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鑒定西瓜種皮顏色的InDel分子標記及其引物和應(yīng)用的制作方法

文檔序號:11126305閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種鑒定西瓜種皮顏色的InDel分子標記,其核苷酸序列為:ATATGAGCCCGTAGAGG。

2.權(quán)利要求1所述InDel分子標記的PCR擴增引物,包括以下的引物對:

InDel6_ sc8F:AAATCACAGTAATAGAATGCTT;

InDel6_sc8R:TTAGAAGCTACACTCGTCCT。

3.一種鑒定西瓜種皮顏色的方法,其特征在于,包括以下步驟:

(1)引物設(shè)計:設(shè)計并篩選,得到權(quán)利要求2所述擴增引物;

(2)DNA提取:采用CTAB法提取西瓜植株總DNA;

(3)PCR擴增:

反應(yīng)體系:100ng/μl西瓜植株總DNA 1μl、正向引物1μl、反向引物1μl、2×Power Taq PCR MasterMix 12.5μl、ddH2O 9.5μl;

反應(yīng)程序:94℃ 5分鐘,35個循環(huán)的94℃ 20秒鐘、55℃ 1分鐘、72℃ 30秒、72℃ 5分鐘;

(4)電泳圖譜分析:對所得擴增產(chǎn)物進行8%聚丙烯酰胺凝膠電泳,然后進行顯影、染色和帶型判讀,根據(jù)擴增產(chǎn)物的條帶大小及位置關(guān)系確定所屬基因型。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述鑒定西瓜種皮顏色的方法,其特征在于:步驟(4)的帶型判讀過程中,若擴增產(chǎn)物的條帶為197bp,則西瓜種皮顏色為黃麻種皮,若擴增產(chǎn)物的條帶為180bp,則西瓜種皮顏色為非黃麻種皮。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述鑒定西瓜種皮顏色的方法,其特征在于:所述正向引物和反向引物的濃度均不小于10μmol/L。

6.權(quán)利要求1所述InDel分子標記或權(quán)利要求2所述PCR擴增引物在種皮顏色分型或西瓜輔助選擇育種中的應(yīng)用。

7.權(quán)利要求1所述InDel分子標記或權(quán)利要求2所述PCR擴增引物在西瓜種皮顏色基因圖位克隆中的應(yīng)用。

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