一種肝靶向溫敏微球及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種肝靶向溫敏微球及其制備方法，屬于功能高分子材料領域，特別涉及藥物緩釋及靶向給藥材料及其制備方法，該材料溫度響應范圍為25℃-37℃，微球粒徑在500nm左右，可由下述方法制得：將甘草次酸(GA)經(jīng)乙二胺、丙烯酸(AAc)改性生成乙烯基單體；以過硫酸銨(APS)為引發(fā)劑，N，N-亞甲基雙丙烯酰胺(MBA)為交聯(lián)劑，通過半連續(xù)無皂乳液聚合法，制備肝靶向性溫敏微球。本發(fā)明所述制備方法工藝流程簡單，實驗條件溫和，不需要特殊設備，投資成本低，具有良好的可操作性，且所用試劑均為常規(guī)試劑，反應殘余物容易去除，便于工業(yè)化實施。
【專利說明】一種肝靶向溫敏微球及其制備方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種功能高分子材料技術，特別涉及一種肝靶向溫敏微球及其制備方法。
【背景技術】
[0002]肝臟是人體最大的實體器官，對維持生命和內環(huán)境的穩(wěn)定起著舉足輕重的作用。然而，肝癌、急性肝衰竭等疾病嚴重危脅人類的健康，我國更是世界上肝病的高發(fā)區(qū)，每年因肝病死亡的人數(shù)超過10萬，發(fā)病率占全球的50%以上。因此，肝臟疾病的治療成為目前醫(yī)藥衛(wèi)生領域的重中之重。肝臟疾病藥物治療手段主要是使藥物分子到達病變部位，殺滅致病病毒，修復受損組織，但傳統(tǒng)的化療方式，化療藥物無選擇性，在殺傷癌細胞的同時會殺死周圍非病患細胞，并且半衰期短，易與血漿蛋白接觸而失活，易受生物屏障作用較難進入實體瘤，從而導致藥效降低，治療效果毒副作用太大。靶向給藥是將治療藥物與靶向載體相結合，在載體的導向下把藥物運送到靶器官或靶細胞，使藥物有選擇地集中于人體的病變部位，減少用藥劑量和給藥次數(shù)，降低毒副作用，提高療效【Hana K.,TomaS E.，KarelU..European Journal of Pharmaceutical Science, 2009, 37:405】。甘草次酸(GA)存在于甘草的根、莖部，無毒，資源豐富，在傳統(tǒng)中藥處方中應用極其廣泛，研究表明，肝實質細胞膜表面還存在GA的受體，GA與肝細胞的結合位點具有高度特異性、飽和性和蛋白質性質，脂質體經(jīng)GA修飾后具有良好的趨肝性和肝細胞靶向性，可在肝臟高度蓄積，廣泛應用于肝臟疾病的治療和肝臟保護中[Zhang J.，Zhang Q.，Chen X.，et al..GlycoconjugateJournal, 2003,19:423】。Tian等研究了 99mTc標記的甘草次酸-聚乙二醇/殼聚糖復合納米粒在大鼠體內的分布行為，研究結果表明，該納米粒子在肝臟高度富集，并且包封治療藥物后所得的給藥系統(tǒng)能有效抑制荷瘤裸鼠的肝癌生長【Tian Q.，Zhang C N., et al..Biomaterial, 2010, 31:4748] ；Mao等以乙醇注入法制備了表面修飾有GA的脂質體納米粒，大鼠肝臟內吞實驗表 明對該納米粒子的攝取量顯著提高【Mao S J.，Bi Y Q.，et al..Pharmazie,2007,62:614】。
[0003]肝病藥物療法過程中的傳統(tǒng)給藥方法，受藥體系內藥物濃度忽高忽低，不易控制，毒副作用大，藥物半衰期短，作用率低，而如果將治療藥物包封于天然或合成高分子材料內，形成藥物控釋系統(tǒng)，則可以控制藥物在體內的釋放速率，使藥物在較長時間內以恒定的濃度釋放，可提高藥物利用率，減小毒副作用和用藥次數(shù)。納米粒子由于其獨特的小尺寸效應，可有效消除特殊生物屏障對藥物作用的限制，在藥劑學領域也得到廣泛應用。如Cho等合成了聚乙二醇-聚谷氨酸芐酯嵌段共聚物，形成150nm膠束，考察了該膠束對阿霉素的包封和釋放行為，結果表明具有明顯緩釋效應【Jeong Y I.,Cho K 0., et al..1nternationalJournal of Pharmaceutics, 2009, 365:150】。溫敏性聚異丙基丙烯酰胺(PNIPAAm),由于其獨特的溫度響應性，在生物大分子的分離濃縮、酶的包埋以及藥物控釋系統(tǒng)的應用越來越受到人們的關注。PNIPAAm分子內存在親水基團(酰胺基)和疏水基團(異丙基)，其水溶液的較低臨界溶解溫度(LCST)為32°C，當溫度低于32°C時，PNIPAAm分子鏈呈伸展狀態(tài)，親水基團暴露，表現(xiàn)親水性，當溫度高于32°C時，PNIPAAm分子鏈收縮，疏水基團暴露，表現(xiàn)疏水性，在溫敏控釋藥物系統(tǒng)，當溫度低于LCST時吸附藥物，而在高于LCST時釋放藥物。
