專利名稱：：從紅豆杉枝葉中超聲提取分離10-去乙酰基巴卡汀Ⅲ的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種從歐洲紅豆杉枝葉中超聲提取分離io—去乙酰基巴卡汀III的方法，特別是用PH值為3-7.5范圍內(nèi)水溶液對紅豆杉枝葉進行連續(xù)超聲提取，再用特定大孔吸附樹脂吸附富集io-去乙酰基巴卡汀ni的方法。技術(shù)背景IO—去乙酰基巴卡汀III(簡稱IO-DAB)是半合成抗癌藥紫杉醇(Taxol)和多西紫杉醇(docetaxel)的前體原料。我們在專利CN1903849里公開過一種從歐洲紅豆杉提取10—去乙酰基巴卡汀III的方法，即用510倍的0.5%—3%重量百分比濃度范圍的有機酸稀溶液浸泡粉碎或未預粉碎的歐洲紅豆杉枝葉，得到的浸取液用有機溶劑提取。蒸去溶劑，得到粘狀物中加入乙腈，盡量使其溶解，得到的混合物放置冷卻析晶，得到粗品。該方法操作簡單，獲得IO-去乙酰基巴卡汀III快捷，對生產(chǎn)條件要求低。但該方法也存在浸泡時間長，溶劑耗量大的問題。在專利CN1903849研究基礎(chǔ)上，我們進行了方法學上的改進，即用超聲提取取代浸泡滲濾，用大孔吸附富集后再洗脫取代溶劑的萃取，從而使生產(chǎn)周期縮短，并避免了大規(guī)模溶劑萃取和蒸餾過程，節(jié)省溶劑，提高收率。U.S.Pat.No.5，736，366介紹過用軟化水提取樹葉，用聚苯乙烯樹脂(AmberchromCG161md.RTM.)吸附，再用甲醇洗脫，并進一步處理，收率達到75.4%.CN1660827報道用7080y。乙醇提取紅豆杉枝葉，得到水溶性濃縮液，靜置后，不溶于水的紫杉醇及低極性雜質(zhì)沉淀析出，溶液再采用S8、AB6等大孔吸附樹脂進行富集提取10—去乙酰基巴卡汀III方法。我們通過大量實驗，采用大孔吸附樹脂直接吸附經(jīng)超聲水溶液提取物，并找到價格低廉，吸附效果好的D101-1和D101大孔吸附樹脂，增加了10-去乙酰基巴卡汀III的提取效率，該工藝可連續(xù)大規(guī)模進行10-去乙酰基巴卡汀III提取生產(chǎn)。
發(fā)明內(nèi)容我們通過大量實驗證明，以前需要數(shù)十小時的浸泡滲濾效果，利用連續(xù)超聲提取方法超聲2至3小時即可達到。連續(xù)動態(tài)提取，紅豆杉枝葉與水溶液始終保持充分接觸，增加10-去乙酰基巴卡汀III溶解、溶出、擴散速度，節(jié)省時間。提取收率可以達到85%-90%。D101-l型大孔吸附樹脂對紅豆杉枝葉處理能力，每lKgD101-l型大孔吸附樹脂每批次可以處理5倍以上的干燥枝葉的提取液，用乙醇洗脫后，可以保持4倍以上處理能力，用酸堿進行活化處理后，基本保持5倍左右的處理能力。用大孔吸附樹脂富集處理，避免了利用有機溶劑萃取不完全，溶劑回收損失大等缺點。本發(fā)明目的就是提供一種更有效從紅豆杉植物的枝葉中提取10—去乙酰基巴卡汀III的方法。本發(fā)明要點是用PH值為3-7.5范圍內(nèi)水溶液，優(yōu)選用O.1%-0.5%重量百分比濃度范圍的檸檬酸水溶液對粉碎歐洲紅豆杉枝葉進行連續(xù)超聲提取2-3小時，提取液用D101-1/D101大孔吸附樹脂吸附，再用乙醇洗脫濃縮得到膏狀濃縮物，濃縮物用乙酸乙酯溶解過濾除掉不溶物，乙酸乙酯提取物蒸干得到含10-去乙酰基巴卡汀III在15%以上的固體。