專利名稱：咪唑并[4，5-c]吡啶類抗骨質疏松劑的制作方法
技術領域：
本發明涉及2-咪唑并〔4，5-C〕吡啶類，它們的制備方法，含上述2-取代的咪唑并〔4，5-C〕吡啶類的藥物組合物，以及上述2-取代的咪唑并〔4，5-C〕吡啶類在改進宿主動物(包括人類)骨生長和骨吸收之間的平衡中的應用。
骨質疏松癥是一種骨胳疾病，它表現在由于骨胳密度降低引起的骨折發生率增加。事實上，骨胳礦物質(磷酸鈣，稱為“羥磷灰石”)和骨胳基質(主要蛋白質，稱為“膠原”)都有損失。這種情況在人體中可能早在30歲時便開始發生。通常，這一過程在經絕后的婦女中比在男人中發生的更快。然而，在80歲以后，骨質疏松癥的發生率對不同性別就沒有差異了。在這10至20年的骨質損失過程中，可能有背疼癥狀和脊柱變形的X-光片證據。在老齡期，骨胳脆性變得更明顯，表現在鄰近的股骨(髖部)容易折斷。在45歲以上的人中，骨質疏松癥是骨折的最普通的原因。
雖然對骨質疏松癥的原因知道的很少，但可以相信，這里存在著骨生長和骨吸收(骨損壞)之間不平衡問題。骨胳在動物的整個生命期保持在動態組織狀態。就是說，新的骨質不斷生成，舊的骨質不斷被吸收。然而，在患有骨質疏松癥的動物中，最終骨吸收超過了骨生長。
調查表明，在美國，可能有1，500萬至2，000萬人患有骨質疏松癥〔W.A.Peck(主席)，NIH Osteoporosis Consensus Conference，J.Am.Med.Assoc.，10，252∶799-802(1984)〕。按照據信是致病原因的各種情況將各種類型骨質疏松癥分為老年的(老化);經絕后的(女性雌激素損失);廢用性(長期固定不動);類固醇(因關節炎長期接受類固醇治療);惡性血鈣過多。骨質疏松癥也可能表現在牙科疾病上，因為下頜骨似乎比其它骨胳更快地損失物質。這樣，涉及成年牙齒損失的牙周病可能是骨質疏松癥的早期征兆。
目前對骨質損失的機理了解尚少。況且，目前的治療方法通常是不能令人滿意的。這些治療方法包括同化劑，各種含亞磷藥物，維生素D，鈣鹽，氟化物和降血鈣素。
雌激素置換治療已經成為經絕后婦女骨質疏松癥治療中可供選擇的方法。
因為在任何年齡階段不活動都能引起骨質疏松癥，所以物理療法成為目前用以治療骨質疏松癥的另一方法。于是，許多醫師相信鍛煉和物理治療可以防止年齡大的病人的病情進一步發展。然而，物理治療對于骨折病人可能是有害的，況且，對于患有嚴重骨質疏松癥的病人來說，過度緊張的鍛煉可能引起骨折。
其它治療方法包括服用氟化物鹽，如氟化鈉，已經表明，它在臨床上能通過刺激膠原合成而明顯地促進骨質生成。然而，一個嚴重的副反應是鈣化較差的無規則的骨生長。其它治療方法涉及輸注鈣和維生素D，以抵消鈣或被損害的鈣吸收形成的缺陷，這是較年老病人中常出現的癥狀。但是，沒有證據表明成年人吸收較多的鈣能防止骨質疏松或增加骨質生長。
治療骨質疏松癥的最有效途徑是服用為改進骨生長速度和骨吸收速度之間平衡而研制的藥物，這種改進是指使前者與后者的速度比增加，達到沒有凈骨質損失的效果。先前發生的骨質損失得到恢復以后，達到一種穩定狀態，其中骨生長速度和骨吸收速度相等。這種改進可通過刺激骨質沉淀(即骨生成)生理機制或通過阻滯骨吸收機制，或兩者都有，來實現。目前為實現這一目的而使用或正在實驗階段的藥物包括膦酸鹽，降血鈣素和光輝霉素。然而，所有這些藥物都有嚴重的缺點。
光輝霉素，一種抗生素，具有抗腫瘤活性和降血鈣活性，它能引起血漿中鈣減少，據信，血鈣減少又是骨吸收相對速度降低的標志，其中骨吸收相對速度是指相對于骨生長而言的骨吸收。然而，副反應包括腎毒性和肝毒性以及惡心。同樣，有機膦酸鹽的副反應包括過度骨質鈣化，血壓過低和腎衰渴。降血鈣素引起免疫方面的問題，因為它通常從非人類來源中獲得。于是，在上述藥物中，目前沒有一種適合于單獨使用來治療骨質疏松癥。
最接近的先有技術是日本專利J 63146-883-A和國標專利申請WO 89/03829;WO 89/03830和WO 89/Q3833。
本發明涉及用于抑制骨吸收并如式(Ⅰ)所示的新的2-取代的咪唑并〔4，5-C〕吡啶衍生物或式(Ⅰ′)所示的其互變異構體及其藥物上可接受的鹽或水合物。
式中R1，R2，R3，R4和R5獨立選自氫，含1-6個碳原子的低級烷基，羥基，含1-6個碳原子的低級烷氧基，鹵素，三氟甲基，三氟甲氧基，硝基，氰基，苯氧基，芐氧基，氨基乙酰基，-S(O)p-CH3或任何兩個相鄰基團連接一起形成亞甲二氧基;m是0-2;n是1-3;p是0-2。
較好的本發明化合物是式(Ⅰ)中R1，R2，R3，R4和R5獨立選自氫，羥基，甲氧基，氟，氯，甲基，三氟甲基，芐氧基或任何兩個相鄰的基團連接一起形成亞甲二氧基，m是0-2，n是1-2時所示的化合物，及其藥物上可接受的鹽。
本發明中最好的化合物為2-〔〔(3-甲氧基苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶;
2-〔〔(3-甲氧基苯基)甲基〕硫代〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶;
2-〔〔(3-甲氧基苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶;
2-〔〔(3，4-二氯苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶;
2-〔〔〔(3-三氟甲基)苯基〕甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶;
2-〔〔(2-氯-6-氟苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶;
2-〔〔(苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶;
2-〔(2-苯基乙基)亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶;
2-〔〔(3-甲氧苯基)乙基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶;
2-〔〔(2，4，6-三甲基苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶;
2-〔〔(4-溴-2-氟苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶;
2-〔〔〔3-(苯基甲氧基)苯基〕甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶;
2-〔〔(6-氯-1，3-苯并二氧雜環戊-5-基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶;
2-〔〔(4-甲氧苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶;
2-〔〔(3，4，5-三甲氧基苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶;
2-〔〔(3，4-二氟苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶;
2-〔〔(五氟苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶;
2-〔〔(3-甲基苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶;
2-〔〔(4-叔丁基苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶;
2-〔〔(1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶-2-基)亞硫酰基〕甲基〕芐腈;
2-〔〔(2-氟苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶;
2-〔〔(2-甲氧基苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶;
2-〔〔(3，5-二甲氧基苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶;
2-〔〔(3-苯氧基苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶;
2-〔〔(3-硝基苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶;
