一種提高α-熊果苷產量的方法
【專利摘要】本發明涉及利用大孔吸附樹脂固定化對苯二酚，通過野油菜黃單胞菌（Xanthomonas?campestris），CGMCC?NO.1243發酵催化固定化對苯二酚與雙糖合成α-熊果苷的制備方法。它包括固定化對苯二酚的制備，微生物發酵，反應條件優化和產物分離提取等工藝步驟。采用本發明生產α-熊果苷，每升發酵液α－熊果苷產量為20-235g，比直接用對苯二酚作為反應物的產量最大提高了14倍，對苯二酚轉化率達到90.5-95.2%，經產物分離純化后，產品純度可達99.5％以上。本發明通過對苯二酚固定化，提高了菌體對對苯二酚的耐受度，簡化了產物后續分離純化工藝，減少了體系含酚廢水的排放；具有產量高、生產工藝簡單、生產成本低、環境友好等優點，大大降低了α－熊果苷生產成本低，為大規模低成本生產α－熊果苷奠定了基礎。
【專利說明】一種提局α _熊果苷產量的方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于生物【技術領域】，涉及利用大孔吸附樹脂固定化對苯二酚，通過野油菜黃單胞菌(Xanthomonas campestris)CGMCC N0.1243發酵催化固定化對苯二酌.與雙糖合成α-熊果苷的制備方法。
【背景技術】
[0002]α 一熊果苷具有顯著抑制酪氨酸酶的活性，可以減少酪氨酸酶在皮膚中的沉積，對皮膚有漂白、防色變和祛斑的功效。在比較α-熊果苷與其同分異構體β-熊果苷的美白效果時，Kazuhisa Sugimotod等通過人體黑素瘤細胞的實驗,發現α-熊果苷的美白效果是β_熊果苷的10倍以上。目前，α —熊果苷是國際公認的并正在極力推廣的高效、安全的美白劑，是美白、祛斑、防曬化妝品理想的添加成份。
[0003]作為α —熊果苷合成反應物的對苯二酚具有殺菌作用，它可以通過降低細胞內巰基水平及升高活性氧水平改變細胞內氧化還原狀態而引起細胞凋亡。當α-熊果苷合成反應體系中對苯二酚濃度超過一定量時，會對菌體產生抑制作用，導致菌體催化能力下降，不利于α —熊果苷的生產。因此，研究一種既可以提高反應體系對苯二酚濃度又可以降低其毒害作用的方法， 成為大規模低成本生產α —熊果苷的必然選擇。
[0004]固定化(immobilized)技術是用化學或物理手段將物體定位于限定空間區域的一門新興技術，在化工、發酵、能源、醫藥等行業應用廣泛。大孔吸附樹脂是一類具有大孔結構的高分子吸附樹脂，有良好的大孔網狀結構和較大的比表面積，可以通過物理吸附從水溶液中有選擇地吸附有機物，具有物理化學穩定性高、比表面積大、吸附容量大、選擇性好、吸附速度快、解吸條件溫和、再生處理方便、使用周期長、宜于構成閉路循環、節省費用等諸多優點，已在環保、食品、醫藥等領域得到了廣泛的應用。
[0005]目前，由于利用化學合成方法很難合成α—熊果苷，所以關于α —熊果苷的制備方法主要通過生物轉化法來實現。如今關于α —熊果苷生產的報道主要有日本KohtaroKirimura，國內張鵬、李群良、姜岷、龐宗文及杜剛等。但這些方法均存在以下一些問題:
[0006]一、催化劑(菌體或酶)對對苯二酚的耐受度不高，導致α —熊果苷的產量也不聞;
[0007]二、α-熊果苷轉化率不高，導致原材料利用率不高；
[0008]三、產物α —熊果苷后續分離純化工藝復雜、設備投資及操作費用均較大；
[0009]四、生產過程有含對苯二酚廢水產生，污染環境。
[0010]為了克服這些問題，固定化對苯二酚是最好的解決辦法。通過把對苯二酚固定在大孔吸附樹脂上，使得發酵液溶液中的對苯二酚濃度基本為零，菌體的生長代謝將不受任何影響，可以更好地催化合成α —熊果苷；此外，把對苯二酚固定在大孔吸附樹脂上，可以大大提高催化劑對對苯二酚的耐受度，提高單位體積發酵液中對苯二酚的濃度，從而大大提高α —熊果苷的產量；再者，待反應結束后，產物和未反應的對苯二酚依然固定在樹脂上，產物后續處理只需用簡單過濾即可把產物和發酵液進行有效分離，大大簡化了后續產物分離純化工藝及設備投資，并減少了發酵液中含對苯二酚廢水排放，對環境的污染基本沒有。

