本發明涉及一種草本植物的提取方法，特別是一種石斛多糖與石斛堿醇質體的制備方法；同時，本發明中還涉及一種能夠抗紫外線抗氧化，具備美白淡斑效果，純天然、無刺激的化妝品。
背景技術：
皮膚長期暴露在紫外線下和吸收內源性光敏分子都將導致氧自由基的形成，對皮膚造成不同程度的損害和病變，如光老化、粗糙，脂褐素增加等。皮膚在紫外線的照射下基底層的酪氨酸酶活性增加，產生黑色素，導致面部雀斑、黃褐斑等色斑顏色加深，這不僅影響患者的容貌美觀，也給患者帶來心理壓力，嚴重時甚至影響患者的社交自信心。
紫外線損傷的皮膚，如果及時的進行保濕、補水和抗氧化護理可以促進皮膚新陳代謝，減緩色斑的生成甚至淡化已生成的色斑。防紫外線與保濕是預防皮膚色素沉著以及老化的一個有效方法。
目前市場上常見的防曬產品主要分為兩類，一類是物理防曬，一類是化學防曬。物理防曬主要是指添加一些反射光的微小粒子，一般是二氧化鈦、氧化鋅等，將紫外線反射出去，避免皮膚接受紫外線而受到傷害。但是物理防曬不易涂抹均勻，同時容易造成皮膚毛孔堵塞，涂抹舒適性差。化學防曬主要是添加了可以吸收特定波長的紫外線吸收劑，如對氨基苯甲酸及其衍生物、肉桂酸等，但是由于不同人群膚質不同，容易造成皮膚過敏或者刺激。因此開發一款天然的可以抵御紫外線，具有舒適涂抹性，無刺激的，同時進行皮膚損傷修復的天然化妝品十分必要。
鐵皮石斛作為我國傳統中藥材，對其功能研究主要集中在免疫、抗氧化、抗腫瘤、抗疲勞、抗炎、降血糖和養陰生津等方面，關于鐵皮石斛抗光損傷試驗的研究報道很少。但是，大量研究表明鐵皮石斛中菲類、多糖、木脂素、聯芐類、酚酸類、黃酮類都有很強的抗氧化作用，鐵皮石斛水提液對皮膚膠原蛋白的成纖維細胞gm0639抗輻射作用，同時馮冰等人研究石斛提取液可以提高細胞保濕性能以及抑制黑色素生成，盧秋靜，周夢娣及王浙樂等人的中成藥發表文獻（浙江省“生物工程”重中之重學科，項目編號：1740002730）中記載到了鐵皮石斛提取物（主要包括石斛多糖以及石斛堿醇質體）對小鼠皮膚光損傷的保護作用，均為鐵皮石斛應用于皮膚光損傷提供了良好的物質基礎。
技術實現要素：
本發明的目的是為了解決上述現有技術的不足而提供一種能夠抗紫外線抗氧化，同時具備美白淡斑效果，純天然、無刺激的化妝品。
為了實現上述目的，本發明所設計的一種化妝品，按重要百分比計算，其包括：石斛多糖20～35%、甘油10～15%、神經酰胺0～2%、超純水42～65%、石斛堿醇質體0.3～1%、天然維生素e0～2%、全反式白藜蘆醇0～1%、維生素c棕櫚酸酯0～1%、α-熊果苷0～1%、植物精油0.1～1%。
上述化妝品成分中的石斛多糖以及石斛堿醇質體涂抹在皮膚上能夠提升皮膚的抗氧化能力，抑制皮膚組織活性氧代謝，從而增強皮膚組織抗光老化作用；同時，上述化妝品成分中鐵皮石斛提取物配合神經酰胺能快速滲透進皮膚，與角質層中的水結合形成一種網狀結構，鎖住水分，迅速恢復保濕和屏障功能，加快皮膚細胞代謝更新，調節細胞生長變異作用，參與細胞作用，抗衰老，防止過敏性皮膚病的目的和抑制黑色素褐斑的效果，有保濕的特性，結合維生素e，在皮膚表面水解成生育酚，使末梢血管擴張，改善血液循環，結合降低血液粘稠度，抑制血小板凝結和血管舒張，保持血液暢通，促進其他活性成分的吸收，而且白藜蘆醇還是一種天然的抗氧化劑，白藜蘆醇還可抑制細胞發炎，α-熊果苷抑制體內酪氨酸酶的活性，阻止黑色素的生成，從而減少皮膚色素沉積，祛除色斑和雀斑，同時還有殺菌、消炎的作用。
