專利名稱：一種虎眼萬年青皂甙osw－1的制備方法
技術領域：
本發明涉及醫藥領域，具體的說，涉及一種虎眼萬年青皂甙OSW-1的制備方法。
背景技術：
1992年，日本東京藥學和生命科學大學化學家Yutaka Sashida教授從一種原產于南非斯威士蘭(Swaziland)，德蘭士瓦(Transval)，納塔爾(Natal)等省的常綠觀賞植物虎眼萬年青(OrnithogalumSaundersiae)的地下球莖中分離提取出一系列具有膽固醇骨架的皂甙，其主成分是虎眼萬年青皂甙OSW-1(Kubo，S.Y.；Terao，M.M.；Sashida，Y.Phytochemistry 1992，31，3969)。
生物活性測試顯示OSW-1具有極強的廣普抗腫瘤活性(Mimaki，Y.；Kuroda，M，；Kameyama，A.；Sashida，Y.Biorg.Med.Chem.Lett.1997，7，633)，例如抗白血病HL-60，鼠淋巴瘤細胞，人肺癌細胞，人肺巨瘤細胞，人肺鱗瘤細胞，人淋巴瘤細胞，鼠乳腺癌細胞，抗阿霉素P388，抗喜樹堿P388等。其IC50值在0.1-0.7nM之間，比臨床使用的甲胺喋呤(methotreate)、依托泊甙(etoposide)、阿霉素(adriamycin)、順鉑(cisplatin)、喜樹堿(camptothecin)以及紫杉醇(taxol)等強10～100倍。而它對人正常肺細胞毒性與臨床用藥相當(IC50＝1500nM)，而且使用10mg/Kg的量即可延長感染P388白血病的老鼠的壽命達到59％。通常皂甙在很低的濃度下就有顯著的溶血作用(如10μg/mL，這種溶血作用大大阻礙了皂甙作為藥物的可能性)，而OSW-1即使在濃度高達100μg/mL時對人紅細胞仍沒有溶血作用。另外，離體器官實驗表明，大大高于抗腫瘤劑量的OSW-1對內皮細胞也幾乎沒有損害作用，這也進一步表明了虎眼萬年青皂甙在抗癌劑量下對生理機能的副作用極小。
Sashida等隨后從Ornithogalum Saundersiae及相關植物中分離出了一系列與OSW-1結構相關的皂甙，一些皂甙顯示了相當的抗腫瘤活性和免疫抑制活性，并申請了一系列專利。
1998年，鄧紹江、俞飚和惠永正等率先完成了OSW-1的全合成(Deng，S.；Yu，B.；Lou，Y.；Hui，Y.J.Org.Chem.1998，202)。隨后其他研究小組對于OSW-1全合成又有多次報道。
(a)Morzycki，J.W.；Gryzkiewicz A.Carbohyd.Res.2002，1269-1274。
(b)Yu，W.；Jin，Z.J.Am.Chem.Soc.2001，123，3369-3370。
(c)Yu，W.；Jin，Z.J.Am.Chem.Soc.2002，124，6576-6583。

發明內容
本發明的目的是提供一種虎眼萬年青皂甙OSW-1的制備方法。
為了實現本發明的目的，本發明提供了一種虎眼萬年青皂甙OSW-1的制備方法，包括以下步驟(1)去氫表雄酮溶于C2～C4的氯代烷烴中，加入三乙胺或吡啶中一種或二者的混合物，然后滴加C3～C6的烷基取代酰氯，用量是1mol去氫表雄酮用1～10升有機溶劑，1～4mol三乙胺或吡啶中一種或二者的混合物，1～3mol C3～C6的烷基取代酰氯，在-10～25℃溫度下攪拌1～10hrs，加入冰水萃取，然后依次用堿溶液和無機鹽溶液洗滌，干燥，過濾，干燥；
(2)Ph3P溶于非極性芳香烴溶劑中，加入單鹵代乙烷，50～80℃溫度下攪拌24～72hrs，過濾，非極性溶劑洗滌，干燥，惰性氣體保護下，加入C2～C4的醇鈉或醇鉀，溶于C2～C4的無水醚類溶劑，15～40℃溫度下攪拌0.5～5hrs，然后加入步驟(1)中得到的產物，60～90℃溫度下攪拌1～10hrs，冷卻，萃取，無機鹽溶液洗滌至中性，過濾，濃縮，柱層析純化；1mol步驟(1)中的產物需要用1～3molPh3P，5～10mol單鹵代乙烷，1～3升非極性芳香烴溶劑，1～3molC2～C4的醇鈉或醇鉀，1～10升無水醚類溶劑；(3)惰性氣體保護下，步驟(2)所得的產物和多聚甲醛中加入C2～C4的氯代烷烴，在冰浴下，加入BF3·Et2O的CH2Cl2溶液，-10～25℃溫度下攪拌1～10hrs，加入淬滅劑，淬滅反應，反應液過濾除去固體，鹽溶液洗滌有機相，真空除去溶劑，殘留物經柱層析純化；1mol步驟(2)中的產物需要用1～10mol多聚甲醛，5～20升C2～C4的氯代烷烴，含0.01～0.1molBF3·Et2O的CH2Cl2溶液；(4)步驟(3)得到的產物，BzO-TEMPO(或PivO-TEMPO或TEMPO)，相轉移催化劑，NaHCO3(0.5M)/K2CO3(0.05M)的水緩沖溶液，N-氯代琥珀酰亞胺，溶于C2～C4的氯代烷烴，0～40℃溫度下攪拌1～24hrs，分離有機相，水層萃取，合并有機相，鹽溶液洗滌，干燥，過濾，濃縮，殘留物經柱層析純化；1mol步驟(3)中的產物需要用0.05～1mol