專利名稱：一種蟾蜍噻嚀的提取方法
技術領域：
本發明涉及一種提取方法，具體涉及一種蟾蜍噻嚀的提取方法。
背景技術：
蟾皮為蟾蜍科動物中華大蟾蜍Bufo bufo garfgarizans Cantor或黑眶蟾蜍 Bufomelanostictus Schneider的干燥全皮。干蟾皮具有清熱解毒、消腫止痛、活血化瘀、 軟堅散結的作用，主要含有蟾毒靈(buffalin)、脂蟾毒配基(resibufogenin)、華蟾酥毒基 (cinobufagin)等內酯類成分,蟾蜍色胺(bufotenldine)、5_輕色胺(serotonine)、蟾蜍噻口寧(bufothionine)、去氫蟾餘色氨氫溴酸(dehydrobufoteinine hydrobromide)等水溶性蟾毒色胺類成分，蟾蜍環酰胺B、蟾蜍環酰胺C、蟾蜍環酰胺D等其他胺類成分，膽甾醇、 7 α -羥基膽甾醇、7 β -羥基膽甾醇、β -谷甾醇、麥角甾醇及菜油甾醇等甾族化合物、以及氨基酸、有機酸、腎上腺素、嗎啡、多肽及多糖等其他成份。目前，以蟾皮水溶性成分為主開發的制劑主要有華蟾素注射液、華蟾素片劑、華蟾素口服液等。這些制劑在提取分離純化的過程中，許多內酯類成分都被除去了，而含量較高的蟾蜍噻嚀可能是華蟾素起作用的主要成分。以往華蟾素僅僅對總生物堿進行含量控制，而大量蟾蜍噻嚀并沒有進行有效控制。采用高效液相色譜法測定蟾蜍噻嚀的含量，作為華蟾素的成分控制指標，不失為一種較好的方法。由于采用高效液相色譜法測定蟾蜍噻嚀的含量需要用蟾蜍噻嚀作為對照，因此如何提取蟾蜍噻嚀單體并達到含量測定對照品的要求已成為關鍵。在干蟾皮藥材中，蟾蜍噻嚀的得率是較高的，大約20kg藥材中可以提取500mg， 遠遠超過蟾蜍環酰胺B(10 mg)、蟾蜍環酰胺C (6mg)、去氫蟾蜍色氨氫溴酸鹽((20 mg)等其他成份。我們進行了相關文獻檢索發現，從蟾皮中提取分離蟾蜍噻嚀單體的方法尚未進行報道，本發明提供了一種蟾蜍噻嚀單體的提取分離方法。

發明內容
本發明的目的是提供一種從蟾皮中提取蟾蜍噻嚀的方法，該方法產品純度和收率較高，工藝成熟，成本低，易于大量提取蟾蜍噻嚀。本發明提供的所述蟾蜍噻嚀分子式=C12H14N2O4S,分子量282. 07，所述蟾蜍噻嚀結構式如下
權利要求
1. 一種蟾蜍噻嚀的提取方法，其中所述蟾蜍噻嚀的分子式C12H14N2O4S,分子量 282. 07，所述蟾蜍噻嚀的結構式如下
2.水提物上大孔樹脂柱，用水洗脫，之后用下述有機溶劑中的一種或多種與水作為洗脫劑進行梯度洗脫乙醇、甲醇和丙酮，收集洗脫部分，減壓濃縮，干燥，經硅膠柱層析、ODS 柱層析分離，合并蟾蜍噻嚀流份，結晶，得蟾蜍噻嚀純品。
3.如權利要求I所述的方法，其特征在于所述的蟾皮原料為中華大蟾蜍Bufobufo gargarizans Can tor 0
4.如權利要求I所述的方法，其特征在于水提取次數為兩次，提取時間第一次45分鐘，第二次30分鐘，浸泡時間60分鐘，加水量第一次為蟾皮5 6倍，第二次為蟾皮6 7 倍。
5.如權利要求I所述的方法，其特征在于乙醇沉淀次數為兩次，沉淀時間第一次為24 小時，第二次為48小時，乙醇濃度第一次為60%，第二次為85%。
