基于74個Y染色體SNP遺傳標記的法醫學二代測序試劑盒的制作方法
本發明屬于法醫學技術領域，具體涉及基于74個Y染色體SNP遺傳標記的法醫學二代測序試劑盒及其用途。
背景技術：
Y染色體是一類僅存在于男性個體的染色體，其非重組區(non-recombination regions of Y chromosome，NRY，以下未做特殊說明的Y染色體均指非重組區)具有父系遺傳、非重組、有效群體小和地理學上的特殊性等特點。由于其僅存在于男性個體，使其在法醫學方面發揮著重要作用，如在男性作為嫌疑人的性侵案件中，以及群體災難事件遇難者身源鑒定和失蹤人員調查中。而由于其父系遺傳及地理學上的特殊性等特點，也使得其成為研究人類進化、群體結構的重要工具之一。其中，運用包括插入/缺失(InDel)在內的單核苷酸多態性(Single Nucleotide Polymorphism，SNP)位點和Alu序列構建Y染色體系統發育樹進行單倍群劃分則是長久以來進行人類進化和群體結構研究的主要手段，并已經發現了不同地區、不同人群的主要單倍群。近年來，越來越多的法醫學工作者注意到，由于不同人群和不同地區間單倍群的分布存在一定的特征，可以通過對檢案中未知來源的男性樣本進行單倍群劃分以推斷其地理來源或所屬群體，從而輔助案件偵查，因而，Y染色體系統發育樹具有重要的法醫學意義。
隨著測序技術的發展，越來越多的SNP位點得以被發現，其中包括部分可用于構建進化樹的SNP位點，這在極大程度上擴充了Y染色體進化樹，使得單倍群的劃分可以愈發精細，截至2016年3月27日，國際遺傳系譜學會(International Society of Genetic Genealogy，ISOGG)在線提供的可用于構建Y染色體進化樹的SNP位點已達31617個。但由于這其中部分位點的遺傳地位相同、某些位點的穩定性尚有待考證，且過多的遺傳標記不利于快速檢測等問題，給其在法醫學檢案中的應用帶來了挑戰。如今，van Oven等人用417個SNP位點構建了一個最小參考樹，該樹可提供全球范圍內各主要單倍群的地理分布(其中包括中國在內的亞洲主要單倍群為12個)，這可為法醫學檢案提供便利，但由于其僅能提供主要單倍群在各大洲的大致分布情況，并不具有較高的分辨率，因而，其在進一步區分某樣本的地理來源或所屬人群上具有極大的限制。因此，針對各群體或地區，構建一個具有較高分辨率的、穩定的系統發育樹顯得尤為必要。中國的國土面積位居世界第三，其人口總數則位列世界第一，其中更是包含56個民族，且在此之前，各群體間群體結構的差異就已經得以發現了。在上述背景下，我們有必要構建一個適用于中國群體的、簡約的、高分辨率的系統發育樹，這將不僅為檢案中未知樣本的溯源提供便利，在進一步了解中國群體亞結構方面也可提供一定的幫助。
但隨著分辨率的提高，勢必需要使用更多的Y-SNP位點，其中包括InDel位點，這就意味著需要一種能同時大批量檢測包括InDel位點在內的SNP位點的方法，而這個要求是傳統的檢測方法，如SNaPshot無法滿足的。
綜上所述，篩選一組適宜的Y染色體SNP遺傳標記，應用二代測序技術，構建一個適用于中國人群的、簡約的、高分辨率的、可將中國男性個體樣本正確歸屬至現已公認的Y染色體系統發育樹分枝上的二代測序體系，將為法醫的樣本歸屬問題提供一種新的技術手段。隨著二代測序技術的普及，在此基礎上開發出基于二代測序檢測平臺的Y染色體SNP二代測序試劑盒，將極大地推動這種新技術在法醫樣本溯源中的推廣和應用。
技術實現要素：
本發明要解決的技術問題是利用Y染色體系統發育樹對未知來源的中國男性樣本進行單倍群劃分以推斷其歸屬地或所屬群體。
本發明的技術方案是基于74個Y染色體SNP遺傳標記的法醫學二代測序試劑盒，包括復合擴增引物混合物。所述的基于74個Y染色體SNP遺傳標記的法醫學二代測序試劑盒中的復合擴增引物混合物包含了74個Y染色體SNP遺傳標記的共計144條擴增引物，各擴增引物的核苷酸序列分別如表2中SEQ ID No.1至SEQ ID No.144所示：
表2復合擴增引物
上表中，SNP位點M69與M82，M133與M134采用的是同一對擴增引物。
進一步的，所述的法醫學二代測序試劑盒還包括復合擴增反應混合液。
更進一步的，上述的法醫學二代測序試劑盒還包括標準DNA。
優選的，所述標準DNA為2800M標準DNA。
用二代測序時，用不用標準DNA都是可以的，為了質量控制使結果更為準確，因此使用標準DNA。
本發明還提供了上述的法醫學二代測序試劑盒在對未知來源的中國男性樣本進行單倍群劃分中的用途。
本發明的有益效果：本發明試劑盒包含74個Y染色體SNP遺傳標記，兼顧了系統發育樹的穩定性和高分辨率，以盡可能少的位點數達到了較高的體系分辨能力，可將任一中國男性個體樣本正確地劃分至現已公認的Y染色體系統發育樹分枝上。本發明是基于篩選得到的74個Y染色體SNP遺傳標記構建的法醫學檢測試劑盒，尤其適用于目前迅速發展的二代測序體系。本試劑盒可采用單管內復合擴增和具有更高通量的二代測序技術，能一次性獲得多個男性來源生物檢材的74個Y染色體SNP遺傳標記的基因分型，快速實現對生物檢材的來源地或所屬人群溯源。本試劑盒包括了標準DNA的分型結果(指用法醫學二代測序試劑盒檢測標準DNA獲得的其Y染色體SNP遺傳標記的分型)，可確保分型準確；該試劑盒復合擴增產物長度最短僅129bp，最長不超過200bp，對于法醫學常見的降解檢材的檢測具有優勢，具有好的應用前景和推廣價值。
附圖說明
圖1本發明所檢測的72個SNP位點所構成的進化樹
具體實施方式
以下通過具體實施方式對本發明進行詳細說明。
本發明系基于Y染色體SNP遺傳標記的法醫學二代測序試劑盒，是基于篩選得到的74個Y染色體SNP遺傳標記，利用目前迅速發展的二代測序體系構建的。該試劑盒由復合擴增引物混合物、標準DNA和復合擴增反應混合液構成。
該試劑盒的工作原理是首先通過復合擴增引物混合物和復合擴增反應混合液，分別在單管內一次性同時擴增獲得單一樣本所有74個Y染色體SNP的72個DNA片段(構建測序文庫)。
然后以此72個DNA片段為模板，分別加上接頭(此接頭是一致的，若要進行多個樣本的同時測序，則需要加接頭的基礎上分別給不同樣本加上不同的標簽以示區分。接頭和標簽均為ABI公司產品)。混合包括分型標準DNA樣本在內的多個樣本后進行乳液PCR擴增(乳液PCR時是將用于測序的多個樣本同時擴增的，即將所有的樣本混合到一個反應管里面擴增)，以獲得各待測樣本的74個Y染色體SNP的乳液PCR產物。
最后，2800M標準DNA的擴增產物作為陽性對照與樣本同時進行測序反應，得到各樣本的測序結果；此后，首先分析分型標準DNA的測序結果準確與否，若該分型標準DNA測序結果正確，表明該次測序結果可靠，則可進一步分析確定待測樣本74個Y染色體SNP遺傳標記的分型結果。
在本發明中，Y染色體SNP的選擇對二代測序試劑盒的構建極其關鍵。如前所述，Y染色體遺傳表現為父系遺傳，在人類進化研究中有重要的意義。在運用Y染色體SNP構建的系統發育樹中，用單倍群(haplogroup，Hg)表示一組類似的單倍型(haplotype)的集合。現有研究結果表明，其分布具有明顯的人群和地理特異性，任何合理的Y染色體DNA檢測體系都不能忽視對單倍群的劃分。ISOGG(網址www.isogg.org)在線提供的Y染色體系統發育樹給定了目前認為可用于劃分單倍群的所有位點，這無疑將是目前已知最完整、分辨率最高的系統發育樹，但由于其所包含的位點數量極其龐大、部分位點的穩定性有待考證，且各節點上的SNP位點存在冗余，使得其不適用于日常檢案。所以針對特定的群體或區域，選擇穩定的、單倍群特定的SNP位點，可保證結果可靠，同時避免信息的重復，檢測較少的位點即可進行單倍群的劃分，進而追溯生物檢材的人群或地理來源。van Oven等人在ISOGG和YCC所公布的系統發育樹的基礎上篩選出了包括各大洲主要單倍群節點在內的417個Y染色體SNP構建了一個最小參考樹，但由于其所包含的具有地區或群體針對性的SNP位點有限，使得其分辨率低，不能將未知生物檢材進一步溯源。