[0004]綜上所述，本發(fā)明結合GA的肝靶向性和PNIPAAm的溫度響應性，設計一種具有特異靶向性的智能釋藥系統(tǒng)，采用半連續(xù)無皂乳液聚合法，制備肝靶向溫敏微凝膠，一方面利用微凝膠的小尺寸效應和肝細胞特異結合性，實現(xiàn)靶向給藥和跨越生物屏障，另一方面，利用高分子的緩釋效果和PNIPAAm的溫度響應性，實現(xiàn)藥物智能釋放。

【發(fā)明內容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種具有肝靶向性的藥物控釋智能載體，該材料可包封抗癌藥物，對肝細胞具有靶向性，可控制藥物釋放速率及濃度，溫度響應范圍為25V -37V,微球直徑在500nm左右。本發(fā)明肝靶向性溫敏微球可由以下方法制得:
[0006](I)甘草次酸氨基化改性
[0007]將甘草次酸(GA)溶于四氫呋喃(THF)，冷卻至-10°C，加入I~3g DCC，攪拌30min，加入N-羥基丁二酰亞胺(SuOH)，GA與SuOH的質量比為3~5: lg，溶液濃度為0.1~0.5g / mL，在-10°C下繼續(xù)攪拌2~4h，然后在不高于20°C的室溫下攪拌15~20h，濾去二環(huán)己基脲(白色固體)，將所得溶液傾入體積為3倍的無水乙醚中，靜置過夜，得到白色沉淀，過濾，用無水乙醚洗滌，真空干燥，得白色粉末狀甘草次酸琥珀酰亞胺活性酯(GSE)。將GSE溶于DMF，溶液濃度為0.05~0.1g / mL，用恒壓滴液漏斗緩慢滴加到乙二胺(EDA)中，GSE與EDA摩爾比為1:20~40mol，混合液在50°C~80°C下反應20~30h后，減壓蒸餾至無餾分流出，將濃縮液滴 加到蒸餾水中，有白色沉淀產生，過濾，用蒸餾水洗滌多次，以除去DMF和EDA，冷凍干燥，得白色粉末狀甘草次酸胺類衍生物(GA-NH2)。
[0008](2)甘草次酸乙烯基單體(GAA)的合成
[0009]將GA-NH2溶于DMF中，溶液濃度為0.1~0.5g / mL,加入AAc，GA-NH2與AAc質量比為4~6:lg，用氮氣保護，再加入0.01~0.03g suIfo-NHS活化劑和0.05~0.1g EDC縮合劑，室溫下反應20~30h，過濾，將反應后的混合物中白色沉淀脲濾去，在攪拌下把濾液滴加到蒸餾水中，靜置過夜，出現(xiàn)白色沉淀，過濾，干燥，得到白色粉末狀乙烯基甘草次酸單體。
[0010](3)肝靶向性溫敏微球的制備
[0011]稱取O~0.5g GAA單體溶解于5ml無水乙醇,0.5~1.0g NIPAAm和0.1~0.2gMBA溶解于75ml 二次蒸餾水中，另取75ml 二次蒸餾水，將0.01~0.03gAPS溶解。將溶解有GAA單體的乙醇溶液加入三口燒瓶中，電磁攪拌，溫度控制在25°C，然后依次加入10%體積的APS水溶液(約7.5ml)和10%體積的(NIPAAm和MBA混合溶液，約7.5ml)，全程氮氣除氧，在10~30min內將溫度升至60~80°C,再用兩個滴液漏斗，同步將兩種剩余溶液緩慢滴加入三口燒瓶，I~3h內滴加完，反應2~5h。停止通氮氣，保溫I~5h后，倒入燒杯中，超聲20min,靜置，12000r / min轉速下離心30min,除去上清液,加入純水,再次超聲分離，再次離心，循環(huán)3次后將純化好的微凝膠轉移入玻璃培養(yǎng)皿，放置于冷凍干燥機得微凝膠粉末。
[0012]本發(fā)明的目的也在于提供一種肝靶向性溫敏微球的制備方法，制備方法包括以下步驟:[0013](I)甘草次酸氨基化改性
[0014]將甘草次酸(GA)溶于四氫呋喃(THF)，冷卻至-10°C，加入I~3g DCC，攪拌30min，加入N-羥基丁二酰亞胺(SuOH)，GA與SuOH的質量比為3~5: lg，溶液濃度為0.1~
0.5g / mL，在-10°C下繼續(xù)攪拌2~4h，然后在不高于20°C的室溫下攪拌15~20h，濾去二環(huán)己基脲(白色固體)，將所得溶液傾入體積為3倍的無水乙醚中，靜置過夜，得到白色沉淀，過濾，用無水乙醚洗滌，真空干燥，得白色粉末狀甘草次酸琥珀酰亞胺活性酯(GSE)。將GSE溶于DMF，溶液濃度為0.05~0.1g / mL，用恒壓滴液漏斗緩慢滴加到乙二胺(EDA)中，GSE與EDA摩爾比為1:20~40mol，混合液在50°C~80°C下反應20~30h后，減壓蒸餾至無餾分流出，將濃縮液滴加到蒸餾水中，有白色沉淀產生，過濾，用蒸餾水洗滌多次，以除去DMF和EDA，冷凍干燥，得白色粉末狀甘草次酸胺類衍生物(GA-NH2)。
