本發明涉及眼部護理液技術領域，具體是一種由鱟細胞裂解液制備眼部護理液的方法。

背景技術：

眼睛及眼睛周圍皮膚是非常稚嫩的，眼睛周圍的皮膚特別柔細纖薄，并有許多褶皺，故眼周肌膚水分蒸發速度較快，同時眼周肌膚汗腺和皮脂腺較少，特別容易干燥缺水。而現代人們因為化妝、游泳、長時間面對電腦和手機、周圍環境霧霾嚴重等多種外在境況的影響，使得眼睛及眼睛周圍皮膚受到很大的影響，出現眼睛干燥、眼睛癢、眼部皮膚癢、眼部皮膚干燥、黑眼圈、眼袋、眼部浮腫、眼部皺紋等多種情況，而目前市面上的眼膏、眼霜等產品在保濕、清潔、抑菌去癢等方面還不涉獵，這也就不能滿足目前人們的使用需要。

鱟，隸屬節肢動物門arthropoda，是一種生活在海洋中的大型節肢動物,在早古生代的奧陶紀出現,至今已有4億多年的歷史,是動物界具有獨特進化地位的“活化石”之一。其中東方鱟屬中的東方鱟(又叫中國鱟)tachypleustridentatus分布于我國沿海的浙江、福建、臺灣地區、廣西和廣東。鱟的血液能提取鱟試劑，后來又發現鱟素對真菌、流感病毒、口腔泡疹病毒及獲得性免疫缺陷綜合癥病毒(hiv)有抗性。所以鱟是可大力開發的珍貴海洋藥用動物資源。

鱟細胞裂解液中含有豐富的鱟素肽、sod、多種氨基酸、多種肽等成分。鱟素是1988年nakamurat.等從中國鱟血細胞碎屑里用酸提取法得到的一種17氨基酸且含2個二硫鍵的β-折疊結構的抗菌肽。鱟素抗菌肽主要存在于鱟血細胞里的小顆粒中，通過和細菌脂糖形成復合物，在低濃度下就能抑制革蘭氏陰性及陽性細菌的生長。鱟素在低ph、高溫下相當穩定，是一種很有應用潛力的抗菌活性物質。另外其本身就是氨基酸，具有修復、保健功效。sod(超氧化物歧化酶)是一種源于生命體的活性物質，能消除生物體在新陳代謝過程中產生的有害物質。對人體不斷地補充sod具有抗衰老的特殊效果。

技術實現要素：

本發明的目的在于提供鱟細胞裂解液的新用途，將鱟細胞裂解液應用于眼部護理領域，具體是提供一種由鱟細胞裂解液制備眼部護理液的方法。

本發明實現其技術目的所采用的技術方案如下：

一種由鱟細胞裂解液制備眼部護理液的方法，包括步驟如下：

第一步，鱟細胞裂解液的制備

(1)取一定量的鱟血細胞按1:1-1:15加入裂解液進行凍融裂解；

(2)裂解后，經離心得到鱟細胞裂解液；

第二步，鱟素肽凍干粉的制備

(1)取100份鱟細胞裂解液與0.1-3份賦形劑均勻混合；

(2)然后將上述混合溶液罐裝到瓶中進行凍干，得鱟素肽凍干粉成品；

第三步，眼部護理液的制備

將上述鱟素肽凍干粉按1:1-1:300的比例加入到純化水溶解液中，得鱟素肽眼部護理液。

而且，所述鱟素肽眼部護理液中鱟素肽凍干粉與純化水的最佳比例范圍為：1:10-1:200。

而且，所述第一步中步驟(2)的離心轉數為3000-5000轉/分。

而且，所述第二步的步驟(1)中的賦形劑為去除熱源的乳糖。

而且，所述第二步的步驟(2)中凍干的具體操作為：在真空度為10pa的條件下，-50℃預凍1小時，然后程序升溫，制品到達24℃，開啟滲氣閥，開始二次干燥，然后制品勻速升溫到達31℃，破解真空，制品出倉。