BzO-TEMPO(或PivO-TEMPO或TEMPO)，0.05～1mol相轉移催化劑，1～20升緩沖溶液，1～4molN-氯代琥珀酰亞胺，5～10升C2～C4的氯代烷烴；(5)惰性氣體保護下，步驟(4)所得產物溶于干燥的C2～C4的無水醚類溶劑，冰浴下向其中緩慢加入新制的Grignard試劑，加完后攪拌0.1～2hr，TLC顯示底物完全消失，向反應體系中加入飽和NH4Cl溶液淬滅反應，Et2O萃取，飽和食鹽水洗滌至中性，無水Na2SO4干燥，過濾，濃縮，殘留物經柱層析純化；1mol步驟(4)中的產物需要5～10升無水醚類溶劑，1～3mol新制的Grignard試劑；(6)惰性氣體保護下，步驟(5)所得產物溶于干燥的C2～C4的氯代烷烴，加入烷基胺類化合物，冰浴下向其中緩慢加入SO3·Pyridine的干燥DMSO溶液，加完后于室溫下攪拌0.5～2hrs，然后倒入飽和食鹽水中，Et2O萃取，依次用3％HCl溶液、飽和NaHCO3溶液及飽和食鹽水洗滌至中性，無水Na2SO4干燥，過濾，濃縮，殘留物經柱層析純化；1mol步驟(5)中的產物需要1～10升C2～C4的氯代烷烴，1～10升烷基胺類化合物，1～10molSO3·Pyridine，1～10升DMSO；(7)惰性氣體保護下，步驟(6)所得產物，(CH2OH)2，(EtO)3CH，p-TsOH·H2O溶于干燥的C2～C4的氯代烷烴，室溫下攪拌24～96hrs，然后加入烷基胺類化合物中止反應，C2～C4的氯代烷烴萃取，飽和食鹽水洗滌至中性，無水Na2SO4干燥，過濾，濃縮，殘留物經柱層析純化；1mol步驟(6)中的產物需要1～10mol(CH2OH)2，1～10mol(EtO)3CH，1～10mol p-TsOH·H2O，1～10升C2～C4的氯代烷烴；(8)步驟(7)所得產物及強堿溶于MeOH/THF/H2O(80mL，1∶6∶1)，室溫攪拌12～48hrs，EtOAc萃取，飽和食鹽水洗滌至中性，無水Na2SO4干燥，過濾，濃縮，殘留物經柱層析純化；(9)惰性氣體保護下，步驟(8)所得產物溶于干燥的C2～C4的氯代烷烴和Pyridine，然后加入DMAP，冷卻至0℃，加入TsCl，加完后升至室溫，攪拌反應24～72hrs，C2～C4的氯代烷烴萃取，飽和食鹽水洗滌至中性，無水Na2SO4干燥，過濾，濃縮，溶于干燥的無水醇溶劑，加入KOAc，加熱回流反應1～5hrs，然后濃縮，用乙酸乙酯萃取，飽和食鹽水洗滌，無水Na2SO4干燥，過濾，濃縮，殘留物經柱層析純化；(10)K3Fe(CN)6，K2CO3，DABCO溶于水中，步驟(9)所得產物溶于t-BuOH中，攪拌下加入K2OsO4·2H2O，然后加入K3Fe(CN)6的水溶液，40～80℃加熱反應24～72hrs，然后撤去油浴，降至室溫，加入飽和NaHSO3溶液至有綠色沉淀，EtOAc萃取，飽和食鹽水洗滌，無水Na2SO4干燥，過濾，濃縮，殘留物經柱層析。其中，1mol步驟(9)所得產物加入1000～10000mlEtOAc；(11)惰性氣體保護下，步驟(10)所得產物，(n-Pr4N)RuO4，NMO及4MS溶于干燥的C2～C4的氯代烷烴及MeCN中，室溫攪拌反應24～72hrs，TLC顯示反應完畢，過濾除去4MS，低溫濃縮，殘留物經快速柱層析；(12)惰性氣體保護下，步驟(11)所得產物及CeCl3·7H2O溶于干燥的THF(50mL)中，-5～10℃下加入NaBH4，使之自然升至室溫反應過夜，然后加入MeOH淬滅反應，Et2O萃取，飽和食鹽水洗滌，無水Na2SO4干燥，過濾，濃縮，殘留物經柱層析；(13)惰性氣體保護下，步驟(12)所得產物、二糖給體及4MS溶于干燥的CH2Cl2，室溫攪拌10～60min，然后浴溫降至-78～0℃，向體系中緩慢滴加促進劑TMSOTf或BF3.Et2O，加完后繼續于-78～0℃反應0.5～2min，TLC顯示給體基本已經沒有，撤去干冰浴，向體系中加Et3N淬滅反應，過濾除去固體，濃縮，殘留物經快速柱層析后溶于同量綱體積比10～50∶1的丙酮與水混和溶劑中，加入0.01-0.5當量Pd(MeCN)2Cl2，攪拌反應1～2天，TLC顯示反應完畢，濃縮，柱層析即得。
該方法更加簡單，反應條件較為穩定。


圖1、目標分子OSW-1(1)的前體(2)的合成路線；圖2、甙元(3)的合成路線；
圖3、二糖給體(4)的合成路線；圖4、OSW-1的合成路線。
具體實施例方式
以下實施例用于說明本發明，但不用來限制本發明的范圍。
如圖1所示，目標分子OSW-1(1)的前體(2)可由兩個片段-甙元受體(3)和二糖給體(4)經Lewis酸催化發生糖苷化反應而得。
一、甙元(3)的合成路線如圖2所示。
二、二糖給體(4)的合成路線如圖3所示。
實施例1M-2的合成 冰水浴下，去氫表雄酮M-1(288g，1.0mol)溶于CH2Cl2(3.0L)中，加入Et3N(418mL，3.0mol)，然后滴加PicvCl(180mL，1.5mol)，加完后，室溫攪拌48hrs，加入冰水(2.0L)萃取，然后依次用10％Na2CO3及飽和食鹽水洗滌，無水Na2SO4干燥，過濾，旋干后，經重結晶得產物M-2(372g，100％)。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ5.40(brd，J＝4.8Hz，1H)，4.63-4.53(m，1H)，1.25(s，9H)，1.12(s，3H)，0.89(s，3H)。
實施例2M-3的合成 a.Ph3PEtBr制備Ph3P(100g，0.38mol)，溶于甲苯(300mL)，加入EtBr(100mL，1.33mL)，然后于70℃攪拌反應48hrs，過濾，所得固體用石油醚洗滌，經真空干燥的白色晶體(130g，92％)。
b.反應Ar保護下，Ph3PEtBr(1.93g，5.2mmol)和t-BuOK(0.59g，5.2mmol)溶于無水THF(6.0mL)，室溫攪拌45min，反應溶液呈血紅色，之后加入底物M-2(1.02g，2.6mmol)，控制溫度80℃左右回流2.5h，TLC顯示反應完全，撤去油浴，冷卻至室溫，加入EtOAc萃取，飽和食鹽水洗滌中性，無水Na2SO4干燥，過濾，濃縮，殘留物經柱層析純化(PE∶EA，20∶1)，得白色固體M-3(0.865g，92％)。