[0015](2)甘草次酸乙烯基單體(GAA)的合成
[0016]將GA-NH2溶于DMF中，溶液濃度為0.1~0.5g / mL,加入AAe，GA-NH2與AAc質量比為4~6:lg，用氮氣保護，再加入0.01~0.03g suIfo-NHS活化劑和0.05~0.1g EDC縮合劑，室溫下反應20~30h，過濾，將反應后的混合物中白色沉淀脲濾去，在攪拌下把濾液滴加到蒸餾水中，靜置過夜，出現(xiàn)白色沉淀，過濾，干燥，得到白色粉末狀乙烯基甘草次酸單體。
[0017](3)肝靶向性溫敏微球的制備
[0018]稱取O~0.5g GAA單體溶解于5ml無水乙醇,0.5~1.0g NIPAAm和0.1~0.2gMBA溶解于75ml 二次蒸餾水中，另取75ml 二次蒸餾水，將0.01~0.03gAPS溶解。將溶解有GAA單體的乙醇溶液加入三口燒瓶中，電磁攪拌，溫度控制在25°C，然后依次加入10%體積的APS水溶液(約7.5ml)和10·%體積的(NIPAAm和MBA混合溶液，約7.5ml)，全程氮氣除氧，在10~30min內將溫度升至60~80°C,再用兩個滴液漏斗，同步將兩種剩余溶液緩慢滴加入三口燒瓶，I~3h內滴加完，反應2~5h。停止通氮氣，保溫I~5h后，倒入燒杯中，超聲20min,靜置，12000r / min轉速下離心30min,除去上清液,加入純水,再次超聲分離，再次離心，循環(huán)3次后將純化好的微凝膠轉移入玻璃培養(yǎng)皿，放置于冷凍干燥機得微凝膠粉末。
[0019]有益效果:本發(fā)明所設計的肝靶向性溫敏微球是一種具有多功能協(xié)同作用的藥物載體，GA的肝靶向性和微球的小尺寸效應，可實現(xiàn)靶向給藥和輔助藥物分子跨越生物屏障，PNIPAAm的溫度響應性可實現(xiàn)藥物智能釋放，控制藥物釋放速率及濃度，可在肝病藥物治療領域得到廣泛應用。本發(fā)明所述制備方法工藝流程簡單，實驗條件溫和，不需要特殊設備，投資成本低，具有良好的可操作性，且所用試劑均為常規(guī)試劑，反應殘余物容易去除，便于工業(yè)化實施。
【具體實施方式】
[0020]以下給出本發(fā)明的具體實施例，但本發(fā)明不受實施例的限制。
[0021]實例1:
[0022](I)甘草次酸氨基化改性
[0023]將2.895g甘草次酸(GA)溶于30mL四氫呋喃(THF)，冷卻至_10°C，加入1.77gDCC，攪拌30min，加入0.71g SuOH，在-10°C下繼續(xù)攪拌3h，然后在不高于20°C的室溫下攪拌18h，濾去二環(huán)己基脲(白色固體)，將所得溶液傾入體積為3倍的無水乙醚中，靜置過夜，得到白色沉淀，過濾，用無水乙醚洗滌，真空干燥，得白色粉末狀甘草次酸琥珀酰亞胺活性酯(GSE)。將1.015g GSE溶于15mL DMF，用恒壓滴液漏斗緩慢滴加到3.5mL乙二胺(EDA)中，混合液在60°C下反應24h后，減壓蒸餾至無餾分流出，將濃縮液滴加到蒸餾水中，有白色沉淀產生，過濾，用蒸餾水洗滌多次，以除去DMF和EDA，冷凍干燥，得白色粉末狀甘草次酸胺類衍生物(GA-NH2)。
[0024](2)甘草次酸乙烯基單體(GAA)的合成
[0025]將5g GA-NH2溶于20mL DMF中，加入ImL AAc,用氮氣保護，再加入0.01gsulfo-NHS活化劑和0.07g EDC縮合劑，室溫下反應24h，過濾，將反應后的混合物中白色沉淀脲濾去，在攪拌下把濾液滴加到蒸餾水中，靜置過夜，出現(xiàn)白色沉淀，過濾，干燥，得到白色粉末狀乙烯基甘草次酸單體(GAA)。
[0026](3)肝靶向性溫敏微球的制備
[0027]稱取0.1g GAA單體溶解于5ml無水乙醇，0.9g NIPAAm和0.1g MBA溶解于75ml二次蒸餾水中，另取75ml 二次蒸餾水，將0.015g APS溶解。將溶解有GAA單體的乙醇溶液加入三口燒瓶中，電磁攪拌，溫度控制在25°C，然后依次加入10%體積的APS水溶液(約7.5ml)和10%體積的(NIPAAm和MBA混合溶液，約7.5ml)，全程氮氣除氧，在IOmin內將溫度升至70°C，再用兩個滴液漏斗，同步將兩種剩余溶液緩慢滴加入三口燒瓶，Ih內滴加完，反應3h。停止通氮氣，保溫2h后，倒入燒杯中，超聲20min，靜置，12000r / min轉速下離心30min，除去上清液，加入純水，再次超聲分離，再次離心，循環(huán)3次后將純化好的微凝膠轉移入玻璃培養(yǎng)皿，放置于冷凍干燥機得微凝膠粉末。
