.44(s,2H),7.24(s,2H),7.20(d,J＝10.0Hz,3H),4.31(s,4H),3.89(s,1H),3.74(s,4H),2.30(s,1H),2.12(s,1H),2.02(s,1H),1.92(s,1H),1.79(s,1H),1.73(s,1H),1.51(d,J＝19.8Hz,3H),0.99(s,3H),0.95(d,J＝4.7Hz,7H),0.85(s,3H),0.53(s,1H),0.43(s,1H).
13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ188.69(s),170.54(s),165.42(s),163.38(s),142.72(s),129.71(s),127.96(s),127.08(s),118.00(s),116.82(s),114.82(s),72.73(s),40.19(s),34.75(s),34.32(s),31.75(s),30.93(s),28.09(s),26.43(s),24.48(s),23.74(s),21.18(s),20.77(s),19.99(s),14.39(s).
HRMS(ESI)m/z[M+H]+calcd for C34H41Br2O5:689.1300；found 689.1303.
實施例3 Psiguadial A的O-(苯并咪唑基)乙基衍生物(III)的合成
將化合物II(344mg，0.5mmol)溶于25mL乙腈當中，向其中加入無水碳酸鉀(690mg，5.0mmol)，碘化鉀(168mg，1.0mmol)和苯并咪唑(4720mg，40mmol)，混合物加熱回流3h。反應結束后將反應液倒入20mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取3次，合并有機相。依次用水和飽和食鹽水洗滌合并之后的有機相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產物粗品。產物粗品用硅膠柱層析純化(流動相為：石油醚/丙酮＝100:0.5，v/v)，收集黃色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物III的黃色粉末(289.6mg,76％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.45(s,2H),8.21(s,2H),7.62(d,J＝25.0Hz,4H),7.23(s,4H),7.22–7.14(m,5H),4.66(s,4H),4.45(s,4H),3.88(s,1H),2.11(s,1H),1.93(s,1H),1.89(s,1H),1.82(s,1H),1.71(d,J＝4.2Hz,1H),1.62(d,J＝26.0Hz,1H),1.54(s,1H),1.47(s,2H),1.18(s,1H),0.96(s,3H),0.95–0.71(m,9H),0.50(s,1H),0.25(s,1H).
13C NMR(125MHz,Common NMR Solvents)δ188.43(s),170.27(s),165.08(s),163.05(s),147.11(s),146.19(s),142.40(s),132.81(s),129.35(s),127.61(s),126.74(s),123.84(s),123.27(s),120.67(s),117.67(s),116.50(s),114.46(s),112.79(s),68.49(s),44.65(s),39.85(s),34.42(s),34.00(s),30.58(s),27.75(s),26.10(s),24.16(s),23.38(s),20.83(s),20.43(s),19.67(s),14.02(s).
HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C48H51N4O5:763.3859；found:763.3857。
實施例4 Psiguadial A的O-(二氯乙胺基)乙基衍生物(IV)的合成
1、Psiguadial A的O-(二羥乙胺)乙基衍生物的合成
將化合物II(344mg，0.5mmol)溶于18mL乙腈，加入無水碳酸鉀(0.345g，2.5mmol)，碘化鉀(0.084g，0.5mmol)和二乙醇胺(2.103g，20mmol)，混合物加熱回流2h。反應結束后將反應液倒入冷水中，用二氯甲烷萃取2次，合并有機相，依次用水和飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑。產物用硅膠柱層析純化(石油醚/丙酮100:0.7，v/v)，得到Psiguadial A的O-(二羥乙胺)乙基衍生物的淡棕色固體(0.254g,69％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.45(s,2H),7.27(t,J＝15.0Hz,2H),7.21(t,J＝15.0Hz,2H),7.21(s,1H),4.04(s,4H),3.97(s,1H),3.39(s,8H),2.68(s,4H),2.54(s,8H),2.16(s,1H),2.01(s,1H),1.98–1.90(m,3H),1.68(s,1H),1.62(s,1H),1.45(s,2H),1.40(s,1H),1.12(s,4H),1.00(s,3H),0.93(s,6H),0.89(s,3H),0.52(s,1H),0.27(s,1H).
13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ188.43(s),170.26(s),165.08(s),163.04(s),142.40(s),129.34(s),127.61(s),126.73(s),117.67(s),116.49(s),114.46(s),69.16(s),58.86(s),56.40(s),53.85(s),39.84(s),34.42(s),33.99(s),30.58(s),27.74(s),26.10(s),24.15(s),23.38(s),20.82(s),20.43(s),19.66(s),14.02(s).
HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C42H61N2O9:737.4377；found:737.4374。
Psiguadial A的O-(二羥乙胺)乙基衍生物
2、Psiguadial A的O-(二氯乙胺基)乙基衍生物(IV)的合成
合成足夠多的Psiguadial A的O-(二羥乙胺基)乙基衍生物，將Psiguadial A的O-(二羥乙胺基)乙基衍生物(0.368g，0.5mmol)溶于4mL氯仿，逐滴加入氯化亞砜(2.38g，20mmol)，反應物加熱回流2h。將反應物冷卻至室溫，滴加甲醇分解過量的氯化亞砜，減壓濃縮除去溶劑。產物經硅膠柱層析純化(石油醚/丙酮100:0.5，v/v)，得到化合物IV的淡黃色固體(271.4mg，67％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.33(s,2H),7.09(t,J＝15.0Hz,5H),3.97(s,1H),3.92(s,4H),3.60(s,8H),2.74(s,2H),2.68(s,2H),2.61(d,J＝17.2Hz,4H),2.51(s,4H),2.08(s,1H),1.77(dd,J＝13.8,8.4Hz,4H),1.54(s,1H),1.30(d,J＝12.7Hz,3H),1.13(s,1H),0.86(s,3H),0.81(s,6H),0.75(s,3H),0.39(s,1H),0.11(s,1H).
13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ205.87(s),197.63(s),194.85(s),189.66(s),134.68(s),119.48(s),114.43(s),83.84(s),75.99(s),66.29(s),62.15(s),59.77(s),59.54(s),55.66(s),53.29(s),52.49(s),50.35(s),44.63(s),39.08(d,J＝0.9Hz),36.02(s),30.20(d,J＝8.9Hz),28.18(s),24.69(s),23.50(d,J＝19.2Hz),22.16(s),17.61(s).
HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C42H57Cl4N2O5:811.2992；found:811.2988。
實施例5組合物升高白細胞活性
一、組合物對失血小鼠的治療作用
對失血小鼠的影響ICR小鼠50只，♀♂各半，均分成5組(n＝10)。除生理鹽水組外，其它組每只小鼠從眼眶靜脈放血0.5ml，24h后再取血測全部各組白細胞指標，然后連續灌胃給藥1周，末次給藥1h后，從眼眶靜脈叢取血用F-800全血小板分析儀測白細胞指標。
組合物的制備：將研磨之后過200目網的45mg化合物III的粉末和研磨之后過200目網的55mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用渦輪攪拌儀混合即得到100mg組合物，使用時用水溶解這100mg的組合物即得到組合物的溶液。
表1組合物對因失血所致白細胞減少的治療作用(109/L)
與模型組比較：*p<0.05
結果表明，放血小鼠經服用組合物治療7天后，組合物給藥組與模型組比較，白細胞顯著高于模型組，接近生理鹽水組。而化合物III和化合物IV不具有此活性。
二、組合物對環磷酰胺致白細胞減少的治療作用
對小鼠骨髓造血功能損傷的防治作用ICR小鼠50只，♀♂兼用，均分成5組(n＝10)，即生理鹽水組、造模組、組合物1.2mg/kg組、化合物III 1.2mg/kg組和化合物IV 1.2mg/kg組，口服給藥，每天1次。第0、5、10日除生理鹽水組外，其它各組小鼠分別腹腔注射環磷酸胺80mg/kg，然后繼續給藥3天。于末次給藥后1h，從眼眶靜脈叢取血，測白細胞。
表2組合物對環磷酰胺所致白細胞減少的治療作用(109/L)
與模型組比較：*p<0.05
結果表明，與生理鹽水組比較，環磷酸胺能使小鼠骨髓損傷，造成外周血細胞下降，組合物組與模型組比較，均可明顯對抗環磷酸胺所致小鼠白細胞下降。而化合物III和化合物IV不具有此活性。
三、組合物對苯所致白細胞減少的治療作用
對再生障礙性貧血小鼠的影響：昆明種小鼠50只，♀♂兼用，均分成5組(n＝10)，除生理鹽水組外，其它組小鼠皮下注射苯0.5ml/kg，連續12天，造模的當日，同時口服給藥，每天1次，共18天，末次給藥后1h，眼眶靜脈叢取血，測白細胞。
表3組合物對苯所致血細胞減少的治療作用(109/L)
與模型組比較：*p<0.05
結果表明，組合物組與模型組比較，可明顯對抗苯所致再生障礙性貧血小鼠白細胞的下降。而化合物III和化合物IV不具有此活性。
結論：組合物能夠顯著升高白細胞，可以用來制備抗白細胞降低藥物。而化合物III和化合物IV不具有顯著升高白細胞的活性，不可以用來制備抗白細胞降低藥物。
實施例6本發明所涉及組合物片劑的制備
取2克組合物，加入制備片劑的常規輔料18克，混勻，常規壓片機制成100片。
實施例7本發明所涉及組合物膠囊的制備
取2克組合物，加入制備膠囊劑的常規輔料如淀粉18克，混勻，裝膠囊制成100粒。