如果Ph3PEtBr試劑與t-BuOK室溫攪拌后不呈血紅色，則試劑已失效。最好在做反應前新制備。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ5.45(brd，J＝4.8Hz，1H)，5.20(q，J＝6.9Hz，1H)，4.71-4.58(m，1H)，1.26(s，9H)，1.12(s，3H)，0.98(s，3H)。
實施例3M-4的合成 Ar保護下，底物M-3(10.0g，26mmol)和多聚甲醛(3.90g，130mmol)中加入干燥的CH2Cl2(220mL)，在冰浴下，加入BF3·Et2O的CH2Cl2溶液(10.5mL，10mG/mL，0.65mmol)，加完后繼續在冰浴下攪拌反應4hrs，TLC檢測反應完全，加入Et3N淬滅反應，反應液過濾除去固體，飽和食鹽水洗滌有機相，真空除去溶劑，殘留物經柱層析純化(PE∶EA，20∶1 to 10∶1)，得白色固體M-4(8.78g，81％)。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ5.44(brs，1H)，5.38(brd，J＝4.8Hz，1H)，4.63-4.53(m，1H)，3.64-3.48(m，1H)，1.19(s，9H)，1.07(s，3H)，1.03(d，J＝6.6Hz，3H)，0.98(s，3H)。
實施例4M-5的合成
底物M-4(0.414g，1mmol)，BzO-TEMPO(28mg，0.1mmol)，TBAB(32mg，0.1mmol)，NaHCO3(0.5M)/K2CO3(0.05M)的水緩沖溶液10mL，NCS即N-氯代琥珀酰亞胺(174mg，1.3mmol)，溶于CH2Cl2(10mL)，反應2hrs后，TLC檢測反應完畢。分離有機相，水層用CH2Cl2(10mL×2)萃取，合并有機相，用飽和食鹽水(10mL×2)洗滌，干燥，過濾，濃縮，殘留物經柱層析(PE∶EA，20∶1)，得白色固體M-5(0.365g，89％)。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ9.44(brs，1H)，5.49(s，1H)，5.39(brd，J＝4.8Hz，1H)，4.63-4.53(m，1H)，3.03(q，J＝4.2Hz，1H)，1.20(d，J＝6.6Hz，3H)，1.18(s，9H)，1.07(s，3H)，0.81(s，3H)。
實施例5M-6的合成 a.Grignard試劑異戊基溴化鎂的制備(條件無水無氧)Ar保護下，新鮮鎂屑(0.24g，10.0mmol)中加入無水Et2O(10.0mL)，并加入少量碘，攪拌下滴入異戊基溴(0.76mL，6.0mmol)，加熱引發反應，反應逐漸劇烈，鎂屑逐漸消失，約1.5hrs后得到一澄清溶液，即為Grignard試劑。
b.底物與異戊基溴化鎂的反應Ar保護下，底物M-5(1.6g，4.0mmol)溶于干燥的Et2O(40mL)，冰浴下向其中緩慢加入新制的Grignard試劑，加完后攪拌0.5hr，TLC顯示底物完全消失。向反應體系中加入飽和NH4Cl溶液淬滅反應，Et2O萃取，飽和食鹽水洗滌至中性，無水Na2SO4干燥，過濾，濃縮，殘留物經柱層析純化(PE∶EA，100∶1 to 40∶1)，得到白色泡沫狀固體M-6(1.68g，89％)。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ5.49(brs，1H)，5.38(brd，J＝4.8Hz，1H)，4.63-4.53(m，1H)，3.66-3.58(m，1H)，1.18(s，9H)，1.07(s，3H)，1.02(d，J＝6.9Hz，3H)，0.89(d，J＝8.4Hz，3H)，0.89(d，J＝8.4Hz，3H)，0.87(s，3H)。
13C-NMR(75MHz，CDCl3)δ178.20，158.81，140.28，124.45，122.50，73.66，73.29，57.99，50.76，47.05，38.82，38.25，37.98，37.14，37.04，35.73，34.88，32.67，31.78，31.42，30.60，28.34，27.87，27.37，22.88，22.81，20.90，19.51，16.92，14.45。
ESI/MS(m/z)507.5(M+Na+)，991.1(2M+Na+)，1475.7(3M+Na+)。
實施例6M-7的合成 Ar保護下，底物M-6(2.67g，5.51mmol)溶于干燥的CH2Cl2(10mL)，加入Et3N(1.44mL，10.3mmol)，冰浴下向其中緩慢加入SO3·Pyridine(1.64g，10.3mmol)的干燥DMSO(10mL)溶液，加完后于室溫下攪拌3.0hrs，然后倒入飽和食鹽水中，Et2O萃取，依次用3％HCl溶液、飽和NaHCO3溶液及飽和食鹽水洗滌至中性，無水Na2SO4干燥，過濾，濃縮，殘留物經柱層析純化(PE∶EA，30∶1)，得到白色固體M-7(2.40g，90％)，并回收底物M-6(200mg，7.5％)。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ5.36(brs，2H)，4.62-4.50(m，1H)，3.18(q，J＝5.4Hz，1H)，1.17(s，9H)，1.15(d，J＝6.6Hz，3H)，1.06(s，3H)，0.86(d，J＝6.0Hz，3H)，0.85(d，J＝6.0Hz，3H)，0.84(s，3H)。
