一種特立帕肽的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于藥物化學【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種肽的制備方法，具體涉及一種特立帕肽的制備方法。所述方法包括以下步驟：1）采用固相合成法，在固相載體上依照特立帕肽的氨基酸序列從碳端開始順次偶聯(lián)氨基酸，偶聯(lián)17位絲氨酸時采用Boc-Ser-OH為原料，其中使所述17位絲氨酸的游離羥基與16位天冬酰胺的羧基進行酯縮合，然后再依次偶聯(lián)其他氨基酸；2）裂解得到粗肽后，將所述17位絲氨酸和16位天冬酰胺之間的酯鍵轉(zhuǎn)換為酰胺鍵，得到特立帕肽粗肽溶液。本發(fā)明的特立帕肽的制備方法新穎，提高了特立帕肽的純度，且操作簡便實用，總收率高，純度高，成本低，利于工業(yè)化生產(chǎn)。
【專利說明】一種特立帕肽的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于藥物化學【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種肽的制備方法，具體涉及一種特立帕肽的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]特立帕肽(Teriparatide)為一種長鏈的多肽藥物,其肽序為:
【權(quán)利要求】
1.一種特立帕肽的制備方法，其包括以下步驟: 1)采用固相合成法，在固相載體上依照特立帕肽的氨基酸序列從碳端開始順次偶聯(lián)氨基酸，偶聯(lián)17位絲氨酸時采用Boc-Ser-OH為原料，并使所述17位絲氨酸的游離羥基與16位天冬酰胺的羧基進行酯縮合，然后再依次偶聯(lián)其他保護氨基酸； 2)裂解得到粗肽后，將所述17位絲氨酸和16位天冬酰胺之間的酯鍵轉(zhuǎn)換為酰胺鍵，得到特立帕肽粗肽溶液。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述固相載體為樹脂，優(yōu)選WangResin。
3.權(quán)利要求1的方法，其中所述酯縮合為DMAP催化的酯縮合。
4.權(quán)利要求1的方法，還包括純化所述特立帕肽粗肽溶液得到特立帕肽，優(yōu)選地，使用反向高效液相色譜純化所述特立帕肽粗肽溶液。
5.權(quán)利要求1的方法，其中步驟2)包括將所述粗肽在包含NH41、二甲硫醚、TFA和水的反應(yīng)體系I中進行第一步反應(yīng)，萃取洗滌得到固體后再在磷酸緩沖液中進行第二步反應(yīng)，其中所述水優(yōu)選為純化水。
6.權(quán)利要求5的方法，其中所述反應(yīng)體系I中NH41、二甲硫醚與所述粗肽的摩爾比分別為10-30:1和10-30:1，優(yōu)選分別為15-25:1和15-25:1，更優(yōu)選分別為20:1和20:1 ；TFA和水相對于每g粗肽的量分別為20-200ml和20-80ml，優(yōu)選分別為50_150ml和30_60ml，更優(yōu)選分別為IOOml和50ml ;在所述反應(yīng)體系I中進行所述第一步反應(yīng)的溫度為0°C _15°C，優(yōu)選0°C -10°C，更優(yōu)選0°C ;進行第一步反應(yīng)的時間為30-150分鐘，優(yōu)選60-120分鐘，更優(yōu)選90分鐘。
7.權(quán)利要求5的方法，其中所述磷酸緩沖液的pH為6.5-8.5，優(yōu)選7_8，更優(yōu)選7.4 ;所述磷酸緩沖液的濃度為lOOm.mol/L ;進行所述第二步反應(yīng)的時間為1_3小時，優(yōu)選2小時。
8.權(quán)利要求1-7任一項的方法，其中所述步驟I)包括以下步驟: a)采用固相合成法，使Fmoc-Phe-OH與固相載體經(jīng)反應(yīng)得到Fmoc-Phe-固相載體； b)使所述Fmoc-Phe-固相載體按順序依次偶聯(lián)其他氨基酸，一直到偶聯(lián)完17位的絲氨酸，得到肽樹脂A，其中偶聯(lián)所述17位絲氨酸采用Boc-Ser-OH為原料； c)使所述肽樹脂A中所述17位絲氨酸的游離羥基與Fmoc-Asn(Trt)-OH進行酯縮合，并脫除Fmoc保護基團，得到肽樹脂B ; d)使所述肽樹脂B按順序依次偶聯(lián)完其他全部保護氨基酸，并脫除Fmoc保護基團，得到肽樹脂C。
9.權(quán)利要求8的方法，其中，在步驟c)中，進行所述酯縮合的反應(yīng)體系包括所述肽樹脂 A、Fmoc-Asn (Trt) -OH、HOBt, DIC 和 DMAP，優(yōu)選地，F(xiàn)moc-Asn (Trt) -OH、HOBt 和 DIC 與所述肽樹脂A的摩爾比均為1-10: I，均更優(yōu)選3-6:1，均最優(yōu)選4: I ；DMAP與所述肽樹脂A的摩爾比為0.1-1.0:1，優(yōu)選0.3-0.6:1，更優(yōu)選0.4:1 ;進行所述酯縮合的反應(yīng)時間為1_3小時，優(yōu)選2小時。
10.權(quán)利要求8的方法，其中，在步驟c)中，進行所述酯縮合的反應(yīng)體系包括所述肽樹脂 A、Fmoc-Asn (Trt) -OH、HOAt, DIC 和 DMAP，優(yōu)選地，F(xiàn)moc-Asn (Trt) -OH、HOAt 和 DIC 與所述肽樹脂A的摩爾比均為1-10: I，均更優(yōu)選3-6:1，均最優(yōu)選4: I ；DMAP與所述肽樹脂A的摩爾比為0.1-1.0:1，優(yōu)選0.3-0.6:1，更優(yōu)選0.4:1 ;進行所述酯縮合的反應(yīng)時間為1_3小時，優(yōu)選2小時。
【文檔編號】C07K1/04GK103467595SQ201310403743
【公開日】2013年12月25日 申請日期:2013年9月6日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月6日
【發(fā)明者】朱日成, 宓鵬程, 馬亞平, 袁建成 申請人:深圳翰宇藥業(yè)股份有限公司