本發(fā)明涉及肝纖維化藥物制備技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及龍虎人丹在制備預(yù)防和/或治療肝纖維化藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

肝纖維化是各種慢性肝損傷過程中一種普遍存在的損傷修復(fù)反應(yīng)，其主要特點是細(xì)胞外基質(zhì)(ecm)的大量沉積。而肝纖維化如果沒有及時治療，最后發(fā)展成肝硬化。同時，肝纖維化也被認(rèn)為是肝癌的一個重要誘因。從通過及時合理的干預(yù)，肝纖維化可以被逆轉(zhuǎn)。目前，針對肝纖維化治療，尚沒有有效的治療藥物。通常采用化學(xué)藥物對肝纖維化進(jìn)行治療，但化療安全性低、毒性大、成本高，對人體產(chǎn)生的副作用大。因此，尋找一個肝纖維化有效的治療藥，成為國內(nèi)外研究的熱點。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供龍虎人丹在制備預(yù)防和/或治療肝纖維化藥物中的應(yīng)用，本發(fā)明中龍虎人丹的使用能夠顯著改善纖維化的作用，其抗肝纖維化和肝保護(hù)效果與陽性藥水飛薊賓相當(dāng)。

本發(fā)明提供了龍虎人丹在制備預(yù)防和/或治療肝纖維化藥物中的應(yīng)用。

優(yōu)選的是，所述龍虎人丹每1000g包括以下質(zhì)量份的成分：薄荷腦32～48g、冰片24～36g、丁香20～30g、砂仁20～30g、八角茴香12～18g、肉桂32～48g、胡椒12～18g、木香12～18g、干姜20～30g、兒茶160～240g、甘草291.28～436.92g、糯米粉144～216g、苯甲酸鈉4～6g、紅氧化鐵11.6～17.4g、二甲硅油0.08～0.12ml、石墨0.16～0.24g、滑石粉0.16～0.24g和糊精3.16～4.74g。

優(yōu)選的是，所述龍虎人丹的劑型包括片劑、粉劑、粒劑、丸劑、膠囊。

優(yōu)選的是，所述龍虎人丹的有效作用劑量為100mg～200mg/kg。

本發(fā)明提供了龍虎人丹在制備預(yù)防和/或治療肝纖維化藥物中的應(yīng)用。在本發(fā)明中，所述龍虎人丹能夠顯著改善肝纖維化，其抗肝纖維化和肝保護(hù)效果與陽性藥水飛薊賓相當(dāng)。且龍虎人丹的副作用小，安全性高。試驗結(jié)果表明，龍虎人丹在低中藥物濃度下具有顯著改善纖維化的作用，其抗肝纖維化和肝保護(hù)效果與陽性藥水飛薊賓相當(dāng)。

附圖說明

圖1為本發(fā)明實施例1提供的龍虎人丹對ccl4誘導(dǎo)肝纖維化小鼠血清學(xué)指標(biāo)的影響結(jié)果圖，其中，圖1a為小鼠血清ast活性結(jié)果圖，圖1b為小鼠血清alt活性結(jié)果圖；

圖2為本發(fā)明實施例1提供的龍虎人丹對ccl4誘導(dǎo)肝纖維化小鼠病理指標(biāo)的影響結(jié)果圖，圖2a為小鼠肝臟he染色結(jié)果圖，圖2b為小鼠肝臟天狼猩紅(siriusred)染色結(jié)果圖，圖2c為小鼠肝臟α-sma免疫組化染色結(jié)果圖。