進一步處理可方便地得到高純度IO-去乙酰基巴卡汀III，以上含量用HPLC測定。紅豆杉枝葉超聲提取io-去乙酰基巴卡汀III的研究-、浸泡提取和超聲提取的研究物料歐洲紅豆杉干燥枝葉0.196(w/w)擰檬酸水溶液超聲提取方法將枝葉粉碎10-100目，稱取100g樹葉加1.5L0.1%檸檬酸水溶液，超聲2小時取樣,再繼續(xù)超聲2小時取樣；浸泡提取方法將枝葉粉碎10-100目，稱取100g枝葉，加入10倍0.l%(w/w)的擰檬酸水溶液浸泡24h，濾出水層，再加5倍檸檬酸水容易浸泡12小時，過濾.合并水相。高效液相外標法分析，按照標準品峰面積折算出從枝葉中提取io-去乙酰基巴卡汀III的含量.<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>二、超聲提取各種紅豆杉的研究超聲提取方法將紅豆杉枝葉粉碎10-100目，稱取100g樹葉加1.5L0.1%(w/w)檸檬酸水溶液，超聲2小時取樣，再繼續(xù)超聲2小時取樣;<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>結(jié)論利用超聲提取速度快，節(jié)省時間，便于工業(yè)化生產(chǎn)。三、吸附研究l.樹脂預處理稱取100gD101-l大孔吸附樹脂分別依次用0.5%鹽酸，0.67%氫氧化鈉浸泡活化，每次加完酸或者堿，都沖洗到中性為止。活化完畢，加入提取液(0.095g/l)，控制流速，每500mL取樣液相檢測，當加完7L溶液時，10-去乙酰基巴卡汀III吸附飽和。每1KgD101-l樹脂可以吸附的10-去乙酰基巴卡汀III飽和量，可折算成約為5Kg歐洲紅豆杉干枝葉的10-去乙酰基巴卡汀III含量。3.乙醇洗脫吸附完畢，加適量乙醇，浸泡數(shù)小時后，將乙醇慢慢放出，再加l倍柱體積乙醇浸泡后放出，合并乙醇，減壓蒸干，得到褐色混合物。HPLC檢測10-去乙酰基巴卡汀III含量約0.6克。具體實施例方式試驗用材料歐洲紅豆杉短枝葉(風干，含水量5%_10%)D101-l大孔吸附樹脂案例l取lKg干燥歐洲紅豆杉枝葉，粉碎，加入10L的0.P/。(w/w)檸檬酸水溶液，放入超聲儀器中，超聲2小時。過濾出8U瞎黃色提取液，用HPLC檢測，含10-去乙酰基巴卡汀III為l.02g.樹葉中再加入10L的0.線(w/w)檸檬酸水溶液，超聲2小時，過濾出10L左右提取液，用HPLC檢測，第二次提取液含10-去乙酰基巴卡汀III為0.21g.將提取過的樹葉再繼續(xù)加IOLO.ly。(w/w)檸檬酸水溶液，超聲2小時，再次得到10L左右淡黃色提取液，用HPLC檢測，第三次提取液中含IO-去乙酰基巴卡汀III為O.08g.案例2取150Kg干燥歐洲紅豆杉枝葉，粉碎，加入到連續(xù)超聲提取裝置的浸出艙中，加入3200Kg的0.ly。(w/w)檸檬酸水溶液，室溫下超聲2小時，過濾，得到2900L左右的提取液，用HPLC檢測提取液中含10-去乙酰基巴卡汀III為135g;過濾出的樹葉再次加入到超聲容器中，再次加入3200Kg的重量百分比濃度范圍O.1%檸檬酸水溶液，室溫下超聲2小時，過濾，得到3100L左右的提取液，用HPLC檢測提取液中含10-去乙酰基巴卡汀III約為30g。HPLC檢測提取后紅豆杉樹葉中10-去乙酰基巴卡汀III的殘余量，總提取率為85%-92%.