而且，在100份的所述第三步的鱟素肽眼部護理液中進一步加入透明質酸鈉0.1-10份和冰片0.1-5份。

本發明的優點和效果是：

1、本發明的鱟細胞裂解液(鱟素肽)為天然物質，綠色、天然；具有清潔抑菌的作用。

2、本發明產品除含有鱟素肽外，還含有多種氨基酸等營養成分，可以起到滋養、防皺、修復皮膚損傷的作用。

3、在本發明的溶解液中添加的透明質酸鈉是高效鎖水保濕劑，含有肌膚修復基團，賦予產品水潤嫩滑的膚感；含有的冰片具有清肝明目功效。

4、本發明直接采用鱟血細胞裂解液裂解而成，方法簡單易行，成分協同功效好，具有清潔、滋養、防皺、眼部保健功效，應用于眼部護理領域，具有極大的市場價值。

附圖說明

圖1為1:1比例純凈水稀釋鱟素肽凍干粉在金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、白色念球菌上的2分鐘和20分鐘抑菌試驗的抑菌率測試照片圖；

圖2為1:5比例純凈水稀釋鱟素肽凍干粉在金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、白色念球菌上的2分鐘和20分鐘抑菌試驗的抑菌率測試照片圖；

圖3為1:10比例純凈水稀釋鱟素肽凍干粉在金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、白色念球菌上的2分鐘和20分鐘抑菌試驗的抑菌率測試照片圖；

圖4為1:15比例純凈水稀釋鱟素肽凍干粉在金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、白色念球菌上的2分鐘和20分鐘抑菌試驗的抑菌率測試照片圖；

圖5為高純水在金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、白色念球菌上的2分鐘和20分鐘抑菌試驗的抑菌率測試照片圖。

圖6為1:1到1:300溶解比例的樣品在2分鐘時的金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、白色念球菌抑菌率的曲線變化對比圖。

具體實施方式

下面結合具體實施方案對本發明進一步說明，其具體實施方案應該理解為僅為舉例說明，不是限定性的，不能以下述舉例說明來限定本發明的保護范圍。

一種由鱟細胞裂解液制備眼部護理液的方法，該方法包括步驟如下：

第一步，鱟細胞裂解液的制備

(1)取一定量的鱟血細胞按1:1-1:15加入裂解液進行凍融裂解；

(2)裂解后，經離心得到鱟細胞裂解液；

其中，離心轉數為3000-5000轉/分；

第二步，鱟素肽凍干粉的制備

(1)取100份鱟細胞裂解液與0.1-3份賦形劑均勻混合；

(2)然后罐裝到瓶中進行凍干，得凍干粉成品；

其中，所述賦形劑為去除熱源的乳糖，所述凍干條件為-50℃預凍1小時，真空度10pa，然后程序升溫，制品到達24℃，開啟滲氣閥，開始二次干燥，制品溫度到達31℃，可以破解真空，制品出倉。

第三步，眼部護理液的制備

將上述鱟素肽凍干粉按1:1-1:300的比例加入到純化水溶解液中，得鱟素肽眼部護理液。

在本發明的具體實施中，在100份所述鱟素肽眼部護理液中進一步加入透明質酸鈉0.1-10份、冰片0.1-5份，使得該鱟素肽眼部護理液具有高效鎖水保濕功能，清肝明目功效。

對上述鱟素肽凍干粉進行抑菌試驗

第一類實驗，將上述鱟素肽凍干粉分別對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念球菌進行2分鐘和20分鐘的抑菌試驗，實驗步驟如下：

1)首先用營養瓊脂做4支斜面，沙氏培養基2個斜面。每個菌兩管—營養瓊脂用于金黃色葡萄球菌和大腸桿菌，沙氏培養基用于白色念球菌。

2)制備磷酸鹽緩沖液(pbs)，ph＝7.2，0.03mol/l的緩沖液：磷酸氫二鈉十二水，7.13g；磷酸二氫鉀，1.36g；加1l蒸餾水，121度滅菌15min備用。

3)從劃線的金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、白色念球菌平板上取菌，將其劃在斜面上，將斜面放在37度生化培養箱中培養24h。

4)用2mlpbs分兩次洗一個試管中的菌，兩個試管用了4mlpbs將其全部洗出，制備菌懸液備用。

5)將想驗證的樣品—鱟細胞裂解液(鱟素肽)干粉，用注射用水1:1、1:5、1:10、1:15稀釋，然后分裝到兩個試管中，與對比物高純水組一起構成5種樣液。

6)取菌懸液100ul滴于5ml樣液中，開始計時，作用2min、20min各計時一次。2min、20min時各取0.5ml樣液投入5mlpbs緩沖液試管中，充分混合得a。然后稀釋做梯度，做2-4個梯度。從中取1ml樣液加入到9mlpbs試管中，充分混合得b，從b中取1ml樣液加入到9mlpbs試管中，依次類推。