[0028]實例2:
[0029](I)甘草次酸氨基化改性
[0030]將5.79g甘草次酸(GA)溶于30mL四氫呋喃(THF)，冷卻至-10°C，加入3g DCC,攪拌30min，加入1.16g SuOH，在-10°C下繼續(xù)攪拌4h，然后在不高于20°C的室溫下攪拌20h，濾去二環(huán)己基脲(白色固體)，將所得溶液傾入體積為3倍的無水乙醚中，靜置過夜，得到白色沉淀，過濾，用無水乙醚洗滌，真空干燥，得白色粉末狀甘草次酸琥珀酰亞胺活性酯(GSE)。將2.03g GSE溶于20mL DMF，用恒壓滴液漏斗緩慢滴加到7mL乙二胺(EDA)中，混合液在80°C下反應20h后，減壓蒸餾至無餾分流出，將濃縮液滴加到蒸餾水中，有白色沉淀產生，過濾，用蒸餾水洗滌多次，以除去DMF和EDA，冷凍干燥，得白色粉末狀甘草次酸胺類衍生物(GA-NH2)。
[0031](2)甘草次酸乙烯基單體(GAA)的合成
[0032]將5gGA-NH2 溶于 20mLDMF 中，加入 ImLAAc，用氮氣保護，再加入 0.01g sulfo-NHS活化劑和0.07g EDC縮合劑，室溫下反應20h，過濾，將反應后的混合物中白色沉淀脲濾去，在攪拌下把濾液滴加到蒸餾水中，靜置過夜，出現(xiàn)白色沉淀，過濾，干燥，得到白色粉末狀乙烯基甘草次酸單體(GAA)。
[0033] (3)肝靶向性溫敏微球的制備
[0034]稱取0.3g GAA單體溶解于5ml無水乙醇，0.7g NIPAAm和0.1g MBA溶解于75ml二次蒸餾水中，另取75ml 二次蒸餾水，將0.015g APS溶解。將溶解有GAA單體的乙醇溶液加入三口燒瓶中，電磁攪拌，溫度控制在25°C，然后依次加入10%體積的APS水溶液(約7.5ml)和10%體積的(NIPAAm和MBA混合溶液，約7.5ml)，全程氮氣除氧，在IOmin內將溫度升至70°C，再用兩個滴液漏斗，同步將兩種剩余溶液緩慢滴加入三口燒瓶，Ih內滴加完，反應2h。停止通氮氣，保溫3h后，倒入燒杯中，超聲20min，靜置，12000r / min轉速下離心30min，除去上清液，加入純水，再次超聲分離，再次離心，循環(huán)3次后將純化好的微凝膠轉移入玻璃培養(yǎng)皿，放置于冷凍干燥機得微凝膠粉末。
[0035]實驗3:
[0036](I)甘草次酸氨基化改性
[0037]將2.895g甘草次酸(GA)溶于30mL四氫呋喃(THF)，冷卻至_10°C，加入3g DCC,攪拌30min，加入0.71g SuOH,在_10°C下繼續(xù)攪拌3h，然后在不高于20°C的室溫下攪拌18h，濾去二環(huán)己基脲(白色固體)，將所得溶液傾入體積為3倍的無水乙醚中，靜置過夜，得到白色沉淀，過濾，用無水乙醚洗滌，真空干燥，得白色粉末狀甘草次酸琥珀酰亞胺活性酯(GSE)。將2.03g GSE溶于20mL DMF，用恒壓滴液漏斗緩慢滴加到9.3g乙二胺(EDA)中，混合液在50°C下反應30h后，減壓蒸餾至無餾分流出，將濃縮液滴加到蒸餾水中，有白色沉淀產生，過濾，用蒸餾水洗滌多次，以除去DMF和EDA，冷凍干燥，得白色粉末狀甘草次酸胺類衍生物(GA-NH2)。
[0038](2)甘草次酸乙烯基單體(GAA)的合成
[0039]將5g GA-NH2溶于 30mL DMF 中，加入 ImLAAc，用氮氣保護，再加入 0.03g sulfo-NHS活化劑和0.05g EDC縮合劑，室溫下反應30h，過濾，將反應后的混合物中白色沉淀脲濾去，在攪拌下把濾液滴加到蒸餾水中，靜置過夜，出現(xiàn)白色沉淀，過濾，干燥，得到白色粉末狀乙烯基甘草次酸單體(GAA)。
[0040](3)肝靶向性溫 敏微球的制備
[0041]稱取0.5g GAA單體溶解于5ml無水乙醇，0.5g NIPAAm和0.1g MBA溶解于75ml二次蒸餾水中，另取75ml 二次蒸餾水，將0.015g APS溶解。將溶解有GAA單體的乙醇溶液加入三口燒瓶中，電磁攪拌，溫度控制在25°C，然后依次加入10%體積的APS水溶液(約7.5ml)和10%體積的(NIPAAm和MBA混合溶液，約7.5ml)，全程氮氣除氧，在IOmin內將溫度升至70°C，再用兩個滴液漏斗，同步將兩種剩余溶液緩慢滴加入三口燒瓶，Ih內滴加完，反應2h。停止通氮氣，保溫2h后，倒入燒杯中，超聲20min，靜置，12000r / min轉速下離心30min，除去上清液，加入純水，再次超聲分離，再次離心，循環(huán)3次后將純化好的微凝膠轉移入玻璃培養(yǎng)皿，放置于冷凍干燥機得微凝膠粉末。