本發明試劑盒中SNP位點的選擇旨在使用較少SNP位點的同時盡可能地提高系統發育樹的分辨率。因此，本發明通過大量研究，得出了納入本發明試劑盒中的Y染色體SNP位點的采納標準：1)為中國群體特定的SNP位點，且不同主要單倍群的下級分枝中所包含位點數目依照該單倍群在人群中所占百分比而有所差異，在人群中所占比重越大，則下級分枝所包含的SNP位點越多；2)具有多態性的主要中間節點SNP，用以保證樹的拓撲結構的穩定性；3)在中國群體中多態性良好的SNP位點；4)可以設計出200bp以內擴增產物。其中，最后一條是每個位點必備條件。根據上述標準，本發明最后確認了74個Y染色體SNP遺傳標記用于建立此二代測序體系。
本發明研究確認的74個Y染色體SNP遺傳標記位點包含可覆蓋所有中國人群主要單倍群及其亞群的共計64個單倍群的特異SNP。經過群體調查實驗(即實施例的檢測實驗)證明，本發明的Y染色體SNP二代測序體系可將任一中國男性樣本正確歸屬至現已公認的Y染色體進化樹分枝上。
試劑盒中所涉及的74個Y染色體SNP位點信息如表3。
表3 74個Y染色體SNP位點
本發明試劑盒在Y染色體SNP的檢測中運用了復合擴增技術。該技術可以在單個反應體系中同時擴增多個目的DNA片段，具有方便、快捷、節約樣本和成本等優點。但這對引物設計有較高的要求，本次引物設計通過賽默飛公司白手套計劃完成，設計完成后的72對引物混合在同一引物池(primer pool)中。其中，由于SNP位點M69與M82，M133與M134位置相近，本發明對這四個位點分別設計了兩對擴增引物，每對位點上下游擴增引物序列相同，位于同一條擴增產物上。
本發明試劑盒利用上述復合擴增引物，獲得了包含74個Y染色體SNP遺傳標記的擴增產物(即，文庫)，繼而以此為模板，進行二代測序反應。
本試劑盒采用的測序可在PGM(Ion Personal Genome來自賽默飛公司)平臺上進行。該平臺的二代測序技術是一種基于堿基延伸時釋放氫離子，從而改變微環境pH值這一原理進行的檢測技術。芯片中含有大量的微孔(依型號不同而有所差異)，每個微孔理論上僅容納單個微珠，而經過乳液PCR反應之后，理論上一個微珠上僅存在一條擴增片段的多個克隆，即，理論上，單個微孔內僅存在一條擴增引物的多個克隆。通過同時檢測各個微孔中反應液在加入不同堿基后pH是否變化，即可反映實際得以延伸的堿基類型，直至所有文庫的檢測完成。其特點在于，可以同時分析多個樣本的多個SNP位點，且得到的結果是包括側翼序列在內的整條核苷酸序列，因而不僅可以了解到目的位置的堿基分布情況，還可以看到側翼序列的堿基排布，通過對比標準序列，可以更直觀地對分型結果的可靠性進行評估。
在每一樣本檢測SNP位點數一定的情況下，為了實現單次檢測更多樣本，需要注意各測序模版間量的均衡性，而此均衡性的主要影響因素則為文庫構建結果，即在于文庫內各擴增產物片段間數量的差異，而導致這一差異的主要原因則在于不同引物擴增效能的差異，因而在進行引物設計和混合引物池時需要尤其注意。
最后設計出的所有74個Y染色體SNP位點復合擴增引物序列參見表2。
本發明試劑盒中引入陽性對照是作為質量控制，用以評估單次測序結果是否可靠。本發明中提供的陽性對照包括了2800M標準DNA樣本的所有74個Y染色體SNP遺傳標記的標準分型結果。對未知樣本進行檢測時，并列地進行標準DNA的擴增和測序，通過對2800M標準DNA分型結果的分析，評估當次檢測結果的可靠性，決定是否進行后續分析。若結果可靠，則可對未知樣本進行分型，并對其所屬單倍群進行劃分。
更具體的，本發明試劑盒具體包括的組分可為：
a)復合擴增反應混合液：含DNA聚合酶的PCR緩沖液、去核酸酶水。
b)復合擴增引物混合物：如表1所示的74個Y染色體SNP遺傳標記的擴增引物對組成的復合擴增引物池。
c)部分消化引物序列試劑：FuPa反應液。
d)接頭連接反應試劑：包括接頭、標簽、轉換液及連接酶。
e)文庫純化試劑：包括XP反應液、70％乙醇和低濃度TE緩沖液。
f)文庫定量反應試劑：包括E.coli標準品、MasterMix和Assay。分別對各文庫進行定量，跟據定量結果，將文庫按相應比例稀釋，以保證后續用于乳液PCR的模版混合物中來自各樣本的模版含量均衡。
g)乳液PCR反應試劑：包括緩沖液、酶、ISP(Ion Sphere Particle)、反應油在內的反應混合物、Ion OneTouchTM反應液和Ion OneTouchTM油以及破乳溶液。
h)文庫富集試劑：包括洗脫液、文庫富集Beads、NaOH溶液、Beads洗脫液、Tween溶液、中和液、去核酸酶水。
i)測序反應混合物：含有聚合酶、測序引物、內參ISP。
j)測序反應其它試劑：W2溶液、W3溶液、氯片、Annealing緩沖液、NaOH溶液、dNTPs。
k)2800M標準DNA：作為質控指標，從文庫構建開始，與其它樣本并行處理。
上述a、c、d、f到j中各試劑除純水和NaOH外，一般需使用配套的商業化的產品，本次所用試劑為Hi-QTM系列，購自賽默飛公司。文庫純化試劑e中的XP反應液購自Beckman公司。試劑k作為男性樣本標準品則購自Promega公司。
至于提取待檢測樣本中的DNA的模板，可使用本領域目前的各種常規試劑，提取DNA模板可以參照現有的常規方法即可進行，亦可使用商業化試劑按指南進行。
利用本發明所述試劑盒，可以對法醫DNA樣本進行分析。分析方法包括以下步驟；
1)提取待檢測樣本的DNA，作為擴增模板。
2)利用上述復合擴增反應混合液和復合擴增引物混合物對步驟1提取的DNA以及上述2800M標準DNA進行單管內復合擴增(即，進行文庫構建)。
所述復合擴增PCR的反應的循環參數為：99℃，2分鐘；99℃，15秒，60℃，4分鐘，19個循環后10℃保存。
3)利用上述部分消化引物序列試劑部分消化步驟2)所構建文庫的引物。
所述部分消化文庫引物的循環參數為：50℃，10分鐘，55℃，10分鐘，60℃，20分鐘。
4)利用上述接頭連接反應試劑在上述方法步驟3中所述產物上加接頭，并利用文庫純化試劑對其進行純化。
所述加接頭的循環參數為：22℃，30分鐘，72℃，10分鐘。
5)利用上述文庫定量反應試劑對上述方法步驟4中所述產物進行定量，以保證后續的文庫混合時各文庫間量的均衡。
所述定量反應的循環參數為：50℃，2分鐘，95℃，2分鐘；95℃，15秒，60℃，1分鐘，40個循環。
6)利用上述乳液PCR反應試劑進行乳液PCR反應，并對上述步驟5中的產物進一步富集，以保證測序時的質量和數量均達到較高水平。
所述乳液PCR反應的循環參數依所使用試劑盒而定：儀器預設提供所有可用試劑盒的參數，使用時選擇所用試劑盒即可。
7)利用測序反應混合物和測序反應其它試劑對上述步驟6中的產物進行測序，獲得標準DNA及樣本各位點基因型。
所述加入測序引物后孵育條件為：95℃，2分鐘，37℃，2分鐘。
所述測序反應的循環參數依所需測序的遺傳標記類型及片段長度、所用芯片等而定。
進一步的，上述方法步驟7中所述的測序結果分析包括以下步驟：將富集后的產物加上測序所需試劑后，載入測序芯片內，進行測序反應，反應結束后得到含有該位點測序結果的excel表格，以及測序原始文件(包括序列信息文件bam.和對應的定位信息文件bai.)，在對2800M標準DNA分型結果及序列分析，認為該次測序結果可信后，方可進行對該次測序其它樣本進行分析，獲得待測樣本基因型。
以下用具體實例進一步具體說明本發明，其中所用試劑無特殊說明均使用以下試劑和儀器：
1)Nanodrop-1000微量紫外可見分光光度計，賽默飛公司
2)ProFlexTM PCR擴增儀，賽默飛公司
3)純水裝置，Millipore公司
4)臺式高速離心機，賽默飛公司
5)移液器EPPENDORF公司
6)芯片載樣所用移液器為Rainin移液器，梅特勒-托利多公司
7)磁力架，賽默飛公司
8)實時定量PCR儀7500型，賽默飛公司
9)PGM二代測序系統，賽默飛公司
10)Ion 318芯片，賽默飛公司
11)漩渦振蕩器，賽默飛公司
實施例1本發明試劑盒的制備
用于檢測的Y染色體SNP二代測序試劑盒可包括分別包裝的以下試劑：
a)復合擴增引物混合物。由表3所示的擴增引物混合得到，由賽默飛公司合成并混合至一個引物池。
