本發明涉及基因工程
技術領域：
：，是一種長鏈非編碼RNAENST00000393507.2及制劑或診斷劑或藥物或試劑盒及檢測其的方法及其應用，即ENST00000393507.2及制劑或診斷劑或藥物或試劑盒和應用。
背景技術：
：：穩定型心絞痛(stableanginapectoris,SAP)是指心絞痛發作的程度、頻度、性質及誘發因素在數周內無顯著變化的患者，是冠心病中較為常見的類型。據報道，美國約有720萬人患有心絞痛，并且以每年35萬人的速度遞增，因此病死亡的人數高達50余萬人，占人口死亡總數的三分之一至二分之一，占心臟病死亡總數的50％至75％。在我國，隨著人民生活水平的提高，生活方式的改變以及生活節奏的加快，心絞痛的發病率逐年增高。以發病率居全國首位的北京為例，2003年心絞痛合并有并發癥的病死率占人口死亡總數的13％，目前仍呈上升趨勢，已接近歐美國家水平。穩定型心絞痛的早期診斷對于預防心絞痛發展為臨床心血管事件具有重要價值，可以提高心絞痛患者的生存率并能夠改善長期預后。血清心肌標志物對評估SAP危險性可提供有價值的信息，非ST段抬高的SAP患者約30％cTnI或cTnT升高，目前仍然缺乏有效SAP的血清標志物。長鏈非編碼RNA(longnon-codingRNAs，lncRNA)是一類轉錄本長度超過200nt的RNA分子，一般不編碼蛋白，由RNA聚合酶II轉錄并經可變剪切形成，轉錄水平低于蛋白質編碼基因，曾一度被認為是基因組轉錄的“噪音”。已證實，長鏈非編碼RNA在表觀遺傳學、轉錄調控、轉錄后調控等多種層面調控基因表達，在多種生物學進程中發揮重要作用，包括脂肪代謝、動脈粥樣硬化形成、胚胎發育及腫瘤的發生等。技術實現要素：本發明提供了一種長鏈非編碼RNAENST00000393507.2，其能解決對穩定型心絞痛的早期診斷,本發明還提供了一種長鏈非編碼RNAENST00000393507.2的制劑或診斷劑或藥物或試劑盒，其還解決了更簡易的進行血清心肌標志物對穩定型心絞痛的早期診斷，本發明進一步提供了一種檢測長鏈非編碼RNAENST00000393507.2的方法，其進一步解決了在血液中如何檢測到長鏈非編碼RNAENST00000393507.2，本發明還進一步提供了一種長鏈非編碼RNAENST00000393507.2在制備用于檢測穩定型心絞痛的試劑盒或用作檢測穩定型心絞痛藥物的新靶點的應用，其還進一步解決了長鏈非編碼RNA可成為心血管疾病診斷、預測預后的標志物，同時也為心血管病的治療提供了新的靶點。本發明的技術方案之一是通過以下措施來實現的：一種在穩定型心絞痛患者血液中低表達的長鏈非編碼RNAENST00000393507.2，該長鏈非編碼RNAENST00000393507.2的序列如SEQIDNO:1所示。下面是對上述發明技術方案之一的進一步優化或/和改進：上述該長鏈非編碼RNAENST00000393507.2為ENST00000393507.2:2的全長或片段。本發明的技術方案之二是通過以下措施來實現的：一種體外檢測血液中長鏈非編碼RNAENST00000393507.2的制劑或診斷劑或藥物或試劑盒，該制劑或診斷劑或藥物或試劑盒包括特異性引物對、標準DNA模板、PCR反應液，其中，特異性引物對包括上游引物和下游引物，上游引物的核苷酸序列為SEQIDNo:2，下游引物的核苷酸序列為SEQIDNo:3。下面是對上述發明技術方案之二的進一步優化或/和改進：上述該試劑盒為熒光定量PCR檢測試劑盒。上述特異性引物對用于SYBRGreen、Taqman探針、分子信標、雙雜交探針、復合探針的檢測。上述PCR反應液為熒光定量PCR反應液。上述熒光定量PCR反應液包括dNTP、Mg2+、Taq酶。上述還包括熒光染料。本發明的技術方案之三是通過以下措施來實現的：一種檢測根據技術方案之一所述的長鏈非編碼RNAENST00000393507.2的方法，按下述步驟進行：第一步，提取血液總RNA；第二步，制備cDNA；第三步，定量擴增長鏈非編碼RNAENST00000393507.2。本發明的技術方案之四是通過以下措施來實現的：一種根據技術方案之一所述的長鏈非編碼RNAENST00000393507.2在制備用于檢測穩定型心絞痛的試劑盒或用作檢測穩定型心絞痛藥物的新靶點的應用。