【發明內容】

[0011]本發明的目的在于克服現有技術的缺陷，利用固定化對苯二酚提高菌體對對苯二酚耐受度，提高單位體積發酵液中對苯二酚的濃度，進而提高α —熊果苷的產量。其中固定化對苯二酚即采用大孔吸附樹脂吸附法對對苯二酚進行固定化，并用此固定化對苯二酚作為野油菜黃單胞菌CGMCC N0.1243催化合成α —熊果苷的反應物，在最佳反應條件下催化合成α —熊果苷。該方法具有提高菌體對對苯二酚的耐受度，簡化產物后續分離純化工藝，減少含酚廢水排放等優點，大大降低了 α —熊果苷生產成本低，為大規模低成本生產α一熊果苷奠定了基礎。
[0012]本發明的整體技術構思是:
[0013]利用大孔吸附樹脂固定化對苯二酹作為野油菜黃單胞菌(Xanthomonascampestris) CGMCC N0.1243催化合成α -熊果苷的反應物,該方法由下列工藝步驟組成:
[0014](I)固定化對苯二酚的制備；
[0015](2)野油菜黃單胞菌(Xanthomonas campestris) CGMCC N0.1243 的發酵,其中包括種子培養和發酵罐培養；
[0016](3)加入固定化對苯二酚和雙糖進行合成反應；
[0017](4) α-熊果苷的分離純化。
[0018]本發明的具體工藝步驟及工藝條件是:`[0019]步驟(1)中固定化對苯二酚的制備:
[0020]先制得質量百分比濃度為1-10%的對苯二酚水溶液；然后往每100ml對苯二酚水溶液加入IOg大孔吸附樹脂進行吸附；把吸附后的樹脂用濾紙過濾，然后用去離子水洗凈樹脂表面的對苯二酚溶液，制得吸附量為0.1-1g對苯二酚/g樹脂的固定化對苯二酚。
[0021]步驟(2)中野油菜黃單胞菌(Xanthomonascampestris) CGMCC N0.1243 的發酵:
[0022]挑取I環斜面保存的野油菜黃單胞菌(Xanthomonas campestris)CGMCC N0.1243菌株，加入到體積為250ml的液體培養基中，在溫度為25 — 40°C，轉速為50_200r/min搖床中培養10 — 24h后得一級種子液；再將一級種子液按I 一 10%接種量接種到體積為1000升的發酵罐中，在溫度為25 - 40°C，轉速為50-300r/min，通風量為0.l-2vvm條件下培養10 — 24h得二級種子液；以5 — 15%接種量接種到體積為10000升發酵罐中，在溫度為25 - 40°C，通風量為0.l-2vvm，轉速為50_300r/min條件下培養10 — 24h。
[0023]種子液及發酵罐培養基由下列重量份組分組成:
[0024]雙糖10-60份，蛋白胨1-10份，酵母粉1_5份，硫酸鎂1_2份，磷酸氫二鉀1_2份，氯化鈉1-2份和水1000份。
[0025]步驟(3)中的合成反應條件為:
[0026]往發酵罐中加入固定了對苯二酚的大孔吸附樹脂和雙糖，其中大孔吸附樹脂的質量濃度為IO-1OOg樹脂/I發酵液，雙糖物質量濃度為10-2000mmol/l ;在反應溫度為20-50°C，通風量為0.l-2vvm，轉速為50_300r/min條件下反應24_72h。
[0027]步驟(4)中α -熊果苷的分離純化包括以下三個步驟:[0028]①將發酵完成后的發酵液用濾紙過濾得到大孔吸附樹脂，然后用去離子水把樹脂表面的發酵液洗干凈；
[0029]②把經過①步驟的大孔吸附樹脂用體積百分比濃度為1-90%的酒精進行洗脫，收集洗脫液；
[0030]③把經過②步驟的洗脫液進行真空濃縮，在濃縮到產品處于飽和狀態時，放入溫度為0_4°C條件下進行結晶，晶體經干燥后得到純度為99.5%以上的α-熊果苷產品；真空濃縮溫度為40-60°C，結晶時間為2-12h。