b)復合擴增反應混合液、部分消化引物序列試劑。本實施例中使用賽默飛公司Ion AmpliSeqTM Library Kit 2.0提供的PCR反應混合液。
c)接頭連接反應試劑。本實施例中使用賽默飛公司的Ion XpressTM Barcode Adapter，將接頭和標簽按1：1混合為標簽-接頭混合物，2倍稀釋備用。需要說明的是，由于標簽的主要作用為區分不同樣本，因而在單次測序樣本數僅為1的情況下可不使用標簽。
d)文庫純化試劑。本實施例中使用XP反應液，70％乙醇溶液按乙醇和水230：100的體積比進行配置，此溶液需新鮮配置。
e)文庫定量反應試劑。本實施例中使用Ion Library TaqManTM定量試劑盒，其中MasterMix和Assay試劑以10：1的比例混合備用。
f)乳液PCR反應試劑及文庫富集試劑。本實施例中使用Ion PGMTM Hi-Q OT2試劑盒，其中，文庫富集所用的Melt-off溶液需用1M NaOH溶液40μL和試劑盒提供的Tween溶液280μL混合備用。
g)測序反應所用試劑。本實施例中除1M NaOH溶液外，均使用Ion PGMTM Hi-QTM測序試劑盒。
將上述試劑分別按各自常規要求包裝后即制得基于Y染色體SNP遺傳標記的法醫學二代測序試劑盒，用于后繼的實驗。
實施例2使用本發明試劑盒檢測100個無關漢族男性個體檢材
使用上述基于Y染色體SNP遺傳標記的法醫學二代測序試劑盒，進行了100個無關漢族成年男性志愿者個體檢材的檢測。具體的檢測過程按如下步驟進行：
a、用試劑盒或鹽析法從100個無關漢族男性個體血樣中提取DNA，作為復合擴增模板(鹽析法所提取DNA來自實驗室已有DNA)；
b、以步驟a中的DNA模版，利用上述復合擴增反應混合液和復合擴增引物混合物將DNA模版及2800M標準DNA進行單管內復合擴增，構建各樣本文庫。體系為20μL：擴增引物混合物10μL，復合擴增反應混合液4μL，模版DNA1μL，加入去核酸酶水補足20μL；循環條件：99℃2分鐘，99℃15秒、60℃4分鐘、循環19次。
c、引物的部分消化：步驟b中的產物中分別加入2μL FuPa反應液，使總體積為22μL，然后50℃10分鐘，55℃10分鐘，60℃20分鐘。
d、加接頭：在步驟c的各產物中分別加入轉換液4μL，以及上述稀釋好的標簽-接頭混合物2μL，充分混合后分別加入DNA連接酶2μL，使體積達30μL，然后22℃30分鐘，72℃10分鐘。
e、文庫純化：將步驟d中得到的產物分別完全轉移至含有45μLXP反應液的EP管中，室溫孵育5分鐘。然后將其置于磁力架上約2分鐘，棄上清液后分別用150μL 70％乙醇溶液潤洗三次，最后一次洗滌完成后，分別將其從磁力架上移下，晾干，并加入50μL低濃度TE溶液充分重懸，然后靜置后吸取上清液備用。
f、文庫定量：將步驟e中的產物分別取5μL，稀釋100倍后，分別取9μL，加入MasterMix、Assay混合液11μL，使總體積為20μL，進行定量。循環參數為：50℃2分鐘，95℃2分鐘；95℃15秒，60℃1分鐘，循環40次。
g、乳液PCR反應：文庫混合物的準備：步驟f中定量后的文庫按原濃度最低者進行稀釋、混合，使混合后各文庫含量均一，取稀釋后的文庫混合物200pM，加入去核酸酶水至25μL。乳液PCR體系：Ion PGMTMHi-QTM Reagent Mix 800μL,Ion PGMTM Hi-QTM Enzyme Mix 50μL,Ion PGMTM Hi-QTM ISPs 100μL,前述文庫25μL，加入去核酸酶水至1000μL，轉移至反應容器中，加上1.7mLOneTouchTM反應用油。在儀器OneTouch2的相應位置按操作手冊指示加入Ion OneTouchTM反應液和Ion OneTouchTM油以及破乳溶液。
h、文庫富集：將步驟g中回收得到的產物洗滌、離心回收(回收后棄上清至100μL)后按操作指南進行富集。此步驟需在富集所用容器中依次加入前述回收的產物100μL、Beads130μL、洗脫液300μL(連續3孔)以及Melt-off溶液300μL，最后在回收用擴增管中加入中和液10μL。依次經Beads結合，洗脫液洗滌和Melt-off溶液解離后，最終的回收產物被轉移至中和液中。
i、使用賽默飛公司的PGM二代測序系統進行測序：充分混合步驟h中得到的產物后，加入內參ISP5μL，混勻，離心，從對側棄上清至剩余15μL，加入測序引物12μL，使體積達27μL，然后95℃2分鐘，37℃2分鐘孵育。在孵育完的產物中加入聚合酶3μL，使體積達30μL，室溫孵育5分鐘。
其間，按操作手冊安裝及潤洗測序反應用W1、W2及W3等配件，加入相應試劑，初始化PGM測序系統，準備好dNTP，以及測試好待用芯片。然后將前述30μL載入測試好的芯片中，進行測序反應。
測序條件：按提示選擇所用試劑盒，設置flow數為500，本實施例的原始文件收集使用Torrent_Suite Server(v4.6)，數據分析選用VariantCaller(v4.6.0.7)和CoverageAnalysis(v4.6.0.3)。后續分析使用IGV(Integrative Genomics Viewer)v 2.3.72.
所得的所有100個男性樣本及2800M標準DNA的分型的結果見表4，從表中可以看到，共劃分至18個單倍群。具體劃分方法如下：如圖1(圖1中72個SNP節點均在現有進化樹上存在，針對中國群體選擇圖1所示的72個；另有兩個位點，rs172763451、rs20756401，現有樹中沒有，尚不知曉其所在節點，故構建進化樹時未包含此二位點)所示，因為進化樹是呈樹狀分布的，不同單倍群即為樹的分枝，而各SNP在樹上則分布于各自的節點。進行單倍群劃分時，從樹根部往上看，若該節點SNP為突變型，即陽性，則可沿分枝往上；若某節點為陰性，則該節點上一個SNP所在節點為終點，其所提示單倍群為該樣本所在單倍群。因而，一個單倍群往往系由多個SNP分型決定的。
表4檢測結果
SEQUENCE LISTING
<110> 四川大學
<120> 基于74個Y染色體SNP遺傳標記的法醫學二代測序試劑盒
<130> A160821KN
<160> 144
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 28
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增SRY10831.1/SRY10831.2位點的上游引物
<400> 1
acacagaaac agattttcta caacagga 28
<210> 2
<211> 27
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增SRY10831.1/SRY10831.2位點的下游引物
<400> 2
gatcattcag tatctggcct cttgtat 27
<210> 3
<211> 27
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M168位點的上游引物
<400> 3
tgatgaaatc tgctttttgt tttgcag 27
<210> 4
<211> 28
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M168位點的下游引物
<400> 4
taggtctctg actgttcagt tttattcc 28
<210> 5
<211> 25
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M145位點的上游引物
<400> 5
tgcaaagagg gtaggcttaa tagga 25
<210> 6
<211> 28
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M145位點的下游引物
<400> 6
acacagagtc taatttttat agcggcat 28
<210> 7
<211> 28
