一種刺莧提取物的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種刺莧提取物的新用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 刺莧（Amaranthus spinosus. L)，別名莧菜、勒莧菜等，是莧科的一種植物。在我 國(guó)大部分省份和日本、印度、中南半島、馬來西亞、菲律賓、美洲等地皆有分布。喜生長(zhǎng)在干 燥荒地，生境在草叢、河邊荒地、荒地、開闊地、山坡等。民間用刺莧的幼葉作野菜食用，也用 于解毒消腫、利尿止痛、清肝明目、散風(fēng)止癢、殺蟲療傷。已有研究發(fā)現(xiàn)，該植物含有游離烷 烴類、留醇類、黃酮類、三萜皂苷類等等化合物。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明該植物具有鎮(zhèn)痛抗炎、 利尿、退熱、免疫、保肝、降血糖、抗瘧疾、抗菌、抗氧化等方面的藥理作用。
[0003] 但是，迄今為止，從未報(bào)道過刺莧的抗癌作用相關(guān)研究。癌癥是當(dāng)今社會(huì)發(fā)病率 高，死亡率高的一種頑疾，目前尚未有能夠治愈率較高的藥物報(bào)道。本發(fā)明人在尋找中草藥 抗癌活性成分的過程中，發(fā)現(xiàn)刺莧的石油醚提取物具有良好的抗腫瘤活性。這為后期這種 植物提取物的抗癌或輔助治療作用研究奠定了一定的基礎(chǔ)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種刺莧提取物的用途，即其在制備抗癌藥物中的應(yīng)用，該 刺莧提取物制備工藝簡(jiǎn)單，為刺莧在抗癌藥物研究中的應(yīng)用奠定了 一定的基礎(chǔ)。
[0005] 本發(fā)明中刺莧提取物按如下方法制得： (1) 按質(zhì)量比1:2~1:5的比例將刺莧浸入乙醇溶液中超聲提取0. 5~lh，過濾，濾渣中再 添加乙醇溶液超聲提取，重復(fù)提取2~4次后，合并濾液得到提取液； (2) 提取液減壓蒸餾濃縮至無醇味； (3) 按照質(zhì)量比1:1~1:2的比例在濃縮后的提取物中添加蒸餾水，混和均勻，按混合溶 液與石油醚的體積比1:1~1:2的比例，在混合溶液中加入石油醚進(jìn)行萃取，收集石油醚萃 取相，反復(fù)萃取3~4次，合并石油醚萃取相；減壓蒸餾濃縮石油醚萃取相，干燥后得到刺莧 提取物。
[0006] 所述刺莧為新鮮采集或者經(jīng)過干燥的根莖、枝葉、果實(shí)中的一種或多種的混合物。
[0007] 所述乙醇溶液為無水乙醇溶液或質(zhì)量百分比濃度為80-95%的乙醇溶液。
[0008] 所述步驟（2)中減壓蒸餾在43°C ~48°C、真空度0· 04~0· 06Mpa條件下進(jìn)行。
[0009] 所述步驟（3)中減壓蒸餾在40°C ~43°C、真空度0· 04~0· 06Mpa條件下進(jìn)行。
[0010] 所述步驟（3)中干燥為先在40°C ~50°C下常壓干燥8~12h后，再在40°C ~50°C下 真空干燥8~12h。
[0011] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和技術(shù)效果：本發(fā)明刺莧提取物的制備工藝簡(jiǎn)單實(shí)用，制得的提取 物抗癌活性好；實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：刺莧石油醚提取物對(duì)MCF-7和A549細(xì)胞具有一定的抑制作 用，且對(duì)A549細(xì)胞抑制的作用更明顯，為后期這種植物提取物的抗癌或輔助治療作用研究 奠定了 一定的基礎(chǔ)。
【附圖說明】
[0012] 圖1為刺莧提取物抑制MCF-7細(xì)胞生長(zhǎng)時(shí)間效應(yīng)曲線； 圖2為刺莧提取物抑制A549細(xì)胞生長(zhǎng)時(shí)間效應(yīng)曲線； 圖3為刺莧提取物抑制MCF-7細(xì)胞IC50曲線； 圖4為刺莧提取物抑制A549細(xì)胞IC50曲線。
