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一種用于身份鑒定的復合分型系統的制作方法

文檔序號:12097986閱讀:698來源:國知局
一種用于身份鑒定的復合分型系統的制作方法與工藝
本發明屬于法醫學身份鑒定
技術領域
,涉及一種用于身份鑒定的復合分型系統,具體涉及482個SNP位點及其在身份鑒定中的應用。
背景技術
:法醫學DNA分析是應用現代DNA分析技術,分析DNA遺傳標記在群體中的分布與傳遞規律,確定分析樣品的一致性與親緣關系,從而對樣品來源樣本進行身份鑒定,為偵查破案和司法審判等提供技術支持。其分析對象主要涉及人體各種體液(斑)、組織、毛發以及表皮脫落細胞等。目前法醫學DNA分析中用于身份鑒定的技術主要是針對短串聯重復序列(Shorttandemrepeats,STR)以及單核苷酸多態性(Singlenucleotidepolymorphisms,SNP)分型。STR廣泛存在于人類基因組中,具有高度多態性。對于一個特定的個體,染色體上某個特定位置的重復序列的重復次數是固定的,而對于不同的個體在同一位置處的重復次數可能不同,這就構成了人群中這些重復序列的多態性。由于人類基因組中這種重復序列非常多,通過對這種多態性的檢測,就可以明確區分個體與個體的不同。SNP被稱為“第三代DNA遺傳標記”,與被稱為“第二代遺傳標記”的STR相比具有截然不同的特點:分布密集、數量龐大(在人類基因組中被認為有300萬個以上的SNP遺傳標記,這可能達到了人類基因組多態位點數目的極限)、頻率高、屬二態性標記、存在相對穩定,因此被認為是應用前景最好的遺傳標記物。目前,基于SNP和STR發展出了多種用于身份鑒定或親緣關系鑒定的分型體系或試劑盒。例如,中國專利申請201310125171公開了20個X-SNP位點多色熒光復合檢測的分型方法,所述20個X-SNP位點在NCBI中SNP數據庫的rs號分別為rs5916197,rs757018,rs2071182,rs5951622,rs4898214,rs5963947,rs5906341,rs4826645,rs3860291,rs5912774,rs1988916,rs5941046,rs4463614,rs5916844,rs6568051,rs2522169,rs5930646,rs5929739,rs5908051,rs6627351。中國專利申請201010265870公開了一種用于個體識別的44個SNPs位點多色熒光復合檢測試劑盒和檢測方法,44個SNP基因位點在NCBI中SNP數據庫的rs號分別為rs1109037,rs3780962,rs987640,rs9951171,rs430046,rs338882,rs2342747,rs10092491,rs1821380,rs321198,rs7041158,rs13218440,rs560681,rs445251,rs8078417,rs10488710,rs7520386,rs214955,rs4530059,rs13182883,rs722290,rs6811238,rs279844,rs9905977,rs6955448,rs4288409,rs315791,rs740598,rs2272998,rs7205345,rs10773760,rs221956,rs576261,rs1498553,rs2399332,rs1058083,rs993934,rs1336071,rs1294331,rs1523537,rs2269355,rs12997453,rs1736442和rs10776839。再例如,J.M.Butler和B.Budowle等人公開了使用了傳統的19個STR基因座進行分型和身份鑒定(J.M.Butler,R.Schoske,P.M.Vallone,J.W.Redman,M.C.Kline,Allelefrequenciesfor15autosomalSTRlocionU.S.CaucasianAfricanAmerican,andHispanicpopulations,J.ForensicSci.48(2003)908–911;J.Ge,B.Budowle,R.Chakraborty,ChoosingrelativesforDNAidentificationofmissingpersons,J.ForensicSci.56(2011);B.Budowle,F.R.Bieber,A.J.Eisenberg,Forensicaspectsofmassdisasters:strategicconsiderationsforDNA-basedhumanidentification,LegalMed.7(2005)230–243),這19個STR基因座為CSF1PO、D12S391、D13S317、D16S539、D18S51、D19S433、D21S11、D2S1338、D3S1358、D5S818、D6S1043、D7S820、D8S1179、FGA、PentaD、PentaE、THO1、TPOX以及vWA。