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增P153位點的上游引物
<400> 7
ttctcactat gatccaggca atgtattt 28
<210> 8
<211> 28
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增P153位點的下游引物
<400> 8
cataaattac ccagattcgg gaagtttg 28
<210> 9
<211> 25
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M174位點的上游引物
<400> 9
gttcttctcc gtcacagcaa aaatg 25
<210> 10
<211> 26
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M174位點的下游引物
<400> 10
cttgcaagga aaagtgtgca ataaac 26
<210> 11
<211> 23
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M15位點的上游引物
<400> 11
aaatcctgaa caatcgccat cac 23
<210> 12
<211> 27
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M15位點的下游引物
<400> 12
tctacctcat gcgcatatac aatcaaa 27
<210> 13
<211> 25
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增N1位點的上游引物
<400> 13
gtacatgatc tgctagcaaa gttgg 25
<210> 14
<211> 32
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增N1位點的下游引物
<400> 14
acactagcta taagcaaaag aaatctaacg aa 32
<210> 15
<211> 22
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增P99位點的上游引物
<400> 15
gtggtaggtt cctttagtcc ca 22
<210> 16
<211> 29
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增P99位點的下游引物
<400> 16
agaatagaag atgtagtcag catgtagag 29
<210> 17
<211> 28
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增p47位點的上游引物
<400> 17
cagaatttct acactgtcat ctgaatcc 28
<210> 18
<211> 32
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增p47位點的下游引物
<400> 18
ttgctgtaaa ggtattttta gatgagattg ag 32
<210> 19
<211> 28
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M55的上游引物
<400> 19
agtaccattc cacagaagaa cagaaata 28
<210> 20
<211> 28
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M55位點的下游引物
<400> 20
aaagctacta cttctgaatc ctaatggc 28
<210> 21
<211> 27
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M125位點的上游引物
<400> 21
cccaagcaga agtcaacttg agactat 27
<210> 22
<211> 24
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M125位點的下游引物
<400> 22
cccaagggat caggagttat gtga 24
<210> 23
<211> 24
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增P143位點的上游引物
<400> 23
cacaagtgaa cagatcccaa cttc 24
<210> 24
<211> 28
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增P143位點的下游引物
<400> 24
gtctttgatt ttgaggcaaa ttttcgtg 28
<210> 25
<211> 28
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M130位點的上游引物
<400> 25
gctggctatt aatgtgaagg aaggtatg 28
<210> 26
<211> 25
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M130位點的下游引物
<400> 26
ctctcttcag caacagtaag tcgaa 25
<210> 27
<211> 31
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M131位點的上游引物
<400> 27
atcacatttt atcttactaa tgccttttcc t 31
<210> 28
<211> 32
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M131位點的下游引物
<400> 28
aaaggtcaat ttagagcaga gaaattattc tt 32
<210> 29
<211> 27
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M217位點的上游引物
<400> 29
caaaatcctc tcgtacagat ctgtttc 27
<210> 30
<211> 25
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M217位點的下游引物
<400> 30
atttgataaa gctgctgtgg ctttc 25
<210> 31
<211> 28
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M48位點的上游引物
<400> 31
tttgttttat cccttccact cttagctt 28
<210> 32
<211> 28
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M48位點的下游引物
<400> 32
tccaagtttc agtgtcacat ataagtca 28
<210> 33
<211> 33
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增P133位點的上游引物
<400> 33
caggtggtgt tacaggttag aatttatata tac 33
<210> 34
<211> 28
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增P133位點的下游引物
<400> 34
acgagacgtg tagttaattg gagatttt 28