2-〔〔(4-甲氧基-3-甲基苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶;
2-〔〔(3-乙氧基苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶;
N-〔4-〔(1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶-2-基)亞硫酰基)甲基〕苯基〕乙酰胺;
〔S-(+)〕-2-〔〔(3-甲氧基苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶;
〔R-(-)〕-2-〔〔(3-甲氧基苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶;
3-〔〔(1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶-2-基)亞硫酰基〕甲基〕苯酚;以及它們的藥物上可接受的鹽。
本發明的亞砜類含有一個不對稱硫原子，于是制備的是其外消旋混合物。應當知道，式(Ⅰ)和(Ⅰ′)所示亞砜類的定義中包括具有下述活性的所有可能的立體異構體，R和S對映體，互變異構體和它們的混合物。具體地說，包括具有所述活性的外消旋改性物和任何旋光異構體。
本發明的另一個目的是提供一種按照下述反應路線生產2-取代的咪唑并〔4，5-C〕吡啶類的改進方法。
反應路線
其中R1，R2，R3，R4，R5，m和n定義同上，X是Cl，Br，I或甲苯磺酰基。
本發明化合物通常是連續生產的，首先用甲醇鈉制得2-巰基咪唑并〔4，5-C〕吡啶的鈉鹽(A)。在DMF中使(A)與當量的適當取代的烷基化試劑(B)反應，得到相應的硫化物衍生物(C)。最后，在低溫下用當量的氧化劑將(C)氧化，所用氧化劑如二氧化硒/過氧化氫或間氯過氧苯甲酸，得到所需亞砜(Ⅰ)。
本發明的再一個目的是提供一種治療患有骨質疏松癥的動物(包括人)的方法，以便改進上述宿主動物中骨沉著速度和骨吸收速度的平衡關系，借以減少后者與前者的比值。
本發明還有一個目的是提供一種治療宿主動物，使其已存在的健康骨胳組織免遭破壞的方法。這些藥劑也可能用于治療惡性血鈣過多，變形性骨炎，甲狀旁腺機能亢進，不活動，糖皮質激素誘導的osteopenia，和關節炎性皮疹。
本發明進一步目的是提供一種治療牙周病的方法。
本發明的式(Ⅰ)化合物可單獨使用或與藥理學上可以接受的載體結合使用，其用量比例決定于化合物溶解度和化學性質，選擇的給藥途徑和標準的藥物實踐。例如，可用膠囊、片劑、懸浮液或溶液形式口服給藥，或口腔局部給藥，或胃腸外注射給藥。膠囊和片劑是較好的給藥方式。對于胃腸外給藥，可以無菌溶液形式使用，溶液中含有其它溶質，例如足夠的鹽水或葡萄糖，使其成為等滲溶液。
膠囊和片劑中含有該活性成分和與之混合的適用于制備膠囊和片劑的、無毒的、已知藥物賦形劑。合適的藥物賦形劑例如有淀粉，乳糖，某些類型的粘土等等。片劑可以不包衣，也可按已知技術包衣以延遲在胃腸道中的崩解和吸收，因此可以在較長時間內有緩釋作用。
式(Ⅰ)化合物的水懸液含有活性成分和與之相混合的適合于制造水懸液的一種或多種已知的無毒藥物賦形劑。合適的賦形劑有，例如，甲基纖維素，藻酸鈉，阿拉伯樹膠，卵磷脂等等。水懸液中也可以含有一種或多種貯藏劑，一種或多種著色劑，一種或多種調味劑和一種或多種增甜劑。
將該活性成分懸浮于植物油中，如花生油，橄欖油，芝麻油，或椰子油，或懸浮于礦物油中，如液體石蠟。懸浮液中也可以含有增稠劑，如蜂蠟，硬石蠟或十六烷醇。這些組合物也可以含有增甜劑，調味劑和抗氧劑。
式(Ⅰ)化合物的劑量隨著給藥形式和選定的具體化合物變化。而且，它也隨著具體的患者以及受治患者的年齡、體重和狀態而變化，并且根據癥狀的性質和程度變化。通常，治療開始時用小劑量，即小于化合物的最佳劑量。然后，小幅度地增加劑量，直至在當時條件下達到最佳效果。通常，本發明化合物最好采用既能收到一般的治療效果又不引起任何有害的或破壞性的副反應的濃度水平給藥。例如，口服給藥時化合物的有效量通常自約200毫克至1200毫克(每天單次量或分次量)，當然，如前所述，也可以有某些變動。然而，為了收到效果，對于口服給藥，最好采用單次日劑量或分次日劑量為約500毫克至900毫克的劑量水平。
提供下述實施例以說明制備和試驗本發明化合物的方法。這些實施例并不能被認為是對本發明幅度和范圍的任何形式的限制。實施例中提出的溫度為攝氏度。
實施例12-巰基-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶將25克(0.23摩爾)3，4-二氨基吡啶在含有50毫升(63.2克，0.83摩爾)二硫化碳的750毫升乙醇中的混合物加熱回流5小時。使反應混合物冷卻至室溫，過濾收集生成的米色沉淀，使其風干過夜，產物重量為33.5克，熔點＞320℃。
參考G.B.Barlin，J.Chem.Soc(B)285(1966)。
實施例22-〔〔(3-甲氧苯基)甲基〕硫代〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶往溶有3.45克(0.15克原子)鈉的800毫升甲醇溶液中加入22.65克(0.15摩爾)2-巰基-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶。將反應混合物在室溫攪拌0.5小時。在旋轉蒸發器中除去溶劑，往殘留物中加入465毫升DMF。滴入3-甲氧芐基氯(23.49克，0.15摩爾)，反應混合物在室溫攪拌過夜。將反應混合物例入約1800毫升水中，使其在冰浴中冷卻幾小時。過濾出產物，重量28.3克。從乙酸乙酯中重結晶得到18.6克產物。用乙醇重結晶，得到一分析樣品(熔點133-136℃)。
分析計算C14H13N3OSC，61.97;H，4.83;N，15.49測定C，61.91;H，4.81;N，15.48。
實施例32-〔〔(3-甲氧苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶將2-〔〔(3-甲氧苯基)甲基〕硫代〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶(9.88克，0.036摩爾)加熱溶于130毫升甲醇中。將4.0克(0.036摩爾)二氧化硒加熱溶于150毫升甲醇中，然后加入4.07克(0.036摩爾)30%過氧化氫和2.5毫升水，制得氧化劑溶液。將氧化劑溶液冷至室溫，把它滴加到硫化物溶液中。將反應混合物攪拌過夜。用過濾器收集生成的沉淀，用石油醚輕洗，得到4.68克產物。用乙醇重結晶，得到一個分析樣品，熔點176-179℃。
分析計算C14H13N3O2SC，58.42;H，4.56;N，14.62測定C，58.47;H，4.53;N，14.62。
實施例42-〔〔3-甲氧苯基)甲基〕磺酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶往2.35克(0.009摩爾)2-〔〔(3-甲氧苯基)甲基〕硫代〕-1H-咪唑〔4，5-C〕吡啶在100毫升二氯甲烷中的溶液中滴加含有4.2克(0.02摩爾)間氯過氧苯甲酸的200毫升二氯甲烷溶液，同時進行攪拌。反應混合物在室溫攪拌4天。收集生成的沉淀(1.52克)，用10%碳酸氫鈉溶液洗滌。用乙醇重結晶，得到一分析樣品，熔點200-203℃。
分析計算C14H13N3O3SC，55.43;H，4.32;N，13.85測定C，55.66;H，4.33;N，13.98。
實施例52-〔〔(3，4-二氯苯基)甲基〕硫代〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶往0.34克(0.015克原子)鈉在70毫升甲醇中的溶液中加入2.0克(0.013摩爾)2-巰基-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶。將反應混合物室溫攪拌20分鐘，在旋轉蒸發器中蒸發至干。往殘留物中加入40毫升DMF，然后滴加溶于3毫升DMF中的2.54克(0.013摩爾)α，3，4-三氯甲苯。反應混合物在室溫攪拌過夜，然后倒入400毫升冷水中。反應混合物用氯仿(3×150毫升)提取。將有機相合并并用硫酸鎂干燥。過濾溶液，用旋轉蒸發器將濾液蒸發至干。得到2.66克產品。用乙腈重結晶，得到一分析樣品，熔點190-193℃。
分析計算C13H9Cl2N3SC，50.34;H，2.92;N，13.55測定C，50.41;H，2.72;N，13.46。
