短亭山麥冬偏諾型甾體皂苷類新化合物分離鑒定及用途
【專利摘要】本發明涉及從短亭山麥冬地下部位分離出的五個偏諾型甾體皂苷類新化合物，由短葶山麥冬地下部位經粗提、大孔樹脂吸附、反復萃取、硅膠柱層析、Spheladex?LH-20柱層析、高效液相色譜儀分離所得，并采用1D和2D-NMR技術定鑒其結構，活性實驗證明5個化合物具有抗腫瘤作用。
【專利說明】短亭山麥冬偏諾型留體皂苷類新化合物分離鑒定及用途
【技術領域】
[0001]本發明涉及從短亭山麥冬地下部位中提取分離的一組五個偏諾型留體皂苷類新化合物、制備方法及在抗腫瘤方面的用途。
【背景技術】
[0002]短葶山麥冬為百合科(Lilaceae)山麥冬屬(Liriope)植物短葶山麥冬Liriopemuscari (Decne)Baily的干燥塊根,是《中國藥典》一部“山麥冬”項下收載的常用中藥。具有養陰潤肺，益胃生津的功效，可用于肺燥干咳，陰虛癆嗽，喉痹咽痛，津傷口渴，內熱消渴，心煩失眠，腸燥便秘”，廣泛用于心血管系統、呼吸系統疾病及糖尿病等疾病的治療。藥理實驗表明，短葶山麥冬藥材可以顯著延長小鼠存活時間、極顯著增加小鼠的脾臟重量、顯著增強小鼠的碳粒廓清作用。前期研究表明，短葶山麥冬中主要含留體皂苷類、萜類、酰胺生物堿類、脂肪酸類等化合物，其中留體皂苷是其主要生物活性成分。藥理作用表明，短葶山麥冬藥材中分離所得的留體皂苷類化合物DT-13為其主要活性成分，其能抑制肺癌、乳腺癌、黑色素瘤等腫瘤的生長和轉移，并發現其通過與蛋白NMMHC IIA結合，調節腫瘤轉移過程中的多種關鍵分子，進而抑制腫瘤。長期以來，在市場上，尤其是在福建省泉州市，惠安，仙游等地作為麥冬Ophiopogon japonicus的替代品使用。國內外學者對該植物化學成分研究報道甚少，僅有的文獻大部分集中在我們研究小組對其成分的研究上[(I)余伯陽，徐國鈞，平井康昭，等.湖北麥冬與短葶山麥冬的化學成分研究(II)[J].中國藥科大學學報，1988，19:296.(2)程志紅，吳餿，余伯陽，等.短亭山麥冬化學成分的研究[J].中草藥，2005，36 (6) =823-826.(3) Tian, Y.Q.；Kou, J.P.；Li, L.Z.；Yu,Β.Y.Ant1-1nflammatory effects of aqueous extract from Radix Liriope muscariand its major active fraction and component.Chin.J.Nat.Med.2011,9, 222-226.(4)Yu, Β.Y.；Hira1.Y.；Shoj1.J.；Xu, G.J.Comparative studies on the constituents ofophiopogonis tuber and its congeners.V1.Studies on the constituents of thesubterranean part of Li`riope spicata var.prolifera and L muscari，Chem.Pharm.Bull.1990,38,1931-1935.(5)Yu，B.Y.；Qiu S.X ；Zaw, KY.；Xu.G.J.；Hirai Yusuaki ；Shoji Junzo, et al.Steroidal glycosides from the subterranean parts of Liriopespicata var.prolifera.Phytochemistryl996,43,201-206.(6)Cheng,Z.H.；Wu,T.；AnnieBligh SW, Bashall Alan.;Yu，Β.Y.;cis_eudesmanesesquiterpene glycosides fromLiriope muscari and Ophiopogon japonicus.J.Nat.Prod.2004, 67,1761-3.(7) Cheng,Z.H.；Wu, T.；Yu, Β.Y.Studies on Chemical constituents of Liriope muscari (inChinese)，Zhong.Ca0.Ya0.2005，36，823-826.(8) Cheng, Z.H.；Wu, T.;Yu，Β.Y.Two newsteroidal glycosides from Liriope muscar1.Chin.Chem.Lett.2006, 17，31-34.(9)Jiang, T.;Qin，L.P.Research on the chemical constituents and pharmacologicalactivities of Liriope Lour, J.Chin.1ntergr.Med.2007, 5,465-469.(10) Jiang, Z.Ch.；Hua,h.；Li,Liu.L.；Qin,M.J.A new eudesmane sesquiterpene glycosides from Liriopemuscar1.Asia.N.P.R.2012，14，491-495.(Il)Li, W.J.;Cheng，X.L ;Liu，J.;Lin，R.Ch.