[0042]實例4:
[0043](I)甘草次酸氨基化改性
[0044]將5.79g甘草次酸(GA)溶于30mL四氫呋喃(THF)，冷卻至_10°C，加入1.77g DCC,攪拌30min，加入1.42g SuOH，在-10°C下繼續(xù)攪拌2h，然后在不高于20°C的室溫下攪拌20h，濾去二環(huán)己基脲(白色固體)，將所得溶液傾入體積為3倍的無水乙醚中，靜置過夜，得到白色沉淀，過濾，用無水乙醚洗滌，真空干燥，得白色粉末狀甘草次酸琥珀酰亞胺活性酯(GSE)。將2.03g GSE溶于15mL DMF，用恒壓滴液漏斗緩慢滴加到7mL乙二胺(EDA)中，混合液在60°C下反應24h后，減壓蒸餾至無餾分流出，將濃縮液滴加到蒸餾水中，有白色沉淀產生，過濾，用蒸餾水洗滌多次，以除去DMF和EDA，冷凍干燥，得白色粉末狀甘草次酸胺類衍生物(GA-NH2)。[0045](2)甘草次酸乙烯基單體(GAA)的合成
[0046]將3g GA-NH2溶于IOmL DMF中，加入0.6mL AAc，用氮氣保護，再加入
0.01gsulfo-NHS活化劑和0.05g EDC縮合劑，室溫下反應24h，過濾，將反應后的混合物中白色沉淀脲濾去，在攪拌下把濾液滴加到蒸餾水中，靜置過夜，出現(xiàn)白色沉淀，過濾，干燥，得到白色粉末狀乙烯基甘草次酸單體(GAA)。
[0047](3)肝靶向性溫敏微球的制備
[0048]稱取0.5g GAA單體溶解于5ml無水乙醇，0.5g NIPAAm和0.2g MBA溶解于75ml二次蒸餾水中，另取75ml 二次蒸餾水，將0.03g APS溶解。將溶解有GAA單體的乙醇溶液加入三口燒瓶中，電磁攪拌，溫度控制在25°C，然后依次加入10%體積的APS水溶液(約7.5ml)和10%體積的(NIPAAm和MBA混合溶液，約7.5ml)，全程氮氣除氧，在20min內將溫度升至80°C，再用兩個滴液漏斗，同步將兩種剩余溶液緩慢滴加入三口燒瓶，2h內滴加完，反應4h。停止通氮氣,保溫3h后,倒入燒杯中，超聲20min,靜置，12000r / min轉速下離心30min，除去上清液，加入純水，再次超聲分離，再次離心，循環(huán)3次后將純化好的微凝膠轉移入玻璃培養(yǎng)皿，放置于冷凍干燥機得微凝膠粉末。
[0049]實例5:
[0050](I)甘草次酸氨基化改性
[0051]將2.895g甘草次酸(GA)溶于30mL四氫呋喃(THF)，冷卻至-10°C，加入1.77gDCC，攪拌30min，加入0.965g SuOH，在-10°C下繼續(xù)攪拌2h，然后在不高于20°C的室溫下攪拌15h，濾去二環(huán)己基脲(白色固體)，將所得溶液傾入體積為3倍的無水乙醚中，靜置過夜，得到白色沉淀，過濾，用無水乙醚洗滌，真空干燥，得白色粉末狀甘草次酸琥珀酰亞胺活性酯(GSE)。
[0052]將1.015g GSE溶于15mLDMF，用恒壓滴液漏斗緩慢滴加到2.3mL乙二胺(EDA)中，混合液在80°C下反應20h后，減壓蒸餾至無餾分流出，將濃縮液滴加到蒸餾水中，有白色沉淀產生，過濾，用蒸餾水洗滌多次，以除去DMF和EDA，冷凍干燥，得白色粉末狀甘草次酸胺類衍生物(GA-NH2)。
[0053](2)甘草次酸乙烯基單體(GAA)的合成
[0054]將3g GA-NH2溶于20mLDMF中，加入0.5mLAAc，用氮氣保護，再加入0.01gsulfo-NHS活化劑和0.05EDC縮合劑，室溫下反應30h，過濾，將反應后的混合物中白色沉淀脲濾去，在攪拌下把濾液滴加到蒸餾水中，靜置過夜，出現(xiàn)白色沉淀，過濾，干燥，得到白色粉末狀乙烯基甘草次酸單體(GAA)。
[0055](3)肝靶向性溫敏微球的制備
[0056]稱取0.3g GAA單體溶解于5ml無水乙醇，0.7g NIPAAm和0.1g MBA溶解于75ml二次蒸餾水中，另取75ml 二次蒸餾水，將0.02g APS溶解。將溶解有GAA單體的乙醇溶液加入三口燒瓶中，電磁攪拌，溫度控制在25°C，然后依次加入10%體積的APS水溶液(約7.5ml)和10%體積的(NIPAAm和MBA混合溶液，約7.5ml)，全程氮氣除氧，在10~30min內將溫度升至60°C，再用兩個滴液漏斗，同步將兩種剩余溶液緩慢滴加入三口燒瓶，2h內滴加完，反應5h。停止通氮氣，保溫5h后，倒入燒杯中，超聲20min，靜置，12000r / min轉速下離心30min，除去上清液，加入純水，再次超聲分離，再次離心，循環(huán)3次后將純化好的微凝膠轉移入玻璃培養(yǎng)皿，放置于冷凍干燥機得微凝膠粉末。[0057]實例6:
[0058](1)甘草次酸氨基化改性
[0059]將5.79g甘草次酸(GA)溶于30mL四氫呋喃(THF)，冷卻至_10°C，加入1.77g DCC,攪拌30min，加入1.16g SuOH，在-10°C下繼續(xù)攪拌4h，然后在不高于20°C的室溫下攪拌15h，濾去二環(huán)己基脲(白色固體)，將所得溶液傾入體積為3倍的無水乙醚中，靜置過夜，得到白色沉淀，過濾，用無水乙醚洗滌，真空干燥，得白色粉末狀甘草次酸琥珀酰亞胺活性酯(GSE)。將2.03g GSE溶于15mL DMF，用恒壓滴液漏斗緩慢滴加到4.7mL乙二胺(EDA)中，混合液在80°C下反應20h后，減壓蒸餾至無餾分流出，將濃縮液滴加到蒸餾水中，有白色沉淀產生，過濾，用蒸餾水洗滌多次，以除去DMF和EDA，冷凍干燥，得白色粉末狀甘草次酸胺類衍生物(GA-NH2)。
[0060](2)甘草次酸乙烯基單體(GAA)的合成
[0061]將3g GA-NH2溶于IOmL DMF中，加入0.75mL AAc，用氮氣保護，再加入
0.03gsulfo-NHS活化劑和0.1g EDC縮合劑，室溫下反應20h，過濾，將反應后的混合物中白色沉淀脲濾去，在攪拌下把濾液滴加到蒸餾水中，靜置過夜，出現(xiàn)白色沉淀，過濾，干燥，得到白色粉末狀乙烯基甘草次酸單體(GAA)。
[0062](3)肝靶向性溫敏微球的制備
[0063]稱取0.1g GAA單體溶解于5ml無水乙醇，0.9g NIPAAm和0.15g MBA溶解于75ml二次蒸餾水中，另取75ml 二次蒸餾水，將0.03gAPS溶解。將溶解有GAA單體的乙醇溶液加入三口燒瓶中，電磁攪拌，溫度控制在25°C，然后依次加入10%體積的APS水溶液(約7.5ml)和10%體積的(NIPAAm和MBA混合溶液，約7.5ml)，全程氮氣除氧，在30min內將溫度升至80°C，再用兩個滴液漏斗，同步將兩種剩余溶液緩慢滴加入三口燒瓶，3h內滴加完，反應4h。停止通氮氣,保溫4h后,倒入燒杯中，超聲20min,靜置，12000r / min轉速下離心30min，除去上清液，加入純水，再次超聲分離，再次離心，循環(huán)3次后將純化好的微凝膠轉移入玻璃培養(yǎng)皿，放置于冷凍干燥機得微凝膠粉末。
[0064]實例7:
[0065](1)甘草次酸氨基化改性
[0066]將2.895g甘草次酸(GA)溶于30mL四氫呋喃(THF)，冷卻至_10°C，加入1.77gDCC，攪拌30min，加入0.579g SuOH，在-10°C下繼續(xù)攪拌4h，然后在不高于20°C的室溫下攪拌20h，濾去二環(huán)己基脲(白色固體)，將所得溶液傾入體積為3倍的無水乙醚中，靜置過夜，得到白色沉淀，過濾，用無水乙醚洗滌，真空干燥，得白色粉末狀甘草次酸琥珀酰亞胺活性酯(GSE)。將1.015g GSE溶于20mL DMF,用恒壓滴液漏斗緩慢滴加到4.7mL乙二胺(EDA)中，混合液在50°C下反應30h后，減壓蒸餾至無餾分流出，將濃縮液滴加到蒸餾水中，有白色沉淀產生，過濾，用蒸餾水洗滌多次，以除去DMF和EDA，冷凍干燥，得白色粉末狀甘草次酸胺類衍生物(GA-NH2)。
[0067](2)甘草次酸乙烯基單體(GAA)的合成
[0068]將8g GA-NH2 溶于 20mLDMF 中，加入 2mLAAc，用氮氣保護，再加入 0.03g sulfo-NHS活化劑和0.1g EDC縮合劑，室溫下反應20h，過濾，將反應后的混合物中白色沉淀脲濾去，在攪拌下把濾液滴加到蒸餾水中，靜置過夜，出現(xiàn)白色沉淀，過濾，干燥，得到白色粉末狀乙烯基甘草次酸單體(GAA)。[0069](3)肝靶向性溫敏微球的制備
[0070]稱取0.3g GAA單體溶解于5ml無水乙醇，0.7g NIPAAm和0.2g MBA溶解于75ml二次蒸餾水中，另取75ml 二次蒸餾水，將0.02gAPS溶解。將溶解有GAA單體的乙醇溶液加入三口燒瓶中，電磁攪拌，溫度控制在25°C，然后依次加入10%體積的APS水溶液(約7.5ml)和10%體積的(NIPAAm和MBA混合溶液，約7.5ml)，全程氮氣除氧，在20min內將溫度升至60°C，再用兩個滴液漏斗，同步將兩種剩余溶液緩慢滴加入三口燒瓶，2h內滴加完，反應2h。停止通氮氣，保溫Ih后，倒入燒杯中，超聲20min，靜置，12000r / min轉速下離心30min，除去上清液，加入純水，再次超聲分離，再次離心，循環(huán)3次后將純化好的微凝膠轉移入玻璃培養(yǎng)皿，放置于冷凍干燥機得微凝膠粉末。
[0071]實例8:
[0072](I)甘草次酸氨基化改性