實施例62-〔〔(3，4-二氯苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶將〔〔(3，4-二氯苯基)甲基〕硫代〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶(1.3克，0.0042摩爾)加熱溶于26毫升甲醇中。將由0.48克(0.0042摩爾)二氧化硒和0.48克(0.0042摩爾)30%過氧化氫和0.5毫升水組成的在9毫升甲醇中的氧化劑溶液滴加到硫化物溶液中。反應溶液在室溫攪拌過夜。過濾收集產物(1.66克)。用乙醇重結晶，得到一分析樣品，熔點198-201℃。
分析計算C13H9Cl2N3OSC，47.87;H，2.78;N，12.88測定C，47.67;H，2.77;N，12.66。
實施例72-〔〔〔3-(三氟甲基)苯基〕甲基〕硫代〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶往含有0.15克(0.0065克原子)鈉的35毫升甲醇溶液中加入1.0克(0.0066摩爾)2-巰基-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶。在室溫攪拌15分鐘后，用旋轉蒸發器除去甲醇。將殘留物溶于20毫升DMF中，滴加1.28克(0.0066摩爾)α′-氯-α，α，α-三氟-間-二甲苯(在2毫升DMF中)于反應溶液中。將反應混合物在室溫攪拌過夜，然后倒入150毫升冰水中。收集結晶的產物1.61克。用乙腈重結晶，得到一分析樣品，熔點148-150℃。
分析計算C14H10F3N3SC，54.36;H，3.26;N，13.59測定C，54.45;H，3.21;N，13.50。
實施例82-〔〔〔3-(三氟甲基)苯基〕甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶將2-〔〔〔3-(三氟甲基)苯基〕甲基〕硫代〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶(0.91克，0.0029摩爾)溶于10毫升乙醇。將0.32克(0.0029摩爾)二氧化硒加熱溶于17毫升乙醇中，加入0.33克(0.0029摩爾)30%過氧化氫和0.25毫升水，制得氧化劑溶液。將該氧化劑溶液滴加到上述硫化物溶液中，將反應混合物室溫攪拌過夜。往反應混合物中加20毫升水，然后用氯仿(3×25毫升)提取。將有機層合并，用硫酸鎂干燥，過濾，蒸發至干。殘留物0.65克。用HPLC法純化，得到的產品用乙醇重結晶，熔點194-197℃。
分析計算C14H10F3OSC，51.69;H，3.10;N，12.92測定C，51.95;H，3.07;N，12.81。
實施例92-〔〔(2-氯-6-氟苯基)甲基〕硫代〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶往含有0.34克(0.015克原子)鈉的70毫升乙醇溶液中加入2.0克(0.013摩爾)2-巰基-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶。室溫攪拌25分鐘后，在旋轉蒸發器中蒸發至干。往殘留物中加入40毫升DMF。往所得溶液中滴加2.33克(0.013摩爾)2-氯-6-氟芐基氯在3毫升DMF中的溶液。反應混合物室溫下攪拌過夜，然后倒入400毫升冷水中。過濾收集生成的沉淀，重3.11克。用乙醇重結晶，得到一分析樣品，熔點224-226℃。
分析計算C13H9ClFN3SC，53.15;H，3.09;N，14.30測定C，53.29;H，3.30;N，13.95。
實施例102-〔〔(2-氯-6-氟苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶將2-〔〔(2-氯-6-氟苯基)甲基〕硫代〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶(2.6克，0.0089摩爾)溶于含20毫升乙酸乙酯的140毫升甲醇中。氧化劑溶液制備如下將0.99克(0.0089摩爾)二氧化硒于40毫升甲醇中加熱，加入1.01克(0.0089摩爾)30%過氧化氫和0.65毫升水。將氧化劑溶液在攪拌下滴加到硫化物溶液中。將反應混合物室溫下攪拌過夜。用旋轉蒸發器除去大約一半的溶劑，反應混合物于冰中驟冷。收集所得沉淀，重1.08克。用乙醇重結晶，得到一分析樣品，熔點180-183℃。
分析計算C13H9ClFN3OSC，50.41;H，2.93;N，13.57測定C，50.45;H，3.01;N，13.26。
實施例112-〔〔(苯基)甲基〕硫代〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶往含有1.26克(0.055克原子)鈉的300毫升甲醇溶液中攪拌加入7.56克(0.05摩爾)2-巰基-1H-咪唑〔4，5-C〕吡啶。20分鐘后，在旋轉蒸發器中將反應混合物蒸發至干。將200毫升二甲基甲酰胺加入殘留物中。往所得溶液中滴加6.33克(0.05摩爾)芐基氯。反應混合物室溫下攪拌5小時，然后倒進1500毫升水中。過濾出產品，重9.5克，熔點175-177℃。產品與熱乙酸乙酯一起研制，過濾。產物重8.11克，熔點175-177℃。取一部分用乙酸乙酯重結晶，得一分析樣品，熔點175-177℃。
分析計算C13H11N3SC，64.70;H，4.59;N，17.41測定C，64.55;H，4.62;N，17.12。
實施例122-〔〔(苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶往3.3克(0.014摩爾)2-〔〔(苯基)甲基〕硫代〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶在50毫升氯仿和5毫升甲醇中的冷(0-5℃)溶液中滴加含2.78克(0.014摩爾)間-氯過氧苯甲酸的50毫升氯仿溶液。反應混合物在室溫攪拌45分鐘。在旋轉蒸發器中除去大約一半的氯仿，然后將反應混合物倒入200毫升乙醚中。反應混合物用冰冷卻。收集生成的沉淀，重1.78克。將產物懸浮于10%碳酸氫鈉溶液中，過濾并空氣干燥過夜。產品重1.39克。用乙醇重結晶，得一分析樣品，熔點190-193℃。
分析計算C13H11N3OSC，60.68;H，4.31;N，16.33測定C，60.39;H，4.17;N，16.47。
實施例132-〔(2-苯基乙基)硫代〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶往含有0.17克(0.0074克原子)鈉的35毫升甲醇溶液中加入1.0克(0.0066摩爾)2-巰基-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶。將反應液在室溫下攪拌25分鐘后，將反應混合物在旋轉蒸發器蒸發至干。往殘留物中加入20毫升DMF。往所得溶液中滴加溶于3毫升DMF中的1.22克(0.0066摩爾)2-(溴乙基)苯。反應混合物在室溫攪拌過夜，然后倒入100毫升冷水中。得到1.0克產品。用乙醇重結晶，制得一分析樣品，熔點164-166℃。
分析計算C14H13N3SC，65.85;H，5.13;N，16.46測定C，66.04;H，5.23;N，16.06。
實施例142-〔(2-苯基乙基)亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶將2-〔(2-苯基乙基)硫代〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶(2.4克，0.0094摩爾)加熱溶解于120毫升氯仿中。反應溶液置冰浴中冷至0-5℃。分批加入間-氯過氧苯甲酸(1.91克，0.0094摩爾)。然后將反應混合物室溫攪拌1小時。加入10%碳酸氫鈉水溶液，分出有機層，用硫酸鎂干燥。過濾以后，將濾液在旋轉蒸發器中蒸發至一半體積。加入乙醚至濁點，用冰冷卻反應混合物。生成的晶體為0.63克。用乙醇重結晶，得到一分析樣品，熔點171-174℃。
分析計算C14H13N3OSC，61.97;H，4.83;N，15.49測定C，61.73;H，4.81;N，15.09。
實施例15對甲苯磺酸3-甲氧基苯乙酯將含有18.82克(0.099摩爾)對甲苯磺酰氯的80毫升吡啶溶液滴加入12.5克(0.082摩爾)3-甲氧基苯乙醇在120毫升吡啶中的冰浴溫度的溶液中。反應混合物在室溫攪拌2小時。用旋轉蒸發器除去吡啶。將100毫升水加到殘留物中。然后用氯仿(3×100毫升)提取水溶液。合并的氯仿層用硫酸鎂干燥，過濾，濾液用旋轉蒸發器蒸干。殘留的油狀物用HPLC法純化，直接用于下一步。
