本發(fā)明涉及中藥復方制劑領域，具體地說，是一種用于滋陰化痰、散結(jié)解毒的中藥復方制劑及其用途。
背景技術(shù)：
胃癌是我國乃至世界范圍內(nèi)常見惡性腫瘤之一，居世界惡性腫瘤死亡原因的第2位，我國則是世界上胃癌發(fā)病率最高的國家之一。統(tǒng)計數(shù)據(jù)表明，我國胃癌死亡率為29.31人/10萬人，大約是世界平均水平的2倍。由于幅員廣闊、人口眾多，經(jīng)濟衛(wèi)生事業(yè)發(fā)展不平衡，我國的胃癌早期篩查體系尚需完善，多數(shù)病例在確診時已經(jīng)達到中晚期，失去手術(shù)的機會。化療是無法切除患者最主要的有效方法之一，但采用細胞毒藥物進行傳統(tǒng)化療的中位生存期僅11個月左右。加之化學藥物的非選擇性和劑量限制性毒性，用藥時常伴隨出現(xiàn)骨髓抑制、免疫功能低下、胃腸道反應等副反應，生存質(zhì)量往往受到不同程度的影響，部分患者甚至無法耐受，這是造成患者化療失敗最常見的原因。即便是接受根治性手術(shù)，胃癌的術(shù)后復發(fā)率也是高居不下。近年來，分子靶向治療的興起為胃癌提供了新的治療策略和方法，但由于胃癌的異質(zhì)性強，當前上市的靶向藥物多數(shù)面臨潛在獲益群體非常有限的窘境。
近年來，中醫(yī)藥作為我國腫瘤綜合防控體系中的重要一環(huán)，已經(jīng)成為胃癌治療中不可或缺的一部分。中醫(yī)學認為，胃癌總體上屬本虛標實、虛實夾雜之病，但目前對其病機認識尚不統(tǒng)一，辨證分型觀點眾多，治療不夠規(guī)范。發(fā)明人在長期中西醫(yī)結(jié)合防治胃癌實踐中，注意到胃癌多由慢性萎縮性胃炎等胃癌前病變演變而來，這些患者多有胃中嘈雜似饑、消瘦乏力、口干不欲飲食、舌苔裂紋、脈沉細等胃陰不足的表現(xiàn)，胃鏡下胃黏膜萎縮、胃液分泌減少也可視為胃陰不足的征象。再結(jié)合胃癌治療中疊經(jīng)手術(shù)、放療、化療等，易耗氣傷津，提出胃陰不足是胃癌發(fā)生發(fā)展的主要內(nèi)在基礎，是為本虛；而胃癌過程中局部腫塊、紅腫破潰、沿淋巴道等的轉(zhuǎn)移為其主要病理表現(xiàn)，提出痰結(jié)毒聚為胃癌的主要病機特點，是為標實。因此，我們認為胃陰虧虛、痰毒互結(jié)為胃癌發(fā)生發(fā)展的核心病機，貫穿于其病程始終。據(jù)此提出滋陰化痰、散結(jié)解毒可作為胃癌全過程的重要治法之一。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種滋陰化痰、散結(jié)解毒的中藥復方制劑。
本發(fā)明的再一目的是，提供所述的中藥復方制劑的用途。
為實現(xiàn)上述第一目的，本發(fā)明的第一方面，提供一種滋陰化痰、散結(jié)解毒的中藥復方制劑，由如下重量份的原料藥組成：百合1-90份，法半夏1-60份，白花蛇舌草1-60份。
優(yōu)選的，所述的中藥復方制劑是由如下重量份的原料藥組成：百合1-60份，法半夏1-45份，白花蛇舌草1-45份。
較優(yōu)選的，所述的中藥復方制劑是由如下重量份的原料藥組成：百合1-30份，法半夏1-30份，白花蛇舌草1-30份。
更優(yōu)選的，所述的中藥復方制劑是由如下重量份的原料藥組成：百合30份，法半夏15份，白花蛇舌草15份。
本發(fā)明的中藥復方制劑可采用本領域常規(guī)制備方法，輔以常規(guī)藥用輔料，制備成藥劑學上的常見劑型。