本發明利用長鏈非編碼表達譜芯片技術，通過差異分析，篩選到一條在穩定型心絞痛患者血液中顯著低表達的長鏈非編碼RNAENST00000393507.2，進一步豐富穩定型心絞痛發病機制的研究，同時，本發明所述的體外檢測穩定型心絞痛相關基因即長鏈非編碼RNAENST00000393507.2的試劑以及本發明所述的體外檢測穩定型心絞痛相關基因即長鏈非編碼RNAENST00000393507.2的試劑盒能夠用于本發明所述的長鏈非編碼RNAENST00000393507.2的表達水平的檢測，通過本發明所述的長鏈非編碼RNAENST00000393507.2的表達水平的檢測結果獲知穩定型心絞痛的篩查結果，為穩定型心絞痛的診斷和治療提供了新方向。附圖說明附圖1為本發明中長鏈非編碼RNA表達譜芯片檢測ENST00000393507.2在健康對照組與穩定型心絞痛組中的檢測信號值。附圖2為本發明中針對長鏈非編碼RNAENST00000393507.2的序列設計的一對特異性引物PCR擴增后行瓊脂糖凝膠電泳測試引物的效果。附圖3為本發明中qRT-PCR檢測RNAENST00000393507.2在健康對照組與穩定型心絞痛組中的相對表達量。具體實施方式本發明不受下述實施例的限制，可根據本發明的技術方案與實際情況來確定具體的實施方式。在本發明中，為了便于描述，各部件的相對位置關系的描述均是根據說明書附圖1的布圖方式來進行描述的，如：上、下、左、右等的位置關系是依據說明書附圖的布圖方向來確定的。本發明利用長鏈非編碼表達譜芯片技術，通過差異分析，篩選到一條在穩定型心絞痛患者血液中顯著低表達的長鏈非編碼RNAENST00000393507.2，其轉錄區域位于17號染色體，起始位置為43,317,681至43,318,564，全長884bp。與健康人的血液含量相比，長鏈非編碼RNAENST00000393507.2在穩定型心絞痛患者血液中顯著低表達，并在樣本的熒光定量實驗中進一步證實長鏈非編碼RNAENST00000393507.2在穩定型心絞痛患者血液中顯著低于健康人。這一新型的長鏈非編碼RNAENST00000393507.2將進一步豐富穩定型心絞痛發病機制的研究，也為穩定型心絞痛的早期診斷及預后監測提供了新的血液分子標志物和治療靶點。發明人提供的穩定型心絞痛患者和健康人的血液標本各5個，共10例。通過ABI公司的Trizol試劑(貨號15596-026)所需步驟提取總RNA后，采用北京博奧生物工程有限公司的芯片產品(AgilenthumanlncRNA+mRNAArrayV4.0)進行檢測，篩選出一條在穩定型心絞痛患者血液中顯著低表達的長鏈非編碼RNAENST00000393507.2，其核酸序列如SEQIDNo.1所示。后期經過對樣本進行熒光定量PCR驗證，發現10個樣本中穩定型心絞痛患者顯著低于健康人。長鏈非編碼RNAENST00000393507.2作為穩定型心絞痛的新靶點，為穩定型心絞痛的臨床治療和藥物開發提供理論基礎。實施例1，一種在穩定型心絞痛患者血液中低表達的長鏈非編碼RNAENST00000393507.2，該長鏈非編碼RNAENST00000393507.2的序列如SEQIDNO:1所示。該長鏈非編碼RNAENST00000393507.2可豐富穩定型心絞痛發病機制的研究，并可對其進行早期診斷。實施例2，作為實施例1的優化，該長鏈非編碼RNAENST00000393507.2為ENST00000393507.2:2的全長或片段。實施例3，一種體外檢測血液中根據實施例1和實施例2所述的長鏈非編碼RNAENST00000393507.2的制劑或診斷劑或藥物或試劑盒，該制劑或診斷劑或藥物或試劑盒包括特異性引物對、標準DNA模板、PCR反應液，其中，特異性引物對包括上游引物和下游引物，上游引物的核苷酸序列為SEQIDNo:2，下游引物的核苷酸序列為SEQIDNo:3。該長鏈非編碼RNAENST00000393507.2的制劑或診斷劑或藥物或試劑盒能夠更方便的對穩定型心絞痛的血清標志物進行診斷和預測。實施例4，作為實施例3的優化，該試劑盒為熒光定量PCR檢測試劑盒。