實施例162-〔〔(3-甲氧基苯基)乙基〕硫代〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶往含有0.81克(0.035克原子)鈉的170毫升甲醇溶液中加入4.83克(0.032摩爾)2-巰基-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶。攪拌25分鐘后，用旋轉蒸發器除去甲醇，殘留物中加入100毫升DMF。加熱幾分鐘后，殘留物溶解，使反應混合物冷至室溫，往其中慢慢滴加溶于5毫升DMF的9.79克(0.032摩爾)對甲苯磺酸3-甲氧基苯乙酯。反應混合物在室溫攪拌過夜，然后倒入725毫升冷水中。反應混合物用氯仿(3×200毫升)提取。合并的有機相用硫酸鎂干燥，過濾，用旋轉蒸發器將濾液蒸發至干。粗產品重12.6克，直接用于下一步。
實施例172-〔〔(3-甲氧苯基)乙基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶將2-〔〔(3-甲氧苯基)乙基〕硫代〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶(4.0克，0.014摩爾)溶于60毫升氯仿中，在冰浴中冷至0-5℃。往反應混合物中分批加入間-氯過氧苯甲酸(3.13克，0.015摩爾)。45分鐘后，加入10%碳酸氫鈉溶液。移出有機層，用硫酸鎂干燥，過濾，用旋轉蒸發器蒸干。粗產品重4.2克，經HPLC純化后，得2.3克純產物，熔點125-128℃。
分析計算C15H15N3O2SC，59.78;H，5.02;N，13.94測定C，59.47;H，4.84;N，13.71。
實施例182-〔〔(2，4，6-三甲基苯基)甲基〕硫代〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶用α2-氯異杜烯氯化物按實施例11的同樣方法合成該化合物，熔點150-153℃。
分析計算C16H17N3S·4H OC，66.75;H，6.09;N，14.59測定C，66.84;H，5.97;N，14.67。
實施例192-〔〔(2，4，6-三甲基苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶按實施例10的同樣方法合成該化合物，熔點214-217℃。
分析計算C16H17N3OSC，64.14;H，5.72;N，14.03測定C，64.00;H，5.66;N，13.93。
實施例202-〔〔(4-溴-2-氟苯基)甲基〕硫代〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶用4-溴-2-氟芐基氯按實施例11的同樣方法合成該化合物，熔點204-206℃分析計算C13H9BrFN3SC，46.17;H，2.68;N，12.42測定C，45.99;H，2.81;N，12.46。
實施例212-〔〔(4-溴-2-氟苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶按實施例10的同樣方法合成該化合物，熔點208-212℃(分解)。
分析計算C13H9BrFN3OSC，44.08;H，2.56;N，11.86測定C，44.03;H，2.59;N，11.83。
實施例222-〔〔〔3-(苯基甲氧基)苯基〕甲基〕硫代〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶用3-芐氧基芐基氯按實施例11的同樣方法合成該化合物，熔點161-164℃。
分析計算C20H17N3OSC，69.14;H，4.93;N，12.09測定C，68.90;H，4.93;N，11.59。
實施例232-〔〔〔3-(苯基甲氧基)苯基〕甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶按實施例10的同樣方法合成該化合物，熔點195-197℃(分解)分析計算C20H17N3O2SC，66.09;H，4.72;N，11.56測定C，65.93;H，4.62;N，11.54。
實施例242-〔〔(6-氯-1，3-苯并二氧雜環戊-5-基)甲基〕硫代〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶用6-氯胡椒基氯按實施例11的同樣方法合成該化合物，熔點212-214℃。
分析計算C14H10ClN3O2SC，52.59;H，3.15;N，13.14測定C，52.52;H，3.10;N，12.77。
實施例252-〔〔(2-氯-1，3-苯并二氧雜環戊-5-基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶按實施例10的同樣方法合成該化合物，熔點210-213℃(分解)。
分析計算C14H10ClN3O3SC，50.08;H，3.00;N，12.51測定C，49.79;H，2.94;N，12.40。
實施例262-〔〔(4-甲氧基苯基)甲基〕硫代〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶用4-甲氧基芐基氯按實施例11的同樣方法合成該化合物，熔點160-161℃。
分析計算C14H13N3OSC，61.97;H，4.83;N，15.49測定C，62.00;H，4.51;N，15.22。
實施例272-〔〔(4-甲氧基苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶1/3水合物按實施例10的同樣方法合成該化合物。
分析計算C14H13N3O2S·1/3H2OC，57.32;H，4.69;N，14.32測定C，57.31;H，4.47;N，14.12。
實施例282-〔〔(3，4，5-三甲氧基苯基)甲基〕硫代〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶鹽酸鹽按實施例11的同樣方法合成該化合物，產物的形式是鹽酸鹽。
分析計算C16H18ClN3O3SC，52.24;H，4.93;N，11.42測定C，52.28;H，4.92;N，11.29。
實施例292-〔〔(3，4，5-三甲氧基苯基)甲基〕亞硫酰基-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶1/3水合物將5.56克(0.009摩爾)單過氧鄰苯二甲酸鎂六水合物在30毫升水中的溶液加入4.95克(0.015摩爾)2-〔〔(3，4，5-三甲基苯基)甲基〕硫代〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶(游離堿)在50毫升乙醇中的混合物中。將攪拌的混合物加熱到50℃保持3小時，然后在室溫過夜。將10毫升水中的另外1.86克(0.003摩爾)氧化劑加到反應混合物中。反應混合物在50℃加熱1小時。再加入30毫升水，用氯仿(3×40毫升)提取反應混合物。合并的有機相用MgSO干燥，過濾并蒸發。用HPLC純化殘留物5.4克，最后用EtOAc/MeOH重結晶，得1.7克產物，熔點118-121℃。
分析計算C16H17N3O4S·1/3H2OC，54.38;H，5.04;N，11.89測定C，54.09;H，5.03;N，12.02。
實施例302-〔〔(3，4-二氟苯基)甲基〕硫代〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶用α-溴-3，4-二氟甲苯按實施例11的同樣方法合成該化合物，熔點147-149℃。
分析計算C13H9F2N3SC，56.31;H，3.27;N，15.15測定C，56.00;H，3.20;N，14.96。
實施例312-〔〔(3，4-二氟苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶1/10水合物按實施例10的同樣方法合成該化合物，熔點170-173℃(分解)。
分析計算C13H9F2N3OS·1/10H2OC，52.91;H，3.14;N，14.24測定C，52.75;H，3.02;N，14.18實施例322-〔〔(五氟苯基)甲基〕硫代〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶用α-溴-2，3，4，5，6-五氟甲苯按實施例11的同樣方法合成該化合物，熔點156-159℃。
