本發明屬于食品生物
技術領域：
，涉及一種低苦味阿膠低聚肽及其制備方法與應用。
背景技術：
：阿膠作為我國傳統滋補類良藥，已經有2000多年的生產和食用歷史，在我國多部中藥名著中均有記載，被譽為“補血圣藥”、“滋補國寶”等，與人參、鹿茸一起譽為“中藥三寶”。阿膠含有豐富的蛋白質、氨基酸和礦物質，具有明顯的補氣養血、滋陰潤燥、化痰清肺、調經安胎、改善睡眠、強筋壯骨、延緩衰老、美容養顏、增強免疫力、提高耐缺氧、抗疲勞、抗休克、升高白細胞、抑制腫瘤等多重功效。但是阿膠中的膠原蛋白分子量較大(幾萬到十幾萬)，對于脾胃虛弱的人群，吸收較難，導致阿膠的功效無法得到充分發揮，通過酶水解技術得到阿膠低聚肽可以大幅提高產品的生物利用度，但是在實際生產過程中發現阿膠低聚肽產品具有較強的苦味，嚴重影響了消費者對產品的接受度。技術實現要素：本發明的目的是提供一種低苦味阿膠低聚肽及其制備方法與應用。本發明提供的制備阿膠低聚肽的方法，包括如下步驟：將阿膠酶解產生的酶解液進行柱層析，收集洗脫液得到所述阿膠低聚肽。上述方法的柱層析步驟中，所用洗脫劑為乙醇的水溶液；所述乙醇的水溶液的體積百分濃度具體為15-30％。所用柱層析填料為大孔吸附樹脂；所述大孔吸附樹脂具體為AB-8型、D101型或DA201-C型大孔吸附樹脂；洗脫劑的用量為2-4倍的柱體積。所述柱層析步驟所用柱層析柱可按照各種常規方法在柱層析步驟之前以及在柱層析完成之后對其進行活化。如可按照如下方法進行活化：將柱層析柱用95％乙醇、水、2％HCl、水、2％NaOH、水依次進行洗脫，使色譜柱進行活化，活化后浸泡在95％乙醇中進行保存。所述酶解液為將阿膠利用復合蛋白酶酶解而得，具體為將阿膠用水配置成固形物的質量百分濃度為20-50％的溶液后，再利用復合蛋白酶酶解而得。所述復合蛋白酶選自菠蘿蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶中的至少一種。所述復合蛋白酶所用酶不止一種時，所用酶之間的酶量比具體可為等比例；更具體的，所述復合蛋白酶可為由木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶、中性蛋白酶和胃蛋白酶組成的復合蛋白酶a或由木瓜蛋白酶與胃蛋白酶組成的復合蛋白酶b；其中，所述復合蛋白酶a和復合蛋白酶b中，各個酶之間的酶量比為等比例，也即：所述復合蛋白酶a中，木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶、中性蛋白酶和胃蛋白酶的酶量比為1:1:1:1；所述復合蛋白酶b中，木瓜蛋白酶與胃蛋白酶的酶量比為1:1；所述酶量均以U計；所述酶解步驟中，溫度為30℃-55℃；pH值為5-8；時間為0.5-2h；所述菠蘿蛋白酶的酶活為50-120萬U/g，具體可為80萬U/g；所述中性蛋白酶的酶活為5-20萬U/g，具體可為15萬U/g；所述胃蛋白酶的酶活為10-50萬U/g；所述木瓜蛋白酶的酶活為40-100萬U/g；所述阿膠與復合蛋白酶的用量比為1g：2500-5500U。所述方法還包括如下步驟：在所述酶解步驟之后，所述柱層析步驟之前，將所述酶解液滅酶；具體的，所述滅酶步驟中，溫度為95-105℃，具體為100℃；時間為3-10min。