同樣為了實現上述目的，本發明所設計的另一種化妝品，按重要百分比計算，其包括：石斛多糖20～30%、甘油10～15%、神經酰胺0～2%、磁化超純水40～50%、石斛堿醇質體0.3～5%、天然維生素e0～0.2%、hegf0～3%、甘草精0～5%、α-熊果苷0～1%、植物精油0.1～1%、透明質酸0.1～1%、維生素p和維生素b3復合物0.1～1%、絲氨酸0.1～2%、橄欖油0.1～1%、角鯊烯0.1～1%、α亞麻酸0.1～3%、β葡聚糖0.1～2%、sod0.1～5%、內皮素拮抗劑0.1～2%、尿囊素0.1～3%、三乙醇胺與檸檬酸0～0.025%。
上述化妝品成分中的石斛多糖以及石斛堿醇質體涂抹在皮膚上能夠提升皮膚的抗氧化能力，抑制皮膚組織活性氧代謝，從而增強皮膚組織抗光老化作用；同時，上述化妝品成分中由于石斛多糖以及石斛堿醇質體能顯著提高超氧化物歧化酶（sod）和血清钖羥脯氨酶（hyp）的水平，明顯降低脂質過氧化物（lop）和單胺氧化物（mao），故結合sod起到最佳的抗氧化作用，加以角鯊烯提高體內超氧化物歧化酶(sod)活性、增強機體免疫能力，從而起到抗衰老作用，促進正常表皮細胞的新陳代謝；當hegf與特異的跨細胞膜表面的egfr結合后，刺激了egfr復合物中的酪氨酸激酶的活性,，通過egfr復合物的自磷酸化作用,，在細胞內形成快速的信息傳遞網絡，激活蛋白酶和磷酸酯酶等的一系列生化反應,，促進體內ca2+、k+和糖等低分子物大量進入細胞內(主動運輸)，糖酵解量增大，rna與蛋白質合成增多，作用一段時間后，egfr復合物開始促進dna合成，并由此趨向刺激內皮細胞、單核細胞等多種細胞分裂、增殖和分化，使之向創傷部位遷移，加速啟動創傷組織再生、修復和胞外間質形成；另一方面，hegf能增加其他內源性生長因子，促進羥脯氨酸合成，調節膠原酶和膠原的合成、分泌和沉淀，調節膠原降解，使膠原纖維以線性方式排列，增強創面抗張程度，減少疤痕形成，提高愈合質量；經美國柏玫思生物科技研究所研究發現hegf與肽類化合物和透明質酸等保濕因子具有優良的正協同作用，起到保護hegf生物活性、提高hegf透滲性和有利皮膚吸收hegf的作用。甘草精能有效鎮靜神經系統增強免疫力，迅速舒緩過敏癥狀，超強滲透力，保濕除皺，補水嫩白，修護受損細胞抗老化，增強肌膚彈性；在美白方面，以β葡聚糖抗氧化、抗輻射的作用，配合sod，石斛堿、石斛多糖等成分去自由基，抗氧化的作用，在加以α-熊果苷和神經酰胺抑制絡氨酸酶合成黑色素，筑起了不僅內外兼具，而且美白皆預防不反彈的堅固堡壘。
同時，本發明中還提供了一種上述化妝品中石斛多糖以及石斛堿醇質體的制備方法，其包括以下步驟：
a、將石斛進行剪碎，并浸入無水乙醇溶劑中；其中，上述料液體積比為1:20；
b、將步驟a中制得的混合物放入閃式提取器中進行提取，在3500r/min的轉速下閃提4次，每次閃提30s，每兩次閃提操作之間間隔1min，4攝氏度低溫高速離心，離心轉速為4000r/min，離心用時20min；后加水浸沒沉淀，真空抽濾，反復用蒸餾水沖洗直至洗凈沉淀，得石斛殘渣；