；Wang, G.L1.Phenolic Compounds and Antioxidant Activities of Liriope muscari,Molecules.2012，17，1797-1808.(12)Xu，Q.；Wang, R.;Yu，B.Y.Effects of ruscogeninfucopyranoside on the delayed type hypersensitivity and inflamnatory reactions，J.Chin.Pharm.Univ.1993，24，98-101.(13) Yu, B.Y.;Yin，X.;Rong，Z.Y.;Yang，T.M.；Zhang, C.H.；Xu, G.J.Biological activities of ruscogeninl-0-[^ -D-glucoPyranosyI (I 一 2) ] [ 3-D-xyloPyranosyl (I 一 3) ] - 3-D-fucopyranoside from tuberous roots ofLiriope muscari (Decne.) Baily, J.Chin.Pharm.Univ.1994，25，286-288.(14) Wu, F.H.；Cao, J.S.； Jiang, J.Y.;Yu，B.Y.;Xu，Q.Ruscogenin glycoside (Lm-3) isolated fromLiriope muscari improves liver injury by dysfunctioning Iiver-1nfiltratinglymphocytes, J.Pharm.Pharmacol.2000，53，681-688.(15)Liu, J.L.;Chen，T.;Yu，B.Y.；Xu, Q.Ruscogenin glycoside(Lm-3)isolated from Liriope muscari inhibitslymphocyte adhesion to extracellular matrix,J.Pharm.Pharmacol.2002,54,959-966.(16)Tao, J.；Wang, H.Y.;Zhou，H.;Li，S.N.The saponin monomer of dwarf lilyturftuber， Lm-3, reduces L-type calcium currents during hypoxia in adult ratventricular myocytes, Life.Sc1.2005,77,3021-3030.(17)Tao, J.；Wang, H.Y.;Chen，J.D.；Xu, H.E.；Ii, S.N.Effects of saponin monomerl3of dwarf lilyturf tuber onL-type calcium currents in adult rat ventricular myocytes, Am.J.Chin.Med.2005,33，797-806.(18) Sun，L ;Lin，S.S.;Zhao，R.P.;Yu，B.Y.;Yuan，S.T.； Zhang, L Y.Thesaponin monomer of dwarf lilyturf tuber，DT—13，reduces human breast cancer celladhesion and migration during hypoxia via regulation of tissue factor， Biol.Pharm.Bull.2010，33，1192-1198.(19) Sun，L.;Lin，S.S.;Yu，B.Y.;Yuan，S.T.;Zhang，L Y.High-throughput screening model for tissue factor inhibitor and effectof DT_13on ant1-tumor metastasis，Chin.J.Nat.Med.2010，8，466-470.(20)Ma, S.T.；Kou,J.P.；Yu,B.Y.Safety evaluation of steroidal saponin DT_13isolated from thetuber of Liriope muscari(Decne.)Baily, Food.Chem.Toxicol.2011, do1:10.1016/j.fct.2011.06.022.]

【發明內容】
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[0003]本發明的目的是提供從短葶山麥冬地下部位中分離出的5個偏諾型留體皂苷類新化合物，由短葶山麥冬地下部位經粗提、大孔樹脂吸附、反復萃取、硅膠柱層析、Spheladex LH-20柱層析、高壓液相色譜儀分離，活性研究證明該組化合物具有抗腫瘤作用。本發明提供的一組新化合物是從短葶山麥冬地下部位中經粗提、大孔樹脂吸附、反復萃取、硅膠柱層析、Spheladex LH-20柱層析、高壓液相色譜儀分離所得的5個含有偏諾型甾
體皂苷元母核類新化合物，其母核結構如下:
[0004]
【權利要求】