實施例5，作為實施例3或實施例4的優化，特異性引物對用于SYBRGreen、Taqman探針、分子信標、雙雜交探針、復合探針的檢測。實施例6，作為實施例3、實施例4和實施例5的優化，PCR反應液為熒光定量PCR反應液。實施例7，作為實施例6的優化，熒光定量PCR反應液包括dNTP、Mg2+、Taq酶。實施例8，作為實施例3、實施例4、實施例5、實施例6和實施例7的優化，該試劑盒還包括熒光染料。該體外檢測穩定型心絞痛的染料類熒光定量PCR試劑盒的使用方法，熒光定量PCR體系：上游引物、下游引物各0.25ul(10uM)；DNA模板cDNA0.5ul；PowerSYBRGreenPCRMaster(2×)5ul，加Nuclease-FreeWater4ul，總容量10ul。熒光定量PCR程序：第一步95℃10分鐘；第2步，95℃15S，60℃1分鐘；第三步，95℃15S，60℃1分鐘，95℃15S，共40個循環。實施例9，一種檢測根據實施例1和實施例2所述的長鏈非編碼RNAENST00000393507.2的方法，按下述步驟進行：第一步，提取血液總RNA；第二步，制備cDNA；第三步，定量擴增長鏈非編碼RNAENST00000393507.2。所述方法具體包括如下步驟：一、提取血液總RNA：按照ABI公司的Trizol試劑(貨號15596-026)所需試劑及步驟提取總RNA，再用7300realtimePCRsystem核酸定量儀定量(AppliedBiosystemsAB)定量所提取的的純度和濃度。二、制備樣品cDNA：采用北京天根生化科技公司FastQuantcDNA第一鏈合成試劑盒試劑盒(貨號KR106)對提取的總RNA反轉錄合成cDNA。1、將模板RNA在冰上解凍；5×gDNABuffer、FQ-RTPrimerMix、10×FastRTBuffer、RNase-FreeddH2O在室溫(15-25℃)解凍，解凍后迅速置于冰上。使用前將每種溶液渦旋振蕩混勻，簡短離心以收集殘留在管壁的液體。2、打開二級結構，反應體系及條件如表1所示；將上述組分的基因組DNA的去除體系配制混合液，徹底混勻。簡短離心，并置于42℃，孵育3min。然后置于冰上放置。3、反轉錄反應，反應體系及條件如表2所示；將反轉錄反應中的Mix，加到gDNA去除步驟的反應液中，充分混勻。42℃，孵育15min。95℃，孵育3min之后放于冰上，得到的cDNA可用于后續實驗，或低溫保存。三、擴增長鏈非編碼RNAENST00000393507.2：采用ABI公司的PowerSYBRGreenPCRMasterMix熒光定量試劑盒(貨號4367659)，以反轉錄的cDNA為模板進行熒光定量PCR擴增。熒光定量PCR體系如表3所示；熒光定量PCR程序：第一步95℃10分鐘；第2步，95℃15S，60℃1分鐘；第三步，95℃15S，60℃1分鐘，95℃15S，共40個循環。實施例10，一種根據實施例1和實施例2所述的長鏈非編碼RNAENST00000393507.2在制備用于檢測穩定型心絞痛的試劑盒或用作檢測穩定型心絞痛藥物的新靶點的應用。用于檢測穩定型心絞痛的方法，所述方法包括以下步驟：第一步，提取血液總RNA；第二步，制備樣品cDNA；第三步，擴增長鏈非編碼RNAENST00000393507.2，并根據相對定量結果進行判斷。實施例11：穩定型心絞痛患者與健康人血液的長鏈非編碼RNA芯片表達分析。一、材料和方法1.材料血液樣本來自于穩定型心絞痛患者與健康人血液樣本各5個。2.方法(1)穩定型心絞痛患者與健康人血液樣本總RNA的提取：按照博奧生物技術有限公司提供的“用于基因芯片分析的血液樣品的準備步驟”提取穩定型心絞痛患者與健康人血液樣本總RNA。具體實驗材料包括：淋巴細胞分離液(天津TBD生物技術發展中心)；滅菌生理鹽水(普通0.9％生理鹽水滅菌即可)；Trizol試劑(Invitrogen公司)。(2)lncRNA+mRNA表達譜芯片檢測以待檢測樣品的總RNA為起始，進行體外擴增和熒光標記，標記過程采用生物芯片通用標記試劑盒。