13C-NMR(75MHz，CDCl3)δ211.76，178.17，154.49，140.29，125.39，122.41，74.13，73.62，57.26，50.71，47.52，45.93，38.81，38.45，38.23，38.21，37.13，37.04，34.81，33.26，31.73，31.43，30.77，27.85，27.82，27.36，27.32，22.71，22.69，22.46，20.91，19.49，17.06，16.49。
ESI/MS(m/z)505.4(M+Na+)，987.2(2M+Na+)，1469.4(3M+Na+)。
實施例7M-8的合成 Ar保護下，底物M-7(3.45g，7.15mmol)，(CH2OH)2(3.0mL，48mmol)，(EtO)3CH(4.0mL，24mmol)，p-TsOH·H2O(50mg，0.26mmol)溶于干燥的CH2Cl2(30mL)，室溫下攪拌96hrs，然后加入Et3N中止反應，CH2Cl2萃取，飽和食鹽水洗滌至中性，無水Na2SO4干燥，過濾，濃縮，殘留物經柱層析純化(PE∶EA，30∶1 to 10∶1)，得到白色固體M-8(3.84g，100％)。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ5.67(brs，1H)，5.39(brd，J＝4.8Hz，1H)，4.63-4.53(m，1H)，3.97(m，4H)，2.45(q，J＝4.8Hz，1H)，1.18(s，9H)，1.07(s，3H)，1.03(d，J＝6.9Hz，3H)，0.86(d，J＝6.6Hz，3H)，0.85(d，J＝6.6Hz，3H)，0.82(s，3H)。
13C-NMR(75MHz，CDCl3)δ178.26，156.74，140.29，124.23，122.64，114.06，73.71，66.08，65.49，57.43，50.82，47.72，39.37，38.84，38.26，37.14，37.07，35.05，34.20，32.64，31.86，31.61，30.85，28.61，27.88，27.37，22.88，20.99，19.51，17.59，15.89。
實施例8M-9的合成
底物M-8(10.9g，20.7mmol)及NaOH(6.0，150mmol)溶于MeOH/THF/H2O(80mL，1∶6∶1)，室溫攪拌24hrs，EtOAc萃取，飽和食鹽水洗滌至中性，無水Na2SO4干燥，過濾，濃縮，殘留物經柱層析純化(PE∶EA，7∶1)，得到無色糖漿M-9(9.16g，100％)。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ5.66(brs，1H)，5.39(brd，J＝4.8Hz，1H)，3.96(m，4H)，3.60-3.47(m，1H)，2.45(q，J＝7.2Hz，1H)，1.05(s，3H)，1.03(d，J＝7.2Hz，3H)，0.87(d，J＝6.9Hz，3H)，0.86(d，J＝6.6Hz，3H)，0.82(s，3H)。
D25＝-43.5(c1.0，CH3OH)。
實施例9M-10的合成 Ar保護下，底物M-9(11.1g，25.2mmol)溶于干燥的CH2Cl2(100mL)和Pyridine(12mL，148mmol)，然后加入DMAP(500mg)，冷卻至0℃，加入TsCl(9.89g，50.3mmol)，加完后升至室溫，攪拌反應48hrs，CH2Cl2萃取，飽和食鹽水洗滌至中性，無水Na2SO4干燥，過濾，濃縮，得到黃色殘留物。
將殘留物溶于干燥的無水MeOH(100mL)，加入KOAc(13.0g，132mmol)，加熱回流反應3hrs，然后濃縮，用乙酸乙酯萃取，飽和食鹽水洗滌，無水Na2SO4干燥，過濾，濃縮，殘留物經柱層析純化(PE∶EA，50∶1)，得到無色糖漿M-10(10.0g，87％)。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ5.66(brs，1H)，3.96(m，4H)，3.34(s，3H)，2.78(brs，1H)，2.45(q，J＝7.2Hz，1H)，1.06(s，3H)，1.03(d，J＝7.2Hz，3H)，0.88-0.83(m，9H)，0.65(t，J＝4.5Hz，1H)，0.44(dd，J＝8.4Hz，5.1Hz，1H)。
13C-NMR(75MHz，CDCl3)δ156.97，124.12，114.04，82.62，57.63，56.76，48.89，48.01，43.84，39.41，35.76，35.47，35.28，33.36，32.65，31.55，29.41，28.57，25.14，22.82，22.61，21.70，19.46，17.56，16.34，13.27。
EI/MS(m/z)456(M+)，441，413，385，143(100)。
IR(KBr，cm-1)2955，2924，1734，1457，1372，1096，1052，1016，950。