【具體實(shí)施方式】
[0013] 下面通過附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不局 限于所述內(nèi)容。
[0014] 實(shí)施例1 :刺莧提取物的應(yīng)用 1、刺莧提取物的制備 (1) 將100g新鮮刺莧根莖浸入200g質(zhì)量百分比濃度95%的乙醇溶液中超聲提取，過 濾，濾渣中再添加200g乙醇溶液超聲提取30min，重復(fù)提取3次后，合并濾液得到提取液； (2) 提取液在45°C、真空度0. 05Mpa條件下減壓蒸餾濃縮至無醇味； (3) 按照質(zhì)量比1:1的比例在濃縮后的提取物中添加蒸餾水，混和均勻，按混合溶液與 石油醚的體積比1:2的比例，在混合溶液中加入石油醚進(jìn)行萃取，收集石油醚萃取相，反復(fù) 萃取3次，合并石油醚萃取相；在40°C、真空度0. 06Mpa條件下減壓蒸餾濃縮石油醚萃取 相，濃縮物先在40°C下常壓干燥12h后，再在50°C下真空干燥8h，得到刺莧提取物。
[0015] 2、刺莧提取物的體外抗癌實(shí)驗(yàn) 2.1細(xì)胞株，試劑以及儀器 人非小細(xì)胞肺癌A549,人乳腺癌MCF-7。DMEM培養(yǎng)液（GIBC0)，胎牛血清（GIBC0)，胰蛋 白酶（GIBCO)，DMSO (分析純，Amresco)，青霉素（Sigma)，鏈霉素（Sigma)，MTT (Amresco)， 96孔板，細(xì)胞培養(yǎng)箱（Thermo)，酶標(biāo)儀（Tecan)，生物操作臺(tái)(吳江市綠島凈化設(shè)備廠)。
[0016] 2. 2腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)方法 基礎(chǔ)培養(yǎng)基1640+10%FBS (胎牛血清）+1%雙抗青鏈霉素，培養(yǎng)條件為37°C，5%C02濃度 及飽和濕度；當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期時(shí)，用胰蛋白酶消化細(xì)胞，洗滌吹散細(xì)胞，以每孔3X103個(gè)細(xì)胞100 μ 1接種于96孔板，以備MTT實(shí)驗(yàn)。
[0017] 2. 3細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)（ΜΤΤ法） 將刺莧提取物溶于DMSO溶液，分別配置濃度為100mg/ml、50mg/ml、25mg/ml、12. 5mg/ ml、6. 25mg/ml、3. 125mg/ml、I. 5625mg/ml、0. 78125mg/ml 的溶液，共 8 個(gè)濃度每個(gè)濃度 2 倍 稀釋；每孔加入1 μ 1各濃度刺莧提取物，并補(bǔ)加100 μ 1培養(yǎng)基，混勻，使得刺莧提取物的每 孔終濃度為 500 μ g/ml、250 μ g/ml、125 μ g/ml、62. 5 μ g/ml、31. 25 μ g/ml、15. 625 μ g/ml、 7.8125以8/!111、3.90625 以8/1111;放入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)2411、4811、7211，每孔加入2(^1]\〇'1'溶 液，繼續(xù)培養(yǎng)4h，培養(yǎng)4h后抽出每孔溶液后每孔加入100 μ I DMSO溶液，酶標(biāo)儀下測(cè)定每 孔的吸光度。以加入DMSO溶液1 μ 1培養(yǎng)的細(xì)胞為對(duì)照組，每個(gè)濃度梯度設(shè)5個(gè)平行組， 分別計(jì)算細(xì)胞抑制率。按照以下公式計(jì)算抑制率：存活率=(實(shí)驗(yàn)組吸光度/對(duì)照組吸光 度）X 100% ;實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1、2,從表中可以看出：刺莧石油醚提取物確實(shí)能抑制MCF-7和 Α