本發明屬于中藥技術領域，更具體地，涉及一種具有抗抑郁功效的藥物組合物及其制備方法。

背景技術：

抑郁癥屬于情感性精神障礙的范疇，是一種以顯著而持久的心境低落為主要特征的綜合癥，主要表現有情緒低落、言語減少、精神運動遲緩、常自責自罪、企圖自殺等。隨著多種應激因素的加劇，抑郁癥已成為現代社會的常見病、高發病，其發病率正在快速攀升，嚴重影響患者及家人的生活質量，甚至危及患者的生命安全。目前，常規抗抑郁藥以下幾類：

1、單胺氧化酶抑制劑(maois)和可逆性選擇性單胺氧化酶抑制藥(rima)：單胺氧化酶抑制劑異丙煙肼是第一個用于治療抑郁癥的藥物，其主要機理是通過抑制mao活性，減少中樞神經系統內單胺類神經遞質的氧化降解，提高神經元突觸間隙遞質濃度，從而產生抗抑郁作用。此后相繼有很多類似的化合物用于臨床治療，主要有苯乙肼、異丙肼等。經長期臨床觀察，這類藥物易于引起肝臟損害、高血壓危象、急性黃色肝萎縮等嚴重的不良反應，是心血管病人和老年患者的禁藥，所以國內逐漸停用。

2、三環類抗抑郁藥(tcas)：自20世紀50年代末至今，tcas抗抑郁作用經受了考驗，即使與新型抗抑郁藥相比，它的療效也是值得肯定的。但由于tcas對神經遞質的選擇性差，所以不良反應多，使得tcas的使用受到了一些限制。經典的tcas有丙咪嗪、氯丙咪嗪、阿米替林、多慮平等，其作用是通過抑制5-ht和ne再攝取來實現的，尤其是抑制ne的再攝取。其中丙咪嗪有較強的振奮作用，可用于遲滯的抑郁癥；阿米替林和多慮平具有鎮靜和抗焦慮作用，用于激越和焦慮狀的抑郁癥；氯丙咪嗪用于具有強迫癥的抑郁癥。

3、四環類抗抑郁藥(hcas)：該類藥多為ne再攝取抑制藥，抗抑郁作用與三環類相當，但有起效快、耐受性好，抗膽堿作用弱、心臟毒性小、還有抗焦慮作用等特點，適用于老年人和心血管患者。目前，投入臨床應用的有馬普替林、米安色林，瑞波西丁。

4、選擇性5-ht再攝取抑制藥(ssris)：ssris是目前新藥開發中最多的一類，對5-ht再攝取有高選擇性抑制作用，幾乎不影響其他神經受體，作用位點相對“單一”，不良反應少，目前已成為全球廣為應用的抗抑郁一線藥物。ssris的缺點是起效慢，用藥后4～6周才產生明顯效果。目前常用的藥物有氟西汀、舍曲林、帕羅西汀、西酞普蘭和氟伏沙明。

5、選擇性5-ht及ne再攝取抑制劑(snri)：文拉法辛是一類新的苯乙胺衍生物，主要藥理機制為通過抑制突觸前膜對5-ht及ne的再攝取的雙重作用，增強中樞5-ht及ne神經遞質的功能，發揮抗抑郁作用。研究顯示文拉法辛治療的第2周起效，而ssris起效時間為3～4周，提示其抗抑郁起效快。

6、腎上腺素能和特異性5-ht能抗抑郁藥(nassa)：米氮平主要作用機制為增強ne能，5-ht能的神經功能及特異性阻滯5-ht2及5-ht3受體，拮抗中樞腎上腺素能神經突觸前α2自身受體及異質受體，增加5-ht及ne水平。另外其對組胺h1受體也有一定程度的拮抗作用，增強鎮靜作用，故有利于改善抑郁癥患者的睡眠障礙。推薦的起始劑量為15mg·d^-1，1次睡前服用，有效劑量為15～45mg·d^-1。對于肝病，腎病和老年患者應減少用量。

7、抗抑郁天然藥物：天然植物藥中具有抗抑郁活性的為數不少。路優泰(neuroston)，貫葉連翹的提取物，是國際上第一個用于抗抑郁的天然植物藥，對輕、中度抑郁癥有顯著效果，并可改善失眠和焦慮，不良反應輕，患者能耐受。其浸膏制劑已在德國上市，在德國抗輕、中度抑郁癥藥物市場約占50％。另外柴胡，石莒蒲，銀杏葉，刺五加通過強迫游泳模型或絕望動物抑郁模型也證明有明顯抗抑郁作用。

現代化學藥物抗抑郁藥物費用昂貴，且毒副作用很大，因此從中藥、天然藥物中尋找毒性低、療效高的抗抑郁藥物，尤其是復方抗抑郁藥物是十分必要的。對于新型抗抑郁藥的研究，目前主要希望在以下方面有所創新：(1)療效方面：療效更高，作用譜更廣，包括能快速緩解自殺企圖，對焦慮癥狀與焦慮譜系障礙有效，對難治性抑郁及精神病性抑郁有效，改善睡眠障礙。起效時間提前，達到快速起效。(2)不良反應方面：減少抗膽堿作用、心臟毒性、性功能障礙、癲癇發作、過量中毒、5-ht綜合征、誘發躁狂和快速循環、突然停藥的“撤藥綜合征”。(3)藥物相互作用方面：減少藥物相互作用，注意療效與不良反應的疊加和抵消作用。(4)增加在特殊人群中應用的安全性，如老年、兒童、軀體疾病患者等。

技術實現要素：

本發明的目的是提供一種具有抗抑郁功效的藥物組合物。

本發明的另一目的是提供該具有抗抑郁功效的藥物組合物的制備方法。

本發明的目的是通過以下方式實現的：

一種具有抗抑郁功效的藥物組合物，該藥物組合物由以下重量份的藥味原料制成：月見草1～3重量份、白頭翁1～3重量份、金蓮花1～3重量份。

所述的具有抗抑郁功效的藥物組合物，優選由以下重量份的藥味原料制成：月見草1重量份、白頭翁1重量份、金蓮花1重量份。

所述的具有抗抑郁功效的藥物組合物與藥學上可接受的輔料制成藥物制劑，優選為片劑、顆粒劑、膠囊劑、丸劑。

一種具有抗抑郁功效的藥物組合物的制備方法，該藥物組合物由以下重量份的藥味原料制成：月見草1～3重量份、白頭翁1～3重量份、金蓮花1～3重量份，該制備方法的步驟如下：

(1)取月見草與金蓮花混合后，粉碎成粗粉，co2超臨界萃取，co2超臨界萃取條件為：萃取壓力為25～35mpa，萃取溫度30～45℃，co2流量20～35l·h^-1，萃取時間1～2h；得到月見草與金蓮花萃取物，用β-環糊精包合，得到β-環糊精包合物；月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣保留，備用；

(2)取步驟(1)所得的月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣，用5～10倍量60％～70％的乙醇回流提取1～3次，每次0.5～2h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到浸膏ⅰ，備用；

(3)取白頭翁，粉碎成粗粉，用5～10倍量水回流提取1～3次，每次0.5～2h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到白頭翁水提浸膏，備用；白頭翁水提取后的藥渣保留，備用；

(4)取步驟(3)所得的白頭翁水提取后的藥渣，進行超聲波輔助提取，提取溫度30～37℃，超聲波頻率40～60khz，按1g:16ml～25ml的料液比，加入濃度為90％～100％的乙醇作為提取液，每次提取31～40min，提取1～3次，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇，得到浸膏ⅱ，備用；

(5)取步驟(3)所得的白頭翁水提浸膏，進行柱層析分離；選用d101b型大孔吸附樹脂進行柱層析分離，樹脂柱徑高比為1：3～5，上樣體積：5～7bv，水洗7～9bv除雜，以丙酮:0.4mol/l乙酸溶液＝2:1的洗脫劑10～12bv洗脫，流速為2～4bv/h，收集洗脫液，洗脫液濃縮，得到浸膏ⅲ；