c、將步驟b中制得的石斛殘渣用重量比為50倍的水進行稀釋，同步按體積百分比為1%的比例加入纖維素酶，用鹽酸調節溶液ph至5.0，60℃下酶解1.5h；酶解完成后，真空過濾，反復用蒸餾水沖洗直至洗凈沉淀，得石斛殘渣；
d、將步驟c中制得的石斛殘渣在真空干燥箱中進行干燥，干燥完成后加入氨水及1mol/l的naoh溶液進行堿化，以1∶3的體積比加入丙酮，回流6h進行脫脂后過濾，用氯仿溶液提取石斛殘渣中的石斛堿，提取完成后，上述石斛堿在水浴鍋中將氯仿蒸干，后加入甲醇溶解，離心取沉淀，干燥；
e、合并步驟b與步驟c中通過真空抽濾所得的濾液，加入體積百分比為80%的無水乙醇靜置過夜，離心即得石斛多糖；
f、將步驟d制得的石斛堿、卵磷脂加入無水乙醇中，要求卵磷脂含量的體積百分比為0.8%或者1.5%亦或者3%，相對應的石斛堿/卵磷脂的質量比值為1/1.5或者1/5亦或者1/10，相對應的無水乙醇含量的體積百分比為20%或者30%亦或者40%，在密閉室溫條件下對上述混合物以700r/min轉速進行攪拌，并將其緩慢注入到ph7.4的pbs溶液中，加完后攪拌5min；再在4℃低溫條件下采用探頭式超聲儀對上述混合物進行超聲處理5min，整個超聲處理過程中單次累計超聲處理用時達到5s便停5s，以此反復，探頭式超聲儀的工作功率為200w；最后，將上述混合物過0.45μm微孔濾膜，即得石斛堿醇質體。
上述中所提供的一種石斛多糖與石斛堿醇質體的制備方法，其基于鐵皮石斛原料中存在豐富的纖維素，及其所含有效活性成分石斛多糖與石斛堿等在長時間高溫下加熱易被破壞的特性，采用了纖維素酶解-閃式提取工藝來提取其有效成分，以達到高效且有效的保留其活性成分的目的。
為了使得藥物能夠被完好無損地輸送至不同的皮膚組織和細胞，以脂質體包封率和囊泡粒徑作為評價石斛堿醇質體的主要指標得最優技術方案，上述步驟f中卵磷脂含量的體積百分比為1.5﹪、石斛堿/卵磷脂質量比值為1/10、無水乙醇含量的體積百分比為30%。通過紫外法測定上述優選技術方案制備的石斛堿醇質體，其脂質體包封率為：（56.25±0.07）%，透射電鏡圖片呈現圓球形，石斛堿醇質體的粒徑分布緊密，平均粒徑167.58nm。
本發明得到的一種化妝品，其在人體皮膚上使用后，具有抗紫外線抗氧化，同時具備美白淡斑效果，并且純天然、無刺激；同時，本發明中所記載的一種石斛多糖與石斛堿醇質體的制備方法，其工藝具備高效性，且能夠有效的保留石斛多糖以及石斛堿醇質體中的活性成分；最后，本發明所得到的化妝品的開發，滿足了當前美容市場的需要，促進鐵皮石斛從育苗-栽種-終端產品產業鏈的拓展，加強鐵皮石斛藥材更好的綜合利用，推廣發然藥物在功效化妝品領域中的應用。
具體實施方式
下面通過實施例對本發明作進一步的描述。
實施例1：
本實施例中所提供的一種化妝品，按重要百分比計算，其包括：石斛多糖20%、甘油10%、神經酰胺1%、超純水64%、石斛堿醇質體0.3%、天然維生素e2%、全反式白藜蘆醇1%、維生素c棕櫚酸酯0.5%、α-熊果苷0.5%、植物精油0.7%。
本實施例中還提供了一種上述化妝品中石斛多糖以及石斛堿醇質體的制備方法，其包括以下步驟：
a、將石斛進行剪碎，其單位體積為10㎝3，并浸入200㎝3的無水乙醇溶劑中；
