專利名稱：一種k4多肽合成產(chǎn)物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物醫(yī)藥領(lǐng)域中的多肽藥物的開發(fā)，具體涉及到設(shè)計(jì)和制備一種 4拷貝分支肽在臨床上可抑制腫瘤生長(zhǎng)和免疫增強(qiáng)劑上的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
生物體的遺傳基因被存儲(chǔ)在多聚核苷酸鏈上，遺傳基因編碼著執(zhí)行生物學(xué)功能的 蛋白質(zhì)。生物體內(nèi)的蛋白質(zhì)多種多樣，它們行使著各種生物學(xué)功能維持生命活動(dòng)。蛋白質(zhì) 的種類雖然多不勝舉，但它們基本上都是由20個(gè)自然界存在的天然氨基酸組成。由于氨基 酸的組成和排列順序的差異導(dǎo)致了蛋白質(zhì)的千差萬(wàn)別。一般來說，含有50個(gè)以上氨基酸的 分子被稱為蛋白質(zhì)，般超過10個(gè)氨基酸的肽鏈被稱為多肽，少于10個(gè)氨基酸的肽鏈被稱做 寡肽。目前發(fā)現(xiàn)最小的功能小肽只有2個(gè)氨基酸，通常較為常見的是4個(gè)以上的功能小肽。由于人類基因組計(jì)劃的完成和人類蛋白組計(jì)劃的開展，將會(huì)有越來越多的蛋白質(zhì) 功能片段被發(fā)現(xiàn)并被作為藥物應(yīng)用到生物醫(yī)藥領(lǐng)域中來。蛋白質(zhì)的功能片段通常是指被發(fā) 現(xiàn)具備某種特定生物學(xué)功能的直鏈多肽片段，它們通常是幾十個(gè)至兩個(gè)氨基酸組成的肽類 片段，被鑒定和發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì)功能片段可通過人工合成的途徑制備。現(xiàn)已開發(fā)并在臨床上 得到應(yīng)用的多肽藥物有“催產(chǎn)素”、“胸腺肽a 1”、“胸腺五肽”等，有在天然肽鏈的基礎(chǔ)上進(jìn) 行人工改構(gòu)制備成為用于治療消化道出血和肢端肥大癥的多肽藥物“奧曲肽”和抗凝血作 用的“水蛭肽”等。蛋白質(zhì)中的功能片段常常能篩選到含有幾十個(gè)或小到只有二個(gè)氨基酸 組成的多肽片段，它們?yōu)槿斯ず铣啥嚯墓δ芷尾⑺鼈兺度霊?yīng)用奠定了基礎(chǔ)。在蛋白質(zhì)、多肽或寡肽中，單一氨基酸的缺失、增加或被替換；氨基端(N端)或羧 基端(C端)被封閉；序列中或游離端被化學(xué)基團(tuán)修飾都會(huì)使得蛋白質(zhì)、多肽或寡肽原有的 生物活性發(fā)生不可預(yù)知的改變。設(shè)計(jì)、篩選和發(fā)現(xiàn)具有新的功能肽段或?qū)ふ腋咝щ亩问撬?物開發(fā)的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。一段含有4個(gè)氨基酸的寡肽蘇氨酸-賴氨酸-亮氨酸-賴氨酸(Thr-Lys-Leu-Lys， 或TKLK)被發(fā)現(xiàn)具有和脾臟產(chǎn)生的生物活性小肽Tuftsin蘇氨酸-賴氨酸-脯氨酸-精 氨酸(Thr-Lys-Pro-Arg，或TKPR)具有相近似的生物活性作用(United States Patent 5，028，593，filed :Augustl5，1989)。實(shí)驗(yàn)證明Tuftsin能使脾內(nèi)脾小體增多，生發(fā)中心生 長(zhǎng)活躍，增強(qiáng)粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞，自然殺傷細(xì)胞的趨化、游離、吞噬和產(chǎn)生細(xì)胞毒 等作用，提高淋巴系統(tǒng)的細(xì)胞免疫功能。Tuftsin不僅促進(jìn)單核吞噬細(xì)胞的MHC非限制性功 能，還促進(jìn)其限制性的抗原遞呈功能，提高細(xì)胞毒作用。