雖然目前已開發了眾多用于身份鑒定和個體識別的遺傳標記分型體系,然而對于血統較遠的一些親緣關系,現有的遺傳標記復合分型體系無法做出令人滿意的家系身份鑒定結論。例如,在實際應用,現有分型體系對一些諸如祖孫、叔侄或半同胞等親緣關系的分型鑒定效果并不理想,而此類親緣關系的鑒定也是實際應用中經常面臨的問題。因此,對于此類親緣關系的鑒定體系或技術有著相當程度的實際需要。綜上所述,開發一套分型效能和應用范圍更加強大的復合分型系統是法醫學身份鑒定、個體識別和親緣關系判定領域中亟待解決的重要問題。技術實現要素:本發明要解決的技術問題是提供一套用于身份鑒定的,尤其適用于諸如祖孫、叔侄或半同胞等親緣關系鑒定的,具備更加強大的分型效能和應用范圍的復合分型系統。一個方面,本發明提供了一組遺傳標記組合,所述的遺傳標記組合包括以下482個SNP位點中的至少214個;作為優選,所述的遺傳標記組合包括以下482個SNP位點中的至少366個;作為進一步優選,所述的遺傳標記組合包括以下482個SNP位點中的至少405個。所述的482個SNP位點在美國國立生物技術信息中心(NationalCenterforBiotechnologyInformation,NCBI)的SNP數據庫中的rs號分別為:rs1490413、rs4654468、rs7520386、rs17351137、rs10927438、rs7517833、rs798066、rs1524180、rs1281611、rs10874326、rs10801788、rs7546709、rs770927、rs187823、rs6684718、rs2036173、rs10748478、rs4847034、rs560681、rs10494685、rs7542498、rs922715、rs10495407、rs891700、rs1413212、rs876724、rs1109037、rs2372009、rs954789、rs863022、rs10203786、rs12617928、rs13395411、rs6547037、rs12622186、rs4849589、rs11888583、rs1881881、rs6541835、rs294643、rs993934、rs1251098、rs6711922、rs13383710、rs1540482、rs10189619、rs12464448、rs2368108、rs12997453、rs1598075、rs13408249、rs850889、rs1440059、rs2392819、rs1443664、rs4074882、rs907100、rs1357617、rs2030874、rs4283565、rs4684919、rs1121305、rs4857969、rs4493387、rs4364205、rs9843337、rs9814482、rs9873254、rs9866013、rs17792804、rs6549661、rs9878912、rs6810199、rs6437890、rs11921425、rs1436345、rs12639347、rs12488989、rs2399332、rs1872575、rs6785912、rs1600137、rs150205、rs10936362、rs1384823、rs1017953、rs1355366、rs779306、rs6444724、rs2046361、rs6846909、rs1356468、rs1452556、rs2324149、rs11940554、rs6826047、rs11096766、rs1822676、rs279844、rs2570070、rs13151209、rs13134862、rs6823094、rs2648037、rs10019345、rs11098234、rs1483597、rs167503、rs619042、rs1948210、rs4473636、rs6813291、rs1554472、rs10024103、rs6838690、rs35034620、rs6811238、rs921691、rs36029731、rs10520447、rs9684753、rs6552515、rs1979255、rs7718226、rs11133954、rs717302、rs7714769、rs417513、rs2928231、rs2257128、rs159606、rs182842、rs10035361、rs10052385、rs641437、rs10072283、rs767715、rs2406113、rs171227、rs12374491、rs412683、rs12153737、rs10478183、rs7717565、rs2408032、rs13182883、rs7704770、rs4543310、rs828720、rs315791、rs154367、rs251934、rs338882、rs1029047、rs1409096、rs13218440、rs9358112、rs7382170、rs2025679、rs10947859、rs4711791、rs663933、rs9349534、rs2811231、rs9345749、rs7772342、rs818269、rs12206819、rs16883568、rs6902855、rs9451593、rs1030428、rs1336071、rs9363138、rs9494677、rs200810、rs12198721、rs7769811、rs12662867、rs4946582、rs1884255、rs1478829、rs1358856、rs2503107、rs1360947、rs1452989、rs2272998、rs214955、rs6911233、rs4585574、rs1584535、rs2820408、rs9347854、rs727811、rs6955448、rs917118、rs1406627、rs10228127、rs1019029、rs991471、rs6965666、rs7797272、rs7805962、rs9969372、rs9642306、rs10263034、rs452247、rs6973042、rs1230531、rs10265025、rs10487320、rs1548395、rs321198、rs737681、rs1861751、rs10092491、rs4237030、rs1377247、rs2368508、rs7831841、rs1515685、rs1589196、rs7015305、rs7819544、rs7015145、rs4487715、rs10095524、rs1383474、rs4288409、rs41376144、rs6577791、rs6577808、rs2056277、rs7820230、rs11781232、rs10092983、rs4606077、rs3858029、rs1015250、rs7042478、rs7049164、rs10756505、rs1410035、rs2270529、rs10738497、rs1970064、rs7871735、rs1318664、rs2383542、rs7041158、rs10813060、rs4879342、rs400426、rs7855727、rs11137900、rs1887719、rs4486277、rs10867685、rs6559615、rs10746789、rs1160209、rs2786797、rs1327804、rs10818193、rs2781116、rs1335220、rs1463729、rs1360288、rs10776839、rs962759、rs826472、rs7909413、rs735155、rs7067974、rs7899028、rs3780962、rs7921673、rs2066058、rs2394137、rs10887346、rs1933957、rs1410059、rs481179、rs1326357、rs10748937、rs10884478、rs1336414、rs740598、rs1541179、rs748309、rs720416、rs964681、rs10765075、rs7898450、rs10768550、rs10500617、rs1498553、rs901398、rs11023546、rs1386734、rs11027682、rs2861329、rs7934283、rs2461678、rs794533、rs7929050、rs6591147、rs10488710、rs1557451、rs4938230、rs590162、rs4054951、rs2032414、rs12576089、rs2076848、rs2107612、rs2942582、rs7957282、rs1038666、rs1909149、rs7980737、rs7299072、rs2171841、rs11836065、rs2111980、rs12812747、rs10773760、rs1335873、rs1886510、rs9506765、rs528756、rs1538001、rs9315314、rs7333999、rs2677595、rs9316628、rs6561816、rs2780326、rs1340301、rs359371、rs7321823、rs9564415、rs9541364、rs4883864、rs9542407、rs337964、rs6562645、rs495593、rs1146888、rs7323290、rs2783082、rs4885690、rs1215468、rs2794251、rs1932807、rs7990715、rs9546538、rs9546953、rs2341300、rs12856670、rs9301207、rs7992038、rs1058083、rs7981712、rs1330527、rs1865350、rs