7)然后將上述做的梯度吸0.5ml放入平板中，加入15ml40-50度的營養瓊脂培養液或沙氏培養液，混合均勻后，將其放入37度48h做活菌計數。真菌的話要等待72h。

8)經計算2分鐘的細菌抑菌率在85％以上，20分鐘的抑菌率在77％以上；2分鐘和20分鐘的真菌抑菌率均在60％以上。

第二類實驗是選取30名20-55歲之間的健康人群進行試用實驗，記錄他們的感受，觀察使用后效果。

實施例1

鱟血細胞和裂解劑按1:10裂解凍融得到鱟血細胞裂解液，該裂解液的凍干粉與溶解液1:1混合得到試驗樣品，將該試驗樣品進行大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念球菌的抑菌試驗，試驗結果見表1，照片見圖1、5。

實施例2

實驗步驟與實施例1一致，所不同的是凍干粉與溶解液按照1:5比例混合得到試驗樣品。試驗結果見表1，照片見圖2、5。

實施例3

實驗步驟與實施例1一致，所不同的凍干粉與溶解液按照1:10比例混合得到試驗樣品。試驗結果見表1，照片見圖3、5。

實施例4

實驗步驟與實施例1一致，所不同的凍干粉與溶解液按照1:15比例混合得到試驗樣品。

試驗結果見表1，照片見圖4、5。

表1為純化水、純化水按1:1、1:5、1:10、1:15稀釋鱟素肽凍干粉對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念球菌的抑菌率。

表1

實施例5

實驗步驟與實施例1一致，所不同的是選取凍干粉與溶解液的比例為1:1、1:5、1:10、1:15、1:20、1:50、1:100、1:200、1:300在2分鐘時的金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、白色念球菌抑菌率的對比。試驗結果見圖6。

實施例6

一種鱟素肽眼部護理液，具體包括按質量份數構成的如下組份：

凍干粉：5份，純化水95份。

選取20-55歲之間的健康人群(性別不限)為測試人群，先清潔雙手和臉部、眼部皮膚，將眼部護理液倒入干凈杯體5ml，然后將杯體扣在眼睛上，然后仰頭持續20秒內按緊杯體，不讓液體外流。每次使用后發現眼部皮膚濕潤光滑，眼睛干澀緩解，連續使用30天后，發現眼部皮膚明顯更光滑有彈性，小細紋消失，眼睛明亮、濕潤。與使用普通眼霜相比，皮膚的濕潤度增加、彈性增加，眼睛更舒服。

實施例7

一種鱟素肽眼部護理液，具體包括按質量份數構成的如下組份：

凍干粉：5份，純化水5份。

選取20-55歲之間的健康人群(性別不限)為測試人群，先清潔雙手和臉部、眼部皮膚，將眼部護理液倒入干凈杯體5ml，然后將杯體扣在眼睛上，然后仰頭持續20秒內按緊杯體，不讓液體外流。使用后發現，與實施例6相比，凍干粉濃度增大為1:1，每次使用后發現眼部皮膚濕潤光滑，眼睛干澀緩解，但因為凍干粉濃度大，30人中有2人感覺眼睛有刺激感，但仍在可接受范圍。連續使用30天后，發現眼部皮膚明顯更光滑有彈性，小細紋消失，眼睛明亮、濕潤。與使用普通眼霜相比，皮膚的濕潤度增加、彈性增加，眼睛更舒服。

實施例8

一種鱟素肽眼部護理液，具體包括按質量份數構成的如下組份：

凍干粉：5份，純化水85份，透明質酸鈉10份。

選取20-55歲之間的健康人群(性別不限)為測試人群，增加透明質酸鈉后，發現每次保濕的時間增加20％，皮膚滑潤感進一步增加。讓人的觸感更好。

實施例9

一種鱟素肽眼部護理液，具體包括按質量份數構成的如下組份：

凍干粉：5份，純化水85份，透明質酸鈉10份，冰片5份。

選取20-55歲之間的健康人群(性別不限)為測試人群，增加冰片后，發現眼睛有涼涼的感覺，更舒服，眼睛干澀、疼痛、瘙癢癥狀減輕的速度增加35％，使眼睛更舒適、明亮。

結合實施例5的抑菌效果及實施例6-實施例9的綜合人體感受效果，確定所述鱟素肽眼部護理液中鱟素肽凍干粉與純化水的最佳比例范圍為：1:10-1:200。