b、將步驟a中制得的混合物放入閃式提取器中進行提取，在3500r/min的轉速下閃提4次，每次閃提30s，每兩次閃提操作之間間隔1min，4攝氏度低溫高速離心，離心轉速為4000r/min，離心用時20min；后加水浸沒沉淀，真空抽濾，反復用蒸餾水沖洗直至洗凈沉淀，得石斛殘渣；
c、將步驟b中制得的石斛殘渣用重量比為50倍的水進行稀釋，同步按體積百分比為1%的比例加入纖維素酶，用鹽酸調節溶液ph至5.0，60℃下酶解1.5h；酶解完成后，真空過濾，反復用蒸餾水沖洗直至洗凈沉淀，得石斛殘渣；
d、將步驟c中制得的石斛殘渣在真空干燥箱中進行干燥，干燥完成后加入氨水及1mol/l的naoh溶液進行堿化，以1∶3的體積比加入丙酮，回流6h進行脫脂后過濾，用氯仿溶液提取石斛殘渣中的石斛堿，提取完成后，上述石斛堿在水浴鍋中將氯仿蒸干，后加入甲醇溶解，離心取沉淀，干燥；
e、合并步驟b與步驟c中通過真空抽濾所得的濾液，加入體積百分比為80%的無水乙醇靜置過夜，離心即得石斛多糖；
f、將步驟d制得的石斛堿、卵磷脂加入無水乙醇中，要求卵磷脂含量的體積百分比為0.8%，相對應的石斛堿/卵磷脂質量比值為1/1.5，相對應的無水乙醇含量的體積百分比為20%，在密閉室溫條件下對上述混合物以700r/min轉速進行攪拌，并將其緩慢注入到ph7.4的pbs溶液中，加完后攪拌5min；再在4℃低溫條件下采用探頭式超聲儀對上述混合物進行超聲處理5min，整個超聲處理過程中單次累計超聲處理用時達到5s便停5s，以此反復，探頭式超聲儀的工作功率為200w；最后，將上述混合物過0.45μm微孔濾膜，即得石斛堿醇質體。
參考qb/t2660-2004化妝水的標準進行各項指標檢測，實驗結果表明所制鐵皮石斛精華液符合標準，根據該產品的具體特性，擬定如下質量標準：
精華液制備完成后，參照化妝品衛生標準gb7916、化妝品衛生化學標準檢驗方法gb7917、化妝品微生物標準檢驗方法gb7918以及化妝品安全性評價程序和方法gb7919對所制作精華液進行評價。采用硫酸-苯酚法測定精華液中多糖含量，酸性染料比色法測定石斛堿含量，并在電子顯微鏡下觀察石斛堿醇質體形狀，利用黏度計測定其黏度，同時利用orac（氧化自由基吸收能力）評價其抗氧化能力，結合其他感官理化指標對所制備的精華液進行質量評價。分析數據表明，所制備精華液外觀良好，質量符合標準。
實施例2：
本實施例中所提供的一種化妝品，按重要百分比計算，其包括：石斛多糖35%、甘油15%、神經酰胺2%、超純水42%、石斛堿醇質體1%、天然維生素e2%、全反式白藜蘆醇1%、維生素c棕櫚酸酯0.5%、α-熊果苷0.5%、植物精油1%。
本實施例中還提供了一種上述化妝品中石斛多糖以及石斛堿醇質體的制備方法，其大體步驟與實施例1相一致，但是，本實施例中所述步驟f中卵磷脂含量的體積百分比為1.5﹪、石斛堿/卵磷脂質量比值為1/10、無水乙醇含量的體積百分比為30%。
參考qb/t2660-2004化妝水的標準進行各項指標檢測，實驗結果表明所制鐵皮石斛精華液符合標準，根據該產品的具體特性，擬定如下質量標準：