實施例10M-11的合成 K3Fe(CN)6(36.2g，110mmol)，K2CO3(15.2g，110mmol)，DABCO(484mg，2.2mmol)溶于水(150mL)中，底物M-10(10.0g，22.0mmol)溶于t-BuOH(150mL)中，攪拌下加入K2OsO4·2H2O(810mg，2.2mmol)，然后加入K3Fe(CN)6等的水溶液，50℃加熱反應48hrs，然后撤去油浴，降至室溫，加入飽和NaHSO3溶液至有綠色沉淀，EtOAc(1000mL)萃取，飽和食鹽水洗滌，無水Na2SO4干燥，過濾，濃縮，殘留物經柱層析(PE∶EA，20∶1)，得糖漿狀固體M-12(6.5g，60％)，并回收底物M-11(2.0g，20％)。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ4.30-4.24(m，1H)，4.02-3.88(m，6H)，3.33(s，3H)，3.09(s，1H)，2.77(t，J＝2.7Hz，1H)，1.11(d，J＝7.2Hz，3H)，0.99(s，3H)，0.83(d，J＝7.2Hz，6H)，0.79(s，3H)，0.64(t，J＝4.8Hz，1H)，0.43(dd，J＝7.5Hz，4.8Hz，1H)。
13C-NMR(75MHz，CDCl3)δ115.92，82.60，82.51，76.13，66.00，64.59，56.80，50.59，47.96，47.62，45.52，43.50，35.53，35.29，33.57，33.48，33.39，32.98，31.55，30.62，28.35，25.11，22.94，22.93，22.34，21.54，19.37，14.96，13.35，13.26。
ESI/MS(m/z)513.4(M+Na+)。
IR(KBr，cm-1)3491，2956，2871，1469，1383，1093，945。
實施例11M-12的合成 Ar保護下，底物M-11(5.20g，10.6mmol)，(n-Pr4N)RuO4(373mg，1.06mmol)，NMO(3.77g，31.8mmol)及4MS(6.3g)溶于干燥的CH2Cl2(250mL)及MeCN(25mL)中，室溫攪拌反應40hrs，TLC顯示反應完畢，過濾除去4MS，低溫(！)濃縮，殘留物經快速柱層析(PE∶EA，10∶1)，得糖漿狀固體M-12(4.67g，90％)。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ4.72(s，1H)，4.06-3.94(m，4H)，3.33(s，3H)，2.80-2.70(m，2H)，2.37(dd，J＝15.6Hz，6.0Hz，1H)，1.05(s，3H)，1.04(d，J＝7.5Hz，3H)，0.98(s，3H)，0.88(d，J＝7.2Hz，6H)，0.64(t，J＝4.8Hz，1H)，0.43(dd，J＝7.5Hz，4.8Hz，1H)。
13C-NMR(75MHz，CDCl3)δ215.03，115.17，85.26，81.93，63.34，63.16，56.43，47.24，45.03，43.29，41.07，36.99，35.44，34.86，33.03，32.61，30.60，29.14，28.11，24.76，22.57，22.33，21.62，21.10，19.07，15.24，14.09，13.04.EI/MS(m/z)488(M+)，473，199，143(100)。
ESI/MS(m/z)489.2(M+Na+)。
IR(KBr，cm-1)3346，2952，1739，1380，1102，943，919。
EACalcd for C30H48O5C 73.73，H 9.90；foundC 73.80，H9.78。
D25＝-112.8(c1.0，CHCl3)。
實施例12 3(M-13)的合成 Ar保護下，底物M-12(600mg，1.23mmol)及CeCl3·7H2O(854mg，2.29mmol)溶于干燥的THF(50mL)中，0℃下加入NaBH4(435mg，11.5mmol)，使之自然升至室溫反應過夜，然后加入MeOH淬滅反應，Et2O萃取，飽和食鹽水洗滌，無水Na2SO4干燥，過濾，濃縮，殘留物經柱層析(PE∶EA，5∶1)，得糖漿狀固體3(M-13)(455mg，76％)，并回收底物M-12(111mg，18％)。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ4.13-3.92(m，6H)，3.90-3.83(m，1H)，3.28(s，3H)，2.72(s，1H)，2.56(q，J＝6.9Hz，1H)，2.25-2.11(m，1H)，1.14(d，J＝7.2Hz，3H)，0.98(s，3H)，0.92(s，3H)，0.85(d，J＝6.6Hz，3H)，0.85(d，J＝6.6Hz，3H)，0.58(t，J＝4.8Hz，1H)，0.37(dd，J＝7.5Hz，4.8Hz，1H)。
13C-NMR(75MHz，CDCl3)δ116.43，88.64，82.31，81.47，64.00，62.77，56.36，48.25，47.41，35.91，35.31，34.65，33.60，33.30，32.79，32.66，30.26，28.18，24.87，22.61，22.37，21.52，19.17，12.91，12.86，11.83。
ESI/MS(m/z)513.2(M+Na+)，1003.0(2M+Na+)。
IR(KBr，cm-1)3510，2956，1471，1386，1099，949，903。二糖給體(4)的合成實施例13阿拉伯糖受體(8)的合成1).L-阿拉伯糖(20g，133mmol)，丙酮叉試劑(25mL，248mmol)，p-TsOH·H2O(0.80g，4.2mmol)溶解于DMF(120mL)，室溫下反應3.5hrs，反應基本完全，濃縮，得到糖漿5。