分析計算C13H6F5N3SC，47.14;H，1.83;N，12.68測定C，46.78;H，1.52;N，12.45。
實施例332-〔〔(五氟苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶半水合物按實施例10的同樣方法合成該化合物，熔點114-117℃。
分析計算C13H6F5N3OS·1/2H2OC，43.82;H，1.98;N，11.79測定C，43.65;H，1.79;N，11.78。
實施例342-〔〔(3-甲基苯基)甲基〕硫代〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶用α-氯-間二甲苯按實施例11的同樣方法合成該化合物，熔點166-168℃。
分析計算C14H13N3SC，65.85;H，5.13;N，16.46測定C，65.64;H，4.75;N，16.37。
實施例352-〔〔(3-甲基苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶1/4水合物按實施例10的同樣方法合成該化合物，熔點175-177℃(分解)。
分析計算C14H13N3OS·1/4H2OC，60.96;H，4.93;N，15.23測定C，60.93;H，4.83;N，15.11。
實施例362-〔〔(4-叔丁基苯基)甲基〕硫代〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶用4-叔丁基芐基氯按實施例11的同樣方法合成該化合物，熔點207-208℃。
分析計算C17H19N3SC，68.65;H，6.44;N，14.13測定C，68.43;H，6.34;N，14.11。
實施例372-〔〔(4-叔丁基苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶按實施例10的同樣方法合成該化合物，熔點215-217℃(分解)。
分析計算C17H19N3OSC，65.15;H，6.11;N，13.40測定C，64.67;H，6.20;N，13.07。
實施例382-〔(1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶-2-基硫代)甲基〕芐腈用α-溴-鄰甲苯基氰按實施例11的同樣方法合成該化合物，熔點200-202℃。
分析計算C14H10N4SC，63.14;H，3.78;N，21.04測定C，62.87;H，3.63;N，20.83。
實施例392-〔〔(1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶-2-基)亞硫酰基〕甲基〕芐腈按實施例10的同樣方法合成該化合物，熔點179-182℃。
分析計算C14H10N4OSC，59.56;H，3.57;N，19.84測定C，59.20;H，3.38;N，19.44。
實施例402-〔〔(2-氟苯基)甲基〕硫代〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶按實施例11的同樣方法，用2-氟芐基氯合成該化合物，熔點186-188℃。
分析計算C13H10FN3SC，60.21;H，3.89;N，16.20測定C，60.19;H，3.76;N，16.48。
實施例412-〔〔(2-氟苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶1/4水合物按實施例10的同樣方法合成該化合物，熔點145-148℃(分解)。
分析計算C13H10FN3OS·1/4H2OC，55.80;H，3.78;N，15.02測定C，55.77;H，3.55;N，14.94。
實施例422-〔〔(2-甲氧基苯基)甲基〕硫代〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶按實施例11的同樣方法，用2-甲氧基芐基氯合成該化合物，熔點193-195℃。
分析計算C14H13N3OSC，61.97;H，4.83;N，15.49測定C，61.67;H，5.00;N，15.29。
實施例432-〔〔(2-甲氧基苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶按實施例10的同樣方法，合成該化合物，熔點209-211℃(分解)分析計算C14H13N3O2SC，58.52;H，4.56;N，14.62測定C，58.20;H，4.57;N，14.41。
實施例442-〔〔(3，5-二甲氧基苯基)甲基〕硫代〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶按實施例11的同樣方法，用3，5-二甲氧基芐基氯合成該化合物，熔點177-179℃。
分析計算C24H25N3O4SC，63.85;H，5.58;N，9.31測定C，63.60;H，5.32;N，9.15。
實施例452-〔〔(3，5-二甲氧基苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶按實施例10的同樣方法合成該化合物，熔點207-210℃(分解)分析計算C15H15N3O3SC，56.77;H，4.76;N，13.24測定C，56.53;H，4.82;N，12.89。
實施例462-〔〔(3-苯氧基苯基)甲基〕硫代〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶按實施例11的同樣方法，用3-苯氧基芐基氯合成該化合物，熔點156-158℃。
分析計算C19H15N3OSC，68.45;H，4.53;N，12.60測定C，68.35;H，4.44;N，12.45。
實施例472-〔〔(3-苯氧基苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶按實施例10的同樣方法，合成該化合物，熔點210-212℃(分解)分析計算C19H15N3O2S·1/4H2OC，64.48;H，4.42;N，11.87測定C，64.41;H，4.18;N，11.77。
實施例482-〔〔(3-硝基苯基)甲基〕硫代〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶按實施例11的同樣方法，用3-硝基芐基氯合成該化合物，熔點208-210℃。
分析計算C13H10N4O2SC，54.53;H，3.52;N，19.57測定C，54.15;H，3.70;N，19.31。
實施例492-〔〔(3-硝基苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶0.15二甲基甲酰胺按實施例10的同樣方法，合成該化合物，熔點214-217℃(分解)分析計算C13H10N4O3S·0.15DMFC，51.56;H，3.56;N，18.56測定C，51.48;H，3.50;N，18.50實施例502-〔〔(4-甲氧基-3-甲基苯基)甲基〕硫代〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶按實施例11的同樣方法，用4-甲氧基-3-甲基芐基氯合成該化合物，熔點158-159℃。
分析計算C15H15N3OSC，63.13;H，5.30;N，14.73
測定C，62.95;H.5.36;N，14.67。
實施例512-〔〔(4-甲氧基-3-甲基苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶按實施例10的同樣方法合成該化合物，熔點189-192℃(分解)。
分析計算C15H15N3O2SC，59.78;H，5.02;N，13.94測定C，59.44;H，4.70;N，13.76。
實施例522-〔〔(3-乙氧基苯基)甲基〕硫代〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶按實施例11的同樣方法，用3-乙氧基芐基氯合成該化合物，熔點158-161℃。
分析計算C15H15N3OSC，63.13;H，5.30;N，14.72測定C，62.98;H，5.24;N，14.47。
實施例532-〔〔(3-乙氧基苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶1/3水合物按實施例10的同樣方法合成該化合物，熔點166-167℃(分解)。
分析計算C15H15N3O2S·1/3H2OC，58.61;H，5.14;N，13.67測定C，58.61;H，4.89;N，13.70。