優(yōu)選的，所述的中藥復方制劑的劑型為如顆粒劑、片劑、沖劑、散劑、合劑、膠囊劑、口服液或滴丸劑。還可以是以上原料藥的水提物。
為實現(xiàn)上述第二個目的，本發(fā)明的第二方面，提供一種以上任一所述的中藥復方制劑在制備治療胃癌或胃癌前性病變的藥物或保健食品中的應用。
優(yōu)選的，所述的藥物用于：
a)降低血清vegr含量，
b)降低血清mmp含量，
c)減少腫瘤mcv生長，
d)減少腫瘤重量和體積，
e)減少腫瘤轉(zhuǎn)移。
需要說明的是：所述的百合科植物卷丹liliumlancifoliumthunb.、百合liliumbrowniif.e.brownvar.viridulumbaker或細葉百合liliumpumilumdc.的干燥肉質(zhì)鱗葉；所述的制半夏為天南星科植物半夏pinelliaternata(thunb.)breit.的干燥塊莖的炮制加工品；所述白花蛇舌草為茜草科耳草屬植物白花蛇舌草hedyotisdiffusawilld.[oldenlandiadiffusa(willd.)roxb.]的全草。
本發(fā)明的中藥復方制劑系在多年臨床實踐基礎上，以傳統(tǒng)中醫(yī)理論為指導，精心選藥組方而成。方中百合味甘微苦性微寒，歸心、肺經(jīng)，善養(yǎng)陰、清心、安神，《本經(jīng)》言其：“主邪氣腹脹、心痛。利大小便，補中益氣”，《綱目拾遺》謂：“清痰火，補虛損”，用之益胃以扶正、化痰以祛邪，為方中君藥；半夏味辛性溫，歸脾、胃經(jīng)，有降氣和胃、燥濕化痰之功，助君藥降氣和胃、化痰散結(jié)，為方中臣藥；白花蛇舌草味苦甘性寒，歸心、肝、脾、大腸經(jīng)，善清熱解毒、利濕，能治療腫瘤，為方中佐藥。三藥合用，共奏滋胃陰、和胃氣、化痰濕、抗腫瘤之功，切合胃癌及胃癌前病變的核心病機。
本發(fā)明中藥復方制劑的原料藥重量配比系發(fā)明人結(jié)合中醫(yī)辨證組方，經(jīng)長期臨床實踐摸索得出，在該配比范圍內(nèi)均能取得較好療效。
本發(fā)明優(yōu)點在于：
1、本申請發(fā)明人結(jié)合自身對胃癌及癌前病變的核心病機(胃陰虧虛，痰毒互結(jié))的認識，提供了一種具有滋陰化痰、散結(jié)解毒功效的中藥復方制劑，經(jīng)臨床應用和藥理學研究確證，其可用于包括改善患者的臨床癥狀，抑制胃癌腫瘤生長，抑制胃癌血管、淋巴管生成侵襲轉(zhuǎn)移從而抑制胃癌侵襲轉(zhuǎn)移，提高生存質(zhì)量，可用于胃癌、胃癌前性病變的治療，療效確切，效果顯著；
2、本發(fā)明的中藥復方制劑的原料藥藥味數(shù)較少，成本低廉，便于制備，適于推廣應用；
3、本發(fā)明的中藥復方制劑為純中藥制成，無毒副作用。
具體實施方式
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明提供的具體實施方式作詳細說明。
本文中，所述的常規(guī)方法煎煮是中藥湯劑常規(guī)的制作方法，即將所述的原料藥加水煎煮成湯劑。
實施例1湯劑的制備(一)
分別稱取百合3000g，法半夏1500g，白花蛇舌草1500g，常規(guī)方法煎煮。
實施例2湯劑的制備(二)
分別稱取百合2000g，法半夏1000g，白花蛇舌草1000g，常規(guī)方法煎煮。
實施例3湯劑的制備(三)
分別稱取百合1000g，法半夏500g，白花蛇舌草500g，常規(guī)方法煎煮。
實施例4湯劑的制備(四)
分別稱取百合800g，法半夏400g，白花蛇舌草1000g，常規(guī)方法煎煮。