2).化合物5不經純化，直接加Pyridine(60mL)溶解，然后加入Ac2O(53mL，562mmol)，室溫攪拌反應過夜，然后用EtOAc(500mL)萃取，飽和食鹽水洗滌，無水Na2SO4干燥，過濾，濃縮，殘留物經柱層析(PE∶EA，3∶1)，得糖漿6(31.2g，兩步產率85％)。
3).化合物6(15.6g，56.7mmol)及CCl3CH2OH(7.0mL，72.6mmol)溶于CH2Cl2(170mL)，冰鹽浴下加入BF3·Et2O(22mL，173mmol)，攪拌3hrs，反應完全，倒入300mL冰水中，用CH2Cl2(500mL)萃取，飽和食鹽水洗滌，干燥，過濾，濃縮，用石油醚和乙酸乙酯結晶得到部分7b，母液經快速柱層析(PE∶EA，5∶1)，共得到白色固體7a(2.5g，12％)，7b(15.5g，75％)。
注意事項反應中所用的BF3·Et2O只需要國產分析純的就可以；反應中的產物7a的Rf值＞7b的Rf值。柱層析時請小心將兩個產物分離。
7b[α]D20＝+13.7(c1.0，CH3OH)。
4).底物7b(10.7g，29.5mmol)溶于80％HOAc水溶液(50mL)，70℃下攪拌3hrs，濃縮，經柱層析(PE∶EA，5∶1)得白色固體8(9.2g，97％)。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ5.08(dd，J＝6.6Hz，4.5Hz，1H)，4.81(d，J＝4.8Hz，1H)，4.34(d，J＝11.7Hz，1H)，4.11(d，J＝11.7Hz，1H)，3.98-3.87(m，2H)，3.83(dd，J＝6.0Hz，2.0Hz，1H)，3.67-3.62(m，1H)，2.12(s，3H)。
ESI-MS(m/e)345.0(M+Na+)，668.7(2M+Na+)。
D20＝+7.5(c1.0，CH3OH)。
實施例14木糖給體(13)的合成1).D-木糖(50g，333mmol)溶于BnOH(250mL)，攪拌下向體系中滴加AcCl(23.8mL，333mmol)，室溫下攪拌過夜，TLC顯示反應完全。體系傾入乙醚(2.0L)中，放入冰箱上層冷凍，有固體析出，過濾，得到固體9(約60g)。
ESI-MS(m/e)263.2(M+Na+)。
2).在上述產物9(250mmol)中加入無水吡啶(350mL)，浴溫-35至-40℃下，滴加對甲氧基苯甲酰氯(48mL，300mmol)，滴畢自然升至室溫，攪拌過夜。TLC顯示反應完全，加無水甲醇淬滅反應，攪拌30分鐘，濃縮除去溶劑，殘留物用乙酸乙酯溶解，依次用5％鹽酸、飽和碳酸氫鈉及飽和食鹽水洗滌至中性，無水硫酸鈉干燥，濃縮，殘留物經快速柱層析(PE∶EA，2∶1)得白色固體10(31.0g，兩步產率25％)。
ESI-MS(m/e)374.8(M+H+)，397.1(M+Na+)，770.9(2M+Na+)。
3).Ar保護下，化合物10(30.8g，82.3mmol)，咪唑(28g，412mmol)，DMAP(1.5g)溶于CH2Cl2(150mL)，攪拌下滴加TESCl(34.6mL，106mmol)，室溫攪拌2hrs后TLC顯示反應完全，加CH2Cl2稀釋，依次用飽和碳酸氫鈉及飽和食鹽水洗滌，干燥，過濾，濃縮，殘留物經快速柱層析(PE∶EA，30∶1)，得無色糖漿11(49g，產率100％)。
ESI-MS(m/e)1226.5(2M+Na+)。
4).底物11(5.19g，8.61mmol)溶于EtOAc(50mL)，加入10％Pd-C(1.5g)，Et3N(0.25mL)，于70℃和H2氣氛(100atm)下攪拌反應1天，然后過濾除去固體，濃縮，殘留物經快速柱層析(PE∶EA，6∶1)，得無色糖漿12(4.03g，91％)。
5).Ar保護下，將底物12(10.5g，20.5mmol)溶于干燥的CH2Cl2(80mL)，然后加入Cl3CCN(16.0mL，160mmol)和DBU(20滴)，室溫下攪拌3hrs，過短柱(干燥CH2Cl2淋洗)，得到淡黃色糖漿13(13.2g，98％)。
實施例15二糖給體(4)的合成將木糖給體13(13.2g，20.1mmol)，受體8(5.2g，16.1mmol)，4MS(20g)溶于CH2Cl2(300mL)，室溫攪拌30min，干冰浴冷至-50～-60℃，加BF3·OEt2的CH2Cl2溶液(8mL，10mg/ml)。攪拌0.5hr，加Et3N(0.2mL)終止反應，過濾，濃縮，經柱層析(PE∶EA，20∶1 to 5∶1)得產物14a和14b(11.6g，產率88％)。
14b1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ8.02(d，J＝8.7Hz，2H)，6.91(d，J＝8.7Hz，2H)，5.04-4.96(m，2H)，4.67(dd，J＝6.0Hz，3.0Hz，2H)，4.31(d，J＝11.7Hz，1H)，4.16-4.02(m，3H)，3.88-3.63(m，4H)，3.86(s，3H)，3.52(dd，J＝12.6Hz，2.7Hz，1H)，3.30(dd，J＝11.7Hz，8.1Hz，1H)，2.58(d，J＝9.3Hz，1H)，2.05(s，3H)，0.99-0.84(m，18H)，0.66-0.53(m，12H).