實施例543-〔〔(1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶-2-基)硫代〕甲基〕苯酚二氫溴酸鹽往盛有20毫升三氟化硼的圓底燒瓶中分批并在攪拌下加入2.49克2-〔〔3-甲氧基苯基)甲基〕硫代〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶(實施例2)。用氯化鈣管保護反應燒瓶，使之免受濕氣侵入。持續攪拌72小時。將反應混合物滴加到用干冰冷卻的200毫升甲醇中。將甲醇溶液蒸發到一半體積。過濾收集生成的沉淀產物，用丙酮洗滌，得1.07克白色結晶，熔點＞300℃。
分析計算C13H11N3OSC，37.25;H，3.13;N，10.02測定C，36.86;H，3.03;N，10.40。
實施例55N-〔4-〔(1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶-2基硫代)甲基〕苯基〕乙酰胺按實施例11的同樣方法，用4-乙酰胺芐基氯合成該化合物，熔點231-234℃。
分析計算C15H14N4OSC，60.38;H，4.73;N，18.78測定C，60.28;H，4.96;N，18.42。
實施例56N-〔4-〔(1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶-2-基亞硫酰基)甲基〕苯基〕乙酰胺1.25水合物按實施例12的同樣方法合成該化合物，熔點168-171℃(分解)。
分析計算C15H14N4O2S·1.25H2OC，53.71;H，4.52;N，16.70測定C，53.77;H，4.63;N，16.06實施例57〔S-(+)〕-2-〔〔3-甲氧基苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶將6.0克(0.0262摩爾)(+)-(2R，8aS)(樟腦基磺酰基)氧氮丙啶在125毫升二氯甲烷中形成的漿液在室溫下聲波處理，直至得到透明溶液。將7.11克(0.0262摩爾)2-〔〔3-(甲氧基苯基)甲基〕硫代〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶在125毫升乙醇中的溶液加到氧氮丙啶溶液中。將反應溶液于20℃聲波處理5天，同時冷凝管中通自來水。聲波處理過程中反應容器保持在氮氣氛中。反應混合物通過HPLC分析，將相應于所需亞砜的這一點的級分在室溫下蒸發。得到2.2克產物，〔α〕25D＝+84.5°。手性分析HPLC柱表明產品中有81.3%(+)對映體和18.7%(-)對映體，熔點185-188℃(分解)。
分析計算C14H13N3O2SC，58.52;H，4.56;N，14.62測定C，58.14;H，4.41;N，14.51。
實施例58〔R-(-)〕-2-〔〔(3-甲氧基苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶1/4水合物按照實施例57的方法，將5.16克(0.019摩爾)2-〔〔3-(甲氧苯基)甲基〕硫代〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶在220毫升乙醇中的溶液和7.15克(0.019摩爾)(-)-α，α-二氯樟腦基磺酰基氧氮丙啶(F.A.Davis，R.T.Reddy，和M.C.Weismiller，J.Am.Chem.Soc.，111，5964(1989))在110毫升二氯甲烷中的溶液的混合液在20℃聲波處理8天。將反應混合物進行HPLC分離。將表明相應于所需亞砜的點的級分在室溫下蒸發。得到1.52克產物，〔α〕25D＝-99.4°。手性分析HPLC柱表明，產品中有85.4%(-)對映體和14.6%(+)對映體，熔點175-178℃(分解)。
分析計算C14H13N3O2S·1/4H2OC，57.62;H，4.66;N，14.40測定C，57.69;H，4.41;N，14.30。
式(Ⅰ)化合物的有用的抗骨質疏松癥活性可用標準的藥理學試驗證明，例如，指定的試驗骨吸收測定大鼠肢骨中Ca釋放。
這一測定的目的是為了鑒定抑制培養中的基礎的或激發的骨吸收的化合物。
基本上按照L.G.Raisz在Bone resorption in tissue culture中介紹的方法來評價2-取代的咪唑并〔4，5-C〕吡啶改善骨吸收過程的能力。影響對甲狀旁腺素的響應的因素。(J.Clin.Invest.44∶103-116，1965)和P.H.Stern等人，大鼠胎兒肢骨和新生小鼠顱骨的對比甲狀旁腺素和1，25-二羥基維生素D的影響(Calcif.Tissue Int.35∶172-176，1983)。
步驟肢骨制備·對計算了妊娠時間的Sprague-Dawley CD 大鼠(Charles River)在妊娠18天時皮下給藥(在100微升0.9%鹽水中的100微居里45CaCl2(NEN鈣-45 NEZ-013)。第二天通過CO2窒息法將大鼠殺死。取出胎兒，將右前肢切下置于含有冰冷卻的移出物介質培養皿中，介質中含有改性的BGJb-Fitton Jackson介質(常規制劑，Gibco No.78-0088)，其pH值調至7.3，其中含有10mM的TES。得到的該改性的BGJb介質沒有加鹽、葡萄糖或碳酸氫鹽，用之前補充以0.1mM MgCl2、1.25mM CaCl2、5.3mM KCl、0.7mM MgSO4、130mM NaCl、1.0mM NaH2PO4、1克/升葡萄糖、50毫克/升乙酸鈉和100U/毫升盤尼西林G。將介質通過0.2μM過濾器(Nalge)進行消毒。在解剖顯微鏡下，輕輕地去除骨上的附著組織并除去軟骨末端。
培育和藥物處理。將中段分別地置于3×3毫米方塊濾紙上(Gelman GN-6 metricel濾紙，孔大小為0.45μM)，濾紙置于不銹鋼網上，該網放在24孔培養盤的孔中，孔中含有0.5毫升預培育介質。在轉移骨以前，先將預培育介質升溫至37℃。預培育介質由BGJb介質組成(含有上述鹽類及葡萄糖)，pH7.3，含29mM NaHCO3。在37℃和0.5%CO2中培育18-24小時后，將置于其網/濾紙載體上的骨轉移到新的盤上，盤上含有用預培育介質稀釋過的試驗化合物，總體積為37℃時0.5毫升/孔，預培育介質中補充15%的熱去活的馬血清(Gibco No.230-6050)，pH7.3，加入或不加骨吸收刺激劑(如甲狀旁腺素〔PTH〕或interleukin-1〔IL-l〕)。對于需要非水溶劑的化合物，從適當的貯存溶液用介質進行稀釋。在這種情況下，包括暴露于相當濃度載體中的基本的和受刺激骨吸收的對照樣品。另外一組骨經煮沸1小時(殺滅對照，kill controll，用以設定本底，無細胞起間介作用，即交換45Ca。使用每個胎兒的右尺骨和橈骨。兩種骨都進行同樣的處理，每個處理組由4只或更多的胎兒的骨組成。處理是用臨床前統計程序(PS-ALLOC)隨機確定的。在37℃和5% CO2中培育48小時后，從介質中移出骨，用0.5毫升0.1N HCl提取1天或數天。將兩份等分的150微升培養液和骨提取液在5毫升閃爍液中分析45Ca放射性。
計算釋放到介質中的骨45Ca的百分數測定如下介質中45Ca每分鐘計數×100介質中45Ca每分鐘計數+骨中45Ca每分鐘計數通常將結果表示為實驗組釋放45Ca百分數與適當的載體對照組釋放45Ca百分數之比。
這一測定結果示于表1中“PTH誘導的”一欄里。
式(Ⅰ)化合物有用的抗骨質疏松活性進一步用指定的試驗說明基本骨吸收測定大鼠肢骨中45Ca釋放。
這一測定的目的是為了體外試驗骨吸收刺激劑和抑制劑。將自離體的帶標記物的鼠骨移出物釋放到培養介質中的45Ca作為骨吸收指數。
骨標記步驟。通過注入受孕鼠(dams)(18天)(含有100微居里45Ca)將胎鼠(pups)體外標記。
移出物制備。進行標記兩天以后，用鹵代烷(halothane)將受孕鼠麻醉，斷頭殺死。切除胎鼠并迅速斷頭。取出顱蓋骨(前骨和頂骨)、前肢(含橈骨和尺骨)和后肢(脛骨)，并置于培養皿中的對照介質中。通過鈍解剖和在高度吸收性紙上滾動相結合，清除骨上的軟組織，小心不要弄壞骨膜。從長骨上切去軟骨端。沿骨縫將顱骨切成兩半。將骨分成3類半顱蓋，脛骨和尺骨/橈骨。8個一組，將各組骨隨機地置于24孔培養盤中，孔中有0.5毫升對照介質。培養物保持在95%空氣5%CO2的濕潤的37℃的培養器中。