實施例5湯劑的制備(五)
分別稱取百合6000g，法半夏3000g，白花蛇舌草2000g，常規(guī)方法煎煮。
實施例6湯劑的制備(六)
分別稱取百合100g，法半夏3000g，白花蛇舌草100g，常規(guī)方法煎煮。
實施例7湯劑的制備(七)
分別稱取百合6000g，法半夏100g，白花蛇舌草200g，常規(guī)方法煎煮。
實施例8湯劑的制備(八)
分別稱取百合100g，法半夏1500g，白花蛇舌草100g，常規(guī)方法煎煮。
實施例9湯劑的制備(九)
分別稱取百合4500g，法半夏100g，白花蛇舌草2000g，常規(guī)方法煎煮。
實施例10湯劑的制備(十)
分別稱取百合4500g，法半夏3000g，白花蛇舌草3000g，常規(guī)方法煎煮。
實施例11水提物的制備(一)
分別稱取百合3000g，法半夏1500g，白花蛇舌草1500g，用水回流提取3次(100l，1小時；80l，1小時；80l，1小時)，合并提取液，濃縮得浸膏，烘干，粉碎，此提取物直接可以包裝、沖服。
實施例12水提物的制備(二)
分別稱取百合2000g，法半夏1000g，白花蛇舌草1000g，用水回流提取3次(100l，1小時；80l，1小時；80l，1小時)，合并提取液，濃縮得浸膏，烘干，粉碎，此提取物直接可以包裝、沖服。
實施例13水提物的制備(三)
分別稱取百合1000g，法半夏500g，白花蛇舌草500g，用水回流提取3次(100l，1小時；80l，1小時；80l，1小時)，合并提取液，濃縮得浸膏，烘干，粉碎，此提取物直接可以包裝、沖服。
實施例14水提物的制備(四)
分別稱取百合800g，法半夏400g，白花蛇舌草1000g，用水回流提取3次(100l，1小時；80l，1小時；80l，1小時)，合并提取液，濃縮得浸膏，烘干，粉碎，此提取物直接可以包裝、沖服。
實施例15水提物的制備(五)
分別稱取百合6000g，法半夏3000g，白花蛇舌草2000g，用水回流提取3次(100l，1小時；80l，1小時；80l，1小時)，合并提取液，濃縮得浸膏，烘干，粉碎，此提取物直接可以包裝、沖服。
實施例16水提物的制備(六)
分別稱取百合100g，法半夏3000g，白花蛇舌草100g，用水回流提取3次(100l，1小時；80l，1小時；80l，1小時)，合并提取液，濃縮得浸膏，烘干，粉碎，此提取物直接可以包裝、沖服。
實施例17水提物的制備(七)
分別稱取百合6000g，法半夏100g，白花蛇舌草200g，用水回流提取3次(100l，1小時；80l，1小時；80l，1小時)，合并提取液，濃縮得浸膏，烘干，粉碎，此提取物直接可以包裝、沖服。
實施例18水提物的制備(八)
分別稱取百合100g，法半夏1500g，白花蛇舌草100g，用水回流提取3次(100l，1小時；80l，1小時；80l，1小時)，合并提取液，濃縮得浸膏，烘干，粉碎，此提取物直接可以包裝、沖服。
實施例19水提物的制備(九)
分別稱取百合4500g，法半夏100g，白花蛇舌草2000g，用水回流提取3次(100l，1小時；80l，1小時；80l，1小時)，合并提取液，濃縮得浸膏，烘干，粉碎，此提取物直接可以包裝、沖服。
實施例20水提物的制備(十)
分別稱取百合4500g，法半夏3000g，白花蛇舌草3000g，用水回流提取3次(100l，1小時；80l，1小時；80l，1小時)，合并提取液，濃縮得浸膏，烘干，粉碎，此提取物直接可以包裝、沖服。
實施例21顆粒劑的制備