另外，在所述滅酶步驟之后，所述柱層析步驟之前，還可對滅酶后的酶解液進行過濾，以除去酶解液中的顆粒性雜質。過濾的方式可為各種常用的過濾方法，如可通過板框壓濾機進行過濾。所述方法還包括如下步驟：在所述柱層析步驟之后，將所得洗脫液進行濃縮和干燥；具體的，所述濃縮步驟中，濃縮的方式為真空濃縮；溫度為75-95℃；濃縮后固形物的質量百分含量不小于65％；所述干燥步驟中，干燥的方式為真空干燥或噴霧干燥；干燥后產品中的水分含量不大于13％。上述方法中，所用阿膠為不含輔料的阿膠膠汁或阿膠塊。另外，按照上述方法制備得到的阿膠低聚肽及含有該阿膠低聚肽的產品，也屬于本發明的保護范圍。其中，所述阿膠低聚肽的分子量具體為200-3000Da；所述產品具體為食品或保健品。本發明基于普通阿膠中的膠原蛋白分子量較大(幾萬到十幾萬)，對于脾胃虛弱的人群，吸收較難，導致阿膠的功效無法得到充分發揮，通過酶水解技術得到阿膠低聚肽可以大幅提高產品的生物利用度，但是又存在產品具有較強的苦味，嚴重影響了消費者對產品的接受度等問題的基礎上，通過大量的多年研究和探索，采用復合酶酶解工藝并結合大孔吸附樹脂柱層析分離去除阿膠低聚肽中苦味極強的成分，制得低苦味阿膠低聚肽，從而在提高產品的生物利用度的同時，顯著降低了阿膠低聚肽的苦味，提高了消費者對產品的接受度，對阿膠低聚肽產品的開發具有十分重要的意義。本發明的優點在于，本發明通過應用復合蛋白酶對阿膠進行酶解，并將酶解液進行柱層析后，得到分子量主要分布介于200-3000Da的低苦味阿膠低聚肽，從而在提高產品的生物利用度的同時，顯著降低了阿膠低聚肽的苦味，提高了消費者對產品的接受度，對阿膠低聚肽產品的開發具有十分重要的意義。附圖說明圖1為標準樣品分子量與保留時間的關系圖。圖2為實施例1和2所得低苦味阿膠低聚肽的色譜圖。具體實施方式下面結合具體實施例對本發明作進一步闡述，但本發明并不限于以下實施例。所述方法如無特別說明均為常規方法。所述原材料如無特別說明均能從公開商業途徑獲得。本發明具體實施例中所涉及的實驗材料來源：1、阿膠購置東阿阿膠股份有限公司；2、所用中性蛋白酶的酶活為15萬U/g；菠蘿蛋白酶的酶活為80萬U/g，均購自廣西南寧龐博生物工程有限公司；木瓜蛋白酶的酶活為100萬U/g，胃蛋白酶的酶活為50萬U/g，均購自山海柯原實業有限公司。實施例1、(1)將不含輔料的阿膠塊溶解后配置成固形物的質量百分濃度為20％，溫度30℃，pH控制在5。(2)將包括木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶、中性蛋白酶和胃蛋白酶按照酶量(以U計)等量混合得到復合蛋白酶后，按阿膠與復合蛋白酶的用量比為1g：2500U的比例加入阿膠膠汁中進行水解2h后100℃保持3-10min滅酶，得到阿膠低聚肽酶解液。(3)將阿膠低聚肽酶解液通過板框壓濾機進行過濾，除去酶解液中的顆粒性雜質。(4)將過濾后的阿膠低聚肽酶解液應用DA201-C型大孔吸附樹脂進行吸附和洗脫，洗脫溶劑為體積百分濃度為15％的乙醇水溶液，洗脫劑用量為2倍柱體積，收集洗脫液即得到低苦味阿膠低聚肽組分。(5)低苦味阿膠低聚肽組分通過真空濃縮裝置進行濃縮，所用溫度為75℃，濃縮至固形物含量≥65％。