本發(fā)明涉及設(shè)計(jì)和制備一種含有4拷貝TKLK片段的肽類分子以進(jìn)一步有效提高 其免疫功能及抗腫瘤活性，開發(fā)一種可在臨床應(yīng)用的抗腫瘤藥物和免疫增強(qiáng)劑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種4拷貝分支肽及其在抑制腫瘤生長(zhǎng)的藥物和免疫增 強(qiáng)劑上的應(yīng)用，所要解決的技術(shù)問題是使該4拷貝分支肽不僅保留功能寡肽的生物學(xué)活性而且顯著提高其生物學(xué)活性。本發(fā)明的目的及解決其技術(shù)問題是采用以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的。本發(fā)明提出一種 4拷貝分支肽，是將具有該氨基酸序列特征組成的寡肽片段通過具有2個(gè)活化氨基可供進(jìn) 行氨基酸加成縮合反應(yīng)的賴氨酸(Lys，用>K-表示)連接的橋梁鏈制備成4拷貝分支分 子，其結(jié)構(gòu)通式為dXfXB-XfXD-Xih > (K-X2)2 > K-X3，其中，XA代表極性不荷電氨基酸，包 括絲氨酸(Ser，S)、蘇氨酸(Thr，T)、半胱氨酸(Cys，C)、脯氨酸(Pro，P)、谷氨酰胺(Gln， Q)、天門冬酰胺(Asn，N) ；XB和XD代表堿性氨基酸，包括組氨酸(His，H)、賴氨酸(Lys，K)、 精氨酸(Arg，R) ；X。代表非極性脂肪族氨基酸，包括甘氨酸(Gly，G)、丙氨酸(Ala，A)、纈氨 酸(Valine，V)、亮氨酸(Leu，L)、異亮氨酸(lie，I)、蛋氨酸(Met，M)。> K-為具有2個(gè)活化氨基可供進(jìn)行氨基酸加成縮合反應(yīng)的賴氨酸；XpX2和X3分 別代表由0-5個(gè)任意氨基酸所構(gòu)成的氨基酸序列，&、X2和X3可以是相同氨基酸序列也可 以是由不同的氨基酸組成的序列，或可以為零不存在。 根據(jù)發(fā)明提出的4拷貝分支肽(XfXfXc-XD-Xih > (K-X2)2 > K-X3所制備出來的 TKLK4分支肽(TKLK)4 > K2 > K_G在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中顯示具明顯的免疫增強(qiáng)抑制腫瘤生長(zhǎng)的作 用和免疫增強(qiáng)作用。按照本發(fā)明設(shè)計(jì)通式制備出來的4拷貝分支肽(TKLK)4 > K2 > K-G克服了直鏈寡 肽TKH 進(jìn)入體內(nèi)易被降解的缺點(diǎn)，不僅保持了 TKLK片段的免疫增強(qiáng)活性和抗腫瘤作用，而 且與TKLK寡肽相比顯著提高了其生物學(xué)活性。按照此方式制備的活性多肽開發(fā)成為藥物 在體內(nèi)的最終降解產(chǎn)物為游離氨基酸，可被機(jī)體直接吸收，沒有明顯的藥物殘留和毒副作 用，作為藥物具有良好的安全性，在臨床應(yīng)用上具有開發(fā)潛力。本發(fā)明所提出的4分支肽(Xa-Xb-Xc-Xd-X) 4 > (K-X2) 2 > K_X3的優(yōu)點(diǎn)在于1. 4拷貝分子在進(jìn)入機(jī)體后在酶的作用下將會(huì)降解產(chǎn)生更小的寡肽片段，使其成 為單拷貝分子發(fā)揮作用。2.從合成工藝的角度出發(fā)在固相樹脂上制備4拷貝分支肽在分支肽分子的啟始 羧基端(C端)接上1個(gè)氨基酸或含有幾個(gè)氨基酸的單鏈寡肽，即本發(fā)明給出的分子通式 (xA-xB-xc-xD-x1)4 > (k-x2)2 > k-x3所代表的分支肽，其中的x3氨基酸序列的存在如“臂” 的作用增加分支肽與固相樹脂間的距離，降低固相樹脂上緊密分布的分支肽分子間的空間 位阻，有助于提高合成效率。3.采用此設(shè)計(jì)通式制備的合成產(chǎn)物經(jīng)過試驗(yàn)鑒定發(fā)現(xiàn)4拷貝分支肽的羧基端(C 端)在連接上1個(gè)氨基酸后不但保留了單拷貝寡肽的生物活性，而且比單純4拷貝分支肽 的活性有所提高。
Xa"Xb-Xc-Xd-XI