按實施例11所述的方法制備提取物150g，加糊精300g，混勻，加入適量60％乙醇制成軟材，過24目篩制粒，50℃干燥2小時，干燥顆粒過30目篩整粒，分裝，即得。
實施例22片劑的制備
按實施例12所述的方法制備提取物150g，加入微晶纖維素150g、淀粉55g，混勻，加入適量60％乙醇制成軟材，過24目篩制粒，50℃干燥2小時，干燥顆粒過30目篩整粒，加入硬脂酸鎂2.5g，混勻，壓片，即得。
實施例23膠囊劑的制備
按實施例11-20任一所述的方法制備提取物，加適當制藥輔料，真空干燥，粉碎制粒，填充裝膠囊。
實施例24合劑的制備
按照實施例1-10任一所述的重量配比取各原料藥，粉碎，按常規(guī)方法煎煮，煎煮液濃縮至稠浸膏。加適當制藥輔料，制成合劑。
實施例25本發(fā)明中藥復方制劑的毒理學研究
1.急性毒性實驗
(1)實驗動物
健康spf級km小鼠40只，4周齡，體質(zhì)量(22±2)g，雌雄各半。由第二軍醫(yī)大學實驗動物中心提供，實驗動物許可證號碼：scxk(滬)：2016-0003。
(2)藥物制備
實驗藥物為本發(fā)明實施例1制備的中藥混合物。將12kg混合物分為低、高劑量組，每組各6kg，分別加水10l，浸泡1小時，加熱至沸騰。低劑量組濃縮至2l，獲得濃度為3g(生藥)/ml的浸膏液；高劑量組濃縮至1l，獲得濃度為6g(生藥)/ml的浸膏液。
(3)動物分組
取健康km小鼠40只，按隨機數(shù)字表法分為2組，每組20只：①低劑量組：予濃度為3g/ml的中藥液灌胃，1200g/kg(表示每公斤體重1200g中藥生藥量，相當于臨床等效劑量的50倍，下同)；②高劑量組：予濃度為6g/ml的中藥液灌胃，2400g/kg(相當于臨床等效劑量的100倍)。
(4)干預方法
中藥低、高劑量組小鼠均按1ml/10g體重灌胃，每日量分兩次灌胃，連續(xù)給藥7天。
(5)觀察指標
觀察小鼠的活動、飲食、行為等改變；觀察小鼠鼻、眼、口腔分泌物分泌情況；觀察并記錄小鼠的體質(zhì)量變化及死亡情況。
(6)實驗結(jié)果
給藥期間兩組小鼠外觀、體質(zhì)量、飲食均正常；未見活動減少、蜷縮、松毛等現(xiàn)象；鼻、眼、口腔未見分泌物；無死亡現(xiàn)象。結(jié)果表明：在小鼠最大給藥量為2400g(生藥)/kg體重，即臨床等效劑量的200倍時，該中藥復方制劑未發(fā)生急性毒性反應。
2.長期毒性實驗
(1)實驗動物
健康spf級sd大鼠40只，6周齡，體質(zhì)量(200±30)g，雌雄各半。由第二軍醫(yī)大學實驗動物中心提供，實驗動物許可證號碼：scxk(滬)：2014-0003。
(2)藥物制備
制備方法同前。低劑量組藥液濃度濃縮至0.8g(生藥)/ml；中劑量組藥液濃度為1.6g(生藥)/ml；高劑量組藥液濃度為3.2g(生藥)/ml。
(3)動物分組
取健康sd大鼠40只，按隨機數(shù)字表法分為4組，每組10只：①空白對照組：予等量生理鹽水灌胃；②低劑量組：予濃度為1.2g/ml的中藥液灌胃，6g/kg(表示每公斤體重6g中藥生藥量，相當于臨床等效劑量的10倍，下同)；③中劑量組：予濃度為2.4g/ml的中藥液灌胃，12g/kg(相當于臨床等效劑量的20倍)；④高劑量組：予濃度為4.8g/ml的中藥液灌胃，24g/kg(相當于臨床等效劑量的40倍)。
(4)干預方法
中藥各劑量組大鼠均按5ml/100g體重灌胃，每日量分兩次灌胃，連續(xù)給藥180天。
(5)觀察指標