[0073]將2.895g甘草次酸(GA)溶于30mL四氫呋喃(THF)，冷卻至_10°C，加入Ig DCC,攪拌30min，加入0.579g SuOH，在-10°C下繼續(xù)攪拌2h，然后在不高于20°C的室溫下攪拌15h，濾去二環(huán)己基脲(白色固體)，將所得溶液傾入體積為3倍的無水乙醚中，靜置過夜，得到白色沉淀，過濾，用無水乙醚洗滌，真空干燥，得白色粉末狀甘草次酸琥珀酰亞胺活性酯(GSE)。將1.015g GSE溶于IOmL DMF，用恒壓滴液漏斗緩慢滴加到3.5mL乙二胺(EDA)中，混合液在80°C下反應30h后，減壓蒸餾至無餾分流出，將濃縮液滴加到蒸餾水中，有白色沉淀產生，過濾，用蒸餾水洗滌多次，以除去DMF和EDA，冷凍干燥，得白色粉末狀甘草次酸胺類衍生物(GA-NH2)。
[0074](2)甘草次酸乙烯基單體(GAA)的合成
[0075]將8g GA-NH2溶于40mL DMF中，加入1.8mL AAc，用氮氣保護，再加入
0.03gsulfo-NHS活化劑和0.1g EDC縮合劑，室溫下反應24h，過濾，將反應后的混合物中白色沉淀脲濾去，在攪拌下把濾液滴加到蒸餾水中，靜置過夜，出現(xiàn)白色沉淀，過濾，干燥，得到白色粉末狀乙烯基甘草次酸單體(GAA)。
[0076](3)肝靶向性溫敏微球的制備
[0077]稱取0.5g GAA單體溶解于5ml無水乙醇，0.5g NIPAAm和0.2g MBA溶解于75ml二次蒸餾水中，另取75ml 二次蒸餾水，將0.015g APS溶解。將溶解有GAA單體的乙醇溶液加入三口燒瓶中，電磁攪拌，溫度控制在25°C，然后依次加入10%體積的APS水溶液(約7.5ml)和10%體積的(NIPAAm和MBA混合溶液，約7.5ml)，全程氮氣除氧，在15min內將溫度升至80°C，再用兩個滴液漏斗，同步將兩種剩余溶液緩慢滴加入三口燒瓶，2h內滴加完，反應3h。停止通氮氣，保溫3h后，倒入燒杯中，超聲20min，靜置，12000r / min轉速下離心30min，除去上清液，加入純水，再次超聲分離，再次離心，循環(huán)3次后將純化好的微凝膠轉移入玻璃培養(yǎng)皿，放置于冷凍干燥機得微凝膠粉末。
【權利要求】
1.一種肝靶向溫敏微球及其制備方法，其特征在于所述肝靶向溫敏微球具有藥物控釋作用和肝細胞靶向性，溫度響應范圍為25°C~37°C，粒徑在500nm左右，可實現(xiàn)抗癌藥物的智能釋放及靶向給藥，所述肝靶向性溫敏微球可由下述方法制得: (1)甘草次酸氨基化改性 將甘草次酸(GA)溶于四氫呋喃(THF)，冷卻至-10°C，加入I~3g DCC，攪拌30min，加入N-羥基丁二酰亞胺(SuOH)，GA與SuOH的質量比為3~5:lg，溶液濃度為0.1~0.5g/mL，在-10°C下繼續(xù)攪拌2~4h，然后在不高于20°C的室溫下攪拌15~20h，濾去二環(huán)己基脲(白色固體)，將所得溶液傾入體積為3倍的無水乙醚中，靜置過夜，得到白色沉淀，過濾，用無水乙醚洗滌，真空干燥，得白色粉末狀甘草次酸琥珀酰亞胺活性酯(GSE)，將GSE溶于DMF，溶液濃度為0.05~0.1g / mL，用恒壓滴液漏斗緩慢滴加到乙二胺(EDA)中，GSE與EDA摩爾比為1:20~40mol，混合液在50°C~80°C下反應20~30h后，減壓蒸餾至無餾分流出，將濃縮液滴加到蒸餾水中，有白色沉淀產生，過濾，用蒸餾水洗滌多次，以除去DMF和EDA，冷凍干燥，得白色粉末狀甘草次酸胺類衍生物(GA-NH2)； (2)甘草次酸乙烯基單體(GAA)的合成 將GA-NH2溶于DMF中，溶液濃度為0.1~0.5g / mL,加入AAc，GA-NH2與AAc質量比為4~6:lg，用氮氣保護，再加入0.01~0.03g suIfo-NHS活化劑和0.05~0.1g EDC縮合劑，室溫下反應20~30h，過濾，將反應后的混合物中白色沉淀脲濾去，在攪拌下把濾液滴加到蒸餾水中，靜置過夜，出現(xiàn)白色沉淀，過濾，干燥，得到白色粉末狀乙烯基甘草次酸單體(GAA)； (3)肝靶向性溫敏微球的制備 稱取O~0.5g GAA單體溶解于5ml無水乙醇，0.5~1.0gNIPAAm和0.1~0.2g MBA溶解于75ml 二次蒸餾水中，另取75ml 二次蒸餾水，將0.01~0.03gAPS溶解，將溶解有GAA單體的乙醇溶液加入三口燒瓶中，電磁攪拌，溫度控制在25°C，然后依次加入10%體積的APS水溶液(約7.5ml)和10%體積的(NIPAAm和MBA混合溶液，約7.5ml)，全程氮氣除氧，在10~30min內將溫度升至60~80°C，再用兩個滴液漏斗，同步將兩種剩余溶液緩慢滴加入三口燒瓶，I~3h內滴加完，反應2~5h，停止通氮氣，保溫I~5h后，倒入燒杯中，超聲20min,靜置，12000r / min轉速下離心30min,除去上清液,加入純水,再次超聲分離，再次離心，循環(huán)3次后將純化好的微凝膠轉移入玻璃培養(yǎng)皿，放置于冷凍干燥機得微凝膠粉末。