<210> 35
<211> 25
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M89的上游引物
<400> 35
ctggattcag ctctcttcct aaggt 25
<210> 36
<211> 25
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M89的下游引物
<400> 36
agctgtgtga agtcttggca gaata 25
<210> 37
<211> 28
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增P141的上游引物
<400> 37
aaaatgacag tcttgacctc taaacatt 28
<210> 38
<211> 25
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增P141的下游引物
<400> 38
gtcaacaaag gagtgtgact gtgta 25
<210> 39
<211> 28
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增P151位點的上游引物
<400> 39
tcttttgtgc ctatttttct atgtaggg 28
<210> 40
<211> 26
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增P151的下游引物
<400> 40
taagacaagc tgcaaaattg agtgag 26
<210> 41
<211> 25
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增F1329位點的上游引物
<400> 41
ccaagatata aactgcttgt gcgat 25
<210> 42
<211> 26
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增F1329位點的下游引物
<400> 42
gacattgagt gtgagctgca ataatg 26
<210> 43
<211> 28
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M201位點的上游引物
<400> 43
tgtcaaattg tgacactgca atagttac 28
<210> 44
<211> 28
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M201位點的下游引物
<400> 44
ctatcagctt catccaacac taagtacc 28
<210> 45
<211> 28
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M578位點的上游引物
<400> 45
agagtagttc atattgaaac cttgtggt 28
<210> 46
<211> 31
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M578下游位點的引物
<400> 46
agggagatat ctattagaga taggatggag t 31
<210> 47
<211> 23
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M69和M82位點的上游引物
<400> 47
gcttcaggag gctgtttaca ctc 23
<210> 48
<211> 24
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M69和M82位點的下游引物
<400> 48
actgaagaaa caaacctacc tgga 24
<210> 49
<211> 23
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M522位點的上游引物
<400> 49
gccttagatg aggatgtcct tcg 23
<210> 50
<211> 26
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M522位點的下游引物
<400> 50
ggaggaagta cagtgcagaa aatcac 26
<210> 51
<211> 30
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M170位點的上游引物
<400> 51
tttcatgttt gttcaaataa ttgcagctct 30
<210> 52
<211> 27
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M170位點的下游引物
<400> 52
accacacaaa aacaggtcct catttta 27
<210> 53
<211> 30
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M304位點的上游引物
<400> 53
aaaccacttc ctaattattc agactcaaga 30
<210> 54
<211> 32
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M304位點的下游引物
<400> 54
actttcaaaa cgtcttatac caaaatatca cc 32
<210> 55
<211> 24
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增P209位點的上游引物
<400> 55
ggagtttgct tatgaagcca agga 24
<210> 56
<211> 27
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增P209位點的下游引物
<400> 56
cacttattta agcattggtt ggtcacg 27
<210> 57
<211> 28
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M267位點的上游引物
<400> 57
cctgtgtttc catttctctt ttcctcat 28
<210> 58
<211> 25
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M267位點的下游引物
<400> 58
tcagctagat tgtgttcttc cacac 25
<210> 59
<211> 27
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M172位點的上游引物
<400> 59
ctgcctctca gtatcaacag gtaaaaa 27
<210> 60
<211> 26
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M172位點的下游引物
<400> 60
ccatgttggt ttggaacagt ttatcc 26
<210> 61
<211> 24
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M9位點的上游引物
<400> 61
caaggaattc gctgcagcat ataa 24
<210> 62
<211> 26
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M9位點的下游引物
<400> 62