(6)將步驟(1)所得的β-環糊精包合物、步驟(2)所得的浸膏ⅰ、步驟(4)所得的浸膏ⅱ、步驟(5)所得的浸膏?；旌暇鶆颍稍铮鬯?，即得。

所述的具有抗抑郁功效的藥物組合物的制備方法，優選該藥物組合物由以下重量份的藥味原料制成：月見草1重量份、白頭翁1重量份、金蓮花1重量份，其制備方法的步驟優選如下：

(1)取月見草與金蓮花混合后，粉碎成粗粉，co2超臨界萃取，co2超臨界萃取條件為：萃取壓力為30mpa，萃取溫度35℃，co2流量30l·h^-1，萃取時間1.5h；得到月見草與金蓮花萃取物，用β-環糊精包合，得到β-環糊精包合物；月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣保留，備用；

(2)取步驟(1)所得的月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣，用8倍量65％的乙醇回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到浸膏ⅰ，備用；

(3)取白頭翁，粉碎成粗粉，用8倍量水回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到白頭翁水提浸膏，備用；白頭翁水提取后的藥渣保留，備用；

(4)取步驟(3)所得的白頭翁水提取后的藥渣，進行超聲波輔助提取，提取溫度34℃，超聲波頻率50khz，按1g：20ml的料液比，加入濃度為95％的乙醇作為提取液，每次提取35min，提取2次，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇，得到浸膏ⅱ，備用；

(5)取步驟(3)所得的白頭翁水提浸膏，進行柱層析分離；選用d101b型大孔吸附樹脂進行柱層析分離，樹脂柱徑高比為1：4，上樣體積：6bv，水洗8bv除雜，以丙酮:0.4mol/l乙酸溶液＝2:1的洗脫劑11bv洗脫，流速為3bv/h，收集洗脫液，洗脫液濃縮，得到浸膏ⅲ；

(6)將步驟(1)所得的β-環糊精包合物、步驟(2)所得的浸膏ⅰ、步驟(4)所得的浸膏ⅱ、步驟(5)所得的浸膏?；旌暇鶆?，干燥，粉碎，即得。

一種具有抗抑郁功效的藥物組合物的質量檢測方法，該藥物組合物由以下重量份的藥味原料制成：月見草1～3重量份、白頭翁1～3重量份、金蓮花1～3重量份，其制備方法的步驟如下：

(1)取月見草與金蓮花混合后，粉碎成粗粉，co2超臨界萃取，co2超臨界萃取條件為：萃取壓力為25～35mpa，萃取溫度30～45℃，co2流量20～35l·h^-1，萃取時間1～2h；得到月見草與金蓮花萃取物，用β-環糊精包合，得到β-環糊精包合物；月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣保留，備用；

(2)取步驟(1)所得的月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣，用5～10倍量60％～70％的乙醇回流提取1～3次，每次0.5～2h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到浸膏ⅰ，備用；

(3)取白頭翁，粉碎成粗粉，用5～10倍量水回流提取1～3次，每次0.5～2h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到白頭翁水提浸膏，備用；白頭翁水提取后的藥渣保留，備用；

(4)取步驟(3)所得的白頭翁水提取后的藥渣，進行超聲波輔助提取，提取溫度30～37℃，超聲波頻率40～60khz，按1g:16ml～25ml的料液比，加入濃度為90％～100％的乙醇作為提取液，每次提取31～40min，提取1～3次，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇，得到浸膏ⅱ，備用；

(5)取步驟(3)所得的白頭翁水提浸膏，進行柱層析分離；選用d101b型大孔吸附樹脂進行柱層析分離，樹脂柱徑高比為1：3～5，上樣體積：5～7bv，水洗7～9bv除雜，以丙酮:0.4mol/l乙酸溶液＝2:1的洗脫劑10～12bv洗脫，流速為2～4bv/h，收集洗脫液，洗脫液濃縮，得到浸膏ⅲ；

(6)將步驟(1)所得的β-環糊精包合物、步驟(2)所得的浸膏ⅰ、步驟(4)所得的浸膏ⅱ、步驟(5)所得的浸膏ⅲ混合均勻，干燥，粉碎，即得；

采用高效液相色譜法對藥物中的長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、豆蔻酸、藜蘆酸甲酯進行含量測定，測定步驟如下：

(1)色譜條件

①長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷色譜條件：色譜柱shimadzuc18，規格為：5μm，250mm×4.6mm；流動相：乙腈-0.05mol·l^-1磷酸二氫鈉溶液，比例為10～30：90～70；流速：0.5～2.0ml·min^-1；柱溫：30～40℃；elsd參數：漂移管溫度：120～140℃，載氣流速：3.5～4.0ml·min^-1；

②豆蔻酸、藜蘆酸甲酯色譜條件：色譜柱kromasil100ac18，規格為：5μm，250mm×4.6mm；流動相：乙腈-2％冰醋酸溶液，梯度洗脫，洗脫順序為：從0min至20min，乙腈保持在10％，2％冰醋酸溶液保持在90％；從21min至50min，乙腈從10％線性增加至25％，2％冰醋酸溶液從90％線性下降至75％；從51min至60min，乙腈從25％線性增加至35％，2％冰醋酸溶液從75％線性下降至65％；從61min至70min，乙腈從35％線性增加至55％，2％冰醋酸溶液從65％線性下降至45％；檢測波長：270～290nm；流速：0.5～2.0ml·min^-1；柱溫：25～35℃；

(2)對照品溶液的制備

①對照品溶液ⅰ的制備：取長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷對照品適量，精密稱定，加60％～80％甲醇溶液制成長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷溶液，即得對照品溶液??；

②對照品溶液ⅱ的制備：取豆蔻酸對照品、藜蘆酸甲酯對照品適量，精密稱定，加90～100％甲醇制成含豆蔻酸、藜蘆酸甲酯的混合溶液，即得對照品溶液ⅱ；

(3)供試品溶液的制備

①供試品溶液ⅰ的制備：取本品3.0～5.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入60％～80％甲醇溶液，密塞，稱定重量，超聲處理，超聲功率為300～400w，超聲頻率為50～70khz，時間為15～25min，放冷，再稱定重量，用60％～80％甲醇溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，續濾液用乙酸乙酯提取1～4次，每次20～40ml，合并乙酸乙酯提取液，用0.5～2％鹽酸水溶液充分洗滌1～4次，每次20～40ml，棄去鹽酸水溶液，乙酸乙酯提取液水浴蒸干，殘渣加60％～80％甲醇溶液溶解，濾過，濾液轉移至量瓶中，加60％～80％甲醇溶液至刻度，搖勻，即得供試品溶液??；

②供試品溶液ⅱ的制備：取本品3.0～5.0g，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入90～100％甲醇，密塞，稱定重量，加熱回流0.5～2h，放冷，濾過，濾液加在聚酰胺色譜柱上，用無水甲醇洗脫1～3次，收集洗脫液，合并，蒸干，殘渣用無水甲醇溶解，濾過，濾液轉移至量瓶中，加無水甲醇溶液至刻度，搖勻，即得供試品溶液ⅱ；

(4)測定：分別精密稱取對照品溶液ⅰ、供試品溶液ⅰ、對照品溶液ⅱ、供試品溶液ⅱ各5～20μl，注入高效液相色譜儀，進行測定。

所述的具有抗抑郁功效的藥物組合物的質量檢測方法，該藥物組合物由以下重量份的藥味原料制成：月見草1重量份、白頭翁1重量份、金蓮花1重量份，制備方法的步驟如下：

(1)取月見草與金蓮花混合后，粉碎成粗粉，co2超臨界萃取，co2超臨界萃取條件為：萃取壓力為30mpa，萃取溫度35℃，co2流量30l·h^-1，萃取時間1.5h；得到月見草與金蓮花萃取物，用β-環糊精包合，得到β-環糊精包合物；月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣保留，備用；

(2)取步驟(1)所得的月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣，用8倍量65％的乙醇回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到浸膏ⅰ，備用；

(3)取白頭翁，粉碎成粗粉，用8倍量水回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到白頭翁水提浸膏，備用；白頭翁水提取后的藥渣保留，備用；