反應瓶中，加入14a和14b的化合物(9.8g，12.0mmol)，TESCl(2.5mL，15mmol)，咪唑(2.0g，29.4mmol)，DMAP(40mg)和CH2Cl2(80mL)。室溫攪拌2.5hrs。加100mL CH2Cl2稀釋萃取，飽和食鹽水洗滌。無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，經柱層析(PE∶EA，30∶1)得產物15a(670mg，產率6％)和15b(10.5g，產率93％)。
15a1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ8.02(d，J＝9.0Hz，2H)，6.89(d，J＝9.0Hz，2H)，5.00-4.92(m，2H)，4.80(d，J＝5.4Hz，1H)，4.63(d，J＝5.1Hz，2H)，4.23(d，J＝11.7Hz，1H)，4.15-4.02(m，3H)，3.86(s，3H)，3.83-3.76(m，3H)，3.71-3.65(m，1H)，3.52(dd，J＝10.8Hz，2.1Hz，1H)，3.28(dd，J＝11.4Hz，7.2Hz，1H)，2.01(s，3H)，0.97-0.86(m，27H)，0.65-0.47(m，18H)。
15b1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ7.98(d，J＝8.7Hz，2H)，6.90(d，J＝8.7Hz，2H)，5.18(dd，J＝8.7Hz，6,3Hz，1H)，4.97(t，J＝7.2Hz，1H)，4.74(d，J＝6.3Hz，1H)，4.61(d，J＝6.3Hz，1H)，4.27(d，J＝12.0Hz，1H)，4.08(d，J＝12.0Hz，1H)，4.08-3.98(m，2H)，3.85(s，3H)，3.88-3.63(m，4H)，3.44(dd，J＝12.0Hz，2.1Hz，1H)，3.30(dd，J＝11.4Hz，8.1Hz，1H)，1.84(s，3H)，1.02-0.82(m，27H)，0.68-0.48(m，18H).ESI-MS(m/e)947.9(M+NH4+)，1878.4(2M+NH4+)。
反應瓶中，加入底物15b(2.2g，2.36mmol)及鋅粉(2.6g)，氯化銨(0.214g)，然后加入無水乙醇(15mL)，超聲波反應1.5hrs，過濾，濃縮，經柱層析(PE∶EA，9∶1)得產物16(1.3g，產率69％)。
Ar保護下，底物16(757mg，0.95mmol)，溶于干燥的CH2Cl2(10mL)，加入Cl3CCN(1.0mL，10mmol)，最后滴加DBU(5滴)，反應3hrs后，直接經去快速柱層析(淋洗液為干燥的CH2Cl2)，得到淡黃色糖漿4(810mg，產率90％)。
實施例16OSW-1的合成如圖4所示，二糖給體(4)與甙元受體(3)在促進劑TMSOTf的作用下，發生糖苷化反應，生成全保護的糖苷化產物(2)，再經脫保護，就成功地得到了產物1-a和目標產物1-b(OSW-1)。
1.糖苷化反應Ar保護下，甙元受體3(85mg，0.173mmol)、二糖給體4(265mg，0.280mmol)及4MS(420mg)溶于干燥的CH2Cl2(8.0mL)，室溫攪拌20min，然后浴溫降至-60℃，向體系中緩慢滴加促進劑TMSOTf(2.0mL，0.005M in CH2Cl2)，加完后繼續于-60℃反應30min，TLC顯示給體基本已經沒有，撤去干冰浴，向體系中加Et3N(0.1mL)淬滅反應，過濾除去固體，濃縮，殘留物經快速柱層析(PE∶EA，20∶1 to 10∶1)，得無色泡沫狀固體2(155mg，70％)。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ8.08(d，J＝9.0Hz，2H)，6.89(d，J＝9.0Hz，2H)，5.05(brd，J＝3.6Hz，1H)，4.97(s，1H)，4.93(s，1H)，4.83-4.55(m，1H)，4.55-4.45(m，2H)，3.86(s，3H)，3.53-3.47(brs，1H)，3.28(s，3H)，2.73(brs，1H)，2.01(s，3H)。
13C-NMR(75MHz，CDCl3)δ168.69，164.62，163.77，163.30，132.03，122.60，116.58，113.27，101.10，92.15，87.19，82.42，73.86，64.20，63.85，56.25，55.38，48.34，47.55，47.34，46.20，43.30，43.28，35.98，33.05，32.75，31.85，31.65，30.19，29.65，28.14，24.96，22.28，22.24，22.23，21.40，20.88，19.28，14.10，13.01，12.60，12.25，11.80，6.93，6.86，6.80，6.76，6.75，4.93，4.88，4.70，4.68。
ESI/MS(m/z)1295.6(M+Na+)。
2.脫保護反應室溫下，化合物2(25mg，0.0194mmol)溶于丙酮/水(20∶1)混和溶劑(3.0mL)中，加入Pd(MeCN)2Cl2(約1mg)，攪拌反應2天，TLC顯示反應完畢，直接濃縮，經快速柱層析(CH2Cl2∶CH3OH，20∶1)，得到化合物1-a(少量)和1-b(OSW-1，11mg，產率64.8％)。
權利要求