aatgcataat gaagtaagcg ctacct 26
<210> 63
<211> 26
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增P326位點的上游引物
<400> 63
gaggtcaaaa tttttagggt ccctca 26
<210> 64
<211> 25
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增P326位點的下游引物
<400> 64
cctgtgtaag cacaaagtag gttct 25
<210> 65
<211> 32
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M526位點的上游引物
<400> 65
atcaaggaaa tttgtgtttt ccaaactgta aa 32
<210> 66
<211> 21
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M526位點的下游引物
<400> 66
tactttggga ggctgctgtt g 21
<210> 67
<211> 27
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增P193位點的上游引物
<400> 67
gaaaaggtaa acaccatttc caccaat 27
<210> 68
<211> 25
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增P193位點的下游引物
<400> 68
tagctttgtg ttttcagtag cacct 25
<210> 69
<211> 28
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M214位點的上游引物
<400> 69
tcaaaaacta ctggttactt tcgttcgt 28
<210> 70
<211> 22
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M214位點的下游引物
<400> 70
tgtcctatag gcccaggtac gc 22
<210> 71
<211> 27
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M231位點的上游引物
<400> 71
tggaaaatgt gggctcgttt taattat 27
<210> 72
<211> 26
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M231位點的下游引物
<400> 72
acagcaagtt tattcgttgt gtttga 26
<210> 73
<211> 27
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增TAT位點的上游引物
<400> 73
atatggactc tgagtgtaga cttgtga 27
<210> 74
<211> 26
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增TAT位點的下游引物
<400> 74
acaagaagaa cttcagcatt gggtat 26
<210> 75
<211> 24
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M178位點的上游引物
<400> 75
actccgaaag tctgcatgga ttag 24
<210> 76
<211> 25
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M178位點的下游引物
<400> 76
agtactgaat gcagcaatac tgtct 25
<210> 77
<211> 28
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M175位點的上游引物
<400> 77
gatttaaact ctctgaatca ggcacatg 28
<210> 78
<211> 30
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M175位點的下游引物
<400> 78
cttgattgac tgtaatccat gtactttgtc 30
<210> 79
<211> 28
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增L466的下游引物
<400> 79
aattgccata tgagagtcat cataggtg 28
<210> 80
<211> 28
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增L466位點的下游引物
<400> 80
ctctttcacc atagtaaaga cttggatg 28
<210> 81
<211> 30
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M119位點的上游引物
<400> 81
aaaaatgtta tgggttattc caattcagca 30
<210> 82
<211> 26
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M119位點的下游引物
<400> 82
ccaaggtaaa tgactcaccc taagga 26
<210> 83
<211> 25
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增P203.1位點的上游引物
<400> 83
agttgttaac ctgtgctcaa atcct 25
<210> 84
<211> 25
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增P203.1位點的下游引物
<400> 84
cgaatgtgct gtattgtgct gtatt 25
<210> 85
<211> 23
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增F140位點的上游引物
<400> 85
ggatcatgaa tctgcagcga aca 23
<210> 86
<211> 28
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增F140位點的下游引物
<400> 86
caggacaatg aaacattgag agatgttg 28
<210> 87
<211> 28
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增F78位點的上游引物
<400> 87
gacatacaca caggcataga aaagaaag 28
<210> 88
<211> 28
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增F78位點的下游引物
<400> 88
cactttttca agtgatgttt taggcact 28
<210> 89
<211> 23
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增P31位點的上游引物
<400> 89
gggaacaggt aggtggtatt tgg 23
<210> 90
<211> 23
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增P31位點的下游引物