將這些骨培養24小時，將介質抽吸出來，換上含有試驗物質的新介質。每一組骨中有一個對照組(8個一組)和一個死骨組(8個一組)。失去生命力的培養物是通過在55℃介質中將骨加熱60分鐘得到的。將骨在37℃再培養72小時。這段時間結束時，取出等分的100微升介質，置于閃爍瓶中。加入10毫升Aquasol，在閃爍計中將45Ca定量。將骨用鹽水輕洗，置于閃爍瓶中，室溫下在0.75毫升6NHCl中水解過夜。水解后的骨溶液中加入2.25毫升2N NaOH進行中和，再加入10毫升Aquasol，用閃爍計測定45Ca含量。
分析通過Dunnett試驗，在24-96小時期間內釋放到培養介質中的45Ca分別地與對照培養物和失去生命力的骨中的45Ca釋放進行比較。所得結果示于表1中的“基本的”欄下。
式(Ⅰ)化合物的有用的抗骨質疏松活性進一步用指定的試驗說明大鼠中除神經支配誘導的Osteopenia。
這一測定的目的是為了用大鼠評價試劑對于由外科手術切斷坐骨神經(除神經支配)產生的不動狀態引起的骨質減少(Osteopenia)癥狀的作用效果。
取用雌性Sprague Dawley CD 大鼠，切除卵巢的或完整的，重225-250克，取自Charles River。
將該動物關在塑料籠子里(每個籠子4或5只大鼠)，備有飼料(rat purina 500 chow)和水ad libitum;14/10日夜循環。在室內適應氣候一周以后，該動物隨機地分組，每組6-10只。將每只大鼠稱重，腹膜內給藥(100毫克/千克氯胺酮(Bristol Laboratories Syracues，NY)和0.75毫克/千克乙酰丙嗪(Aveco，Ft.Dodge IA)將其麻醉。將其左后肢剃毛，沿平行于股方向橫切，手術除去鄰近向尾股間肌(caudofemoralis)和內收肌短肌的一厘米坐骨神經的一半。用傷口小夾閉合切口。外科手術后，將大鼠關在有吸收劑的籠子里，減小對固定肢的附加創傷。給予24小時的術后恢復期，然后開始藥物處理。
按每100克體重0.1毫升體積計算所用藥物濃度。藥溶液或均勻懸浮液是用含1%吐溫80的普通鹽水制備的。經口服或胃腸外每日(每周五次)給藥，用藥四周。
隨后用礦化組織三重標記來測定骨變化(尤其是骨生成)和礦化速率。分別在結束研究之前的大約21天、10天和2天，每只動物給予90毫克/千克的二甲酚橙(Fisher科學公司)，S.C.，15毫克/千克的鈣黃綠素(Sigma化學公司)，S.C.和15毫克/千克脫甲金霉素(Sigma化學公司)，i.p.。
在第4周末，將每只大鼠稱重，通過腹膜內給藥100毫克/千克氯胺酮和0.75毫克/千克乙酰丙嗪，通過心臟穿刺術收集大約4毫升血液。通過將麻醉的大鼠暴露于二氧化碳中使其無痛苦死亡。將從兩肢取得的股骨和脛骨進行解剖，除去軟組織。
(ⅰ)將股骨用馬弗爐于約1100℃灰化16小時。(ⅱ)將鄰近的脛骨固定，脫水并未脫鈣的植入甲基丙烯酸甲酯和甲基丙烯酸乙二醇酯混合物中。用Poly cut S切片機(Reichert)制備縱向組織切片。用改性Goldner染料對浮游(free-floating)切片染色，然后將其固定并蓋上玻片。
鄰近脛骨中的網狀骨質的骨含量用象分析處理裝置進行測定(Drexel大學發明的軟件，測定結果表示為兩度骨礦質面〔B.Ar〕)。
選來進行網狀骨含量測定的脛骨的面積為初級和二次松質。在測定時為了選擇面積并將其標準化，骼的生長板-干骺端連接方向平行于數字屏幕的橫坐標。自生長板的骨單元1.7毫米(二級松質)和0.2毫米(一級松質)和從脅腹皮單元的等距離按上述方法定量。評價的總面積是2.30毫米寬、1.45毫米深，構成3.34平方毫米面積。
體重，股骨質(干的或灰化的)和小梁(網狀)骨礦化面積(B.Ar)進行了測定。
將處理組的完整的(對照)和除神經肢的股骨質和骨礦化面積的區別與載體組的相應數據進行了比較，采用的是Dunnett試驗的一維方差分析，或采用其它多重比較方法。
其結果示于表Ⅰ和Ⅱ中“體內”欄下。
表Ⅰ咪唑并〔4，5-C〕吡啶亞砜和砜類似物
骨吸收抑制實施例 nR mPTH誘導的基本的 體內31 3-甲氧基 1 活性 活性10μg/mL 活性IC50=49μM41 3-甲氧基 2 活性10μg/mL 臨界的10μg/mL 非活性61 3，4-二氯 1 活性10μg/mL 活性10μg/mL NT81 3-三氟甲基 1 活性10μg/mL 非活性 NT10 1 2-氯-6- 氟 1 活性10μg/mL 活性10μg/mL 非活性121 氫1 活性10μg/mL 活性10μg/mL 非活性142 氫1 活性10μg/mL 活性10μg/mL NT172 3-甲氧基 1 活性10μg/mL 非活性10μg/mL 不明確19 1 2，4，6-三甲基 1 活性10μg/mL 活性10μg/mL 非活性211 2-氟-4- 溴 1 活性10μg/mL 活性10μg/mL 非活性231 3-芐氧基1 活性10μg/mL 活性10μg/mL 非活性251 2-氯-4，5- 1 活性10μg/mL 活性10μg/mL 非活性亞甲二氧基271 4-甲氧基1 活性10μg/mL NT非活性291 3，4，5-三甲氧基 1 非活性NT 非活性311 3，4-二氟 1 活性10μg/mL 活性10μg/mL 非活性表Ⅰ(續)咪唑并〔4，5-C〕吡啶亞砜和砜類似物
骨吸收抑制實施例 n R m PTH誘導的 基本的 體內33 1 五氟 1 NT NT NT35 1 3-甲基 1 NT NT NT37 1 4-叔丁基 1 NT NT NT39 1 2-氰基 1 活性10μg/mL NT 非活性41 1 2-氟 1 活性10μg/mL NT 非活性43 1 2-甲氧基 1 活性10μg/mL NT NT45 1 3，5-二甲氧基 1 活性10μg/mL NT 非活性47 1 3-苯氧基 1 活性10μg/mL NT 非活性49 1 3-硝基 1 NT NT 非活性51 1 4-甲氧基-3- 1 NT NT 非活性甲基53 1 3-乙氧基 1 活性10μg/mL NT NT56 1 3-氨乙酰基 1 NT NT NT57 1 S-(+)-3-甲氧基 1 活性 NT NT58 1 R-(-)-3-甲氧基 1 活性 NT NT
表Ⅱ咪唑并〔4，5-C〕吡啶硫代類似物
骨吸收抑制實施例 n R PTH誘導的 基本的 體內10μg/mL 10μg/mL 25mg/kg2 1 3-甲氧基 非活性 非活性 活性(i.p.)5 1 3，4-二氯 NT 非活性 NT7 1 3-三氟甲基 NT 活性 NT9 1 2-氯-6-氟 非活性 非活性 NT11 1 氫 NT 非活性 NT13 2 氫 非活性 非活性 NT16 2 3-甲氧基 非活性 NT 非活性(p.o.)18 1 2，4，6-三甲基 NT NT NT20 1 2-氟-4-溴 活性 非活性 NT22 1 3-芐氧基 活性 非活性 NT24 1 2-氯-4，5-亞甲 活性 NT NT二氧基26 1 4-甲氧基 活性 非活性 非活性(p.o.)28 1 3，4，5-三甲氧基 NT NT NT30 1 3，4-二氟 非活性 非活性 非活性(p.o.)32 1 五氟 非活性 非活性 非活性(p.o.)34 1 3-甲基 NT NT NT
表Ⅱ(續)咪唑并〔4，5-C〕吡啶硫代類似物
骨吸收抑制實施例 n R PTH誘導的 基本的 體內10μg/mL 10μg/mL36 1 4-叔丁基 NT NT NT38 1 2-氰基 非活性 NT 非活性40 1 2-氟 活性 NT 非活性42 1 2-甲氧基 活性 NT NT44 1 3，5-二甲氧基 活性 NT 非活性46 1 3-苯氧基 非活性 NT 非活性48 1 3-硝基 NT NT 非活性50 1 4-甲氧基-3-甲基 NT NT 非活性52 1 3-乙氧基 非活性 NT 非活性54 1 3-羥基 非活性 NT 非活性55 1 3-氨乙酰基 NT NT NT在骨吸收過程中骨發生降解，這進而引起骨質疏松。本發明提供了一種治療宿主動物的方法，目的在于改善該宿主動物中骨吸收速率和骨沉著速率的平衡關系，進而使上述骨吸收速率與上述骨沉著速率的比值減小，該方法包括給宿主動物足以改善所述平衡并足以減小所述比值的、一定量的2-取代咪唑并〔4，5-C〕吡啶類。2-取代咪唑并〔4，5-C〕吡啶用于人的日劑量為200毫克至1200毫克。
使用本發明的2-取代咪唑并〔4，5-C〕吡啶可以作為治療骨質疏松或牙周炎的其它用藥方案的補充。例如，使用2-取代的咪唑并〔4，5-C〕吡啶可以作為對每日攝入鈣(磷酸鈣或碳酸鈣)600毫克至1200毫克治療方案的補充。使用2-取代咪唑并〔4，5-C〕吡啶可以作為雌激素置換治療方案(如0.625毫克/天共軛馬雌激素)的補充。
權利要求
1.式(Ⅰ)所示化合物及其藥物上可接受的鹽和水合物的制備方法