觀察各組大鼠的活動、飲食、行為等改變；觀察大鼠鼻、眼、口腔分泌物分泌情況；觀察并記錄大鼠的體質(zhì)量變化及死亡情況。采集血液標本，檢驗并分析大鼠血清學指標。頸椎脫臼法處死大鼠，觀察各器官組織的形態(tài)學改變。
(6)實驗結(jié)果
給藥期間各組大鼠外觀、體重、飲食均正常；未見活動減少、蜷縮、松毛等現(xiàn)象；鼻、眼、口腔未見分泌物；無死亡現(xiàn)象。給藥180天后，采集各組大鼠血液標本進行檢驗分析，結(jié)果顯示：各組大鼠血常規(guī)(紅細胞、血紅蛋白、血小板計數(shù)、白細胞計數(shù)等)及凝血時間均正常；肝功能(谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶、血清總蛋白、白蛋白等)、腎功能(尿素氮、肌酐等)、血脂、血糖等與空白對照組比較差異無統(tǒng)計學意義。頸椎脫臼法處死大鼠，各組織器官(心、肝、腎、脾、肺、睪丸、子宮及卵巢、腦、胃、胰腺、腎上腺、胸腺、甲狀腺等)外觀觀察及組織學切片檢查均未見明顯異常改變。以上結(jié)果表明：在大鼠給藥量為6g(生藥)/kg、12g(生藥)/kg、24g(生藥)/kg體重時，連續(xù)給藥6個月后，本發(fā)明中藥復方制劑未見明顯毒性反應。
實施例26：本發(fā)明的臨床觀察
1.病例來源：60例臨床病例均來源于2012-05/2015-05上海長征醫(yī)院經(jīng)病理學診斷明確的胃癌，且影像學明確診斷有遠處轉(zhuǎn)移灶的患者。
納入標準：tnm分期為ⅳ期；均未行手術(shù)治療，karnofsky評分60以上，無嚴重的心、肝、腦、腎等臟器的器質(zhì)性或功能性疾患。
2.分組及處理：采用信封法隨機分成治療組(滋陰化痰方加化療)和對照組(單純化療)。對照組：應用folfox4方案：奧沙利鉑(oxa)85mg/m2，靜滴2h，第1天；亞葉酸鈣(lv)200mg/m2，靜滴2h，第1、2天；氟尿嘧啶(5-fu)400mg/m2，靜推，然后600mg/m2，22h靜脈維持，第1、2天；2周重復，14天為1個周期，n＝23)，共6個療程；治療組：在化療方案基礎上加滋陰化痰方配方顆粒，12g/次，2/日，療程為6個月；且兩組治療時間≥3個月。
3.觀察指標及方法：
(1)療效評價：兩組患者化療前及每6周均行全腹ct掃描，按照recist1.1標準評價療效，分為完全緩解(cr)、部分緩解(pr)、穩(wěn)定(sd)和進展(pd)；以cr+pr計算有效率(rr)，以cr+pr+sd為疾病控制率(dcr)。隨訪截止于2016年5月，無進展生存期(pfs)定義為化療開始至患者疾病進展或死亡的時間。總生存期(os)定義為化療開始至患者死亡或末次隨訪時間。
(2)毒副反應評價：兩組患者每個周期治療前均檢查血常規(guī)及肝腎功能，觀察患者血常規(guī)(白細胞、血小板、血紅蛋白)、肝腎功能損害以及惡心嘔吐等消化系統(tǒng)不良反應及周圍神經(jīng)毒性反應。按照who制定的化療藥物毒副作用分級標準進行毒副反應評價，分為0～4級。
(3)生活質(zhì)量：參照衛(wèi)生部醫(yī)政司中國常見腫瘤診治規(guī)范體力狀況評分標準，進行治療前后karnofsky評分：①生活質(zhì)量提高：karnofsky評分提高≥10分；②生活質(zhì)量下降：karnofsky評分下降≥10分；③生活質(zhì)量穩(wěn)定：karnofsky評分提高或降低<10分。其中生活質(zhì)量提高、生活質(zhì)量穩(wěn)定視為有效。
表1karnofsky(卡氏，kps，百分法)功能狀態(tài)評分標準