<400> 90
ctgatacacg agaatcgctt ggg 23
<210> 91
<211> 23
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M95位點的上游引物
<400> 91
ccagcaatag tgttgcacct tct 23
<210> 92
<211> 24
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M95位點的下游引物
<400> 92
ccacattttg gtagtgcacc tgtt 24
<210> 93
<211> 25
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M88位點的上游引物
<400> 93
gctatggcct aggtgctttt cttat 25
<210> 94
<211> 26
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M88位點的下游引物
<400> 94
tatggtcttc catgtgatgg tcagta 26
<210> 95
<211> 25
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M176位點的上游引物
<400> 95
cattcttgag tgtgtggctt tcgta 25
<210> 96
<211> 25
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M176位點的下游引物
<400> 96
atgcacagag agaaataccc gaatt 25
<210> 97
<211> 23
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M122位點的上游引物
<400> 97
aggcgatgct gatatgctag ttc 23
<210> 98
<211> 28
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M122位點的下游引物
<400> 98
caaacttggt aaactctact tagttgcc 28
<210> 99
<211> 28
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M324位點的上游引物
<400> 99
cagaaacact gtcaatctga tttgatct 28
<210> 100
<211> 30
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M324位點的下游引物
<400> 100
tgtcatgata ttcacatttc tgaaatgctc 30
<210> 101
<211> 24
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增P197位點的上游引物
<400> 101
ggccagcgaa atgatgacta attg 24
<210> 102
<211> 28
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增P197位點的下游引物
<400> 102
tgaatccact agagaaagct acatagga 28
<210> 103
<211> 28
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增P200位點的上游引物
<400> 103
cccattctat ctgttcctct ctcatgta 28
<210> 104
<211> 28
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增P200位點的下游引物
<400> 104
cttgactgtt gaatggagat acatcttg 28
<210> 105
<211> 26
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增L467(KL2)位點的上游引物
<400> 105
accatctgtc ctcatccatt taaagg 26
<210> 106
<211> 25
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增L467(KL2)的下游引物
<400> 106
tgtgctccat gaaaaacatc gtaac 25
<210> 107
<211> 23
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增JST002611位點的上游引物
<400> 107
ccaacatact cgccaatcca atg 23
<210> 108
<211> 25
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增JST002611位點的下游引物
<400> 108
cagataccca gcagtattag ctgtg 25
<210> 109
<211> 27
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增F11位點的上游引物
<400> 109
tacggtgcaa agtagcttga gatttta 27
<210> 110
<211> 27
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增F11位點的下游引物
<400> 110
actgtactat cacacaattt tgtcagc 27
<210> 111
<211> 27
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增P201位點的上游引物
<400> 111
aatatttact gagcatgatg tgctgtg 27
<210> 112
<211> 24
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增P201位點的下游引物
<400> 112
cactaacccc aaatcccaag gtag 24
<210> 113
<211> 24
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M133和M134位點的上游引物
<400> 113
tgtggagaga tacttttgat cccc 24
<210> 114
<211> 25
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M133和M134位點的下游引物
<400> 114
ggctttctga agcaaatacc agctt 25
<210> 115
<211> 33
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M117位點的上游引物
<400> 115
tcactaaaga gcttattaga tgatagaaaa aca 33
<210> 116
<211> 27
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M117位點的下游引物
<400> 116
accagcaaaa cttttcctat agaagca 27
<210> 117
<211> 28
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增F444位點的上游引物
<400> 117
gtcacatgtc ttttggatac aaaccttc 28
<210> 118