701565、rs6491913、rs354439、rs9514807、rs1228539、rs1454361、rs1955877、rs1951055、rs2781333、rs7159343、rs722290、rs2358481、rs4899801、rs2998319、rs10150656、rs9323780、rs879803、rs873196、rs4530059、rs2016276、rs1821380、rs8037429、rs1528460、rs9944198、rs4887279、rs7181498、rs16975446、rs2159620、rs729172、rs2342747、rs7205345、rs4787112、rs12597901、rs16862、rs8056924、rs430046、rs1382387、rs9905977、rs740910、rs4796362、rs1860555、rs2175957、rs8070085、rs1004357、rs1027895、rs1897859、rs4080890、rs11077529、rs8081246、rs4793377、rs8078417、rs2291395、rs4789798、rs689512、rs3744163、rs2292972、rs1493232、rs3906004、rs16943205、rs1624032、rs9951171、rs7229946、rs273696、rs10502503、rs7232841、rs12967345、rs2949539、rs12457638、rs1943539、rs985492、rs7240706、rs1567612、rs1196588、rs9959097、rs7244456、rs4506998、rs17696192、rs521861、rs7243527、rs1626480、rs1736442、rs154889、rs8092618、rs1906774、rs17176581、rs1244834、rs1024116、rs719366、rs576261、rs1031825、rs445251、rs12480506、rs2567608、rs1005533、rs1523537、rs722098、rs2824224、rs2825957、rs2826366、rs2829225、rs2829292、rs464663、rs2830795、rs2831700、rs2833736、rs914165、rs221956、rs9606186、rs5746846、rs2073383、rs733164、rs987640、rs5749850、rs2040411、rs1028528、rs5769866。所述的482個SNP位點的遺傳信息如表1所示:表1應當指出的是,以上SNP位點是根據NCBI的SNP數據庫的命名方式來表示的,該方式是以rs或者ac加數位阿拉伯數字來表示一個確定的SNP位點。本領域技術人員知道,一個SNP位點還可以有其它表示方式,如以HGVS命名法標注某位點在參考gDNA上的位置來表示。采用其他命名方式來標注指代與本發明一樣的SNP位點或SNP位點組合也屬于本發明的范圍。上述482個SNP位點的獲得方式是:通過對NCBIdbGaP數據庫(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gap)的分析,收集了其中11,989份全基因組關聯分析(Genome-wideAssociationStudy,GWAS)研究的SNP位點分型結果,對其經過Hardy-Weinberg平衡檢驗的篩選后,獲得1,842,870個SNP位點作為候選SNP位點。分別利用千人基因組計劃(the1000GenomesProject)中的853個來自不同群體的無關個體樣本和英國萬人計劃(theUK10Kproject)中的4,000個個體樣本的上述1,842,870個SNP位點的多態性數據,以等位基因頻率(MinorAlleleFrequency,MAF)大于等于20%和固定指數(FixationIndex,FRT)小于等于0.03作為篩選標準,對上述1,842,870個SNP位點進行篩選,獲得12,942個SNP位點;以連鎖不平衡(LD)的r2大于等于0.01為篩選標準,最終獲得本發明所述的482個SNP位點。遺傳分型也稱基因型分型,是利用生物學檢測方法測定個體基因型(Genotype)的技術。遺傳分型在群體遺傳學和法醫學領域有廣泛的應用,是進行如身份鑒定、親子鑒定、個體識別、尸源鑒定、犯罪認定、失蹤人口認定和案件排查等工作的有力工具。隨著PCR技術和高通量測序技術的發展,進行遺傳分型的方法也發展和完善,目前遺傳分型的方法主要有:直接測序法、高通量測序法、片段長度多態性法、熒光標記的片段長度多態性法、飛行質譜檢測法、TaqMan熒光探針法、多重SNaPShot檢測方法、連接酶檢測反應法、改進的連接酶檢測法、基因芯片法、SNPscan分型法、高分辨率熔解曲線法和基于qPCR方法的SNP分型法。