具體實(shí)施例方式本發(fā)明給出一個(gè)4拷貝分支肽的結(jié)構(gòu)通式(XfXB-X^XD-Xi)4 > (K-X2)2 > K_X3，如具體給出一個(gè)4拷貝分支肽的結(jié)構(gòu)為(TKLK)4 >K2> K-G，經(jīng)過試驗(yàn)證明該多肽
具有提升免疫力和抗腫瘤的作用，其結(jié)構(gòu)如 為更進(jìn)一步闡述本發(fā)明為達(dá)成預(yù)定發(fā)明目的所采取的技術(shù)手段及功效，以下結(jié)合 實(shí)施例對(duì)依據(jù)本發(fā)明提出的4拷貝分支肽(TKLK)4 > K2 > K-G的設(shè)計(jì)方式、具體應(yīng)用、實(shí)施 方式、特征及其功效做以下說明。1963年美國(guó)科學(xué)家R. B. Merrifield發(fā)明創(chuàng)立了將目的肽的羧基端氨基酸的羧基 端(C端)固定在不溶性樹脂上，樹脂上結(jié)合的氨基酸的氨基端(N端)與有待連接的氨基 酸的羧基端進(jìn)行縮合反應(yīng)達(dá)到延長(zhǎng)肽鏈的固相合成法。多肽合成的順序是從多肽的羧基端 (C端)開始逐個(gè)氨基酸縮合連接向肽段的氨基端(N端)方向不斷延伸。當(dāng)進(jìn)行氨基酸的 羧基接合反應(yīng)時(shí)要將其氨基和側(cè)鏈基團(tuán)保護(hù)起來避免發(fā)生反應(yīng)，目前常用的有叔丁氧羰基 (Boc)保護(hù)法和芴甲氧羰基(Fmoc)保護(hù)法，因此每連接上一個(gè)氨基酸就要經(jīng)歷一次以結(jié)合 在固相載體上的氨基酸作為氨基的脫保護(hù)基并同過量的下一個(gè)有待連接的氨基酸的活化 羧基發(fā)生縮合反應(yīng)延長(zhǎng)肽鏈。通過這樣的步驟反復(fù)地多次地進(jìn)行下去，即達(dá)到縮合_ >洗 滌_ >去保護(hù)_ >中和和洗滌_ >下一輪縮合(再接上一個(gè)氨基酸)，直至達(dá)到所需要合成 的肽鏈長(zhǎng)度。多肽合成反應(yīng)完成后采用三氟乙酸TFA法將多肽從固相樹脂上裂解下來，經(jīng)過高 效液相色譜(HPLC)C18反相色譜層析分離柱分離純化后最終得到合成產(chǎn)物。基于以上的原 理，多肽合成可以是手工操作合成，也可以采用多肽合成儀經(jīng)過輸入合成序列和程序自動(dòng) 化合成取得。如今固相法已成為多肽和蛋白質(zhì)合成中的一個(gè)常用技術(shù)。這里需要說明的是4拷貝TKPR分支肽片段的合成方式是通過在賴氨酸上的2個(gè) 活化氨基上同時(shí)進(jìn)行氨基酸的縮合反應(yīng)，并在以后的氨基酸加成縮合反應(yīng)中同時(shí)得到延伸 達(dá)到同時(shí)合成多拷貝分支肽的目的。在合成直鏈多肽的過程中使用的是只有一個(gè)活化氨基的賴氨酸，其另一個(gè)氨基被保護(hù)起來所以不能發(fā)生縮合反應(yīng)。當(dāng)我們需要合成多拷貝肽段 時(shí)，選用兩個(gè)氨基均被活化可進(jìn)行縮合反應(yīng)的賴氨酸可以縮合連接上2個(gè)氨基酸，本文中 用>K-表示。如果被連接上的是2個(gè)賴氨酸(>K-)，又可以繼續(xù)往下連接4個(gè)氨基酸，依 次往下繼續(xù)進(jìn)行氨基酸加成縮合反應(yīng)就可以得到多拷貝分支多肽分子。多肽分子是一類具有生物活性的分子，它們的氨基酸序列和結(jié)構(gòu)決定了它們的生 物學(xué)作用。多肽合成目前成為常用技術(shù)并已有商業(yè)化的服務(wù)公司可根據(jù)客戶的需求提供合 成產(chǎn)物。關(guān)于多肽合成及純化的具體細(xì)節(jié)和原理我們?cè)诖瞬辉倮蹟ⅲ?qǐng)參見由盛樹力主編， 科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社(1998年)出版的“多肽激素的當(dāng)代理論和應(yīng)用”一書。