1.一種用于檢測(cè)紫杉醇亞細(xì)胞分布動(dòng)力學(xué)的方法及模型的建立方法,其特征在于,包括如下步驟:
S1. 細(xì)胞培養(yǎng);
S2. 對(duì)步驟S1的細(xì)胞進(jìn)行不同時(shí)間點(diǎn)給藥后收樣;
S3. 對(duì)步驟S2收樣得到的細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞亞結(jié)構(gòu)提取物的制備;
S4. 對(duì)步驟S3得到的提取物進(jìn)行蛋白定量;
S5. 檢測(cè)步驟S3得到的提取物的紫杉醇含量;
S6. 通過(guò)分析紫杉醇含量和蛋白定量的比值,篩選出合適的給藥時(shí)間及紫杉醇濃度,建立檢測(cè)紫杉醇亞細(xì)胞分布動(dòng)力學(xué)的方法及模型。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于檢測(cè)紫杉醇亞細(xì)胞分布動(dòng)力學(xué)的方法及模型的建立方法,其特征在于,步驟S1所述細(xì)胞培養(yǎng)為:取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞接種至細(xì)胞培養(yǎng)皿中,連續(xù)培養(yǎng)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于檢測(cè)紫杉醇亞細(xì)胞分布動(dòng)力學(xué)的方法及模型的建立方法,其特征在于,步驟S2是對(duì)S1連續(xù)培養(yǎng)過(guò)程中的細(xì)胞進(jìn)行不同時(shí)間點(diǎn)給藥后收樣處理。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于檢測(cè)紫杉醇亞細(xì)胞分布動(dòng)力學(xué)的方法及模型的建立方法,步驟S3進(jìn)行細(xì)胞亞結(jié)構(gòu)提取物的制備時(shí),根據(jù)細(xì)胞膜/細(xì)胞器、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞骨架、細(xì)胞核的蛋白溶解性不同,從細(xì)胞中提取不同細(xì)胞蛋白;且細(xì)胞貼壁培養(yǎng),在提取細(xì)胞不同部分的過(guò)程中細(xì)胞依舊貼壁,防止提取過(guò)程中四部分混合。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于檢測(cè)紫杉醇亞細(xì)胞分布動(dòng)力學(xué)的方法及模型的建立方法,其特征在于,步驟S4是利用BCA蛋白定量分析試劑盒對(duì)步驟S3得到的提取物進(jìn)行蛋白定量。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于檢測(cè)紫杉醇亞細(xì)胞分布動(dòng)力學(xué)的方法及模型的建立方法,其特征在于,步驟S5是利用UPLC-MS/MS方法檢測(cè)步驟S3得到的提取物的紫杉醇含量。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于檢測(cè)紫杉醇亞細(xì)胞分布動(dòng)力學(xué)的方法及模型的建立方法,其特征在于,步驟S1所述細(xì)胞為非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞株。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于檢測(cè)紫杉醇亞細(xì)胞分布動(dòng)力學(xué)的方法及模型的建立方法,其特征在于,步驟S6篩選出的合適的給藥時(shí)間為:5min、10min、20min、0.5h、1h、1.5h、2h、3h。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于檢測(cè)紫杉醇亞細(xì)胞分布動(dòng)力學(xué)的方法及模型的建立方法,其特征在于,步驟S6篩選出的最適紫杉醇濃度為0.1μg/mL。
10.一種考察某化合物是否能夠影響紫杉醇的細(xì)胞藥動(dòng)學(xué)過(guò)程的方法,其特征在于,細(xì)胞培養(yǎng)后,分別進(jìn)行兩種給藥方式:(1)0.1μg/mL紫杉醇,(2)0.1μg/mL紫杉醇和10μg/mL某化合物;然后按照不同時(shí)間點(diǎn)5min、10min、20min、0.5h、1h、1.5h、2h、3h,同一時(shí)間收樣處理,制備細(xì)胞亞結(jié)構(gòu)提取物,進(jìn)行UPLC-MS/MS分析紫杉醇含量,利用0.1μg/mL紫杉醇和10μg/mL某化合物處理后紫杉醇在細(xì)胞亞結(jié)構(gòu)提取物中隨時(shí)間分布變化圖與單獨(dú)給藥0.1μg/mL紫杉醇處理后紫杉醇在細(xì)胞亞結(jié)構(gòu)提取物中隨時(shí)間分布變化圖相比較,分析紫杉醇在細(xì)胞骨架的分布有無(wú)提高,即可說(shuō)明待測(cè)某化合物是否可提高紫杉醇在細(xì)胞骨架的分布。