(4)血管生成指標：酶聯(lián)免疫吸附(elisa)法測定治療前后血清中金屬蛋白-9(mmp-9)、血管內(nèi)皮生長因子vegf的含量。
4.統(tǒng)計學方法：
符合正態(tài)分布的計量資料數(shù)據(jù)的組間比較采用lsd-t檢驗，不符合正態(tài)分布的計量資料數(shù)據(jù)的組間比較采用k樣本kruskal-wallis非參數(shù)檢驗；計數(shù)資料采用χ2檢驗，生存分析采用kaplan-meier法。以p＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
5.結(jié)果：
(1)近期療效比較：兩組經(jīng)治療6周期后，對照組無1例完全緩解，部分緩解3例，穩(wěn)定19例，進展8例；治療組對照組無1例完全緩解，部分緩解8例，穩(wěn)定18例，進展4例。對照組治療有效率10.0％，疾病控制率73.3％，治療組分別為26.7％、86.7％，兩組比較差異有顯著性意義(p＜0.05)，見表2：
表2復發(fā)轉(zhuǎn)移人數(shù)及病灶大小的比較
與對照組比較，*p＜0.05。
(2)遠期療效的比較：截止隨訪結(jié)束，對照組無進展生存期(pfs)為6.3個月、中位生存期(os)為10.5個月，治療組分別為10.6個月、16.9個月，兩組比較差異有顯著性意義(p＜0.05)，見表3：
表3兩組遠期療效的比較
(3)生活質(zhì)量的比較
①kps評分比較：兩組患者治前總體生存質(zhì)量(kps)評分為(71.76±5.48)分，治療組、對照組治療前kps評分分別為(72.27±4.21)分、(71.28±6.43)分，兩組差異無統(tǒng)計學意義(p＝0.22＞0.05)；經(jīng)治療6個月后總體生存質(zhì)量(kps)評分為(67.58±19.80)分，治療組為(75.00±14.78)，對照組為(60.64±21.39)分，兩組差異具有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。見表4：
表4治療前后kps比較
②治療后kps評分等級比較：經(jīng)治療6周期后，對照組kps評分顯著提高0例，提高7例，穩(wěn)定11例，下降12例，有效18例，有效率60.00％；治療組kps評分顯著提高3例，提高12例，穩(wěn)定10例，下降5例，有效25例，有效率83.33％；兩組差異有統(tǒng)計學意義(χ2＝4.022，p＜0.05)。見表5：
表5治療后kps分級比較
(4)毒副反應的比較：經(jīng)治療6周期后，兩組毒副反應比較見表6：
表6兩組治療前后毒副反應比較
(3)血管生成指標：與治療前相比，mmp-9、vegf含量顯著降低(p＜0.01)；對照組治療后較治療前相比mmp-9、vegf含量無顯著變化；治療組治療后較對照組治療后相mmp-9、vegf含量顯著降低(p＜0.05)，見表7：
表7兩組治療前后mmp-9、vegf含量
△p＜0.05：與對照組治療后；#p＜0.01：與治療組治療前。
以上試驗顯示：滋陰消痰方加化療的治療組較單純化療的對照組延緩晚期胃癌的進展，提高疾病控制率，改善患者生活質(zhì)量，減輕因化療引起的毒副反應，其遠期療效可明顯延長患者的pfs、os；滋陰消痰方加化療方案可以顯著較少與血管生成的密切相關(guān)的mmp-9、vegf含量；滋陰消痰方加化療的治療組mmp-9、vegf含量較單純化療的對照組低，提示滋陰消痰方可通過降低血管生成來抑制晚期胃癌侵襲轉(zhuǎn)移。