本發(fā)明合成 制備分支肽的方式可參照以上固相合成方式但并不局限于此方式。實(shí)施例1Thr-Lys-Leu-Lys(TKLK)是一段具有免疫增強(qiáng)活性的寡肽，為達(dá)到制備出高效 免疫增強(qiáng)活性和抗腫瘤活性的多肽產(chǎn)物，嘗試設(shè)計(jì)和制備出一種含有4拷貝TKLK分支肽 (TKLK) 4 > K2 > K-G并將其與TKLK相比較。按照本發(fā)明所述，采用有機(jī)化學(xué)Fmoc保護(hù)的氨基酸固相合成法在多肽自動(dòng)合成 儀(ABI433A型)上自多肽的羧基端(C)向氨基端(N)合成，反應(yīng)完成后得到的肽樹脂采用 三氟乙酸TFA法將多肽從樹脂上裂解下來。采用Waters高效液相色譜C18反相色譜分離 柱分離純化，收集流出峰溶液，經(jīng)過冷凍干燥得到白色絮狀固體多肽產(chǎn)物。本實(shí)施例通過人工固相合成的方式得到多肽TKLK和4拷貝分支肽(TKLK)4 > K2 > K-G，合成肽產(chǎn)物經(jīng)高效液相色譜(HPLC)C18柱以流動(dòng)相三氟乙酸TFA/乙晴系統(tǒng)分離純 化可得到純度> 95. 0%的合成產(chǎn)物，經(jīng)冷凍干燥后得到白色絮狀合成產(chǎn)物，被密閉包裝后 放置在冰箱保存。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康募胺椒?實(shí)驗(yàn)?zāi)康谋容^和觀察合成產(chǎn)物(TKLK) 4 > K2_K_G與TKLK的生物學(xué)活性差異。實(shí)驗(yàn)方法取C57雌性小鼠，體重13-18g，給予小鼠右前肢腋部皮下接種B16小鼠黑色素瘤組 織勻漿物(lg組織8ml生理鹽水)0. 2ml。以《抗腫瘤藥效學(xué)指導(dǎo)原則(討論稿)》及《細(xì) 胞毒類抗腫瘤藥物非臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則》為指導(dǎo)，設(shè)置實(shí)驗(yàn)組、陽(yáng)性藥物組以及空白對(duì) 照組。小鼠接種腫瘤細(xì)胞后，稱量小鼠體重，按體重分級(jí)，隨機(jī)分組，接種腫瘤24h后給藥。實(shí)驗(yàn)分組空白對(duì)照組200ml注射用生理鹽水 200ul/次；陽(yáng)性對(duì)照組給予4mg/kg/次試驗(yàn)組給予4mg/kg/次給藥方式2次/周，連續(xù)4次皮下注射。實(shí)驗(yàn)觀察每隔一天稱量小鼠體重、用游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤長(zhǎng)短徑，計(jì)算腫瘤體積。 給藥結(jié)束后，頸部脫白處死動(dòng)物，剝離取出瘤塊稱重，依據(jù)瘤塊重量和測(cè)量體積評(píng)價(jià)藥物療 效。二、藥效學(xué)評(píng)價(jià) 單拷貝TKLK和4拷貝分支肽(TKLK) 4 > K2 > K-G對(duì)BL6-B16小鼠黑色素移植瘤 的生長(zhǎng)都顯示出明顯的抑制效果，但是4拷貝TKLK分支肽的抑瘤效果要明顯高于單拷貝的TKLK,實(shí)驗(yàn)結(jié)果合成產(chǎn)物對(duì)小鼠黑色素細(xì)胞瘤生長(zhǎng)的抑制 按照腫瘤體積計(jì)算，4拷貝分支肽得出的抑瘤率(47.7% )比單拷貝寡肽 (36. 6% )明顯高出 11. 1%。按照腫瘤重量計(jì)算，4拷貝分支肽得出的抑瘤率(45.8% )比單拷貝寡肽 (34. 5% )明顯高出 11. 3%。各給藥組在給藥后均未見急性毒性反應(yīng)；各組動(dòng)物活動(dòng)正常，與對(duì)照組相比體重 曲線增長(zhǎng)一致；試驗(yàn)期間各試驗(yàn)組動(dòng)物未發(fā)生死亡；提示受試藥物無明顯毒副作用。