(4)取步驟(3)所得的白頭翁水提取后的藥渣，進行超聲波輔助提取，提取溫度34℃，超聲波頻率50khz，按1g：20ml的料液比，加入濃度為95％的乙醇作為提取液，每次提取35min，提取2次，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇，得到浸膏ⅱ，備用；

(5)取步驟(3)所得的白頭翁水提浸膏，進行柱層析分離；選用d101b型大孔吸附樹脂進行柱層析分離，樹脂柱徑高比為1：4，上樣體積：6bv，水洗8bv除雜，以丙酮:0.4mol/l乙酸溶液＝2:1的洗脫劑11bv洗脫，流速為3bv/h，收集洗脫液，洗脫液濃縮，得到浸膏ⅲ；

(6)將步驟(1)所得的β-環糊精包合物、步驟(2)所得的浸膏ⅰ、步驟(4)所得的浸膏ⅱ、步驟(5)所得的浸膏?；旌暇鶆?，干燥，粉碎，即得；

采用高效液相色譜法對藥物中的長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、豆蔻酸、藜蘆酸甲酯進行含量測定，優選的測定步驟如下：

(1)色譜條件

①長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷色譜條件：色譜柱shimadzuc18，規格為：5μm，250mm×4.6mm；流動相：乙腈-0.05mol·l^-1磷酸二氫鈉溶液，比例為22：78；流速：0.5ml·min^-1；柱溫：35℃；elsd參數：漂移管溫度：130℃，載氣流速：3.8ml·min^-1；

②豆蔻酸、藜蘆酸甲酯色譜條件：色譜柱kromasil100ac18，規格為：5μm，250mm×4.6mm；流動相：乙腈-2％冰醋酸溶液，梯度洗脫，洗脫順序為：從0min至20min，乙腈保持在10％，2％冰醋酸溶液保持在90％；從21min至50min，乙腈從10％線性增加至25％，2％冰醋酸溶液從90％線性下降至75％；從51min至60min，乙腈從25％線性增加至35％，2％冰醋酸溶液從75％線性下降至65％；從61min至70min，乙腈從35％線性增加至55％，2％冰醋酸溶液從65％線性下降至45％；檢測波長：286nm；流速：0.5ml·min^-1；柱溫：30℃；

(2)對照品溶液的制備

①對照品溶液ⅰ的制備：取長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷對照品適量，精密稱定，加70％甲醇溶液制成每1ml含長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷0.500mg的溶液，即得對照品溶液ⅰ；

②對照品溶液ⅱ的制備：取豆蔻酸對照品、藜蘆酸甲酯對照品適量，精密稱定，加95％甲醇制成每1ml含豆蔻酸0.200mg，藜蘆酸甲酯0.200mg的混合溶液，即得對照品溶液ⅱ；

(3)供試品溶液的制備

①供試品溶液ⅰ的制備：取本品4.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70％甲醇溶液100ml，密塞，稱定重量，超聲處理，超聲功率為350w，超聲頻率為60khz，時間為20min，放冷，再稱定重量，用70％甲醇溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，續濾液用乙酸乙酯提取3次，每次30ml，合并乙酸乙酯提取液，用1％鹽酸水溶液充分洗滌3次，每次30ml，棄去鹽酸水溶液，乙酸乙酯提取液水浴蒸干，殘渣加70％甲醇溶液溶解，濾過，濾液轉移至10ml量瓶中，加70％甲醇溶液至刻度，搖勻，即得供試品溶液??；

②供試品溶液ⅱ的制備：取本品4.0g，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入95％甲醇100ml，密塞，稱定重量，加熱回流1h，放冷，濾過，濾液加在聚酰胺色譜柱上，用無水甲醇100ml洗脫2次，收集洗脫液，合并，蒸干，殘渣用無水甲醇溶解，濾過，濾液轉移至10ml量瓶中，加無水甲醇溶液至刻度，搖勻，即得供試品溶液ⅱ；

(4)測定：分別精密稱取對照品溶液ⅰ、供試品溶液ⅰ、對照品溶液ⅱ、供試品溶液ⅱ各10μl，注入高效液相色譜儀，進行測定。

一種藥物組合物在制備治療抑郁癥藥物中的應用，該藥物組合物由以下重量份的藥味原料制成：月見草1重量份、白頭翁1重量份、金蓮花1重量份；其制備方法的步驟如下：

(1)取月見草與金蓮花混合后，粉碎成粗粉，co2超臨界萃取，co2超臨界萃取條件為：萃取壓力為30mpa，萃取溫度35℃，co2流量30l·h^-1，萃取時間1.5h；得到月見草與金蓮花萃取物，用β-環糊精包合，得到β-環糊精包合物；月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣保留，備用；

(2)取步驟(1)所得的月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣，用8倍量65％的乙醇回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到浸膏ⅰ，備用；

(3)取白頭翁，粉碎成粗粉，用8倍量水回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到白頭翁水提浸膏，備用；白頭翁水提取后的藥渣保留，備用；

(4)取步驟(3)所得的白頭翁水提取后的藥渣，進行超聲波輔助提取，提取溫度34℃，超聲波頻率50khz，按1g：20ml的料液比，加入濃度為95％的乙醇作為提取液，每次提取35min，提取2次，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇，得到浸膏ⅱ，備用；

(5)取步驟(3)所得的白頭翁水提浸膏，進行柱層析分離；選用d101b型大孔吸附樹脂進行柱層析分離，樹脂柱徑高比為1：4，上樣體積：6bv，水洗8bv除雜，以丙酮:0.4mol/l乙酸溶液＝2:1的洗脫劑11bv洗脫，流速為3bv/h，收集洗脫液，洗脫液濃縮，得到浸膏ⅲ；

(6)將步驟(1)所得的β-環糊精包合物、步驟(2)所得的浸膏ⅰ、步驟(4)所得的浸膏ⅱ、步驟(5)所得的浸膏?；旌暇鶆?，干燥，粉碎，即得；

采用高效液相色譜法對藥物中的長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、豆蔻酸、藜蘆酸甲酯進行含量測定，測定步驟如下：

(1)色譜條件

①長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷色譜條件：色譜柱shimadzuc18，規格為：5μm，250mm×4.6mm；流動相：乙腈-0.05mol·l^-1磷酸二氫鈉溶液，比例為22：78；流速：0.5ml·min^-1；柱溫：35℃；elsd參數：漂移管溫度：130℃，載氣流速：3.8ml·min^-1；

②豆蔻酸、藜蘆酸甲酯色譜條件：色譜柱kromasil100ac18，規格為：5μm，250mm×4.6mm；流動相：乙腈-2％冰醋酸溶液，梯度洗脫，洗脫順序為：從0min至20min，乙腈保持在10％，2％冰醋酸溶液保持在90％；從21min至50min，乙腈從10％線性增加至25％，2％冰醋酸溶液從90％線性下降至75％；從51min至60min，乙腈從25％線性增加至35％，2％冰醋酸溶液從75％線性下降至65％；從61min至70min，乙腈從35％線性增加至55％，2％冰醋酸溶液從65％線性下降至45％；檢測波長：286nm；流速：0.5ml·min^-1；柱溫：30℃；

(2)對照品溶液的制備

①對照品溶液ⅰ的制備：取長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷對照品適量，精密稱定，加70％甲醇溶液制成每1ml含長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷0.500mg的溶液，即得對照品溶液ⅰ；

②對照品溶液ⅱ的制備：取豆蔻酸對照品、藜蘆酸甲酯對照品適量，精密稱定，加95％甲醇制成每1ml含豆蔻酸0.200mg，藜蘆酸甲酯0.200mg的混合溶液，即得對照品溶液ⅱ；

(3)供試品溶液的制備

①供試品溶液ⅰ的制備：取本品4.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70％甲醇溶液100ml，密塞，稱定重量，超聲處理，超聲功率為350w，超聲頻率為60khz，時間為20min，放冷，再稱定重量，用70％甲醇溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，續濾液用乙酸乙酯提取3次，每次30ml，合并乙酸乙酯提取液，用1％鹽酸水溶液充分洗滌3次，每次30ml，棄去鹽酸水溶液，乙酸乙酯提取液水浴蒸干，殘渣加70％甲醇溶液溶解，濾過，濾液轉移至10ml量瓶中，加70％甲醇溶液至刻度，搖勻，即得供試品溶液ⅰ；