<211> 26
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增F444位點的下游引物
<400> 118
ggcattcgct cttaataaaa catgct 26
<210> 119
<211> 26
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增F629位點上游引物
<400> 119
acctgctcca cttgtacata ctactc 26
<210> 120
<211> 24
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增F629位點的下游引物
<400> 120
aaaaatctgt ttgctggtgc acaa 24
<210> 121
<211> 27
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增F46位點的上游引物
<400> 121
attaggattt cagtataccc cttggga 27
<210> 122
<211> 23
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增F46位點的下游引物
<400> 122
ctccttttca ctgcaatgac cgt 23
<210> 123
<211> 28
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M45位點的上游引物
<400> 123
tctaggagag aggatatcaa aaattggc 28
<210> 124
<211> 25
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M45位點的下游引物
<400> 124
tacaactctc ctactctgat gagca 25
<210> 125
<211> 26
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M242位點的上游引物
<400> 125
ctacggcata gaaagtttgt gcaaaa 26
<210> 126
<211> 25
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M242位點的下游引物
<400> 126
tatttcgctt taagggcttt cagca 25
<210> 127
<211> 27
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M346位點的上游引物
<400> 127
ggaagagtaa atctgtccct ctatcct 27
<210> 128
<211> 27
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M346位點的下游引物
<400> 128
tgtaggagga tattcttcca ctcactc 27
<210> 129
<211> 27
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M3位點的上游引物
<400> 129
taagggcatc tttcatttta ggtacca 27
<210> 130
<211> 27
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M3位點的下游引物
<400> 130
gacacatctg aacactagtg gatttgc 27
<210> 131
<211> 28
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M207位點的上游引物
<400> 131
aggaaaaatc agaagtatcc ctgaagaa 28
<210> 132
<211> 29
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M207位點的下游引物
<400> 132
tcacttcaac ctcttgttgg aagattatt 29
<210> 133
<211> 27
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M173位點的上游引物
<400> 133
cacagtactc actttaggtt tgccata 27
<210> 134
<211> 27
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M173位點的下游引物
<400> 134
tttcccagat cctgaaaaca aaacact 27
<210> 135
<211> 24
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M17位點的下游引物
<400> 135
gccttgtctt gaagtggtat tggg 24
<210> 136
<211> 25
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M17位點的下游引物
<400> 136
catctgaaac ccacatacaa cagtc 25
<210> 137
<211> 27
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M343位點的上游引物
<400> 137
accctagcct tttaaatatg caaatgc 27
<210> 138
<211> 27
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M343位點的下游引物
<400> 138
acctttaata tgcaaatgcc agcgtta 27
<210> 139
<211> 28
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M124位點的上游引物
<400> 139
tgatcaactt ctttccctca acatagtt 28
<210> 140
<211> 26
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增M124位點的下游引物
<400> 140
ggcaacacca gaatctaaca aagcaa 26
<210> 141
<211> 26
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增rs17276345位點的上游引物
<400> 141
attattacca tcacctggca ctgaga 26
<210> 142
<211> 26
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增rs17276345的下游引物
<400> 142
ggaaaagggt ggaacaagac atttag 26
<210> 143
<211> 24
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增rs2075640位點的上游引物
<400> 143
ggttagttca gctgagcact cttc 24
<210> 144
<211> 22
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> 擴增rs2075640位點的下游引物
<400> 144
gcatttcctc ggtcagagaa gg 22
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