實(shí)施例二根據(jù)本發(fā)明提出的4拷貝分支肽設(shè)計(jì)通式(XA-Xb-XC-XD-X》4 > (K_X2)2 > K_X3制 備出(TKLK)4 > K2 > K-G，其結(jié)構(gòu)如 按照本發(fā)明所述，采用有機(jī)化學(xué)Fmoc保護(hù)的氨基酸固相合成法在多肽自動(dòng)合成 儀(ABI433A型)上自多肽的羧基端(C)向氨基端(N)合成，反應(yīng)完成后得到的肽樹脂采用 三氟乙酸TFA法將多肽從樹脂上裂解下來。采用Waters高效液相色譜儀C18反相色譜柱 以流動(dòng)相TFA/乙晴系統(tǒng)分離純化，可得到純度> 98. 0%的合成產(chǎn)物，經(jīng)過冷凍干燥得到白 色絮狀固體多肽產(chǎn)物。本實(shí)施例通過人工固相合成的方式分別得到單拷貝TKLK寡肽和4拷貝分支肽 (TKLK) 4 > K2 > K-G，純度 > 95. 0% 的合成產(chǎn)物。實(shí)驗(yàn)方法新城疫病毒(Newcastle Disease Virus, NDV)能夠與雞紅細(xì)胞發(fā)生凝集現(xiàn)象，這 是一種特異性的抗體中和反應(yīng)，其原理是根據(jù)病毒的血凝素可凝集紅細(xì)胞，但若先用特異 性抗體與病毒作用，再加入紅細(xì)胞，則不出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集，稱為血凝抑制試驗(yàn)(HI)，檢測(cè)所 用的抗血清稀釋的最高倍數(shù)即是抗體的滴度。待測(cè)抗體的滴度越高說明免疫的效果越好。 HI方法具有以下優(yōu)點(diǎn)①敏感性強(qiáng)，可以檢測(cè)到微量的抗體，結(jié)果也較為準(zhǔn)確，是較敏感的血清學(xué)反應(yīng)之一；②特異性強(qiáng)，病毒凝集紅細(xì)胞只能被特異的抗體所抑制；③檢測(cè)速度快， 1次HI試驗(yàn)只需2h左右，即可判定結(jié)果；④HI試驗(yàn)對(duì)環(huán)境要求不高，操作簡(jiǎn)單，1次還可檢 測(cè)大量的樣品。因此細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)(HI)已經(jīng)成為一種常用于檢測(cè)禽類動(dòng)物血清抗體 的檢測(cè)方法，具體細(xì)節(jié)請(qǐng)參見由郭鑫主編，中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社2007年出版的“動(dòng)物免疫 學(xué)實(shí)驗(yàn)教程”。試驗(yàn)?zāi)康牟捎秒u新城疫滅活疫苗在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雛雞身上觀察單拷貝tklk寡肽與4拷貝分支 肽(tklk)4 >k2> k-g對(duì)疫苗免疫活性的影響并做比較。材料與方法選取1月齡左右的SPF雞分為5組，每組10只。在雞的胸部肌肉接種雞新城疫滅 活疫苗(La Sota 株)0. 3ml。試驗(yàn)組空白組每只雞胸部肌肉注射0. 3ml生理鹽水。正常組每只雞胸部肌肉接種疫苗0. 3ml。陽(yáng)性組每只雞胸部肌肉接種疫苗0.3ml，含有合成產(chǎn)物TKLK lug。試驗(yàn)組每只雞胸部肌肉接種疫苗0. 3ml，含有合成產(chǎn)物(TKLK) 4 > K2 > K_G lug。飼養(yǎng)方式各組同時(shí)飼養(yǎng)在隔離器內(nèi)。采血接種后第21天采血，分離血清進(jìn)行HI試驗(yàn)。結(jié)果檢測(cè)結(jié)果表明疫苗中分別添加了合成產(chǎn)物TKLK和(TKLK)4 > K2 > K_G，試驗(yàn)組 (TKPR)4 > K2 > K的HI抗體滴度比TKLK組明顯提高，具體結(jié)果見下表表2:第21日HI結(jié)果