②供試品溶液ⅱ的制備：取本品4.0g，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入95％甲醇100ml，密塞，稱定重量，加熱回流1h，放冷，濾過，濾液加在聚酰胺色譜柱上，用無水甲醇100ml洗脫2次，收集洗脫液，合并，蒸干，殘渣用無水甲醇溶解，濾過，濾液轉移至10ml量瓶中，加無水甲醇溶液至刻度，搖勻，即得供試品溶液ⅱ；

(4)測定：分別精密稱取對照品溶液ⅰ、供試品溶液ⅰ、對照品溶液ⅱ、供試品溶液ⅱ各10μl，注入高效液相色譜儀，進行測定。

一種藥物組合物在制備治療精神分裂癥藥物中的應用，該藥物組合物由以下重量份的藥味原料制成：月見草1重量份、白頭翁1重量份、金蓮花1重量份；其制備方法的步驟如下：

(1)取月見草與金蓮花混合后，粉碎成粗粉，co2超臨界萃取，co2超臨界萃取條件為：萃取壓力為30mpa，萃取溫度35℃，co2流量30l·h^-1，萃取時間1.5h；得到月見草與金蓮花萃取物，用β-環糊精包合，得到β-環糊精包合物；月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣保留，備用；

(2)取步驟(1)所得的月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣，用8倍量65％的乙醇回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到浸膏ⅰ，備用；

(3)取白頭翁，粉碎成粗粉，用8倍量水回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到白頭翁水提浸膏，備用；白頭翁水提取后的藥渣保留，備用；

(4)取步驟(3)所得的白頭翁水提取后的藥渣，進行超聲波輔助提取，提取溫度34℃，超聲波頻率50khz，按1g：20ml的料液比，加入濃度為95％的乙醇作為提取液，每次提取35min，提取2次，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇，得到浸膏ⅱ，備用；

(5)取步驟(3)所得的白頭翁水提浸膏，進行柱層析分離；選用d101b型大孔吸附樹脂進行柱層析分離，樹脂柱徑高比為1：4，上樣體積：6bv，水洗8bv除雜，以丙酮:0.4mol/l乙酸溶液＝2:1的洗脫劑11bv洗脫，流速為3bv/h，收集洗脫液，洗脫液濃縮，得到浸膏ⅲ；

(6)將步驟(1)所得的β-環糊精包合物、步驟(2)所得的浸膏ⅰ、步驟(4)所得的浸膏ⅱ、步驟(5)所得的浸膏?；旌暇鶆?，干燥，粉碎，即得；

采用高效液相色譜法對藥物中的長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、豆蔻酸、藜蘆酸甲酯進行含量測定，測定步驟如下：

(1)色譜條件

①長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷色譜條件：色譜柱shimadzuc18，規格為：5μm，250mm×4.6mm；流動相：乙腈-0.05mol·l^-1磷酸二氫鈉溶液，比例為22：78；流速：0.5ml·min^-1；柱溫：35℃；elsd參數：漂移管溫度：130℃，載氣流速：3.8ml·min^-1；

②豆蔻酸、藜蘆酸甲酯色譜條件：色譜柱kromasil100ac18，規格為：5μm，250mm×4.6mm；流動相：乙腈-2％冰醋酸溶液，梯度洗脫，洗脫順序為：從0min至20min，乙腈保持在10％，2％冰醋酸溶液保持在90％；從21min至50min，乙腈從10％線性增加至25％，2％冰醋酸溶液從90％線性下降至75％；從51min至60min，乙腈從25％線性增加至35％，2％冰醋酸溶液從75％線性下降至65％；從61min至70min，乙腈從35％線性增加至55％，2％冰醋酸溶液從65％線性下降至45％；檢測波長：286nm；流速：0.5ml·min^-1；柱溫：30℃；

(2)對照品溶液的制備

①對照品溶液ⅰ的制備：取長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷對照品適量，精密稱定，加70％甲醇溶液制成每1ml含長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷0.500mg的溶液，即得對照品溶液ⅰ；

②對照品溶液ⅱ的制備：取豆蔻酸對照品、藜蘆酸甲酯對照品適量，精密稱定，加95％甲醇制成每1ml含豆蔻酸0.200mg，藜蘆酸甲酯0.200mg的混合溶液，即得對照品溶液ⅱ；

(3)供試品溶液的制備

①供試品溶液ⅰ的制備：取本品4.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70％甲醇溶液100ml，密塞，稱定重量，超聲處理，超聲功率為350w，超聲頻率為60khz，時間為20min，放冷，再稱定重量，用70％甲醇溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，續濾液用乙酸乙酯提取3次，每次30ml，合并乙酸乙酯提取液，用1％鹽酸水溶液充分洗滌3次，每次30ml，棄去鹽酸水溶液，乙酸乙酯提取液水浴蒸干，殘渣加70％甲醇溶液溶解，濾過，濾液轉移至10ml量瓶中，加70％甲醇溶液至刻度，搖勻，即得供試品溶液?。?/p>

②供試品溶液ⅱ的制備：取本品4.0g，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入95％甲醇100ml，密塞，稱定重量，加熱回流1h，放冷，濾過，濾液加在聚酰胺色譜柱上，用無水甲醇100ml洗脫2次，收集洗脫液，合并，蒸干，殘渣用無水甲醇溶解，濾過，濾液轉移至10ml量瓶中，加無水甲醇溶液至刻度，搖勻，即得供試品溶液ⅱ；

(4)測定：分別精密稱取對照品溶液ⅰ、供試品溶液ⅰ、對照品溶液ⅱ、供試品溶液ⅱ各10μl，注入高效液相色譜儀，進行測定。

本發明所用原料：

白頭翁：毛莨科植物白頭翁屬植物白頭翁(pulsatillachinensis(bunge)regel)的干燥根，又名老翁花，白頭草等，廣泛分布于我國東北、華北、西北和華東等地，另外在朝鮮和俄羅斯西伯利亞也被廣泛應用。始載于《神農本草經》，為常用中藥，性寒、味苦，具有清熱解毒、涼血止痢、燥濕殺蟲的功效。白頭翁的主要成分三萜皂苷具有抗菌、抗病毒、抗腫瘤、抗氧化、抗病原蟲、提高機體免疫力、抑制巨噬細胞分泌l-6、抗癌、抗炎、止瀉、鎮靜、鎮痛、殺精、保肝、抑制腸運動、抗內毒素血癥等作用，白頭翁對消化系統、泌尿系統、心血管系統及造血系統等多種疾病均有治療作用。

月見草：柳葉菜科植物onagraceae月見草屬草本植物(oenotherabiennisl.)，又叫待霄草、山芝麻、野芝麻。性溫、味甘，可治療多種疾病，調節血液中類脂物質，對高膽固醇、高血脂引起的冠狀動脈梗塞、粥樣硬化及腦血栓等癥有顯著療效。月見草富含γ-亞麻酸，具有很強的生物活性，月見草油具有明顯的抗炎、抗氧化、抗血栓、降血糖、降血脂、減肥等作用，對糖尿病、高血脂癥、動脈粥樣硬化、冠心病等具有顯著療效。月見草中含有可以轉化為類似荷爾蒙的物質，調節激素平衡，消除緊張焦慮、易怒失眠、情緒低落、頭昏目眩，乳房腫痛、下腹痛、粉刺暗瘡等癥。有效改善經前、經期綜合癥及更年期綜合癥。延緩性機能減退，調節血脂。維持和控制細胞的生長和再生，保證其活力、防止皺紋的產生。

金蓮花：本發明選用的短瓣金蓮花trolliusledebourireichb.為毛莨科金蓮花屬trolliusl.植物的干燥花，屬野生的多年生草本植物，主要分布于黑龍江及內蒙古東北部等地區。主要含有黃酮類、揮發油、生物堿、鞣質、黃色素及有機酸等化學成分，具有抗菌、抗病毒、抗氧化及抗癌等活性，其中黃酮及有機酸為主要有效成分。