具體實施方式

本發(fā)明提供了龍虎人丹在制備預(yù)防和/或治療肝纖維化藥物中的應(yīng)用。

在本發(fā)明中，所述龍虎人丹每1000g包括以下質(zhì)量份的成分：薄荷腦32～48g、冰片24～36g、丁香20～30g、砂仁20～30g、八角茴香12～18g、肉桂32～48g、胡椒12～18g、木香12～18g、干姜20～30g、兒茶160～240g、甘草291.28～436.92g、糯米粉144～216g、苯甲酸鈉4～6g、紅氧化鐵11.6～17.4g、二甲硅油0.08～0.12ml、石墨0.16～0.24g、滑石粉0.16～0.24g和糊精3.16～4.74g。本發(fā)明對所述龍虎人丹的來源沒有特殊的限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的龍虎人丹的市售產(chǎn)品即可，如上海中華藥業(yè)有限公司出售的龍虎人丹。本發(fā)明所述龍虎人丹在現(xiàn)有技術(shù)中的常規(guī)作用為開竅醒神、祛濕化濁、和中止嘔功效，具有調(diào)理脾胃、化濁健運之功效；在本發(fā)明中，所述龍虎人丹能夠?qū)崿F(xiàn)對肝纖維化的預(yù)防和/或治療。

在本發(fā)明中，所述龍虎人丹的劑型包括片劑、粉劑、粒劑、丸劑、膠囊。

在本發(fā)明中，所述龍虎人丹的有效作用劑量為100mg/kg～200mg/kg。

在本發(fā)明中，龍虎人丹的使用方法中優(yōu)選包括稀釋用藥劑，在本發(fā)明中，所述龍虎人丹的稀釋用藥劑沒有特殊的限制，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的藥物載體即可，如羥甲基纖維素鈉(cmc-na)。在本發(fā)明中，所述羥甲基纖維素鈉在龍虎人丹中的質(zhì)量濃度優(yōu)選為0.5％。在本發(fā)明中，所述稀釋用藥劑是為了保證施藥量，本發(fā)明優(yōu)選采取灌胃給藥方式。在本發(fā)明中，所述稀釋用藥劑羥甲基纖維素鈉對纖維化無明顯影響，僅作為藥劑中的常用助懸劑，屬于惰性分子，沒有明顯生物活性。

本發(fā)明對所述的制備方法沒有特殊的限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的龍虎人丹市售產(chǎn)品的制備方法即可。如所述制備方法可參照申請?zhí)枮?00910194559.1的專利中對制備方法的限定，具體包括以下步驟：(1)軟材的制備：a.兒茶漿的配制：根據(jù)上述質(zhì)量份將兒茶與純化水按質(zhì)量比1∶1混合攪拌，控制蒸汽壓力0.25～0.5mpa，溫度60～95℃，加熱至溶解，過濾得兒茶溶液；然后將苯甲酸鈉、兒茶溶液及上述糯米粉量的5～18％，分批攪拌3～5分鐘，打漿10～30分鐘，出料；b.混合粉的制備：取上述質(zhì)量份糯米粉、砂仁粉、八角茴香粉、肉桂粉、胡椒粉、木香粉、干姜粉、丁香粉及甘草粉混合投料，噴入預(yù)先經(jīng)熔化過濾的揮發(fā)性原料，邊噴邊混合，噴液結(jié)束后，出料；c.將上述混合粉、兒茶漿，混合攪拌15～30分鐘，出料即可；(2)丸劑的制備：a.將軟材制成圓整、大小均勻的濕毛丸；b.將濕毛丸進(jìn)行拉光，加糊精溶液攪勻，吹風(fēng)，滾動至表面光亮后撒入紅氧化鐵，再滴入二甲硅油，包衣時間在0.5～2.5小時；c.干燥滅菌，挑選丸徑在4.0mm～4.5mm之間的丸藥，加入石墨粉與滑石粉打光。

下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明提供的龍虎人丹在制備預(yù)防和/或治療肝纖維化藥物中的應(yīng)用做進(jìn)一步詳細(xì)的介紹，本發(fā)明的技術(shù)方案包括但不限于以下實施例。

實施例1

實驗動物：spf級c57小鼠，8周齡，雌雄各半，廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心提供，飼養(yǎng)于屏障環(huán)境動物房(spf級)，并保持飲水和飼料充足。合格證[scxk(粵)2013-0002]。