編號(hào)12345678910均值J空白組0000100010<1正常組24435242433.3試驗(yàn)組135546343454.2試驗(yàn)組243467634654.8結(jié)果評(píng)價(jià)以上試驗(yàn)結(jié)果顯示合成產(chǎn)物4拷貝分支肽(TKLK)4 >K2 > K-G與TKLK與疫苗聯(lián) 用均可提高疫苗的抗體平均滴度，但(TKLK)4 >K2> K-G比TKLK的作用更加明顯。在試驗(yàn) 過程中受試動(dòng)物行動(dòng)未見異常，提示合成產(chǎn)物4拷貝分支肽(TKLK) 4>K2> K-G和TKLK均 無明顯毒副作用，(TKLK)4 >K2> K-G比TKLK的使用免疫增強(qiáng)效果更加顯著。總結(jié)以上2個(gè)實(shí)施例證明，按照本發(fā)明設(shè)計(jì)通式制備出的(TKLK)4 >K2> K-G，其分支 肽的羧基端(C端)的甘氨酸G時(shí)，&所代表的任意氨基酸的數(shù)目為1，說明在本通式 4分支肽的羧基端連接氨基酸不僅沒有消除單拷貝寡肽TKLK的作用，而且更加提高了單拷 貝寡肽TKLK原有的生物活性。按照此通式(XfXfXe-Xe-Xih〉(K-X2)2>K-X3設(shè)計(jì)制備的肽類分子具有免疫增強(qiáng)活性和抗腫瘤活性，其可單獨(dú)成為藥物原料或通過加入制劑輔料可 以制備成為臨床用抑制腫瘤生長(zhǎng)的藥物或臨床用免疫增強(qiáng)劑。按照本發(fā)明設(shè)計(jì)通式產(chǎn)生的4拷貝分支肽經(jīng)過如下的化學(xué)修飾可應(yīng)用于免疫增 強(qiáng)作用或抗腫瘤領(lǐng)域1.所述的4拷貝分支肽所帶有的羥基可形成但不限于所形成的醚、酯、苷或甙等 的化合物。2.所述的4拷貝分支肽所帶有的巰基可形成但并不限于所形成的硫醚、硫苷或與 半胱氨酸或含半胱氨酸的肽所形成的含二硫鍵的化合物。3.所述的4拷貝分支肽所帶有的氨基可形成但不限于所形成的酰化物，烴化物、 與糖類物質(zhì)所形成的苷類物質(zhì)等。4.所述的4拷貝分支肽所帶有的羧基可形成但不限于所形成的酯、酰胺類化合物等。5.所述的4拷貝分支肽所帶有的亞氨基可形成但不限于所形成的苷、酰化物、烴 化物等。6.所述的4拷貝分支肽所帶有的酚羥基可形成但不限于所形成的酯、醚、苷、甙類 化合物，以及與有機(jī)堿或無機(jī)堿所形成的鹽類化合物。7.所述的4拷貝分支肽與有機(jī)酸或無機(jī)酸所形成的鹽類化合物。8.所述的4拷貝分支肽與金屬離子所形成的配合物、絡(luò)合物或螯合物。9.所述的4拷貝分支肽所形成的水合物或溶劑物。本發(fā)明所述的4拷貝分支肽(TKLK)4 > K2 > K-G經(jīng)過以上任意一種或同時(shí)含有多 種化學(xué)修飾產(chǎn)生的衍生物作為一種臨床用抑制腫瘤生長(zhǎng)的藥物、一種臨床用及動(dòng)物用免疫 增強(qiáng)劑。
權(quán)利要求
一種4拷貝分支肽，其特征在于，該多肽的結(jié)構(gòu)通式為(XA-XB-XC-XD-X1)4＞(K-X2)2＞K-X3，其中，XA代表極性不荷電氨基酸；XB和XD代表堿性氨基酸；Xc代表非極性脂肪族氨基酸；K代表具有2個(gè)活化氨基可供進(jìn)行氨基酸加成縮合反應(yīng)的賴氨酸(Lys，用＞K-表示)；X1、X2和X3分別代表由0-5個(gè)任意氨基酸組成的氨基酸序列，X1、X2和X3分別代表氨基酸序列可相同也可以不相同。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的4拷貝分支肽，其特征在于，所述的極性不荷電氨基酸是絲氨 酸(Ser，S)、蘇氨酸(Thr，Τ)、半胱氨酸(Cys，C)、脯氨酸(Pro，P)、谷氨酰胺(Asn，N)或天 門冬酰胺(Gin, Q)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的4拷貝分支肽，其特征在于，所述的堿性氨基酸是組氨酸 (His, H)、賴氨酸(Lys, K)或精氨酸(Arg，R)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的4拷貝分支肽，其特征在于，所述的非極性脂肪族氨基酸是甘 氨酸(Gly，G)、丙氨酸(Ala，Α)、纈氨酸(Val，V)、亮氨酸(Leu，L)、異亮氨酸(lie，I)或蛋 氨酸(Met5M)0