以下實驗或試驗用于說明本發明的技術內容與技術效果，但并不限制本發明權利要求的保護范圍。

實驗一：對治療抑郁癥的處方與活性的藥效學藥物篩選實驗研究

1材料

1.1藥物

1.1.1受試藥物a：處方：月見草300g、白頭翁300g、金蓮花300g；制備方法：取干燥的月見草300g、白頭翁300g、金蓮花300g，用8倍量水回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，干燥，即得；加水稀釋成濃度為含生藥量0.5g·ml^-1的藥液，4℃冷藏保存。

1.1.2受試藥物b：處方：月見草300g、白頭翁300g、金蓮花300g；制備方法：取干燥的月見草300g、白頭翁300g、金蓮花300g，用8倍量65％的乙醇回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，干燥，即得；加水稀釋成濃度為含生藥量0.5g·ml^-1的藥液，4℃冷藏保存。

1.1.3受試藥物c：處方：月見草300g、白頭翁300g、金蓮花300g；制備方法：(1)取干燥的月見草300g與金蓮花300g混合后，粉碎成粗粉，co2超臨界萃取，co2超臨界萃取條件為：萃取壓力為30mpa，萃取溫度35℃，co2流量30l·h^-1，萃取時間1.5h；得到月見草與金蓮花萃取物，用β-環糊精包合，得到β-環糊精包合物；月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣保留，備用；

(2)取步驟(1)所得的月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣，用8倍量65％的乙醇回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到浸膏ⅰ，備用；

(3)取白頭翁300g，粉碎成粗粉，用8倍量水回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到白頭翁水提浸膏，備用；白頭翁水提取后的藥渣保留，備用；

(4)取步驟(3)所得的白頭翁水提取后的藥渣，進行超聲波輔助提取，提取溫度34℃，超聲波頻率50khz，按1g：20ml的料液比，加入濃度為95％的乙醇作為提取液，每次提取35min，提取2次，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇，得到浸膏ⅱ，備用；

(5)取步驟(3)所得的白頭翁水提浸膏，進行柱層析分離；選用d101b型大孔吸附樹脂進行柱層析分離，樹脂柱徑高比為1：4，上樣體積：6bv，水洗8bv除雜，以丙酮:0.4mol/l乙酸溶液＝2:1的洗脫劑11bv洗脫，流速為3bv/h，收集洗脫液，洗脫液濃縮，得到浸膏ⅲ；

(6)將步驟(1)所得的β-環糊精包合物、步驟(2)所得的浸膏ⅰ、步驟(4)所得的浸膏ⅱ、步驟(5)所得的浸膏?；旌暇鶆颍稍?，粉碎，即得；加水稀釋成濃度為含生藥量0.5g·ml^-1的藥液，4℃冷藏保存。

1.1.4受試藥物d：處方：月見草300g、白頭翁300g、金蓮花300g；制備方法：(1)取干燥的月見草300g與金蓮花300g混合后，粉碎成粗粉，用8倍量65％的乙醇回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到浸膏ⅰ，備用；

(2)取白頭翁300g，粉碎成粗粉，用8倍量水回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到浸膏ⅱ；

(3)將步驟(1)所得的浸膏ⅰ、步驟(2)所得的浸膏ⅱ混合均勻，干燥，粉碎，即得；加水稀釋成濃度為含生藥量0.5g·ml^-1的藥液，4℃冷藏保存。

1.1.5受試藥物e：處方：月見草300g、白頭翁300g、金蓮花300g；制備方法：(1)取干燥的月見草300g與金蓮花300g混合后，粉碎成粗粉，co2超臨界萃取，co2超臨界萃取條件為：萃取壓力為30mpa，萃取溫度35℃，co2流量30l·h^-1，萃取時間1.5h；得到月見草與金蓮花萃取物，用β-環糊精包合，得到β-環糊精包合物；月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣保留，備用；

(2)取步驟(1)所得的月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣，用8倍量無水乙醇回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到浸膏ⅰ，備用；

(3)取白頭翁300g，粉碎成粗粉，用8倍量水回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到白頭翁水提浸膏，進行柱層析分離；選用d101b型大孔吸附樹脂進行柱層析分離，樹脂柱徑高比為1：4，上樣體積：6bv，水洗8bv除雜，以丙酮:0.4mol/l乙酸溶液＝2:1的洗脫劑11bv洗脫，流速為3bv/h，收集洗脫液，洗脫液濃縮，得到浸膏ⅱ；

(4)將步驟(1)所得的β-環糊精包合物、步驟(2)所得的浸膏ⅰ、步驟(3)所得的浸膏ⅱ混合均勻，干燥，粉碎，即得；加水稀釋成濃度為含生藥量0.5g·ml^-1的藥液，4℃冷藏保存。

1.1.6陽性對照藥：鹽酸氟西汀膠囊，上海中西制藥有限公司生產，批準文號：國藥準字h19980114，批號：2015082302。

1.2動物

icr雄性小鼠，體重18～22g，由黑龍江中醫藥大學藥物安全性評價中心提供，合格證號為p00102013。實驗前適應性喂養1周，溫度為(23±3)℃，12h光照，濕度40％，自由進食，單籠飼養，排除飲食及環境等所有可能對實驗動物產生的影響。

1.3儀器

medlab生物信號采集系統，由上?？禐獒t療科技發展有限公司制造；jz100型100g張力換能器，由上?？禐獒t療科技發展有限公司制造；sonydsc2p8數碼攝像機，由上海索廣電子有限公司生產；mc-145電子體溫計，由歐姆龍大連有限公司制造。

2方法

2.1小鼠懸尾實驗

正常小鼠隨機區組法分為7組，即空白對照組、陽性藥鹽酸氟西汀組：灌胃給藥劑量為3.0mg·kg^-1，受試藥物a組：灌胃給藥劑量為50mg·kg^-1，受試藥物b組：灌胃給藥劑量為50mg·kg^-1，受試藥物c組：灌胃給藥劑量為50mg·kg^-1，受試藥物d組：灌胃給藥劑量為50mg·kg^-1，受試藥物e組：灌胃給藥劑量為50mg·kg^-1。

各組均按0.25ml·(10g)^-1體重灌胃給藥。每日1次，連續給藥10d，空白對照組灌胃給予純凈水。于末次給藥后1h進行實驗。將小鼠尾端(在距尾尖2cm處)用膠布固定在100g張力換能器的連線上，使其呈倒懸狀態，頭部離實驗臺約15cm，換能器連接到medlab生物信號采集系統，適應2min后，記錄4min之內的不動時間(s)。

2.2小鼠強迫游泳實驗

動物分組及給藥方式、劑量、時間同2.1，于末次給藥后1h進行實驗。將小鼠單個放入高25cm，直徑20cm，水深15cm，水溫(22±3)℃的水缸中，觀察8min，適應3min，記錄后5min內累計不動時間(s)。

2.3小鼠利血平拮抗實驗

體溫下降的觀測正常小鼠隨機區組法分為8組，即空白對照組、模型組、鹽酸氟西汀組、受試藥物a組、受試藥物b組、受試藥物c組、受試藥物d組、受試藥物e組，給藥方式、劑量、時間同2.1。組均按0.25ml·(10g)^-1體重灌胃給藥。每日1次，連續給藥7d，空白對照組灌胃給予純凈水。于末次給藥后1h，按1.2mg·kg^-1劑量腹腔注射利血平，2h后測小鼠肛溫(將電子體溫計探頭插入小鼠肛門內約1.5cm處)。

2.4統計學處理

實驗結果均采用均數±標準差表示，使用spss15.0軟件中的方差分析(anova)進行檢驗，p<0.05表示差異有顯著性。

3結果

3.1對小鼠懸尾不動時間的影響

實驗結果表明，鹽酸氟西汀組、受試藥物c組能明顯縮短小鼠懸尾不動時間，與空白組比較差異顯著(p<0.05)。見表1。

表1對小鼠懸尾不動時間的影響(n＝20)