遺傳分型的檢材可以從任何生物學材料得來,例如血液、精斑、唾液、牙齒、骨骼、指甲、毛發、皮膚、口腔拭子、脫落細胞以及心臟、肝臟、脾臟、肺、胃、腎臟、胰腺、腦、腸和膽等器官。本發明還提供了上述一組遺傳標記組合在身份鑒定中的應用。所述的應用指:利用遺傳分型確定所述的遺傳標記組合中的SNP位點的基因型,從而對個體進行身份鑒定。上述應用中,所述的個體可以為亞洲人、美洲人或歐洲人,但不限于上述人群。上述應用中,所述的遺傳分型的方法包括但不限于:直接測序法、高通量測序法、片段長度多態性法、熒光標記的片段長度多態性法、飛行質譜檢測法、TaqMan熒光探針法、多重SNaPShot檢測方法、連接酶檢測反應法、改進的連接酶檢測法、基因芯片法、SNPscan分型法、高分辨率熔解曲線法和基于qPCR方法的SNP分型法;優選為高通量測序法和基因芯片法。在本發明一個較佳的實施例中,利用高通量測序法對含有本發明所述的482個SNP位點的遺傳標記組合進行遺傳分型,可同時獲得上述482個SNP位點的基因型信息。另一個方面,本發明提供了一種分型試劑盒,所述的分型試劑盒包含用于對本發明所述的一組遺傳標記組合中的SNP位點進行遺傳分型的試劑。所述的分型試劑盒用于對個體的進行身份鑒定。所述的分型試劑盒中還可以包含用于擴增一組遺傳標記組合中的SNP位點的PCR引物。本發明還提供了所述的分型試劑盒在個體識別、親緣關系判定、案件排查、尸源認定、親子鑒定、罪犯認定和失蹤人口認定中的應用。本發明還提供了一套用于身份鑒定的復合分型系統,所述的復合分型系統包含本發明所述的分型試劑盒和利用高通量測序法檢測SNP位點基因型所需的儀器、軟件、和/或模塊。再一個方面,本發明還提供了一種個體基因型身份證,所述的個體基因型身份證包含芯片,所述的芯片上儲存有該個體的遺傳標記位點的基因型信息,所述的遺傳標記位點指本發明所述的遺傳標記組合中的SNP位點。所述的個體基因型身份證的結構樣式可以為卡片式、硬盤式或光盤式,但不限于上述3種結構樣式。本發明還提供了所述的個體基因型身份證在身份鑒定中的應用。與現有技術相比,本發明的有益效果為:(1)、本發明提供的一組遺傳標記組合和復合分型系統中,由于其包含的SNP位點數量多,因此具有現有遺傳標記組合所不能比擬的分型效能;覆蓋包含全球各大主要人群,對不同人群的適用范圍較現有技術更加廣泛;通過對超過4000個無關個體的基因型數據進行分析獲得的482個SNP位點,對個體身份鑒定的結果較現有技術更加可靠。(2)、本發明提供的一組遺傳標記組合和一種分型試劑盒對于血統較遠的一些親緣關系進行家系身份鑒定的效果明顯優于現有技術,對于一些諸如親緣關系類中的祖孫、叔侄、半同胞關系進行身份鑒定的區分度和準確性明顯優于現有技術。(3)、本發明提供的一種分型試劑盒和復合分型系統能夠實現對上述482個SNP位點的同時擴增,通過一管反應即可獲得包含482個SNP位點的擴增產物,方便高效。(4)、本發明利用高通量測序技術實現對上述482個SNP位點的分型,能夠同時獲得482個SNP位點的基因型,能夠實現一管反應即可獲得單一個體的測序文庫,使得對個體的身份鑒定更加簡潔高效可靠。(5)、本發明提供的一種個體基因型身份證中儲存有個體的基因型信息,即本發明所述的482個SNP位點的基因型信息,能夠有效方便的作為個體身份認證的工具。(6)、本發明提供的一組遺傳標記組合和復合分型系統在用于身份鑒定時,真實樣本與無關對照樣本的區分度優異,明顯優于現有技術中常用的STR基因座組合或SNP位點組合。由此可知,基于本發明提供的一組遺傳標記組合的一種分型試劑盒和一套復合分型系統在用于身份鑒定時,同樣也具有比現有技術更高的區分度;因而,在用于親子鑒定、個體識別、尸源鑒定、犯罪認定、失蹤人口認定和案件排查等方面具有比現有技術更高的準確性。附圖說明圖1為實驗例1中的組合2得出的似然率LR比較結果。圖2為實驗例1中的組合2得出的似然率LR比較結果。具體實施方式以下實施例的說明只是用于幫助理解本發明的方法及其核心思想。應當指出,對于本
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的普通技術人員來說,在不脫離本發明原理的前提下,還可以對本發明進行若干改進和修飾,這些改進和修飾也落入本發明權利要求的保護范圍內。對所公開的實施例的下述說明,使本領域專業技術人員能夠實現或使用本發明。對這些實施例的多種修改對本領域的專業技術人員來說將是顯而易見的,本文中所定義的一般原理可以在不脫離本發明的精神或范圍的情況下,在其它實施例中實現。因此,本發明將不會被限制于本文所示的這些實施例中,而是可以應用于符合與本文所公開的原理和新穎特點相一致的更寬的范圍。雖然在本發明的實施或測試中可以使用與本發明中所述相似或等價的任何方法和材料,本文在此處例舉優選的方法和材料。除非另外定義,本文中使用的所有技術和科學術語具有與本發明所屬
技術領域