1.一種虎眼萬年青皂甙OSW-1的制備方法，包括以下步驟(1)去氫表雄酮溶于C2～C4的氯代烷烴中，加入三乙胺或吡啶中一種或二者的混合物，然后滴加C3～C6的烷基取代酰氯，用量是1mol去氫表雄酮用1～10升有機溶劑，1～4mol三乙胺或吡啶中一種或二者的混合物，1～3mol C3～C6的烷基取代酰氯，在-10～25℃溫度下攪拌1～10hrs，加入冰水萃取，然后依次用堿溶液和無機鹽溶液洗滌，干燥，過濾，干燥；(2)Ph3P溶于非極性芳香烴溶劑中，加入單鹵代乙烷，50～80℃溫度下攪拌24～72hrs，過濾，非極性溶劑洗滌，干燥，惰性氣體保護下，加入C2～C4的醇鈉或醇鉀，溶于C2～C4的無水醚類溶劑，15～40℃溫度下攪拌0.5～5hrs，然后加入步驟(1)中得到的產物，60～90℃溫度下攪拌1～10hrs，冷卻，萃取，無機鹽溶液洗滌至中性，過濾，濃縮，柱層析純化；1mol步驟(1)中的產物需要用1～3mol Ph3P，5～10mol單鹵代乙烷，1～3升非極性芳香烴溶劑，1～3molC2～C4的醇鈉或醇鉀，1～10升無水醚類溶劑；(3)惰性氣體保護下，步驟(2)所得的產物和多聚甲醛中加入C2～C4的氯代烷烴，在冰浴下，加入BF3·Et2O的CH2Cl2溶液，-10～25℃溫度下攪拌1～10hrs，加入淬滅劑，淬滅反應，反應液過濾除去固體，鹽溶液洗滌有機相，真空除去溶劑，殘留物經柱層析純化；1mol步驟(2)中的產物需要用1～10mol多聚甲醛，5～20升C2～C4的氯代烷烴，含0.01～0.1molBF3·Et2O的CH2Cl2溶液；(4)步驟(3)得到的產物，BzO-TEMPO或PivO-TEMPO或TEMPO，相轉移催化劑，NaHCO3(0.5M)/K2CO3(0.05M)的水緩沖溶液，N-氯代琥珀酰亞胺，溶于C2～C4的氯代烷烴，0～40℃溫度下攪拌1～24hrs，分離有機相，水層萃取，合并有機相，鹽溶液洗滌，干燥，過濾，濃縮，殘留物經柱層析純化；1mol步驟(3)中的產物需要用0.05～1mol BzO-TEMPO，0.05～1mol相轉移催化劑，1～20升緩沖溶液，1～4mol N-氯代琥珀酰亞胺，5～10升C2～C4的氯代烷烴；(5)惰性氣體保護下，步驟(4)所得產物溶于干燥的C2～C4的無水醚類溶劑，冰浴下向其中緩慢加入新制的Grignard試劑，加完后攪拌0.1～2hr，TLC顯示底物完全消失，向反應體系中加入飽和NH4Cl溶液淬滅反應，Et2O萃取，飽和食鹽水洗滌至中性，無水Na2SO4干燥，過濾，濃縮，殘留物經柱層析純化；1mol步驟(4)中的產物需要5～10升無水醚類溶劑，1～3mol新制的Grignard試劑；(6)惰性氣體保護下，步驟(5)所得產物溶于干燥的C2～C4的氯代烷烴，加入烷基胺類化合物，冰浴下向其中緩慢加入SO3·Pyridine的干燥DMSO溶液，加完后于室溫下攪拌0.5～2hrs，然后倒入飽和食鹽水中，Et2O萃取，依次用3％HCl溶液、飽和NaHCO3溶液及飽和食鹽水洗滌至中性，無水Na2SO4干燥，過濾，濃縮，殘留物經柱層析純化；1mol步驟(5)中的產物需要1～10升C2～C4的氯代烷烴，1～10升烷基胺類化合物，1～10molSO3·Pyridine，1～10升DMSO；(7)惰性氣體保護下，步驟(6)所得產物，(CH2OH)2，(EtO)3CH，p-TsOH·H2O溶于干燥的C2～C4的氯代烷烴，室溫下攪拌24～96hrs，然后加入烷基胺類化合物中止反應，C2～C4的氯代烷烴萃取，飽和食鹽水洗滌至中性，無水Na2SO4干燥，過濾，濃縮，殘留物經柱層析純化；1mol步驟(6)中的產物需要1～10mol(CH2OH)2，1～10mol(EtO)3CH，1～10molp-TsOH·H2O，1～10升C2～C4的氯代烷烴；(8)步驟(7)所得產物及強堿溶于MeOH/THF/H2O(80mL，1∶6∶1)，室溫攪拌12～48hrs，EtOAc萃取，飽和食鹽水洗滌至中性，無水Na2SO4干燥，過濾，濃縮，殘留物經柱層析純化；(9)惰性氣體保護下，步驟(8)所得產物溶于干燥的C2～C4的氯代烷烴和Pyridine，然后加入DMAP，冷卻至0℃，加入TsCl，加完后升至室溫，攪拌反應24～72hrs，C2～C4的氯代烷烴萃取，飽和食鹽水洗滌至中性，無水Na2SO4干燥，過濾，濃縮，溶于干燥的無水醇溶劑，加入KOAc，加熱回流反應1～5hrs，然后濃縮，用乙酸乙酯萃取，飽和食鹽水洗滌，無水Na2SO4干燥，過濾，濃縮，殘留物經柱層析純化；(10)K3Fe(CN)6，K2CO3，DABCO溶于水中，步驟(9)所得產物溶于t-BuOH中，攪拌下加入K2OsO4·2H2O，然后加入K3Fe(CN)6的水溶液，40～80℃加熱反應24～72hrs，然后撤去油浴，降至室溫，加入飽和NaHSO3溶液至有綠色沉淀，EtOAc萃取，飽和食鹽水洗滌，無水Na2SO4干燥，過濾，濃縮，殘留物經柱層析；其中，1mol步驟(9)所得產物加入1000～10000ml EtOAc；(11)惰性氣體保護下，步驟(10)所得產物，(n-Pr4N)RuO4，NMO及4 MS溶于干燥的C2～C4的氯代烷烴及MeCN中，室溫攪拌反應24～72hrs，TLC顯示反應完畢，過濾除去4 MS，低溫濃縮，殘留物經快速柱層析；(12)惰性氣體保護下，步驟(11)所得產物及CeCl3·7H2O溶于干燥的THF(50mL)中，-5～10℃下加入NaBH4，使之自然升至室溫反應過夜，然后加入MeOH淬滅反應，Et2O萃取，飽和食鹽水洗滌，無水Na2SO4干燥，過濾，濃縮，殘留物經柱層析；(13)惰性氣體保護下，步驟(12)所得產物、二糖給體及4 MS溶于干燥的CH2Cl2，室溫攪拌10～60min，然后浴溫降至-78～0℃，向體系中緩慢滴加促進劑TMSOTf或BF3.Et2O，加完后繼續于-78～0℃反應0.5～2min，TLC顯示給體基本已經沒有，撤去干冰浴，向體系中加Et3N淬滅反應，過濾除去固體，濃縮，殘留物經快速柱層析后溶于體積比10～50∶1的丙酮和水混和溶劑中，加入0.01-0.5當量Pd(MeCN)2Cl2，攪拌反應1～2天，TLC顯示反應完畢，濃縮，柱層析即得。
全文摘要
本發明涉及一種虎眼萬年青皂甙OSW－1的合成新方法，包括如下步驟(1)邊鏈的引入以酰基保護的去氫表雄酮為原料，引入邊鏈；(2)5，6位雙鍵的保護；(3)甙元順式16α，17α雙羥基的引入；(4)16－OH氧化成酮；(5)16β－羥基的生成；(6)二糖給體的合成；(7)甙元16β－羥基與二糖給體的糖苷化；(8)脫除保護基得到目標化合物在不同脫保護條件下，可得到OSW－1或其類似物。該方法更加簡單，反應條件較為穩定。
文檔編號C07J75/00GK101029070SQ20061014724
公開日2007年9月5日 申請日期2006年12月14日 優先權日2006年12月14日
發明者惠永正, 楊志奇, 葛強 申請人:上海中藥創新研究中心