1.短亭山麥冬偏諾型甾體皂苷類新化合物，化學名稱分別為:化合物1、25(R)pennogenin3-0-[ β -D-xylopyranosyl (I 一 2) ] [ a -L-xylopyranosyl (I 一 3)]-a-L_rhamnopyranoside,化合物 2Λ25(R)pennogenin3-0-[a -L-xylopyranosyl(I 一 2)]_2，4-0-diacetyl-[β -D-rhamnopyrano syl (I — 3) ]-β -D-xylopyranoside,化合物 3、25(R)pennogenin3-0-[a -L-rhamnopyranosyl(I 一 3)][β -D-xylopyranosyl (I 一 3)][β -D-xylopyranosyl(I — 2)]-4-0-acetyl-a -D-glucopyranoside,化合物 4、25(R)pennogenin3-0-[ a -L-xylopyranosyl(I 一 2) ]-3,4-0-diacetyl-[a -L-rhamnopyranosyl (I — 3) ] [ β -D-xylopyranosyl (I — 3) ] β -D-fucopyranoside,化合物 5、25 (R)pennogenin3-0-[a -L-xylopyranosyl(I 一 2)]-4-0-acetyl-[a -L-rhamnopyranosyI(1 — 3)][β -D-xylopyranosyl (I 一 3)] β -D-fucopyranoside。 . 1.1.根據權利要求1的短亭山麥冬偏諾型留體皂苷類化合物，其特征在于:
2.根據權利要求1所述的從短亭山麥冬中分離的新化合物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)稱取粉碎的短葶山麥冬地下部位，加入一定體積的乙醇，攪勻，回流提取，過濾，合并濾液，減壓回收乙醇，備用。(2)將藥液直接進行預處理過的大孔樹脂吸附，并用水，乙醇洗脫除雜和洗脫，收集合并洗脫液，減壓回收乙醇，備用。 (3)將(2)中所得藥液依次用乙酸乙酯、正丁醇反復多次萃取，將萃取液分別濃縮至浸膏，分別獲得乙酸乙酯、正丁醇萃取物。 (4)將正丁醇萃取物進行硅膠柱色譜分離，用氯仿-甲醇進行梯度洗脫，收集洗脫液，用薄層色譜進行檢測，顯色，合并相同部分，濃縮至干，備用。 (5)將硅膠柱層析12至18部分分別用凝膠SephadexLH-20進行柱層析，用氯仿-甲醇進行洗脫除雜，分別收集所得洗脫液，減壓回收濃縮至干得Π2至118，備用。 (6)將117部分以RP-18為填料，用高壓液相色譜儀進行純化，得新化合物1，將115部分以RP-18為填料，用高壓液相色譜儀進行純化，得新化合物2，3，將118部分以RP-18為填料，用高壓液相色譜儀進行純化，得新化合物4，5。
3.如權利要求2所述化新合物的分離方法，其特征在于該該方法為:步驟(1)中，提取用的乙醇為6-10倍體積的50-70%的乙醇，回流提取為2次，每次I小時。
4.權利要求2所述化新合物的分離方法，其特征在于該方法為:步驟(2)中，所用大孔樹脂為DlOl型，除雜乙醇濃度為20% _30%，所得合并液為50% -70%洗脫部分。
5.權利要求2所述化新合物的分離方法，其特征在于該方法為:步驟(3)中，其所用的乙酸乙酯和溶劑比例為1: 1、正丁醇與溶劑比例為1:1。
6.權利要求2所述 化新合物的分離方法，其特征在于該方法為:步驟(4)中，其所用的氯仿-甲醇體積比為 10: 1,9: 1,8: 2,7: 3,6: 4,5: 5,4: 6,3: 7,2: 8 的洗脫溶劑進行梯度洗脫，并分別收集各洗脫部分。
7.權利要求2所述化新合物的分離方法，其特征在于該方法為:步驟(5)中，其所用的氯仿-甲醇梯度洗脫體積比為1:1的混合溶劑，并分別收集各洗脫部分。
8.權利要求2所述化新合物的分離方法，其特征在于該方法為:步驟(6)中，其117以甲醇-水為流動相，梯度洗脫條件如下:0到10分鐘，甲醇-水為流動相中，甲醇體積濃度為60%，水的濃度為40% ;以另外的10分鐘內，甲醇的濃度勻速變為65%，水的濃度為35% ；再于另外的10分鐘內，甲醇的濃度勻速變為70%，水的濃度為30%，得純度為98%以上的新化合物I。Π5以甲醇-水為流動相，梯度洗脫條件如下:0到10分鐘，甲醇-水為流動相中，甲醇體積濃度為70%，水的濃度為30% ;以另外的10分鐘內，甲醇的濃度勻速變為75%，水的濃度為25% ;再于另外的10分鐘內，甲醇的濃度勻速變為80%，水的濃度為20%，得純度為98%以上的新化合物2，3。118以甲醇-水為流動相，梯度洗脫條件如下:0到10分鐘，甲醇-水為流動相中，甲醇體積濃度為50%，水的濃度為50% ;以另外的10分鐘內，甲醇的濃度勻速變為55%，水的濃度為45%;再于另外的10分鐘內，甲醇的濃度勻速變為60%，水的濃度為40%，得純度為98%以上的新化合物4，5。
9.根據權利要求1所述的從短亭山麥冬中分離得到的偏諾型留體皂苷新化合物的一種或兩種以上的混合物在制備抗腫瘤藥物方面的用途。
10.根據權利要求1所述的從短亭山麥冬中分離得到的偏諾型留體皂苷新化合物的一種或兩種以上的混合物在制備抗腫瘤藥物組分之一的用途。
【文檔編號】C07J71/00GK103755774SQ201410010200
【公開日】2014年4月30日 申請日期:2014年1月9日 優先權日:2014年1月9日
【發明者】余伯陽, 李永偉, 戚進, 張媛媛, 寇俊萍, 黃楨 申請人:中國藥科大學