6.如權利要求I所述的方法，其特征在于所述的大孔樹脂為下述類型的大孔樹脂 SP207、SP825、HP-20、HP-2MG、XAD1600, D-101、AB-8、MCI 或 HPD。
7.如權利要求I所述的方法，其特征在于所述的大孔樹脂的徑長比為1:5 1:50;大孔樹脂的用量為上樣量的30 130倍。
8.如權利要求I所述的方法，其特征在于將粗提物上大孔樹脂柱的上樣方法為濕法上樣，以O. I 5倍柱體積/小時的流速上樣進柱,上樣溫度為10 60°C。
9.如權利要求I所述的方法，其特征在于所述水的用量為I 8倍柱體積，用水洗脫的流速為I 5倍柱體積/小時，梯度洗脫的溫度為10 60°C。
10.如權利要求I所述的方法，其特征在于所述的梯度洗脫的洗脫梯度在體積比0% 有機溶劑和體積比為100%有機溶劑的濃度范圍內選擇，每個梯度的洗脫液的用量為5 20 柱體積，洗脫的流速為I 5倍柱體積/小時，梯度洗脫的溫度為10 60°C。
11.如權利要求I所述的方法，其特征在于所述的大孔樹脂為SP825大孔樹脂，所述的梯度洗脫中，洗脫梯度依次為5%乙醇水溶液，40%乙醇水溶液，純乙醇，收集40%乙醇水溶液的洗脫部分；或者，所述的大孔樹脂為DlOl型大孔樹脂，所述的梯度洗脫中，洗脫梯度依次為5%丙酮水溶液，40%丙酮水溶液，純丙酮，收集40%丙酮水溶液的洗脫部分；或者，所述大孔樹脂為HP-20大孔樹脂，所述的梯度洗脫中，洗脫梯度依次為20%甲醇水溶液，40%甲醇水溶液,純甲醇,收集20%甲醇水溶液的洗脫部分，以及部分40%甲醇水溶液的洗脫部分；或者所述大孔樹脂為SP207大孔樹脂，所述的梯度洗脫中，洗脫梯度依次為10%甲醇水溶液，50%甲醇水溶液,純甲醇,收集10%甲醇水溶液的洗脫部分，以及部分50%甲醇水溶液的洗脫部分；百分比為體積百分比。
12.如權利要求I所述的方法，其特征在于所得大孔樹脂洗脫液經硅膠柱層析，收集以體積比為80:20:2. 5的氯仿、甲醇、水為展開劑，硅膠薄層層析板上Rf值為O. 2 O. 5的洗脫部分。
13.如權利要求I所述的方法，其特征在于所得硅膠柱層析洗脫液經ODS柱層析，依次用純水，5% 10%乙腈水溶液，50%乙腈水溶液梯度洗脫，收集5% 10%乙腈水溶液洗脫部分，結晶，得到蟾蜍噻嚀純品。
全文摘要
本發明公開了一種提取蟾蜍噻嚀的方法，具體包括如下步驟取干蟾皮洗凈，加水5～8倍，煎煮二次，第一次45分鐘，第二次30分鐘，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.1～1.2(85±5℃)，冷卻至40℃，加乙醇使含醇量達60%，攪勻，靜置24小時，取上清液回收乙醇至無醇味，加乙醇使含醇量達85%，攪勻，靜置48小時，濾過，回收乙醇至稠膏。水提物上大孔樹脂柱，用水洗脫，之后用下述有機溶劑中的一種或多種與水作為洗脫劑進行梯度洗脫乙醇、甲醇和丙酮，收集洗脫部分，減壓濃縮，干燥，經硅膠柱層析、ODS柱層析分離，合并蟾蜍噻嚀流份，結晶，得蟾蜍噻嚀純品。本發明所得蟾蜍噻嚀純度和收率較高，且工藝簡單，易于大量生產。
文檔編號C07D471/06GK102603742SQ20121003950
公開日2012年7月25日 申請日期2012年2月22日 優先權日2012年2月22日
發明者羅川, 高波 申請人:安徽金蟾生化股份有限公司