[0031]本發明提供的利用大孔吸附樹脂固定化對苯二酚作為野油菜黃單胞菌(Xanthomonas campestris)CGMCC N0.1243催化合成α —熊果苷反應物的方法,適用于以非極性大孔吸附樹脂，弱極性大孔吸附樹脂，中等極性大孔吸附樹脂或極性大孔吸附樹脂為固定化介質的固定化對苯二酹的方法。
[0032]本發明所用的野油菜黃單胞菌(Xanthomonas campestris)CGMCC N0.1243已經在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏地址為北京市海淀區中關村北一條13號中國科學院微生物研究所(100080)，保藏號為野油菜黃單胞菌CGMCC N0.1243，保藏時間為2004年11月8日。
[0033]本發明所取得的技術進步在于:
[0034]本發明是通過以固定化對苯二酹作為野油菜黃單胞菌(Xanthomonascampestris) CGMCC N0.1243催化合成α —熊果苷的反應物，解決了直接用對苯二酚作為反應物所存在的發酵液中對苯二酚濃度不高導致α —熊果苷產量無法提高，產物后續分離工藝復雜，含酚廢水導致的環境污染等問題。利用本發明生產α —熊果苷的方法具有如下優點:
[0035](I)利用固定化對苯 二酚提高菌體對對苯二酚耐受度，提高單位體積發酵液中對苯二酚濃度，進而提高α —熊果苷的產率，降低α —熊果苷的生產成本，使大規模生產α一熊果苷成為了可能；
[0036](2)在反應結束后，產物是直接固定在樹脂上的，產物只需用簡單過濾即可把產物和發酵液進行有效分離，大大簡化了產物后續分離純化工藝及其設備投資；
[0037](3)在反應結束后，未反應的對苯二酚依然固定在樹脂上，發酵液中沒有對苯二酚的存在，從而減少含酚廢水排放，對環境不造成任何污染。
[0038]采用本發明生產的α —熊果苷具有產量高，工藝步驟簡單，生產成本低等優點，每升發酵液α —熊果苷產量為20-235g，比直接用對苯二酚作為反應物(ZL200410090980.5與ZL200510080364.6)的產量提高了 2_14倍，對苯二酚轉化率達到90.5-95.2%，經分離純化后，產品純度可達99.5%以上，具有重大工業化意義。
[0039]本發明的方法涉及的非極性大孔吸附樹脂，弱極性大孔吸附樹脂，中等極性大孔吸附樹脂或極性大孔吸附樹脂，既可用公知的方法合成，也可以是市場銷售產品。作為市場銷售的大孔吸附樹脂的代表例 子，例如下面所列舉的實施例只是為了更詳細地說明本發明，但本發明不受它們的任何限定。
【具體實施方式】
[0040]實施例1[0041](I)固定化對苯二酚的制備:
[0042]先制得質量百分比濃度為10%的對苯二酚水溶液；然后往每100ml對苯二酚水溶液加入 IOg 非極性大孔吸附樹脂如 D201、D4020、D4006、D3520、H1020、H103、H107、HPD-100、PS、NKA、X-5或YWDOlB進行吸附；把吸附后的樹脂用濾紙過濾，然后用去離子水洗凈樹脂表面的對苯二酚溶液，制得吸附量為Ig對苯二酚/g樹脂的固定化對苯二酚。
[0043](2)野油菜黃單胞菌(Xanthomonas campestris) CGMCC N0.1243 的發酵:
[0044]挑取I環斜面保存的野油菜黃單胞菌(Xanthomonas campestris)CGMCC N0.1243菌株，加入到體積為250ml的液體培養基中，在溫度為30°C，轉速為100r/min搖床中培養15h后得一級種子液；再將一級種子液按5%接種量接種到體積為1000升的發酵罐中，在溫度為30°C，轉速為100r/min，通風量為Iwm條件下培養15h得二級種子液；以10%接種量接種到體積為10000升發酵罐中，在溫度為30°C，通風量為lvvm，轉速為120r/min條件下培養15h。 [0045]種子液及發酵罐培養基由下列重量份組分組成:
[0046]蔗糖20份，蛋白胨5份，酵母粉2份，硫酸鎂1.5份，磷酸氫二鉀1份，氯化鈉1份和水1000份。
[0047](3)加入反應物進行合成反應:
[0048]往10000升發酵罐中加入固定了對苯二酚的非極性大孔吸附樹脂和蔗糖，其中樹脂的質量濃度為50g樹脂/I發酵液，蔗糖物質量濃度為lOOOmmol/1 ;在反應溫度為30°C，通風量為lvvm，轉速為150r/min條件下反應72h。在此反應條件下，對苯二酚轉化為α -熊果苷的轉化率達93.5%，每升反應液中含α —熊果苷115.6g。
[0049](4) α -熊果苷的分離純化:
[0050]①將發酵完成后的發酵液用濾紙過濾得到大孔吸附樹脂，然后用去離子水把樹脂表面的發酵液洗干凈；
[0051]②把經過①步驟的大孔吸附樹脂用體積百分比濃度為1-90%的酒精進行洗脫，收集洗脫液；
[0052]③把經過②步驟的洗脫液進行真空濃縮，在濃縮到產品處于飽和狀態時，放入溫度為0_4°C條件下進行結晶，晶體經干燥后得到純度為99.5%以上的α-熊果苷產品；真空濃縮溫度為50°C，結晶時間為12h。
[0053]實施例2
[0054](I)固定化對苯二酚的制備:
[0055]先制得質量百分比濃度為5%的對苯二酚水溶液；然后往每100ml對苯二酚水溶液加入IOg極性大孔吸附樹脂如NKA-9、NKA-1I, S_8、HPD-600或YWD06進行吸附；把吸附后的樹脂用濾紙過濾，然后用去離子水洗凈樹脂表面的對苯二酚溶液，制得吸附量為0.5g對苯二酚/g樹脂的固定化對苯二酚。
[0056](2)野油菜黃單胞菌(Xanthomonas campestris) CGMCC N0.1243 的發酵:
[0057]挑取I環斜面保存的野油菜黃單胞菌(Xanthomonas campestris)CGMCC N0.1243菌株，加入到體積為250ml的液體培養基中，在溫度為30°C，轉速為200r/min搖床中培養IOh后得一級種子液；再將一級種子液按10%接種量接種到體積為1000升的發酵罐中，在溫度為30°C，轉速為150r/min，通風量為0.5vvm條件下培養12h得二級種子液；以10%接種量接種到體積為10000升發酵罐中，在溫度為30°C，通風量為0.5vvm，轉速為150r/min條件下培養12h。
[0058]種子液及發酵罐培養基由下列重量份組分組成:
[0059]蔗糖40份，蛋白胨2份，酵母粉5份，硫酸鎂1份，磷酸氫二鉀1份，氯化鈉2份和水1000份。
[0060](3 )加入反應物進行合成反應:
[0061]往10000升發酵罐中加入固定了對苯二酚的非極性大孔吸附樹脂和蔗糖，其中樹脂的質量濃度為100g樹脂/I發酵液，蔗糖物質量濃度為lOOOmmol/1 ;在反應溫度為30°C，通風量為lvvm，轉速為200r/min條件下反應72h。在此反應條件下，對苯二酚轉化為α -熊果苷的轉化率達90.5%，每升反應液中含α —熊果苷111.9g。
[0062](4) α -熊果苷的分離純化:
[0063]①將發酵完成后的發酵液用濾紙過濾得到大孔吸附樹脂，然后用去離子水把樹脂表面的發酵液洗干凈；
[0064]②把經過①步驟的大孔吸附樹脂用體積百分比濃度為1-90%的酒精進行洗脫，收集洗脫液；
[0065]③把經過②步驟的洗脫液進行真空濃縮，在濃縮到產品處于飽和狀態時，放入溫度為0_4°C條件下進行結晶，晶體經干燥后得到純度為99.5%以上的α-熊果苷產品；真空濃縮溫度為50°C，結晶時間為12h。
[0066]實施例3`[0067](I)固定化對苯二酚的制備:
[0068]先制得質量百分比濃度為2%的對苯二酚水溶液；然后往每100ml對苯二酚水溶液加入IOg弱極性大孔吸附樹脂如AB-8或YWD03F進行吸附；把吸附后的樹脂用濾紙過濾，然后用去離子水洗凈樹脂表面的對苯二酚溶液，制得吸附量為0.2g對苯二酚/g樹脂的固