主要包括如下步驟：1)反轉錄合成第一鏈cDNA：以TotalRNA起始，含有T7啟動子序列的T7Oligo(dT)Primer和T7-隨機引物，既可以結合帶poly(A)的mRNA，也可以結合除rRNA以外其它不帶poly(A)的RNA，使用第一鏈EnzymeMix合成第一鏈cDNA。2)合成第二鏈DNA：用第二鏈EnzymeMix將DNA-RNA雜合體中的RNA鏈轉化為第二鏈cDNA，合成雙鏈DNA。3)體外轉錄合成cRNA：以第二鏈cDNA為模板，利用T7EnzymeMix合成cRNA。4)cRNA純化：使用RNA純化柱純化cRNA，除去反應中的鹽、酶等試劑，并對cRNA進行定量、質控。5)反轉錄：以cRNA為模板，RandomPrimer為引物，CbcScriptⅡ酶進行反轉錄。純化回收反轉錄得到的cDNA并定量。6)標記：以反轉錄的cDNA產物為模板，RandomPrimer為引物，用KlenowFragment酶合成cDNA互補鏈并摻入帶有熒光基團的dNTP(Cy3-dCTP、Cy5-dCTP)，純化并定量標記產物。帶有熒光基團DNA即可用于芯片雜交。7)芯片雜交及清洗：取1μLcDNA溶于雜交液，45℃雜交過夜。取出芯片在博奧SlideWasher8芯片洗干儀進行清洗，清洗程序如下：洗液I：0.2％SDS，2×SSC,42℃120S清洗2遍。洗液II：0.2％SDS，2×SSC,42℃80S清洗3遍。清洗程序完成后，離心甩干，待掃描。8)芯片掃描，數據分析，差異基因篩選：使用Agilent芯片掃描儀(G2565CA)對清洗后的芯片進行掃描，得到雜交圖片。使用AgilentFeatureExtraction(v10.7)軟件對雜交圖片進行分析并提取數據。然后使用AgilentGeneSpring軟件對數據進行歸一化和差異分析，并用GeneSpringGX軟件進行差異基因篩選。二、結果長鏈非編碼表達譜芯片檢測ENST00000393507.2在健康對照組與穩定型心絞痛組中的檢測信號值如附圖1所示。芯片篩查發現多條表達上調和表達下調的lncRNAs。其中長鏈非編碼RNAENST00000393507.2顯示出在穩定型心絞痛患者中表達顯著下調，Fc值為1.93倍，其中，由圖上可知，P小于0.05，具有統計學意義。鑒于其可能在穩定型心絞痛患者中存在特異性表達，本發明通過以下實施例采用芯片檢測的樣本進行指標的重復驗證。實施例12：qRT-PCR重復驗證長鏈非編碼RNAENST00000393507.2在穩定型心絞痛患者和健康人中的差異表達。一、實驗材料選取芯片測試的樣本，對長鏈非編碼RNAENST00000393507.2的表達差異進行qRT-PCR驗證。二、實驗方法和結果1.引物特異性鑒定(1)特異性引物的設計：從Ensemble數據庫提取長鏈非編碼RNAENST00000393507.2相關的轉錄本序列，并用根據轉錄本的序列通過NCBI的引物設計工具(PrimerBLAST)設計引物；設計后的引物序列如下：上游引物：SEQIDNo:2下游引物：SEQIDNo:3(2)將穩定型心絞痛患者與健康人血液按照ABI公司的Trizol試劑(貨號15596-026)所需試劑及步驟提取總RNA，再用7300realtimePCRsystem核酸定量儀定量(AppliedBiosystemsAB)定量所提取的的純度和濃度。采用北京天根生化科技公司FastQuantcDNA第一鏈合成試劑盒試劑盒(貨號KR106)對提取的總RNA反轉錄合成cDNA。第一步將模板RNA在冰上解凍；5×gDNABuffer、FQ-RTPrimerMix、10×FastRTBuffer、RNase-FreeddH2O在室溫(15-25℃)解凍，解凍后迅速置于冰上。使用前將每種溶液渦旋振蕩混勻，簡短離心以收集殘留在管壁的液體。第二步打開二級結構，反應體系及條件如表4所示，將上述組分的基因組DNA的去除體系配制混合液，徹底混勻。簡短離心，并置于42℃，孵育3min。然后置于冰上放置。第三步反轉錄反應，反應體系及條件如表5所示：將反轉錄反應中的Mix，加到gDNA去除步驟的反應液中，充分混勻。42℃，孵育15min。95℃，孵育3min之后放于冰上，得到的cDNA可用于后續實驗，或低溫保存。