2.根據(jù)權利要求1所述的肝靶向性溫敏微球，其特征在于所述肝靶向性溫敏微球具有藥物控釋作用和肝靶向性，溫度響應范圍為25 °C~37 °C，粒徑在500nm左右，可實現(xiàn)抗癌藥物的智能釋放及靶向給藥。
3.—種肝靶向溫敏微球的制備方法，包括以下步驟: (I)甘草次酸氨基化改性 將甘草次酸(GA)溶于四氫呋喃(THF)，冷卻至-10°C，加入I~3g DCC，攪拌30min，加入N-羥基丁二酰亞胺(SuOH)，GA與SuOH的質量比為3~5: lg，溶液濃度為0.1~0.5g /mL，在-10°C下繼續(xù)攪拌2~4h，然后在不高于20°C的室溫下攪拌15~20h，濾去二環(huán)己基脲(白色固體)，將所得溶液傾入體積為3倍的無水乙醚中，靜置過夜，得到白色沉淀，過濾，用無水乙醚洗滌，真空干燥，得白色粉末狀甘草次酸琥珀酰亞胺活性酯(GSE)，將GSE溶于DMF，溶液濃度為0.05~0.1g / mL，用恒壓滴液漏斗緩慢滴加到乙二胺(EDA)中，GSE與EDA摩爾比為1:20~40mol，混合液在50°C~80°C下反應20~30h后，減壓蒸餾至無餾分流出，將濃縮液滴加到蒸餾水中，有白色沉淀產生，過濾，用蒸餾水洗滌多次，以除去DMF和EDA，冷凍干燥，得白色粉末狀甘草次酸胺類衍生物(GA-NH2)； (2)甘草次酸乙烯基單體(GAA)的合成 將GA-NH2溶于DMF中，溶液濃度為0.1~0.5g / mL,加入AAc，GA-NH2與AAc質量比為4~6:lg，用氮氣保護，再加入0.01~0.03g suIfo-NHS活化劑和0.05~0.1g EDC縮合劑，室溫下反應20~30h，過濾，將反應后的混合物中白色沉淀脲濾去，在攪拌下把濾液滴加到蒸餾水中，靜置過夜，出現(xiàn)白色沉淀，過濾，干燥，得到白色粉末狀乙烯基甘草次酸單體(GAA)； (3)肝靶向性溫敏微球的制備 稱取O~0.5g GAA單體溶解于5ml無水乙醇，0.5~1.0g NIPAAm和0.1~0.2g MBA溶解于75ml 二次蒸餾水中，另取75ml 二次蒸餾水，將0.01~0.03gAPS溶解，將溶解有GAA單體的乙醇溶液加入三口燒瓶中，電磁攪拌，溫度控制在25°C，然后依次加入10%體積的APS水溶液(約7.5ml)和10%體積的(NIPAAm和MBA混合溶液，約7.5ml)，全程氮氣除氧，在10~30min內將溫度升 至60~80°C，再用兩個滴液漏斗，同步將兩種剩余溶液緩慢滴加入三口燒瓶，I~3h內滴加完，反應2~5h，停止通氮氣，保溫I~5h后，倒入燒杯中，超聲20min,靜置，12000r / min轉速下離心30min,除去上清液,加入純水,再次超聲分離，再次離心，循環(huán)3次后將純化好的微凝膠轉移入玻璃培養(yǎng)皿，放置于冷凍干燥機得微凝膠粉末。
4.根據(jù)權利要求1，3所述一種肝靶向性溫敏微球的制備方法，其特征在于所述步驟(1)中甘草次酸琥珀酰亞胺活性酯(GSE)與乙二胺(EDA)摩爾比為1:20~40mol，反應溫度為50°C~80°C。
5.根據(jù)權利要求1，3所述一種肝靶向性溫敏微球的制備方法，其特征在于所述步驟(2)中甘草次酸胺類衍生物(GA-NH2)與丙烯酸(AAc)質量比為4~6:lg。
6.根據(jù)權利要求1，3所述一種肝靶向性溫敏微球的制備方法，其特征在于所述步驟(3)中GAA 與(GA+NIPAAm)的質量比為 O ~0.5:lg。
7.根據(jù)權利要求1，3所述一種肝靶向性溫敏微球的制備方法，其特征在于所述步驟(3)中反應溫度為60°C~80°C。
8.根據(jù)權利要求1，3所述一種肝靶向性溫敏微球的制備方法，其特征在于所述步驟(3)中反應時間為2~5h。
9.根據(jù)權利要求1，3所述一種肝靶向性溫敏微球的制備方法，其特征在于所述步驟(3)中10~30min內將溫度升至60~80°C。
【文檔編號】C08F220/54GK103709323SQ201310652380
【公開日】2014年4月9日 申請日期:2013年12月4日 優(yōu)先權日:2013年12月4日
【發(fā)明者】賀曉凌, 盧文甲, 劉澤麗, 黎湘旭, 趙月梅, 陳莉 申請人:天津工業(yè)大學