定化對苯二酹。
[0069](2)野油菜黃單胞菌(Xanthomonas campestris) CGMCC N0.1243 的發酵:
[0070]挑取I環斜面保存的野油菜黃單胞菌(Xanthomonas campestris)CGMCC N0.1243菌株，加入到體積為250ml的液體培養基中，在溫度為30°C，轉速為150r/min搖床中培養IOh后得一級種子液；再將一級種子液按2%接種量接種到體積為1000升的發酵罐中，在溫度為30°C，轉速為100r/min，通風量為1.5vvm條件下培養20h得二級種子液；以10%接種量接種到體積為10000升發酵罐中，在溫度為30°C，通風量為1.5vvm，轉速為150r/min條件下培養10h。
[0071]種子液及發酵罐培養基由下列重量份組分組成:
[0072]麥芽糖50份，蛋白胨5份，酵母粉5份，硫酸鎂1.5份，磷酸氫二鉀2份，氯化鈉I份和水1000份。
[0073](3)加入反應物進行合成反應:
[0074]往10000升發酵罐中加入固定了對苯二酚的非極性大孔吸附樹脂和麥芽糖，其中樹脂的質量濃度為100g樹脂/I發酵液，麥芽糖物質量濃度為400mmol/l ;在反應溫度為30°C，通風量為1.5vvm，轉速為200r/min條件下反應48h。在此反應條件下，對苯二酚轉化為α —熊果苷的轉化率達95.0%，每升反應液中含α —熊果苷47.0g。[0075](4) α -熊果苷的分離純化:
[0076]①將發酵完成后的發酵液用濾紙過濾得到大孔吸附樹脂，然后用去離子水把樹脂表面的發酵液洗干凈；
[0077]②把經過①步驟的大孔吸附樹脂用體積百分比濃度為1-90%的酒精進行洗脫，收集洗脫液；
[0078]③把經過②步驟的洗脫液進行真空濃縮，在濃縮到產品處于飽和狀態時，放入溫度為0_4°C條件下進行結晶，晶體經干燥后得到純度為99.5%以上的α-熊果苷產品；真空濃縮溫度為50°C，結晶時間為12h。
[0079]實施例4
[0080](I)固定化對苯二酚的制備:
[0081]先制得質量百分比濃度為5%的對苯二酚水溶液；然后往每100ml對苯二酚水溶液加入IOg中等極性大孔吸附樹脂如HPD-450或YWD04進行吸附；把吸附后的樹脂用濾紙過濾，然后用去離子水洗凈樹脂表面的對苯二酚溶液，制得吸附量為0.5g對苯二酚/g樹脂的固定化對苯二酹。
[0082](2)野油菜黃單胞菌(Xanthomonas campestris) CGMCC N0.1243 的發酵:
[0083]挑取I環斜面保存的野油菜黃單胞菌(Xanthomonas campestris)CGMCC N0.1243菌株，加入到體積為250ml的液體培養基中，在溫度為30°C，轉速為150r/min搖床中培養15h后得一級種子液；再將一級種子液按5%接種量接種到體積為1000升的發酵罐中，在溫度為30°C，轉速為150r/min，通風量為2vvm條件下培養12h得二級種子液；以10%接種量接種到體積為10000升發酵罐中`，在溫度為30°C，通風量為2vvm，轉速為150r/min條件下培養12h。
[0084]種子液及發酵罐培養基由下列重量份組分組成:
[0085]乳糖30份，蛋白胨10份，酵母粉5份，硫酸鎂1份，磷酸氫二鉀2份，氯化鈉2份和水1000份。
[0086](3)加入反應物進行合成反應:
[0087]往10000升發酵罐中加入固定了對苯二酚的非極性大孔吸附樹脂和乳糖，其中樹脂的質量濃度為50g樹脂/I發酵液，乳糖物質量濃度為500mmol/l ;在反應溫度為30°C，通風量為lvvm，轉速為150r/min條件下反應72h。在此反應條件下，對苯二酚轉化為α —熊果苷的轉化率達94.5%，每升反應液中含α —熊果苷58.4g。
[0088](4) α -熊果苷的分離純化:
[0089]①將發酵完成后的發酵液用濾紙過濾得到大孔吸附樹脂，然后用去離子水把樹脂表面的發酵液洗干凈；