注：與空白組比較*p<0.05。

3.2對小鼠強迫游泳不動時間的影響

實驗結果表明，鹽酸氟西汀組、受試藥物c組能明顯縮短小鼠強迫游泳不動時間，與空白組比較差異顯著(p<0.05)。見表2。

表2對小鼠強迫游泳不動時間的影響(n＝20)

注：與空白組比較*p<0.05。

3.3對利血平所致小鼠體溫下降的影響

實驗結果表明，鹽酸氟西汀組、受試藥物c組能顯著對抗利血平所致小鼠體溫下降，與模型組比較差異顯著(p<0.05)。見表3。

表3對利血平所致小鼠體溫下降的影響(n＝20)

注：與空白組比較*p<0.05。

4討論

實驗結果表明，受試藥物c可顯著縮短小鼠懸尾試驗和小鼠強迫游泳試驗的不動時間，顯示其具有抗抑郁作用。受試藥物c具有明顯的抗抑郁作用，而受試藥物a、受試藥物b、受試藥物d和受試藥物e的療效則不明顯，說明在特定劑量的藥物組合物在特定的制備方法下制成的藥物產生了協同增效作用，具有預料不到的有益效果。

實驗二：hplc法測定本發明藥物中長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、豆蔻酸、藜蘆酸甲酯的含量

現有研究表明，白頭翁中的長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、月見草中的豆蔻酸、金蓮花中的藜蘆酸甲酯是抗抑郁的有效活性成分，所以本發明采用hplc法測定本發明藥物中長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、豆蔻酸、藜蘆酸甲酯這3中有效活性成分的含量。

1實驗儀器與試藥

1.1實驗儀器

lc-2010a型高效液相色譜儀，由日本島津公司制造；十萬分之一電子分析天平，由上海丙林電子科技有限公司制造，kq-500b型超聲儀，由北京天秤物華醫療儀器有限責任公司制造。

1.2試藥

長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷對照品，由北京譜析科技有限公司生產，批號：130226-201505；豆蔻酸對照品，由江蘇永健醫藥科技有限公司生產，批號：140625-201503；藜蘆酸甲酯對照品，由武漢斯坦德化工科技有限公司生產，批號：110823-201511；中性氧化鋁，由深圳市恒豐萬達化工有限公司生產，批號：20150623-8。

乙腈、磷酸為色譜純，甲醇、正丁醇、氨水為分析純，娃哈哈純凈水。

本發明藥物：在本發明中成為本品，處方及制備方法如下：

處方：月見草300g、白頭翁300g、金蓮花300g；

制備方法：(1)取干燥的月見草300g與金蓮花300g混合后，粉碎成粗粉，co2超臨界萃取，co2超臨界萃取條件為：萃取壓力為30mpa，萃取溫度35℃，co2流量30l·h^-1，萃取時間1.5h；得到月見草與金蓮花萃取物，用β-環糊精包合，得到β-環糊精包合物；月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣保留，備用；

(2)取步驟(1)所得的月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣，用8倍量65％的乙醇回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到浸膏ⅰ，備用；

(3)取白頭翁300g，粉碎成粗粉，用8倍量水回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到白頭翁水提浸膏，備用；白頭翁水提取后的藥渣保留，備用；

(4)取步驟(3)所得的白頭翁水提取后的藥渣，進行超聲波輔助提取，提取溫度34℃，超聲波頻率50khz，按1g：20ml的料液比，加入濃度為95％的乙醇作為提取液，每次提取35min，提取2次，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇，得到浸膏ⅱ，備用；

(5)取步驟(3)所得的白頭翁水提浸膏，進行柱層析分離；選用d101b型大孔吸附樹脂進行柱層析分離，樹脂柱徑高比為1：4，上樣體積：6bv，水洗8bv除雜，以丙酮:0.4mol/l乙酸溶液＝2:1的洗脫劑11bv洗脫，流速為3bv/h，收集洗脫液，洗脫液濃縮，得到浸膏ⅲ；

(6)將步驟(1)所得的β-環糊精包合物、步驟(2)所得的浸膏ⅰ、步驟(4)所得的浸膏ⅱ、步驟(5)所得的浸膏?；旌暇鶆颍稍?，粉碎，即得。

2方法與結果

2.1色譜條件

2.1.1長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷色譜條件

色譜柱shimadzuc18，規格為：5μm，250mm×4.6mm；流動相：乙腈-0.05mol·l^-1磷酸二氫鈉溶液(22：78)；流速：0.5ml·min^-1；柱溫：35℃；elsd參數：漂移管溫度：130℃，載氣流速：3.8ml·min^-1。

2.1.2豆蔻酸、藜蘆酸甲酯色譜條件

色譜柱kromasil100ac18，規格為：5μm，250mm×4.6mm；流動相：乙腈-2％冰醋酸溶液，梯度洗脫，洗脫順序為：從0min至20min，乙腈保持在10％，2％冰醋酸溶液保持在90％；從21min至50min，乙腈從10％線性增加至25％，2％冰醋酸溶液從90％線性下降至75％；從51min至60min，乙腈從25％線性增加至35％，2％冰醋酸溶液從75％線性下降至65％；從61min至70min，乙腈從35％線性增加至55％，2％冰醋酸溶液從65％線性下降至45％；檢測波長：286nm；流速：0.5ml·min^-1；柱溫：30℃。

2.2溶液的制備

2.2.1對照品溶液的制備

取長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷對照品適量，精密稱定，加70％甲醇溶液制成每1ml含長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷0.500mg的溶液，即得對照品溶液ⅰ。

取豆蔻酸對照品、藜蘆酸甲酯對照品適量，精密稱定，加95％甲醇制成每1ml含豆蔻酸0.200mg，藜蘆酸甲酯0.200mg的混合溶液，即得對照品溶液ⅱ。

2.2.2供試品溶液的制備

取本品4.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70％甲醇溶液100ml，密塞，稱定重量，超聲處理，超聲功率為350w，超聲頻率為60khz，時間為20min，放冷，再稱定重量，用70％甲醇溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，續濾液用乙酸乙酯提取3次，每次30ml，合并乙酸乙酯提取液，用1％鹽酸水溶液充分洗滌3次，每次30ml，棄去鹽酸水溶液，乙酸乙酯提取液水浴蒸干，殘渣加70％甲醇溶液溶解，濾過，濾液轉移至10ml量瓶中，加70％甲醇溶液至刻度，搖勻，即得供試品溶液ⅰ。

取本品4.0g，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入95％甲醇100ml，密塞，稱定重量，加熱回流1h，放冷，濾過，濾液加在聚酰胺色譜柱上，用無水甲醇100ml洗脫2次，收集洗脫液，合并，蒸干，殘渣用無水甲醇溶解，濾過，濾液轉移至10ml量瓶中，加無水甲醇溶液至刻度，搖勻，即得供試品溶液ⅱ。

2.2.3陰性樣品溶液的制備

取處方中除去白頭翁的其他藥味，按處方比例制成缺白頭翁陰性對照樣品，照“2.2.2”項下供試品溶液ⅰ的制備方法制得陰性對照溶液，即得陰性樣品溶液ⅰ。

取處方中除去月見草與金蓮花的其他藥味，按處方比例制成缺月見草與金蓮花陰性對照樣品，照“2.2.2”項下供試品溶液ⅱ的制備方法制得陰性對照溶液，即得陰性樣品溶液ⅱ。

2.3系統專屬性試驗

分別精密吸取“2.2”項下對照品溶液ⅰ、供試品溶液ⅰ及陰性樣品溶液ⅰ各10μl，按“2.1.1”項下色譜條件進行測定。結果顯示，供試品中長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷保留時間與對照品一致；而陰性對照溶液ⅰ色譜中在相同保留時間處無相應色譜峰，表明處方中其他藥味對測定結果無干擾，該方法對本發明藥物中長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷的測定具有專屬性。

再分別精密吸取“2.2”項下對照品溶液ⅱ、供試品溶液ⅱ及陰性樣品溶液ⅱ各10μl，按“2.1.2”項下色譜條件進行測定。結果顯示，供試品中豆蔻酸與藜蘆酸甲酯譜峰能達到分離且保留時間與相應對照品一致；而陰性對照溶液色譜中在相同保留時間處無相應色譜峰，表明處方中其他藥味對測定結果無干擾，該方法對本發明藥物中豆蔻酸、藜蘆酸甲酯的測定具有專屬性。見附圖1至附圖6。