實施例27：本發(fā)明的動物實驗
1.實驗材料：
(1)動物與瘤株：spf級balb/c無胸腺裸鼠30只，雄性，6周齡，20±2g，由中國科學院上海實驗動物中心提供，實驗動物生產(chǎn)許可證號：scxk(滬)2016-0005，人胃腺癌細胞株mkn45，由中國科學院上海細胞生物研究所提供，將含2×106腺癌細胞懸液0.22ml于裸鼠腋下注射，成瘤后，傳代成實體瘤本實驗瘤組織為第6代。
(2)實驗藥物：滋陰化痰方：由百合30g、法半夏15g、白花蛇舌草15g組成，原生藥購自上海雷允上藥業(yè)有限公司，產(chǎn)地明確，由第二軍醫(yī)大學長征醫(yī)院制劑室制備成含生藥濃度為6g/ml的水煎膏；5-氟尿嘧啶(5-fu)注射液，上海旭東海普藥業(yè)有限公司，批號：070209；
2.分組與方法：
采用ob膠粘貼法建立裸鼠mkn-45人胃癌原位移植模型(參考文獻：陳亞琳,魏品康,許玲,蘇曉妹.采用ob膠粘貼法建立人胃癌裸鼠原位種植轉(zhuǎn)移模型[j].癌癥.2005；24(2):246-248.)。30只裸鼠同時造模后，按隨機數(shù)字表法分為生理鹽水組、5-fu組和滋陰化痰方組，每組10只。造模后48h開始給藥。生理鹽水組給予生理鹽水灌胃，每只1ml/次，每日1次，連續(xù)6周；5-fu組給予5-fu注射液腹腔注射，按照60mg/kg標準，每只0.2ml/次，每周1次，連續(xù)3周；滋陰化痰方組給予滋陰化痰方水煎劑灌胃，每只1ml/次，每日2次，連續(xù)6周。各組藥物干預結(jié)束后，經(jīng)麻醉脫頸處死荷瘤鼠，從胃部完整剝?nèi)∧[瘤組織，分別置于10％中性福爾馬林固定液與液氮中備用。分別制備病理組織切片及新鮮組織標本，待檢測。并取裸鼠胃周淋巴結(jié)(16組)、肝臟組織，并記錄裸鼠腹水情況。
3.觀察指標：
3.1瘤重、腫瘤體積及抑瘤率。抑瘤率(％)＝(模型組平均瘤重—處理組平均瘤重)/模型組平均瘤重*100％。
3.2轉(zhuǎn)移情況：胃周淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率、肝臟轉(zhuǎn)移率、腹水形成率。
胃周淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率(％)＝出現(xiàn)轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)/總淋巴結(jié)數(shù)*100％。
肝臟轉(zhuǎn)移率：出現(xiàn)肝臟轉(zhuǎn)移的小鼠數(shù)量/每組小鼠總數(shù)(10只)*100％。
腹水形成率：出現(xiàn)腹水的小鼠數(shù)量/每組小鼠總數(shù)(10只)*100％。
3.3實時定量(realtime)-pcr法檢測胃癌組織中vegf-c及vegfr-3mrna表達。具體操作方法如下1.rna提取：棄上清，加入trizol試劑提取各組rna；2.逆轉(zhuǎn)錄：反應體系總體積為20ul，按照逆轉(zhuǎn)錄說明合成cdna；3.實時定量pcr測定：pcr反應總體積為50ul，pe7700pcr擴增儀上94℃2min，94℃變性25s，60℃退火30s，40個循環(huán)結(jié)束。由pcr反應曲線得出ct值，通過檢測儀計算相對應定量數(shù)值。
4.統(tǒng)計方法：