(6)濃縮后低苦味阿膠低聚肽組分采用真空干燥設備進行干燥，使產品最終水分含量≤13％，粉碎后得到本發明提供的低苦味阿膠低聚肽產品。實施例2、(1)將不含輔料的阿膠膠汁或阿膠塊溶解后配置成固形物濃度50％，溫度55℃，pH控制在8。(2)將木瓜蛋白酶與胃蛋白酶按照酶量(以U計)等量混合得到復合蛋白酶后，按照阿膠與復合蛋白酶的用量比為1g：5500U，加入阿膠膠汁中進行水解2h后100℃保持10min滅酶，得到阿膠低聚肽酶解液。(3)將阿膠低聚肽酶解液通過板框壓濾機進行過濾，除去酶解液中的顆粒性雜質。(4)將過濾后的阿膠低聚肽酶解液應用AB-8型大孔吸附樹脂進行吸附和洗脫，洗脫溶劑為體積百分濃度為30％的乙醇水溶液，洗脫劑用量為4倍柱體積，收集洗脫液即得到低苦味阿膠低聚肽組分。(5)低苦味阿膠低聚肽組分通過真空濃縮裝置進行濃縮，所用溫度為95℃，濃縮至固形物含量≥65％。(6)濃縮后低苦味阿膠低聚肽組分采用真空干燥或噴霧干燥設備進行干燥，使產品最終水分含量≤13％，粉碎后得到本發明提供的低苦味阿膠低聚肽產品。實施例3、低苦味阿膠低聚肽的分子量測定對實施例1和2所得低苦味阿膠低聚肽產品的分子量分布按照GB/T22492-2008大豆肽粉中肽相對分子量的分布的測定方法進行測定。具體方法如下：色譜柱：TSKgel2000SWXL，流動相：乙腈：水：三氟乙酸＝45:55:0.1(v/v/v)，檢測波長：220nm，流速：0.5ml/min，柱溫30℃，進樣量：10μL，檢測時間：30min，分別以乙胺酸-乙胺酸-乙胺酸(Mw＝189)、乙胺酸-乙胺酸-酪氨酸-精氨酸(Mw＝451)、桿菌酶(Mw＝1450)、抑肽酶(Mw＝6500)、細胞色素C(Mw＝12500)5種樣品為標準品，測定各自標準品的出峰時間計算相對分子質量。圖1為標準樣品分子量與保留時間的關系圖。圖2為實施例1和2所得低苦味阿膠低聚肽的色譜圖。由圖可知，實施例1和2所得低苦味阿膠低聚肽的分子量為200-3000Da。實施例4、低苦味阿膠低聚肽的苦味評價對實施例1和2所得阿膠低聚肽的苦味評價采用苦味值法和閾值法進行評價：選取20名評價者(男、女各10名)，將不同實施例的阿膠低聚肽配置成同樣濃度的溶液，評定員用蒸餾水漱口之后，取待評定液10ml置于口中，10s后吐出，描述樣品的苦味強弱及其對應的評分值，例如：0.無苦味，2.略有苦味，4.苦味較弱，6.苦味一般，8.苦味較重，10.苦味極重。根據此評分標準，對實施例1和2所得阿膠低聚肽的苦味進行評分，用最后得出的平均值表示苦味程度。閾值法是將不同實施例的阿膠低聚肽配置成不同濃度溶液，確定剛剛能夠感覺出苦味的阿膠低聚肽的濃度即為其苦味閾值濃度。所得結果如表1所示。表1、低苦味阿膠低聚肽苦味評價結果評價指標普通阿膠低聚肽實施例1實施例2苦味值822閾值濃度1.0％1.8％1.9％表1中，普通阿膠低聚肽為東阿阿膠有限公司生產的真顏牌小分子阿膠。由表1可知，本發明實施例1和實施例2制備的阿膠低聚肽相對于普通阿膠低聚肽，在同等濃度下苦味值有感官評價得分8(苦味較重)降低至感官評價得分2(略有苦味)；而且對本發明實施例1和實施例2制備的阿膠低聚肽的苦味閾值濃度均比普通阿膠低聚肽高，說明感知其苦味需要更高的濃度。當前第1頁1 2 3