(3)擴增長鏈非編碼RNAENST00000393507.2：采用ABI公司的PowerSYBRGreenPCRMasterMix熒光定量試劑盒(貨號4367659)，以反轉錄的cDNA為模板進行熒光定量PCR擴增。熒光定量PCR體系如表6所示；熒光定量PCR程序：第一步95℃10分鐘；第2步，95℃15S，60℃1分鐘；第三步，95℃15S，60℃1分鐘，95℃15S，共40個循環。電泳檢測，選用0120000Marker(北京康為世紀生物科技有限公司，貨號CW0632)結果如附圖2所示：擴增片段大小與預期相同，擴增產物只有一個條帶。該引物對符合上述標準。上游的特異性引物，其序列見序列表SEQIDNo.2，下游的特異性引物，其序列見序列表SEQIDNo.2。2.標準DNA模板的制備根據長鏈非編碼RNAENST00000393507.2堿基序列(其核酸序列如序列表SEQIDNo.1所示)，委托上海生工合成。取樣2ul合成產物，連接到Puc-TTA克隆載體(北京康為世紀生物科技有限公司，貨號CW0801)，隨后轉化到DH5a感受態細胞中。通過序列為SEQIDNo.2和SEQIDNo.3的特異性引物篩選陽性克隆，提取質粒DNA，質粒DNA用7300realtimePCRsystem核酸定量儀定量，并做10倍系列稀釋作為標準曲線(標準DNA模板濃度范圍在102-106拷貝/ul)。3.敏感性實驗將標準將標準DNA模板質粒按比例稀釋為102、103、104、105、106拷貝/ul，進行熒光定量PCR檢測靈敏度。最低檢出濃度為102拷貝/ul。4.合成cRNA模板取上述穩定型心絞痛和健康人的總RNA各5個，采用北京天根生化科技公司FastQuantcDNA第一鏈合成試劑盒試劑盒(貨號KR106)對提取的總RNA反轉錄合成cDNA。第一步將模板RNA在冰上解凍；5×gDNABuffer、FQ-RTPrimerMix、10×FastRTBuffer、RNase-FreeddH2O在室溫(15-25℃)解凍，解凍后迅速置于冰上。使用前將每種溶液渦旋振蕩混勻，簡短離心以收集殘留在管壁的液體。第二步打開二級結構，反應體系及條件如表7所示：將上述組分的基因組DNA的去除體系配制混合液，徹底混勻。簡短離心，并置于42℃，孵育3min。然后置于冰上放置。第三步反轉錄反應，反應體系及條件如表8所示：將反轉錄反應中的Mix，加到gDNA去除步驟的反應液中，充分混勻。42℃，孵育15min。95℃，孵育3min之后放于冰上，得到的cDNA可用于后續實驗，或低溫保存。5.熒光定量PCR檢測長鏈非編碼RNAENST00000393507.2采用ABI公司的PowerSYBRGreenPCRMasterMix熒光定量試劑盒(貨號4367659)，以反轉錄的cDNA為模板進行熒光定量PCR擴增。熒光定量PCR體系如表9所示：熒光定量PCR程序：第一步95℃10分鐘；第2步，95℃15S，60℃1分鐘；第三步，95℃15S，60℃1分鐘，95℃15S，共40個循環。qRT-PCR檢測穩定型心絞痛患者中長鏈非編碼RNAENST00000393507.2的相對表達量如附圖3所示。根據qRT-PCR的相對定量公式：2-△△ct，分別計算出長鏈非編碼RNAENST00000393507.2在穩定型心絞痛患者和健康人中的表達水平，結果所示穩定型心絞痛患者與健康人的長鏈非編碼RNAENST00000393507.2表達水平比較，其2-△△ct平均值為0.56。以上結果說明，長鏈非編碼RNAENST00000393507.2在穩定型心絞痛患者血液中普遍低表達，這與前面所述的長鏈非編碼RNA芯片結果ENST00000393507.2下調1.83倍相一致，其中，由圖中可知，P小于0.05，具有統計學意義。因此，長鏈非編碼RNAENST00000393507.2可以作為穩定型心絞痛診斷的新的血液生物標志物，用于穩定型心絞痛的篩查。以上技術特征構成了本發明的實施例，其具有較強的適應性和實施效果，可根據實際需要增減非必要的技術特征，來滿足不同情況的需求。