本發明屬于生物技術領域；具體說來，本發明確立了一種提高H5亞型禽流感疫苗毒株增殖滴度的方法，用于疫苗的生產，降低生產成本，在生產上有較大的使用價值。

背景技術：

禽流感是由禽流感病毒引起的一種禽類傳染病。禽流感病毒根據血凝素（HA）和神經氨酸酶（NA）的不同，可分為16個HA亞型和9個NA亞型。高致病性禽流感是由某些H5或H7亞型禽流感病毒引起的嚴重威脅禽類的烈性傳染病。

2003年以來，H5亞型高致病性禽流感一直在包括中國在內的多個國家和地區流行，給養禽業造成了嚴重的經濟損失。目前，疫苗仍然是防控該病的重要手段。2005年，我國開始實施針對禽流感的大規模強制性免疫政策，并取得了顯著成效。隨著病毒的不斷變異，疫苗也從Re-1更新到目前的Re-6、Re-7、Re-8。生產中發現，Re-7在雞胚上的增殖滴度要明顯低于Re-6和Re-8的滴度。這就使得Re-7疫苗生產的成本要高于Re-6和Re-8疫苗的生產成本。本專利提供了一種提高Re-7疫苗毒株增殖滴度的方法。

技術實現要素：

本發明針對上述Re-7疫苗毒株增殖滴度的不足，研究建立了一種提高Re-7疫苗毒株在雞胚上增殖滴度的方法。首先利用定點突變技術，將Re-7疫苗毒株的HA基因進行突變，使其編碼的第171位氨基酸突變為異亮氨酸（I）或纈氨酸（V），再利用反向遺傳操作技術重新獲得重組病毒。將重組病毒接種雞胚，能夠顯著提高Re-7疫苗毒株的增殖滴度。

具體實施方式

下面通過實施例，說明本發明的技術方案，但本發明的保護范圍不限于這個實施例。

本實施例利用定點突變技術，對Re-7禽流感疫苗毒株HA基因進行點突變，使其編碼的第171位氨基酸由原來的蘇氨酸（T）突變為異亮氨酸（I）或纈氨酸（V），再利用反向遺傳操作技術重新獲得重組病毒。將突變之前的Re-7疫苗株和突變后的重組病毒接種10日齡SPF雞胚，37°C孵化72小時，其HA滴度分別達到9和11，突變后的重組病毒比突變之前的疫苗毒株提高了2個HA滴度。