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的4拷貝分支肽，其特征在于，Xa*蘇氨酸(Thr，T)，XB為賴氨 酸(Lys，K)，Xc為亮氨酸(Leu，L)，Xd為賴氨酸(Lys，K)，X3為甘氨酸(Gly，G)，結(jié)構(gòu)式表示 為(TKLK)4 > K2 > K-G。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5所述的4拷貝分支肽，其特征在于所述的多肽所帶有的羥基可形 成但不限于所形成的醚、酯、苷或甙等的化合物。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-5所述的4拷貝分支肽，其特征在于所述的多肽所帶有的巰基可形 成但不限于所形成的硫醚、硫苷，或與半胱氨酸或含半胱氨酸的肽所形成的含有二硫鍵的 化合物。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-5所述的4拷貝分支肽，其特征在于所述的多肽所帶有的氨基可形 成但不限于所形成的酰化物、烴化物、與糖類物質(zhì)所形成的苷類物質(zhì)等。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-5所述的4拷貝分支肽，其特征在于所述的多肽所帶有的羧基可形 成但不限于所形成的酯、酰胺類化合物等。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-5所述的4拷貝分支肽，其特征在于所述的多肽所帶有的亞氨基可 形成但不限于所形成的苷、酰化物、烴化物等。
11.根據(jù)權(quán)利要求1-5所述的4拷貝分支肽，其特征在于所述的多肽所帶有的酚羥基可 形成但不限于所形成的酯、醚、苷、甙類化合物，與有機(jī)堿或無機(jī)堿所形成的鹽類化合物。
12.根據(jù)權(quán)利要求1-5所述的4拷貝分支肽，其特征在于所述的多肽與有機(jī)酸或無機(jī)酸 所形成的鹽類化合物。
13.根據(jù)權(quán)利要求1-5所述的4拷貝分支肽，其特征在于所述的多肽與金屬離子所形成 的配合物、絡(luò)和物或螯合物。
14.根據(jù)權(quán)利要求1-5所述的4拷貝分支肽，其特征在于該多肽所形成的水合物或溶劑物。
15.一種臨床用抑制腫瘤生長(zhǎng)的藥物，其特征在于該藥物包括權(quán)利要求1-14任一項(xiàng)所述的4拷貝分支肽及其化學(xué)衍生物。
16.一種臨床用免疫增強(qiáng)劑，其特征在于該免疫增強(qiáng)劑包括權(quán)利要求1-14任一項(xiàng)所述 的4拷貝分支肽及其化學(xué)衍生物。
17.一種動(dòng)物用免疫增強(qiáng)劑，其特征在于該免疫增強(qiáng)劑包括權(quán)利要求1-14任一項(xiàng)所述 的4拷貝分支肽及其化學(xué)衍生物。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種4拷貝分支肽及其應(yīng)用。該分支肽的結(jié)構(gòu)通式為(XA-XB-XC-XD-X1)4＞(K-X2)2＞K-X3，該分支肽在動(dòng)物試驗(yàn)中顯示出明顯的抑制腫瘤生長(zhǎng)和免疫增強(qiáng)作用，具有開發(fā)成為臨床抗腫瘤藥物和免疫增強(qiáng)劑的潛力。
文檔編號(hào)C07K7/02GK101838306SQ20091008029
公開日2010年9月22日 申請(qǐng)日期2009年3月17日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月17日
發(fā)明者韓蘇 申請(qǐng)人:天津中天博奧生物技術(shù)有限公司