在連續(xù)提取超聲裝置的浸提艙中加入150Kg干燥歐洲紅豆杉粉碎枝葉，加滿0.1。/。(w/w)的檸檬酸水溶液約3200Kg。超聲3小時后，開始連續(xù)超聲提取，每小吋進紅豆杉樹葉粉末50Kg，檸檬酸水溶液1100Kg。排渣器排渣速度和過濾器出提取液速度與加料速度保持一致，冷凝器通入循環(huán)水保持水溫5(TC以下，一共加料500Kg。以上操作得到的提取液約11000L,通過粗過濾和硅藻土精過濾，得到淡黃綠色提取液。HPLC檢測提取后紅豆杉樹葉中10-去乙酰基巴卡汀III的殘余量，10-去乙酰基巴卡汀III提取率為88%—95%。將該提取液中10-去乙酰基巴卡汀III經(jīng)D101-1大孔吸附樹脂，吸附完畢，用適量乙醇洗脫柱子，洗脫液在4(TC減壓濃縮，得到約llKg黃褐色粘稠狀濃縮膏。再用適量乙酸乙酯溶解，濾去不溶物，濾液除盡溶劑得3.3Kg黃褐色固體;HPLC定量檢測，含10-去乙酰基巴卡汀III15%-17%，吸附收率為90%—95%。權(quán)利要求1.一種從紅豆杉枝葉中超聲提取10-去乙酰基巴卡汀III的方法，用PH值為3-7.5范圍內(nèi)水溶液連續(xù)超聲提取粉碎的紅豆杉枝葉，得到的提取液用大孔吸附樹脂吸附，再用乙醇洗脫，濃縮溶劑得到黃褐色提取物濃縮物。再用常用有機溶劑溶解濃縮物，除掉不溶物，除盡溶劑，得到黃色固體，含10-去乙酰基巴卡汀III重量比15％以上。2.如權(quán)利要求1所述，其特征在于所用工藝用于紅豆杉枝葉，包括歐洲紅豆杉(TaxusBaccata);曼地亞紅豆杉(TaxusMedia);南方紅豆杉(TaxusMariei)。3.如權(quán)利要求l所述，其特征在于所用水溶液的ra值范圍在3-7.5之間，優(yōu)選重量百分比濃度范圍O.1%—0.5%的檸檬酸水溶液。4.如權(quán)利要求1所述，其特征在于紅豆杉枝葉經(jīng)粉碎后用超聲提取，尤其是用連續(xù)超聲提取，紅豆杉枝葉需粉碎至10-100目，檸檬酸水溶液和紅豆杉枝葉充分接觸，增加io-去乙酰基巴卡汀in的溶解、溶出，提高超聲提取效率并可連續(xù)工業(yè)化生產(chǎn)。5.如權(quán)利要求l所述，其特征在于所用大孔吸附樹脂為D101-1和D101型號大孔吸附樹脂。全文摘要本發(fā)明公開了一種改進的從紅豆杉提取10-去乙酰基巴卡汀Ⅲ(10-DAB)(10-deacetylbaccatinⅢ)的方法。用重量百分比0.1％-0.5％濃度的檸檬酸水溶液連續(xù)超聲提取粉碎的紅豆杉枝葉。得到的提取液用大孔吸附樹脂吸附，再用乙醇洗脫，蒸干溶劑得到黃褐色提取物濃縮膏。用有機溶劑溶解濃縮膏，除掉不溶物，蒸干溶劑，得到黃色固體，含10-DAB重量比約15-17％。重結(jié)晶可得純度98％以上。本發(fā)明利用連續(xù)超聲提取大大縮短提取時間，用大孔吸附樹脂吸附可以節(jié)省溶劑，有利于大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)。文檔編號C07D305/00GK101230053SQ20071017867公開日2008年7月30日申請日期2007年12月4日優(yōu)先權(quán)日2007年12月4日發(fā)明者劉永周,虎肖,韓見生申請人:北京諾瑞醫(yī)藥技術(shù)有限公司