符合正態(tài)分布的計量資料數(shù)據(jù)的組間比較采用lsd-t檢驗，不符合正態(tài)分布的計量資料數(shù)據(jù)的組間比較采用k樣本kruskal-wallis非參數(shù)檢驗；計數(shù)資料采用χ2檢驗。
5.實驗結(jié)果：
(1)滋陰化痰方對胃癌生長的作用：經(jīng)方差分析，5-fu組與生理鹽水組相比，瘤體積、瘤重、抑瘤率，其差異均有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)；滋陰化痰方組與生理鹽水組相比，瘤體積、瘤重、抑瘤率差異均有顯著統(tǒng)計學意義(p＜0.01)；經(jīng)兩兩分析，與5-fu組相比，滋陰化痰方組的瘤體積、瘤重、抑瘤率之差異亦有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)；表明滋陰化痰方對胃癌生長有明顯抑制作用。
表8滋陰化痰方對胃癌生長的抑制作用
與生理鹽水組比較，δp＜0.05，δδp＜0.01；與5-fu組比較，#p＜0.05。
(2)滋陰化痰方對胃癌轉(zhuǎn)移的作用：
①滋陰化痰方對胃淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率、肝轉(zhuǎn)移率、腹水形成率的作用：滋陰化痰方組與生理鹽水組相比，胃淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率、肝轉(zhuǎn)移率、腹水形成率差異均有顯著統(tǒng)計學意義(p＜0.01)。見表9：
表9滋陰化痰方對胃癌轉(zhuǎn)移的抑制作用
與生理鹽水組比較，δδp＜0.01；與5-fu組比較，#p＜0.05。
②滋陰化痰方對vegf-c及vegf-r3mrna表達的影響
滋陰化痰方與5-fu均可下調(diào)原位移植瘤組織中vegf-c及vegf-r3的mrna表達水平，差異均有差異也存在統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。其中滋陰化痰方可顯著下調(diào)vegf-c的mrna表達水平，差異具有顯著統(tǒng)計學意義(p＜0.01)。見表10：
表10各組瘤組織中vegf-c及vegf-r3mrna表達比較
與生理鹽水組比較，*p＜0.05，**p＜0.01。
以上實驗顯示滋陰化痰方可有效降低裸鼠原位移植瘤的體積和瘤重，提高抑瘤率，提示其具有良好的抑制胃癌生長作用。同時，滋陰化痰方能夠顯著降低胃周淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肝轉(zhuǎn)移，抑制腹水形成，下調(diào)vegf-c及vegf-r3的mrna表達，提示滋陰化痰方對胃癌侵襲轉(zhuǎn)移具有抑制作用。
以上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理、主要特征和本發(fā)明的優(yōu)點。本行業(yè)的技術(shù)人員應該了解，本發(fā)明不受上述實施例的限制，上述實施例和說明書中描述的只是說明本發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下本發(fā)明還會有各種變化和改進，這些變化和改進都落入要求保護的本發(fā)明范圍內(nèi)。本發(fā)明要求保護范圍由所附的權(quán)利要求書及其等同物界定。