[0090]②把經過①步驟的大孔吸附樹脂用體積百分比濃度為1-90%的酒精進行洗脫，收集洗脫液；
[0091]③把經過②步驟的洗脫液進行真空濃縮，在濃縮到產品處于飽和狀態時，放入溫度為0_4°C條件下進行結晶，晶體經干燥后得到純度為99.5%以上的α-熊果苷產品；真空濃縮溫度為50°C，結晶時間為12h。
【權利要求】
1.一種提高α -熊果苷產量的方法，其特征在于:用大孔吸附樹脂對對苯二酚進行固定化，然后用野油菜黃單胞菌(Xanthomonas campestris) CGMCC N0.1243發酵催化對苯二酚與雙糖合成α -熊果苷，該方法由下列工藝步驟組成: (O固定化對苯二酹的制備； (2)野油菜黃單胞菌(Xanthomonascampestris) CGMCC N0.1243的發酵,其中包括種子培養和發酵罐培養； (3)加入固定化對苯二酚和雙糖進行合成反應； (4)α-熊果苷的分離純化。
2.根據權利要求1所述的一種提高α-熊果苷產量的方法，其特征在于:所述的(I)步驟中固定化對苯二酚的制備是利用大孔吸附樹脂吸附法制備，其步驟是:先制得質量百分比濃度為1-10%的對苯二酚水溶液；然后往每100ml對苯二酚水溶液加入IOg大孔吸附樹脂進行吸附；把吸附后的樹脂用濾紙過濾，然后用去離子水洗凈樹脂表面的對苯二酚溶液，制得吸附量為0.1-1g對苯二酚/g樹脂的固定化對苯二酚。
3.根據權利要求1或2所述的一種提高α-熊果苷產量的方法，其特征在于:所述的用于固定化對苯二酚的大孔吸附樹脂為非極性大孔吸附樹脂，弱極性大孔吸附樹脂，中等極性大孔吸附樹脂或極性大孔吸附樹脂。
4.根據權利要求1所述的一種提高α-熊果苷產量的方法，其特征在于:所述的(2)步驟中的種子液及發酵罐培養基由下列重量份組分組成:雙糖10-60份，蛋白胨1-10份，酵母粉1_5份，硫酸鎂1-2份， 磷酸氫二鉀1-2份，氯化鈉1-2份和水1000份。
5.根據權利要求1或4所述的一種提高α-熊果苷產量的方法，其特征在于:種子液培養的工藝條件為培養溫度為25-40°C，搖床轉速為50-200r/min，發酵時間為10_24h ;發酵液培養的工藝條件為種子液接種量為1_10%，培養溫度為25-40°C，通風量為0.l-2vvm,攪拌轉速為50-300r/min，發酵時間為10_24h。
6.根據權利要求1所述的一種提高α-熊果苷產量的方法，其特征在于:所述的(3)步驟中的反應條件為:固定化對苯二酚大孔吸附樹脂質量濃度為IO-1OOg樹脂/L發酵液，雙糖物質量濃度為10-2000mmol/L，反應溫度為20_50°C，攪拌轉速為50_300r/min，反應時間為 24-72h。
7.根據權利要求1或6所述的一種提高α-熊果苷產量的方法，其特征在于:所述的雙糖為蔗糖，麥芽糖或乳糖。
8.根據權利要求1所述的一種提高α-熊果苷產量的方法，其特征在于:所述的(4)步驟中的α-熊果苷的分離純化包括以下三個步驟: ①將反應完成后的發酵液用濾紙過濾得到大孔吸附樹脂，然后用去離子水把樹脂表面的發酵液洗干凈； ②把經過①步驟的大孔吸附樹脂用體積百分比濃度為1-90%的酒精進行洗脫，收集洗脫液； ③把經過②步驟的洗脫液進行真空濃縮，在濃縮到產品處于飽和狀態時，放入溫度為0-4°C條件下進行結晶，晶體經干燥后得到純度為99.5%以上的α -熊果苷產品；真空濃縮溫度為40-60°C，結晶時間為2-12h。
9.野油菜黃單胞菌(Xanthomonascampestris) CGMCC N0.1243。
【文檔編號】C07H15/203GK103773827SQ201210399102
【公開日】2014年5月7日 申請日期:2012年10月19日 優先權日:2012年10月19日
【發明者】王芳, 劉春巧, 鄧利, 張鵬, 張淑榮, 譚天偉, 聶開立, 劉珞 申請人:北京化工大學