的普通技術人員通常理解的相同意義。實施例中未注明具體技術或條件者,按照本領域內的文獻所描述的技術或條件(例如參考J.薩姆布魯克等著,黃培堂等譯的《分子克隆實驗指南》,第三版,科學出版社)或者按照產品說明書進行。本發明實施方式中核酸的定量采用NanoDrop2000超微量分光光度計,產品編號ND2000c,購自賽默飛世爾公司(ThermoFisherScientific);GenEluteTM血液基因組DNA試劑盒貨號為NA2010-1KT,購自SIGMA-ALDRICH公司;實施例1一組遺傳標記組合該遺傳標記組合包含本發明所述的482個SNP位點,所述的482個SNP位點的rs號和遺傳信息如表1所示。實施例2一種分型試劑盒該分型試劑盒包含:(1)、測序文庫制備試劑;(2)、高通量測序試劑。實施例1對存在16個親屬關系的家庭成員進行隨機樣本試驗和結果分析。個體樣本:包括父母小孩、兄弟、姐妹、堂兄弟姐妹、祖孫和叔侄等在內的16個親屬關系的共計47個家庭成員;檢材為血液樣本。實驗過程:對以上47個個體進行靜脈采血,獲得47份血液樣本,對其進行隨機編號,進行雙盲實驗:(1)、DNA提?。菏褂肎enEluteTM血液基因組DNA試劑盒分別從47份血液樣本提取基因組DNA,獲得47份血液基因組DNA樣本,具體提取過程參照試劑盒使用說明;(2)、文庫制備:A、PCR擴增:分別以本實施例步驟(1)獲得的47份血液基因組DNA樣本作為PCR模板,設計引物,采用IonAmpliSeqTMLibraryKit2.0試劑盒(購自LifeTechnologies公司,貨號為Cat.no4475345)擴增樣本中的482個SNP位點,獲得47個擴增產物;PCR擴增體系:成分加入量5×IonAmpliSeqTMHiFiMix(redcap)4μL血液基因組DNA1ng擴增引物10μLNuclease-freeWater補齊至20μLPCR擴增程序:B、使用IonXpressTMBarcodeAdapters1–96Kit試劑盒(購自ThermoFisher公司,貨號為Cat.no.4474517)分別對本實施例步驟(2)-A獲得的47個擴增產物連接特異性接頭,獲得47個不同的接頭-擴增產物,具體連接過程參照試劑盒使用說明;C、使用XPKit試劑盒(購自BeckmanCoulter公司,貨號為A63880或A63881)對本實施例步驟(2)-B獲得的的47個不同的接頭-擴增產物進行純化,使用實時熒光定量核酸擴增檢測方法對純化后的接頭-擴增產物進行定量后,混合47個接頭-擴增產物,構成測序文庫;(3)、使用IONPGM測序儀對本實施例步驟(2)-C獲得的測序文庫進行測序,具體操作流程參見IONPGM測序儀操作說明;(4)、結果分析:根據47份血液基因組DNA樣本的分型結果,隨機進行樣本聚類得到的個體家系關系結果,符合之前采樣的預期。目前現有分型試劑盒或用于分型的遺傳標記組合對本實施例中關于祖孫和叔侄關系的個體樣本獲得的個體家系關系結果,不符合采樣預期。例如使用傳統的19個STR基因座作為一組遺傳標記組合對本實施例相關樣本進行樣本聚類得到的個體家系關系結果中,祖孫和叔侄關系的樣本結果不符合之前采樣的預期。說明本發明在用于對于一些諸如親緣關系中的祖孫、叔侄、半同胞關系等進行身份鑒定的效果優于現有技術。實驗例1區分度對比分別利用傳統的19個STR基因座作為遺傳標記組合(以下簡稱組合1)和利用本發明提供的482個SNP位點作為遺傳標記組合(以下簡稱組合2)對個體進行身份鑒定,并對鑒定結果進行比較。采用高通量測序技術分別對組合1和組合2進行遺傳分型,并利用Elston-Stewart算法模型計算真實親緣關系的似然率LR,將其與無關群體的似然率LR分布進行比較。若真實親緣關系的LR值能夠顯著大于無關群體的似然率LR分布,則能夠進行相關的認定。組合1得出的似然率LR比較結果如圖1所示,圖中橫軸為似然率LR標度,兩條平行豎線代表真實親緣關系的似然率LR,灰色區域為無關群體的分布。其結果無法分開,說明19個STR在該親緣關系下的鑒定效力不足。組合2得出的似然率LR比較結果如圖2所示,可以看出,其結果的真實親緣關系似然率LR顯著(p值<0.01)大于無關群體分布,從而能夠做出相關認定。由本實驗例可以明顯看出本發明提供的482個SNP位點組成的遺傳標記組合對于身份鑒定的效果明顯優于現有技術。以上實施例的說明只是用于幫助理解本發明的方法及其核心思想。應當指出,對于本
技術領域
的普通技術人員來說,在不脫離本發明原理的前提下,還可以對本發明進行若干改進和修飾,這些改進和修飾也落入本發明權利要求的保護范圍內。對所公開的實施例的上述說明,使本領域專業技術人員能夠實現或使用本發明。對這些實施例的多種修改對本領域的專業技術人員來說將是顯而易見的,本文中所定義的一般原理可以在不脫離本發明的精神或范圍的情況下,在其它實施例中實現。因此,本發明將不會被限制于本文所示的這些實施例中,而是可以應用于符合與本文所公開的原理和新穎特點相一致的更寬的范圍。當前第1頁1 2 3 
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