表1試劑用量5×gDNABuffer2ul總RNA1-2ugDEPC水補足至10uL表2試劑用量10×FastRTBuffer2ulRTEnzymeMix1ulFQ-RTPrimerMix2ulRNase-FreeddH2O補足到10μl表3試劑用量PowerSYBRGreenPCRMaster(2×)5ulcDNA樣品0.5ulForwardPrimer(10μM)0.25ulReversePrimer(10μM)0.25ulNuclease-FreeWater4ul總容量10ul表4試劑用量5×gDNABuffer2ul總RNA1-2ugDEPC水補足至10uL表5試劑用量10×FastRTBuffer2ulRTEnzymeMix1ulFQ-RTPrimerMix2ulRNase-FreeddH2O補足到10μl表6試劑用量PowerSYBRGreenPCRMaster(2×)5ulcDNA樣品0.5ulForwardPrimer(10μM)0.25ulReversePrimer(10μM)0.25ulNuclease-FreeWater4ul總容量10ul表7試劑用量5×gDNABuffer2ul總RNA1-2ugDEPC水補足至10uL表8試劑用量10×FastRTBuffer2ulRTEnzymeMix1ulFQ-RTPrimerMix2ulRNase-FreeddH2O補足到10μl表9試劑用量PowerSYBRGreenPCRMaster(2×)5ulcDNA樣品0.5ulForwardPrimer(10μM)0.25ulReversePrimer(10μM)0.25ulNuclease-FreeWater4ul總容量10ul<110>新疆醫科大學第一附屬醫院<120>ENST00000393507.2及制劑或診斷劑或藥物或試劑盒和應用<130><160><170><210>1<211>884<212>DNA<213>Homosapiens<400>1TCTTGGGTTTTGTAATTCGATGCCTGAATGCAGAATCCCAACTCCTCCATTTATTGACTTTGAAATATTGAAAAAATACTCTTAACCTCTTGATTTACTTAAGAATCCTCCTCTGTCAAATAAGGATTACATTTCCTGCCTTATGAAAGGCAGTGAATACTAGTTACAATTGCCATGTACCAGGTCACTGAACAAAGCCTACTATGCTGAAGTCAGTGGTGAATTCCTAGGTTGCAAGAATTGACTTCTATTATTGCTACTGTTGCTTTGTTTTTATGCTATTTTTTGTAAATCTCATAACTATACTATGAAGTGAAGACTTGCATGTTCTTCAATTATCAGTTGAGCTTACTATGCAATTGGCATTTCAGACGCTGGAGACACATCGGTAAGTATGACATATGAACTTCTTATTCTAGAAGAACTAATATTCTGGCCAAGGGAGGTAGACAATAAAAAAAATCAATAAAACATCAGGCAGTAAAAGCGCTGGTCAGATTAAACAGAGCAATACTGTAAGGAGTGATTCAGTGGCAATCACAGTGATTGTCAGGAAATGTCTCTTTGAAGAGATGAAAATGTGGACTCCATCCATGTGGTGGGCAGGACAGTGATGCTTCACCCCACCTTAAAACGGACACATCCTAATCTTTGGAAGTTGAGAATACGTTACTTTACATGGCAAAAGGATATTTGCAGATGCCATCAAAATAAGCACCTTGAGCTAGGGAGCGTATCGTGGGTTATTCATGTGGGTCCAATCTAATCACATGCCTTCTTGAAATCAGCAGAGGTTTCTCATTCCCTCGCTTTCAGAGAGAAATGTGACTGTGGGAGAGGATGGGAGAGATACAACTAAATTGGCTTTGAAGGTGGAGGAAGGG<210>2<211>21<212>DNA<213>人工序列<400>2acagcgttcttggtctctgtg<210>3<211>21<212>DNA<213>人工序列<400>3ctcaccccactccttccatct當前第1頁1 2 3 當前第1頁1 2 3