精華液制備完成后，參照化妝品衛生標準gb7916、化妝品衛生化學標準檢驗方法gb7917、化妝品微生物標準檢驗方法gb7918以及化妝品安全性評價程序和方法gb7919對所制作精華液進行評價。采用硫酸-苯酚法測定精華液中多糖含量，酸性染料比色法測定石斛堿含量，并在電子顯微鏡下觀察石斛堿醇質體形狀，利用黏度計測定其黏度，同時利用orac（氧化自由基吸收能力）評價其抗氧化能力，結合其他感官理化指標對所制備的精華液進行質量評價。分析數據表明，所制備精華液外觀良好，質量符合標準。
實施例3：
本實施例中所提供的一種化妝品，按重要百分比計算，其包括：石斛多糖20%、甘油10%、神經酰胺1%、磁化超純水40%、石斛堿醇質體0.3%、天然維生素e1%、hegf3%、甘草精5%、α-熊果苷1%、植物精油1%、透明質酸1%、維生素p和維生素b3復合物1.095%、絲氨酸2%、橄欖油1%、角鯊烯1%、α亞麻酸3%、β葡聚糖2%、sod5%、內皮素拮抗劑1%、尿囊素0.6%、三乙醇胺與檸檬酸0.005%。
本實施例中還提供了一種上述化妝品中石斛多糖以及石斛堿醇質體的制備方法，其大體步驟與實施例1相一致，但是，本實施例中所述步驟f中卵磷脂含量的體積百分比為3﹪、石斛堿/卵磷脂質量比值為1/5、無水乙醇含量的體積百分比為40%。
參考qb/t2660-2004化妝水的標準進行各項指標檢測，實驗結果表明所制鐵皮石斛精華液符合標準，根據該產品的具體特性，擬定如下質量標準：
精華液制備完成后，參照化妝品衛生標準gb7916、化妝品衛生化學標準檢驗方法gb7917、化妝品微生物標準檢驗方法gb7918以及化妝品安全性評價程序和方法gb7919對所制作精華液進行評價。采用硫酸-苯酚法測定精華液中多糖含量，酸性染料比色法測定石斛堿含量，并在電子顯微鏡下觀察石斛堿醇質體形狀，利用黏度計測定其黏度，同時利用orac（氧化自由基吸收能力）評價其抗氧化能力，結合其他感官理化指標對所制備的精華液進行質量評價。分析數據表明，所制備精華液外觀良好，質量符合標準。
實施例4：
本實施例中所提供的一種化妝品，按重要百分比計算，其包括：石斛多糖30%、甘油15%、神經酰胺1%、磁化超純水50%、石斛堿醇質體0.3%、天然維生素e0.1%、hegf0.5%、甘草精0.54%、α-熊果苷0.1%、植物精油0.1%、透明質酸0.1%、維生素p和維生素b3復合物0.1%、絲氨酸0.2%、橄欖油0.1%、角鯊烯0.1%、α亞麻酸0.3%、β葡聚糖0.2%、sod0.5%、內皮素拮抗劑0.2%、尿囊素0.55%、三乙醇胺與檸檬酸0.01%。
本實施例中所提供了一種上述化妝品中石斛多糖以及石斛堿醇質體的制備方法，其與實施例3相一致。
參考qb/t2660-2004化妝水的標準進行各項指標檢測，實驗結果表明所制鐵皮石斛精華液符合標準，根據該產品的具體特性，擬定如下質量標準：
精華液制備完成后，參照化妝品衛生標準gb7916、化妝品衛生化學標準檢驗方法gb7917、化妝品微生物標準檢驗方法gb7918以及化妝品安全性評價程序和方法gb7919對所制作精華液進行評價。采用硫酸-苯酚法測定精華液中多糖含量，酸性染料比色法測定石斛堿含量，并在電子顯微鏡下觀察石斛堿醇質體形狀，利用黏度計測定其黏度，同時利用orac（氧化自由基吸收能力）評價其抗氧化能力，結合其他感官理化指標對所制備的精華液進行質量評價。分析數據表明，所制備精華液外觀良好，質量符合標準。