實驗藥物與試劑如表1所示：

表1實驗藥物與試劑

實驗設(shè)備如表2所示：

表2實驗設(shè)備

實驗設(shè)計

給藥情況：取32粒龍虎人丹，置于研缽中研碎，用20ml的0.5％cmc-na將其溶解，吸入50ml離心管中，渦旋使其完全溶解后定容至32ml(a液)。取6個5mlep管，每管分裝3ml(即高劑量組一天給藥量)。另取50ml管，吸取a液9ml，加9ml0.5％cmc-na，混勻，取6個5mlep管，每管分裝3ml(即中劑量組一天給藥量)。另取一個50ml離心管，吸取a液4.5ml，加0.5％cmc-na溶液至18ml，混勻，取6個5mlep管，每管分裝3ml(即低劑量組一天給藥量)。持續(xù)6周，共6×32粒＝192粒，約4盒藥。

水飛薊賓的配制：取50ml離心管，加10～12ml的0.5％cmc-na，將4粒膠囊內(nèi)顆粒倒入，溶解，之后用0.5％cmc-na定容至20ml，混勻。取6個5mlep管每管分裝3ml(即一天給藥量)。持續(xù)6周，共6×4粒＝24粒，約2盒藥。

造模、分組及給藥方法

取健康昆明種小鼠60只，隨機(jī)分為6組，每組8只。即：空白對照組、ccl4模型組、水飛薊賓陽性對照組、龍虎人丹低、中、高劑量組。各組均正常飲食，空白對照組和ccl4模型組每日灌胃給等體積的0.5％cmc-na，水飛薊賓組按70mg/kg/d的劑量給藥，實驗組小鼠按龍虎人丹低劑量組100mg/kg/d，中劑量組200mg/kg/d、高劑量組400mg/kg/d給藥，每天一次，連續(xù)6周。

血清學(xué)指標(biāo)：

禁食12h后摘除眼球取血，分離血清，按谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alt)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(ast)試劑盒測定alt、ast活性。

圖1為龍虎人丹對ccl4誘導(dǎo)肝纖維化小鼠血清學(xué)指標(biāo)的影響結(jié)果圖，圖1a為小鼠血清ast活性結(jié)果圖，圖1b為小鼠血清alt活性結(jié)果圖。由圖1結(jié)果顯示：與ccl4組相比，陽性藥水飛薊賓和龍虎人丹三個劑量組的ast均顯著降低(p<0.05)，而alt除了龍虎人丹高劑量組400mg/kg沒有改善以外，低、中劑量組均顯著降低(p<0.05)。

病理指標(biāo)：

he染色、天狼猩紅染色、平滑肌肌動蛋白α-sma免疫組化。使用imagej軟件統(tǒng)計天狼星紅和免疫組化的陽性染色面積，用graphpadprism處理數(shù)據(jù)作圖，并進(jìn)行t檢驗分析，以p<0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。

首先對小鼠肝臟切片進(jìn)行he染色，觀察大體形態(tài)，圖2為龍虎人丹對ccl4誘導(dǎo)肝纖維化小鼠病理指標(biāo)的影響結(jié)果圖，圖2a為小鼠肝臟he染色結(jié)果圖，圖2b為小鼠肝臟天狼猩紅(siriusred)染色結(jié)果圖，圖2c為小鼠肝臟α-sma免疫組化染色結(jié)果圖。由圖2a可以看出，與oil組比較，ccl4組有明顯的炎癥浸潤和肝細(xì)胞損傷；與ccl4模型組相比，水飛薊賓組和龍虎人丹三個劑量組的炎癥浸潤和肝損傷都有不同程度的改善，其中100mg/kg和200mg/kg改善較為明顯。隨后進(jìn)行天狼星紅染色(圖2b)和免疫組化(α-sma)(圖2c)觀察，同樣發(fā)現(xiàn)水飛薊賓和龍虎人丹三個劑量均能顯著改善小鼠肝纖維化程度。

龍虎人丹在低中藥物濃度下(100mg/kg和200mg/kg)具有顯著改善纖維化的作用，其抗肝纖維化和肝保護(hù)效果與陽性藥水飛薊賓相當(dāng)。當(dāng)龍虎人丹藥物溶度過高，可能由于藥物制劑體系不穩(wěn)定或具有胃腸道刺激、藥物吸收差等，導(dǎo)致肝保護(hù)和抗肝纖維化效果降低。

以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。