2.4方法學考察

2.4.1線性關系考察

分別精密吸取“2.2.1”項下對照品溶液ⅰ、ⅱ各1、2、5、10、15、20μl，注入液相色譜儀，分別按“2.1.1”“2.1.2”項下色譜條件測定。分別以長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷對照品進樣量對數(lgx)為橫坐標x，以峰面積對數(lgy)為縱坐標y，以豆蔻酸、藜蘆酸甲酯對照品的進樣量x(μg)為橫坐標，對應峰面積積分值y為縱坐標進行線性回歸，計算得長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、豆蔻酸和藜蘆酸甲酯的回歸方程分別為：

長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷回歸方程：y＝3.4587x+6.4941(r＝0.9997)

豆蔻酸回歸方程：y＝5.2486x+7.2385(r＝0.9998)

藜蘆酸甲酯回歸方程：y＝4.3653x+4.2365(r＝0.9999)

試驗結果表明，長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、豆蔻酸和藜蘆酸甲酯分別在0.4550～10.350μg、0.0500～1.110μg、0.0550～1.020μg范圍內線性良好。

2.4.2精密度試驗

精密吸取“2.2.1”項下對照品溶液ⅰ、ⅱ，分別按“2.1.1”“2.1.2”項下色譜條件測定，重復測定6次，進樣量10μl，測定峰面積積分值。試驗結果長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、豆蔻酸和藜蘆酸甲酯峰面積的rsd值分別為0.79％、0.86％、0.77％，結果顯示儀器精密度良好。

2.4.3穩定性試驗

取本品適量(批號：20160621-2)，照“2.2.2”項下供試品溶液的制備方法制成供試品溶液ⅰ、ⅱ，在0、5、10、15、20h分別精密吸取10μl，再分別按“2.1.1”“2.1.2”項下色譜條件測定峰面積，計算長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、豆蔻酸和藜蘆酸甲酯峰面積的rsd值分別為0.86％、0.78％、0.82％。表明供試品溶液ⅰ、ⅱ在20h內穩定性良好，能夠滿足測定需要。

2.4.4重復性試驗

取本品適量(批號：20160621-2)，照“2.2.2”項下供試品溶液ⅰ、ⅱ的制備方法分別制成供試品溶液，平行制備6份。分別按“2.1.1”“2.1.2”項下色譜條件測定，進樣量10μl。試驗結果為制劑中長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、豆蔻酸和藜蘆酸甲酯的平均質量分數分別為0.7532mg·g^-1、0.4213mg·g^-1、0.4452mg·g^-1，rsd分別為1.34％、0.97％、1.26％，表明含量測定方法的重復性良好。

2.4.5加樣回收試驗

精密稱取已測知含量的本品0.45g(批號：20160621-2)，分別精密加入長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷對照品溶液、豆蔻酸對照品溶液和藜蘆酸甲酯對照品溶液各25ml，照“2.2.2”項下供試品溶液ⅰ、ⅱ的制備方法分別平行制備6份。分別按“2.1.1”“2.1.2”項下色譜條件測定，進樣量10μl，并計算加樣回收率，結果見表4。

表43種成分加樣回收率試驗(n＝6)

2.5樣品含量測定

取3批本發明藥物樣品(批號20160621-2、20160625-1、20160630-1)，按“2.2.2”項下方法制備供試樣品溶液ⅰ、ⅱ，分別按“2.1.1”“2.1.2”項下色譜條件測定，每批樣品測定3份，結果見表5。

表53種成分的樣品含量測定(mg·g^-1，n＝3)

3結論

本實驗測定了制劑中的3種有效成分，確保了制劑療效，實驗方法簡便可行，靈敏度高，重現性好，可用于本發明藥物的檢測。

實驗三：不同藥物中長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、豆蔻酸、藜蘆酸甲酯的含量測定

1待測樣品

1.1.1待測藥物a：處方：月見草300g、白頭翁300g、金蓮花300g；制備方法：取干燥的月見草300g、白頭翁300g、金蓮花300g，用8倍量水回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，干燥，即得。

1.1.2待測藥物b：處方：月見草300g、白頭翁300g、金蓮花300g；制備方法：取干燥的月見草300g、白頭翁300g、金蓮花300g，用8倍量65％的乙醇回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，干燥，即得。

1.1.3待測藥物c：處方：月見草300g、白頭翁300g、金蓮花300g；制備方法：(1)取干燥的月見草300g與金蓮花300g混合后，粉碎成粗粉，co2超臨界萃取，co2超臨界萃取條件為：萃取壓力為30mpa，萃取溫度35℃，co2流量30l·h^-1，萃取時間1.5h；得到月見草與金蓮花萃取物，用β-環糊精包合，得到β-環糊精包合物；月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣保留，備用；

(2)取步驟(1)所得的月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣，用8倍量65％的乙醇回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到浸膏ⅰ，備用；

(3)取白頭翁300g，粉碎成粗粉，用8倍量水回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到白頭翁水提浸膏，備用；白頭翁水提取后的藥渣保留，備用；

(4)取步驟(3)所得的白頭翁水提取后的藥渣，進行超聲波輔助提取，提取溫度34℃，超聲波頻率50khz，按1g：20ml的料液比，加入濃度為95％的乙醇作為提取液，每次提取35min，提取2次，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇，得到浸膏ⅱ，備用；

(5)取步驟(3)所得的白頭翁水提浸膏，進行柱層析分離；選用d101b型大孔吸附樹脂進行柱層析分離，樹脂柱徑高比為1：4，上樣體積：6bv，水洗8bv除雜，以丙酮:0.4mol/l乙酸溶液＝2:1的洗脫劑11bv洗脫，流速為3bv/h，收集洗脫液，洗脫液濃縮，得到浸膏ⅲ；

(6)將步驟(1)所得的β-環糊精包合物、步驟(2)所得的浸膏ⅰ、步驟(4)所得的浸膏ⅱ、步驟(5)所得的浸膏?；旌暇鶆?，干燥，粉碎，即得。

1.1.4待測藥物d：處方：月見草300g、白頭翁300g、金蓮花300g；制備方法：(1)取干燥的月見草300g與金蓮花300g混合后，粉碎成粗粉，用8倍量65％的乙醇回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到浸膏ⅰ，備用；

(2)取白頭翁300g，粉碎成粗粉，用8倍量水回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到浸膏ⅱ；

(3)將步驟(1)所得的浸膏ⅰ、步驟(2)所得的浸膏ⅱ混合均勻，干燥，粉碎，即得。

1.1.5待測藥物e：處方：月見草300g、白頭翁300g、金蓮花300g；制備方法：(1)取干燥的月見草300g與金蓮花300g混合后，粉碎成粗粉，co2超臨界萃取，co2超臨界萃取條件為：萃取壓力為30mpa，萃取溫度35℃，co2流量30l·h^-1，萃取時間1.5h；得到月見草與金蓮花萃取物，用β-環糊精包合，得到β-環糊精包合物；月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣保留，備用；

(2)取步驟(1)所得的月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣，用8倍量無水乙醇回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到浸膏ⅰ，備用；

(3)取白頭翁300g，粉碎成粗粉，用8倍量水回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到白頭翁水提浸膏，進行柱層析分離；選用d101b型大孔吸附樹脂進行柱層析分離，樹脂柱徑高比為1：4，上樣體積：6bv，水洗8bv除雜，以丙酮:0.4mol/l乙酸溶液＝2:1的洗脫劑11bv洗脫，流速為3bv/h，收集洗脫液，洗脫液濃縮，得到浸膏ⅱ；

(4)將步驟(1)所得的β-環糊精包合物、步驟(2)所得的浸膏ⅰ、步驟(3)所得的浸膏ⅱ混合均勻，干燥，粉碎，即得。

2測定方法

采用本發明實驗二提供的高效液相色譜法測定各個藥物中的長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、豆蔻酸、藜蘆酸甲酯的含量。