式中R1，R2，R3，R4和R5獨立選自氫，含1-6個碳原子的低級烷基，羥基，含1-6個碳原子的低級烷氧基，鹵素，三氟甲基，三氟甲氧基，硝基，氰基，苯氧基，芐氧基，氨乙酰基，-S(O)p-CH3，或任意兩個相鄰的基團連接成亞甲二氧基；m是0-2；n是1-3；p是0-2；該方法包括使式(A)所示化合物與式(B)所示化合物反應，得到下述式(Ⅰ)硫代化合物
其中R1，R2，R3，R4和R5及定義同上，X是氯，溴，碘或甲苯磺酰基，
其中R1，R2，R3，R4，R5和n定義同上，m是0，并且任選地將上述硫代化合物進行氧化，得到其中m是1和2的式(Ⅰ)化合物。
2.權利要求1所述的方法，其中R1，R2，R3，R4和R5獨立選自氫，羥基，甲氧基，氟，溴，氯，甲基，三氟甲基，芐氧基或任意兩個相鄰基團連接形成亞甲二氧基;m是0-2;n是1-2。
3.權利要求2所述的方法，制得的化合物是2-〔〔(3-甲氧苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶及其藥物上可接受的鹽。
4.權利要求2所述的方法，制得的化合物是2-〔〔(3-甲氧苯基)甲基〕硫代〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶及其藥物上可接受的鹽。
5.權利要求2所述的方法，制得的化合物是2-〔〔(3-甲氧苯基)甲基〕磺酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶及其藥物上可接受的鹽。
6.權利要求2所述的方法，制得的化合物是2-〔〔(3，4-二氯苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶及其藥物上可接受的鹽。
7.權利要求2所述的方法，制得的化合物是2-〔〔〔3-(三氟甲基)苯基〕甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶及其藥物上可接受的鹽。
8.權利要求2所述的方法，制得的化合物是2-〔〔(2-氯-6-氟苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶及其藥物上可接受的鹽。
9.權利要求2所述的方法，制得的化合物是2-〔〔(苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶及其藥物上可接受的鹽。
10.權利要求2所述的方法，制得的化合物是2-〔(2-苯基乙基)亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶及其藥物上可接受的鹽。
11.權利要求2所述的方法，制得的化合物是2-〔〔(3-甲氧基苯基)乙基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶及其藥物上可接受的鹽。
12.權利要求2所述的方法，制得的化合物是2-〔〔(2，4，6-三甲基苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶及其藥物上可接受的鹽。
13.權利要求2所述的方法，制得的化合物是2-〔〔(4-溴-2-氟苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶及其藥物上可接受的鹽。
14.權利要求2所述的方法，制得的化合物是2-〔〔〔3-(苯基甲氧基)苯基〕甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶及其藥物上可接受的鹽。
15.權利要求2所述的方法，制得的化合物是2-〔〔(6-氯-1，3-苯并二氧戊環-5-基〕甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶及其藥物上可接受的鹽。
16.權利要求2所述的方法，制得的化合物是2-〔〔(4-甲氧基苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶及其藥物上可接受的鹽。
17.權利要求2所述的方法，制得的化合物是2-〔〔(3，4，5-三甲氧基苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶及其藥物上可接受的鹽。
18.權利要求2所述的方法，制得的化合物是2-〔〔(3，4-二氟苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶及其藥物上可接受的鹽。
19.權利要求2所述的方法，制得的化合物是2-〔〔(五氟苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶及其藥物上可接受的鹽。
20.權利要求2所述的方法，制得的化合物是2-〔〔(3-甲基苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶及其藥物上可接受的鹽。
21.權利要求2所述的方法，制得的化合物是2-〔〔(4-叔丁基苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶及其藥物上可接受的鹽。
22.權利要求2所述的方法，制得的化合物是2-〔〔(1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶-2-基〕亞硫酰基〕甲基〕芐腈及其藥物上可接受的鹽。
23.權利要求2所述的方法，制得的化合物是2-〔〔(2-氟苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶及其藥物上可接受的鹽。
24.權利要求2所述的方法，制得的化合物是2-〔〔(2-甲氧基苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶及其藥物上可接受的鹽。
25.權利要求2所述的方法，制得的化合物是2-〔〔(3，5-二甲氧基苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶及其藥物上可接受的鹽。
26.權利要求2所述的方法，制得的化合物是2-〔〔(3-苯氧基苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶及其藥物上可接受的鹽。
27.權利要求2所述的方法，制得的化合物是2-〔〔(3-硝基苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶及其藥物上可接受的鹽。
28.權利要求2所述的方法，制得的化合物是2-〔〔(4-甲氧基-3-甲基苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶及其藥物上可接受的鹽。
29.權利要求2所述的方法，制得的化合物是2-〔〔(3-乙氧基苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶及其藥物上可接受的鹽。
30.權利要求2所述的方法，制得的化合物是N-〔4-〔(1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶-2-基亞硫酰基)甲基〕苯基〕乙酰胺及其藥物上可接受的鹽。
31.權利要求2所述的方法，制得的化合物是〔S-(+)〕-2-〔〔3-甲氧基苯基)甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶及其藥物上可接受的鹽。
32.權利要求2所述的方法，制得的化合物是〔R-(-)〕-2-〔〔(3-甲氧基苯基甲基〕亞硫酰基〕-1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶及其藥物上可接受的鹽。
33.權利要求2所述的方法，制得的化合物是3-〔〔(1H-咪唑并〔4，5-C〕吡啶-2-基〕亞硫酰基〕甲基〕苯酚及其藥物上可接受的鹽。
34.一種制備藥物組合物的方法，該組合物用于改變宿主動物中骨吸收速率和骨生成速率之間的平衡，借以減小該骨吸收速率與該骨生成速率的比值，該方法包括將式(Ⅰ)所示化合物與藥物上可接受的載體相混合。
全文摘要
本發明涉及2-取代-咪唑并(4，5-C)吡啶類，它們的制備方法，含有所述2-取代-咪唑并(4，5-C)吡啶類的藥物組合物和該2-取代-咪唑并(4，5-C)吡啶類在改變宿主動物，包括人類，骨生成與骨吸收之間平衡方面的應用。
文檔編號A61P3/02GK1058594SQ9011006
公開日1992年2月12日 申請日期1990年12月21日 優先權日1989年12月21日
發明者阿瑟·A·圣蒂利, 安東尼·C·斯科蒂斯, 唐納德·P·斯特賴克 申請人:美國家用產品公司