專利名稱：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2, 4-二磺基苯)-2h-四唑單鈉鹽的合成方法
技術領域：
本發明屬于化學合成技術領域，涉及ー種四氮唑單鈉鹽WST-8的合成方法。
背景技術：
WST-8，化學名為2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2，4_ ニ磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽，是細胞活性檢測劑CCK-8試劑盒中的ー種主要成分。CCK-8試劑盒是日本Dojindo研究所開發的用于檢測細胞増殖、細胞毒性的試劑盒。該試劑盒使用方便、靈敏度高、重復性好、無放射性。但該試劑盒價格昂貴，其主要成分WST-8市售價格高。目前報道的WST-8的主要合成方法如下
I、以苯甲醛_2，4- ニ磺酸鈉和對硝基苯肼作原料，生成腙；腙與2-甲氧基-4-硝基重氮鹽偶合得到甲臜；再在酸性條件下，經亞硝基正丁酯氧化關環，得WST-8。總收率20. 4%(.Talanta. 1997，44，1299- 1305)。
權利要求
1.2- (2-甲氧基-4-硝苯基)-3- (4-硝苯基)-5- (2，4- 二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽的合成方法，其特征在于，該方法通過下列步驟實現
2.根據權利要求I所述的2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2，4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽的合成方法，其特征在于，步驟(I)所用的有機溶劑為甲醇，乙醇，異丙醇。
3.根據權利要求I所述的2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2，4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽的合成方法，其特征在于，步驟(I)中化合物I緩慢滴加到反應體系中，投料摩爾比為化合物I :化合物2 = I: Γ 2。
4.根據權利要求I所述的2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2，4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽的合成方法，其特征在于，步驟(I)反應溫度為40 70°C。
5.根據權利要求I所述的2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2，4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽的合成方法，其特征在于，步驟(2)反應溫度為-10 15°C。
6.根據權利要求I所述的2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2，4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽的合成方法，其特征在于，步驟(2)中亞硝酸鈉緩慢滴加到反應體系中，投料摩爾比為亞硝酸鈉4_硝基-2-甲氧基苯胺= 1.05: I。
7.根據權利要求I所述的2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2，4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽的合成方法，其特征在于，步驟(3)加料時的反應溫度為-10 5°C,加畢攪拌廣3h，改至室溫。
8.根據權利要求I所述的2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2，4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽的合成方法，其特征在于，步驟(3)所用的堿為碳酸鈉、碳酸鉀、氫氧化鈉或氫氧化鉀。
9.根據權利要求I所述的2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2，4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽的合成方法，其特征在于，步驟(3)中堿和重氮鹽同步滴加到反應體系中，投料摩爾比為堿重氮鹽化合物3 = Γ 5: Γ 1.5: I。
10.根據權利要求I所述的2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2，4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽的合成方法，其特征在于，步驟(4)中投料摩爾比為化合物4 =NBS =I: Γ 5。
全文摘要
本發明公開了一種2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽(WST-8)的合成方法，屬于化學合成技術領域。該合成方法以苯甲醛-2,4-二磺酸鈉和對硝基苯肼為原料，N-溴代琥珀酰亞胺(NBS)作氧化劑，經四步反應得到WST-8。操作安全簡便，易于后處理，避免了使用氯氣、亞硝酸正丁酯等毒性較大、價格較高的化合物，四步反應總收率達34.4%，有利于工業化生產。
文檔編號C07D257/04GK102838556SQ20121035873
公開日2012年12月26日 申請日期2012年9月25日 優先權日2012年9月25日
發明者劉宏民, 張恩, 何慧麗, 徐錦梅, 賀鵬, 鄭甲信 申請人:鄭州大學