3測定結果

測定結果見表6。

表6待測藥物含量測定結果(單位：mg·g^-1)

4討論

從上表中可以看出，待測藥物c中的長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、豆蔻酸、藜蘆酸甲酯的含量明顯高于其他待測藥物，這可能也是待測藥物c在治療抑郁癥方面的效果優于其他待測藥物的原因。

附圖說明：

圖1為對照品溶液ⅰ的hplc色譜圖，圖中1號峰為長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷色譜峰；

圖2為供試品溶液ⅰ的hplc色譜圖，圖中1號峰為長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷色譜峰；

圖3為白頭翁陰性對照品的hplc色譜圖

圖4為對照品溶液ⅱ的hplc色譜圖，圖中2號峰為豆蔻酸色譜峰，3號峰為藜蘆酸甲酯色譜峰；

圖5為供試品溶液ⅱ的hplc色譜圖，圖中2號峰為豆蔻酸色譜峰，3號峰為藜蘆酸甲酯色譜峰；

圖6為月見草與金蓮花陰性對照品的hplc色譜圖

具體實施方式

以下通過具體實施例對本發明進行進一步說明：

實施例1：

處方：月見草300g、白頭翁300g、金蓮花300g；

制備方法：(1)取干燥的月見草300g與金蓮花300g混合后，粉碎成粗粉，co2超臨界萃取，co2超臨界萃取條件為：萃取壓力為30mpa，萃取溫度35℃，co2流量30l·h^-1，萃取時間1.5h；得到月見草與金蓮花萃取物，用β-環糊精包合，得到β-環糊精包合物；月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣保留，備用；

(2)取步驟(1)所得的月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣，用8倍量65％的乙醇回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到浸膏ⅰ，備用；

(3)取白頭翁300g，粉碎成粗粉，用8倍量水回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到白頭翁水提浸膏，備用；白頭翁水提取后的藥渣保留，備用；

(4)取步驟(3)所得的白頭翁水提取后的藥渣，進行超聲波輔助提取，提取溫度34℃，超聲波頻率50khz，按1g：20ml的料液比，加入濃度為95％的乙醇作為提取液，每次提取35min，提取2次，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇，得到浸膏ⅱ，備用；

(5)取步驟(3)所得的白頭翁水提浸膏，進行柱層析分離；選用d101b型大孔吸附樹脂進行柱層析分離，樹脂柱徑高比為1：4，上樣體積：6bv，水洗8bv除雜，以丙酮:0.4mol/l乙酸溶液＝2:1的洗脫劑11bv洗脫，流速為3bv/h，收集洗脫液，洗脫液濃縮，得到浸膏ⅲ；

(6)將步驟(1)所得的β-環糊精包合物、步驟(2)所得的浸膏ⅰ、步驟(4)所得的浸膏ⅱ、步驟(5)所得的浸膏?；旌暇鶆颍稍?，粉碎，即得。

采用高效液相色譜法對藥物中的長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、豆蔻酸、藜蘆酸甲酯進行含量測定，測定步驟如下：

(1)色譜條件

①長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷色譜條件：色譜柱shimadzuc18，規格為：5μm，250mm×4.6mm；流動相：乙腈-0.05mol·l^-1磷酸二氫鈉溶液，比例為22：78；流速：0.5ml·min^-1；柱溫：35℃；elsd參數：漂移管溫度：130℃，載氣流速：3.8ml·min^-1；

②豆蔻酸、藜蘆酸甲酯色譜條件：色譜柱kromasil100ac18，規格為：5μm，250mm×4.6mm；流動相：乙腈-2％冰醋酸溶液，梯度洗脫，洗脫順序為：從0min至20min，乙腈保持在10％，2％冰醋酸溶液保持在90％；從21min至50min，乙腈從10％線性增加至25％，2％冰醋酸溶液從90％線性下降至75％；從51min至60min，乙腈從25％線性增加至35％，2％冰醋酸溶液從75％線性下降至65％；從61min至70min，乙腈從35％線性增加至55％，2％冰醋酸溶液從65％線性下降至45％；檢測波長：286nm；流速：0.5ml·min^-1；柱溫：30℃；

(2)對照品溶液的制備

①對照品溶液ⅰ的制備：取長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷對照品適量，精密稱定，加70％甲醇溶液制成每1ml含長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷0.500mg的溶液，即得對照品溶液??；

②對照品溶液ⅱ的制備：取豆蔻酸對照品、藜蘆酸甲酯對照品適量，精密稱定，加95％甲醇制成每1ml含豆蔻酸0.200mg，藜蘆酸甲酯0.200mg的混合溶液，即得對照品溶液ⅱ；

(3)供試品溶液的制備

①供試品溶液ⅰ的制備：取本品4.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70％甲醇溶液100ml，密塞，稱定重量，超聲處理，超聲功率為350w，超聲頻率為60khz，時間為20min，放冷，再稱定重量，用70％甲醇溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，續濾液用乙酸乙酯提取3次，每次30ml，合并乙酸乙酯提取液，用1％鹽酸水溶液充分洗滌3次，每次30ml，棄去鹽酸水溶液，乙酸乙酯提取液水浴蒸干，殘渣加70％甲醇溶液溶解，濾過，濾液轉移至10ml量瓶中，加70％甲醇溶液至刻度，搖勻，即得供試品溶液??；

②供試品溶液ⅱ的制備：取本品4.0g，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入95％甲醇100ml，密塞，稱定重量，加熱回流1h，放冷，濾過，濾液加在聚酰胺色譜柱上，用無水甲醇100ml洗脫2次，收集洗脫液，合并，蒸干，殘渣用無水甲醇溶解，濾過，濾液轉移至10ml量瓶中，加無水甲醇溶液至刻度，搖勻，即得供試品溶液ⅱ；

(4)測定：分別精密稱取對照品溶液ⅰ、供試品溶液ⅰ、對照品溶液ⅱ、供試品溶液ⅱ各10μl，注入高效液相色譜儀，進行測定；

(5)測定結果：本品中長春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷含量為0.742mg·g^-1、豆蔻酸含量為0.411mg·g^-1、藜蘆酸甲酯含量為0.420mg·g^-1。

實施例2：

處方：月見草300g、白頭翁300g、金蓮花300g；

制備方法：(1)取干燥的月見草300g與金蓮花300g混合后，粉碎成粗粉，co2超臨界萃取，co2超臨界萃取條件為：萃取壓力為30mpa，萃取溫度35℃，co2流量30l·h^-1，萃取時間1.5h；得到月見草與金蓮花萃取物，用β-環糊精包合，得到β-環糊精包合物；月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣保留，備用；

(2)取步驟(1)所得的月見草與金蓮花co2超臨界萃取后的藥渣，用8倍量65％的乙醇回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到浸膏ⅰ，備用；

(3)取白頭翁300g，粉碎成粗粉，用8倍量水回流提取2次，每次1h，提取液合并，過濾，濾液濃縮，得到白頭翁水提浸膏，備用；白頭翁水提取后的藥渣保留，備用；

(4)取步驟(3)所得的白頭翁水提取后的藥渣，進行超聲波輔助提取，提取溫度34℃，超聲波頻率50khz，按1g：20ml的料液比，加入濃度為95％的乙醇作為提取液，每次提取35min，提取2次，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇，得到浸膏ⅱ，備用；

(5)取步驟(3)所得的白頭翁水提浸膏，進行柱層析分離；選用d101b型大孔吸附樹脂進行柱層析分離，樹脂柱徑高比為1：4，上樣體積：6bv，水洗8bv除雜，以丙酮:0.4mol/l乙酸溶液＝2:1的洗脫劑11bv洗脫，流速為3bv/h，收集洗脫液，洗脫液濃縮，得到浸膏ⅲ；

(6)將步驟(1)所得的β-環糊精包合物、步驟(2)所得的浸膏ⅰ、步驟(4)所得的浸膏ⅱ、步驟(5)所得的浸膏ⅲ混合均勻，干燥，粉碎，加入淀粉、糊精，混勻，壓片，制成片劑900片。